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青枯菌GMI 1000菌株c-di-GMP代谢酶调控基因vsrD功能研究
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作者 杨晓欣 许景升 +3 位作者 徐进 韩文超 李志明 冯洁 《植物保护》 北大核心 2025年第3期102-112,共11页
青枯菌Ralstonia solanacearum是全球作物生产中的一种重要病原细菌。由青枯菌引起的植物细菌性枯萎病(简称青枯病)危害数百种经济作物并造成严重经济损失。环二鸟苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)是一种广泛存在于细菌中的第二信使分... 青枯菌Ralstonia solanacearum是全球作物生产中的一种重要病原细菌。由青枯菌引起的植物细菌性枯萎病(简称青枯病)危害数百种经济作物并造成严重经济损失。环二鸟苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)是一种广泛存在于细菌中的第二信使分子,通过调控生物膜形成、运动性等影响病原菌致病力。但在青枯菌中,c-di-GMP的调控网络并不清楚。本试验以青枯菌GMI 1000中的c-di-GMP降解酶基因gedrG缺失突变体菌株(ΔgedrG-GMI)为研究对象,将pMiniHimarI RB1质粒通过双亲共结合法导入ΔgedrG-GMI突变体,筛选运动性表型恢复的转座子插入突变体(transposon mutagenesis),共鉴定了13272株转座子插入突变体。其中,转座子插入vsrD基因时,ΔgedrG-GMI运动性恢复为野生型水平。分析表明vsrD基因缺失后,突变株运动性极显著增强,胞内c-di-GMP水平降低,致病力丧失,vsrD基因互补菌株运动性恢复至缺失前水平。以上结果表明,vsrD参与了青枯菌GMI 1000中c-di-GMP调控通路,影响GMI 1000运动性,且与致病性密切相关。 展开更多
关键词 青枯菌 c-di-gmp 致病力 运动性 调控
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汉氏葡糖醋杆菌HDM1-3中第二信使c-di-GMP相关结构域蛋白质的生物信息学分析
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作者 杨承 庄梓涵 +3 位作者 吴昊基 陈炫 雷虹 李元敬 《黑龙江大学自然科学学报》 2025年第1期81-89,共9页
为探究汉氏葡糖醋杆菌(Komagataeibacter hansenii,K.hansenii)HDM1-3所包含的GGDEF结构域对合成环二鸟苷酸(cyclic diguanylate monophosphate,c-di-GMP)的作用,挖掘c-di-GMP对该菌种产细菌纤维素(Bacterial cellulose,BC)的作用,采用... 为探究汉氏葡糖醋杆菌(Komagataeibacter hansenii,K.hansenii)HDM1-3所包含的GGDEF结构域对合成环二鸟苷酸(cyclic diguanylate monophosphate,c-di-GMP)的作用,挖掘c-di-GMP对该菌种产细菌纤维素(Bacterial cellulose,BC)的作用,采用生物信息学方法系统分析了K.hansenii HDM1-3菌株的基因组,发现K.hansenii HDM1-3菌株中共有8个基因含有GGDEF-EAL结构域。利用Hmmer软件、Pfam数据库、SMART(Simple Modular Architecture Research Tool)平台、MEME Suite平台、MEGA11(Molecular Evolutionary Genetics Analysis 11)软件、ClustalW平台、Swiss-model平台、NCBI(National Center for Biotechnology Information)平台、InterPro平台及BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)平台对该菌株所含有GGDEF-EAL结构域的功能进行了分析,并深入探究了该结构域对细菌纤维素产量的影响。功能预测分析表明,K.hansenii HDM1-3中含有GGDEF-EAL结构域的8个基因均参与c-di-GMP的合成、降解及信号传导。 展开更多
关键词 汉氏葡糖醋杆菌HDM1-3 c-di-gmp 生物信息学 GGDEF-EAL结构域
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病原细菌受体介导的c-di-GMP信号传导及其调控机制 被引量:3
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作者 杨凤环 田芳 +1 位作者 陈华民 何晨阳 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期9-14,共6页
细菌第二信使环二鸟苷酸(c-di-GMP)信号网络系统主要涉及信号代谢、识别、接受、传递、功能表达和调控。c-di-GMP胞内水平受到鸟苷酸环化酶(DGC)和磷酸二酯酶(PDE)的控制。c-di-GMP信号受体类型多样,包括转录调控因子、PilZ结构域蛋白... 细菌第二信使环二鸟苷酸(c-di-GMP)信号网络系统主要涉及信号代谢、识别、接受、传递、功能表达和调控。c-di-GMP胞内水平受到鸟苷酸环化酶(DGC)和磷酸二酯酶(PDE)的控制。c-di-GMP信号受体类型多样,包括转录调控因子、PilZ结构域蛋白、退化的GGDEF和EAL结构域蛋白、核糖体开关、多核苷酸磷酸化酶和新发现的蛋白激酶等。c-di-GMP受体接受信号后,可以在转录、翻译以及翻译后水平上对下游靶标进行调控,从而影响细菌的毒性、运动性、生物膜形成、细胞分裂等生理生化过程。本文结合本实验室对水稻白叶枯病菌的研究结果,综述了近年来国内外在c-di-GMP信号受体介导的调控机制等方面的研究进展。 展开更多
关键词 c-di-gmp 信号代谢 受体 传导 调控
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ToxR负调控副溶血弧菌中c-di-GMP的合成
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作者 张苗苗 薛星帆 +6 位作者 孙君芳 吴齐敏 李雪 周冬生 倪斌 陆仁飞 张义全 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期4719-4730,共12页
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是世界范围内引起海产品相关食物中毒的主要致病菌,具有很强的生物膜形成能力。ToxR是一种膜结合调控蛋白,对副溶血弧菌生物膜形成具有一定的调控作用,但具体机制尚未见报道。c-di-GMP是一种普遍存... 副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是世界范围内引起海产品相关食物中毒的主要致病菌,具有很强的生物膜形成能力。ToxR是一种膜结合调控蛋白,对副溶血弧菌生物膜形成具有一定的调控作用,但具体机制尚未见报道。c-di-GMP是一种普遍存在于细菌中重要的第二信使,参与调控细菌的多种生物学行为包括生物膜的形成。本文探究ToxR对副溶血弧菌中c-di-GMP代谢的调控作用。利用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定副溶血弧菌野生株(wild-type,WT)和toxR突变株(ΔtoxR)中c-di-GMP水平的差异。挑选c-di-GMP代谢相关基因scrA、scrG和vpa0198为进一步研究的靶标,采用实时定量qPCR实验检测靶基因在WT和ΔtoxR中的转录水平差异;将靶基因调控区DNA序列克隆入pHRP309质粒中无启动子的β半乳糖苷酶基因上游,采用lacZ报告基因融合实验进一步研究ToxR对靶基因的转录调控关系;将重组质粒分别导入含有pBAD33或pBAD33-toxR的EC100λpir中,采用lacZ报告基因融合实验研究ToxR是否能在异体宿主中调控靶基因的表达;PCR扩增靶基因上游调控区DNA序列,并纯化His-ToxR蛋白,用凝胶阻滞实验(electrophoresis mobility shift assay,EMSA)研究His-ToxR与靶基因启动子区DNA序列是否具有结合作用。ELISA结果显示ΔtoxR中c-di-GMP含量显著性高于WT中的,说明ToxR抑制c-di-GMP的产生;实时定量qPCR结果表明WT中scrA、scrG和vpa0198的转录水平显著性高于ΔtoxR中的,表明ToxR抑制它们的转录;lacZ报告基因融合实验结果表明ToxR可抑制副溶血弧菌和EC100λpir中scrA、scrG和vpa0198的启动子区活性;EMSA实验显示His-ToxR能特异性地结合到scrA和scrG的上游调控区DNA序列上,而对vpa0198的上游调控区DNA序列无结合作用。综上所述,ToxR通过直接调控相关酶蛋白基因的转录来抑制副溶血弧菌内c-di-GMP的合成,从而有助于精确调控生物膜形成等细菌行为。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 转录调控 ToxR c-di-gmp
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水稻白叶枯病菌第二信使c-di-GMP代谢酶基因的预测和分析 被引量:3
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作者 薛丁榕 田芳 +3 位作者 李海云 杨凤环 陈华民 何晨阳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期131-138,共8页
旨在从水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)中鉴定出含有GGDEF结构域的鸟苷酸环化酶(DGC)和含有EAL或HD-GYP结构域的磷酸二酯酶(PDE)编码基因。预测分析了Xoo已测序菌株中的GGDEF、EAL和HD-GYP结构域蛋白的种类、数量及... 旨在从水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)中鉴定出含有GGDEF结构域的鸟苷酸环化酶(DGC)和含有EAL或HD-GYP结构域的磷酸二酯酶(PDE)编码基因。预测分析了Xoo已测序菌株中的GGDEF、EAL和HD-GYP结构域蛋白的种类、数量及其序列特征,鉴别了基序保守的DGC或PDE、基序退化的信号受体以及信号输入结构域,验证了部分不同类型结构域蛋白作为DGC/PDE、信号受体以及在细菌毒性调控等方面的功能。 展开更多
关键词 水稻白叶枯病菌 c-di-gmp信号途径 鸟苷酸环化酶 磷酸二酯酶
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美罗培南对胞内不同c-di-GMP浓度表型铜绿假单胞菌生物被膜形成的影响 被引量:5
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作者 谢杰鹏 孔晋亮 +4 位作者 陈一强 王可 罗劲 张真强 刘冬梅 《广西医科大学学报》 CAS 2020年第6期1001-1006,共6页
目的:探究美罗培南对胞内不同环二鸟苷酸(c-di-GMP)浓度表型铜绿假单胞菌(PA)生物被膜形成的影响。方法:两倍稀释法测定美罗培南对各菌株的抑菌浓度(MIC);设阴性对照组和3个美罗培南干预组(1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC)。用1/2MIC、1/4MIC、... 目的:探究美罗培南对胞内不同环二鸟苷酸(c-di-GMP)浓度表型铜绿假单胞菌(PA)生物被膜形成的影响。方法:两倍稀释法测定美罗培南对各菌株的抑菌浓度(MIC);设阴性对照组和3个美罗培南干预组(1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC)。用1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC的美罗培南分别干预野生株PAO1、PA胞内c-di-GMP高表达株(PAO1ΔwspF)、PA胞内c-di-GMP低表达株(PAO1/Plac-yhjH),观察美罗培南对其运动能力的影响,用结晶紫染色法测定美罗培南对PAO1、PAO1ΔwspF、PAO1/Plac-yhjH菌株的生物被膜形成以及对生物被膜清除能力的影响。结果:在美罗培南的干预下,PAO1、PAO1ΔwspF、PAO1/Plac-yhjH的运动区域直径均比阴性对照组小(P<0.05),所形成的的生物被膜也均比阴性对照组少(P<0. 05),而破坏的生物被膜均比阴性对照组多(P<0. 05)。结论:美罗培南能抑制PAO1、PAO1ΔwspF、PAO1/Plac-yhjH的运动能力以及生物被膜形成,美罗培南能破坏PAO1、PAO1ΔwspF、PAO1/Plac-yhjH形成的生物被膜,美罗培南对PAO1、PAO1ΔwspF、PAO1/Plac-yhjH的抑制效果不同。 展开更多
关键词 美罗培南 c-di-gmp 铜绿假单胞菌 生物被膜
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环二鸟苷酸(c-di-GMP)在微生物体内的作用及其类似物的研究 被引量:5
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作者 那路新 杨振军 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期307-312,258,共6页
环二鸟苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)是在细菌中普遍存在的第二信使分子,参与调节多种生理功能,包括细胞分化、生物被膜形成、致病因子产生等。细菌细胞内c-di-GMP合成与降解代谢分别受二鸟苷酸环化酶(diguanylate cyclase,DGC)和... 环二鸟苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)是在细菌中普遍存在的第二信使分子,参与调节多种生理功能,包括细胞分化、生物被膜形成、致病因子产生等。细菌细胞内c-di-GMP合成与降解代谢分别受二鸟苷酸环化酶(diguanylate cyclase,DGC)和磷酸二酯酶(phosphodiesterase,PDE)调控,DGC和PDE共处于同一个蛋白中,是一个双功能蛋白酶的两个区域,分别负责菌体内c-di-GMP的合成和降解。c-di-GMP作用菌体内下游靶点包括PilZ结构域和GEMM核开关两种类型。目前发现c-di-GMP核开关是唯一不参与代谢活动而参与信号传导的一类核开关。本文综述了c-di-GMP的代谢途径、调控机制、生物学功能,以及c-di-GMP结构类似物合成及生物学评价等方面的最新研究进展。 展开更多
关键词 环二鸟苷酸 c-di-gmp 细菌信号传导 代谢酶 GEMM核开关
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西瓜噬酸菌中C-di-GMP代谢相关基因Aave2620的功能研究 被引量:4
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作者 郭彦彤 张美玉 +3 位作者 田二渊 杨玉文 关巍 赵廷昌 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期30-40,共11页
环鸟苷二磷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)是一种广泛存在于植物病原细菌中的第二信使,调控细菌多种生物学功能,从而影响病原细菌的致病性,但其在西瓜噬酸菌中的研究还未见报道。本实验以Aac5菌株为研究对象,通过构建c-di-GMP代谢相... 环鸟苷二磷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)是一种广泛存在于植物病原细菌中的第二信使,调控细菌多种生物学功能,从而影响病原细菌的致病性,但其在西瓜噬酸菌中的研究还未见报道。本实验以Aac5菌株为研究对象,通过构建c-di-GMP代谢相关基因Aave_2620缺失突变株和互补菌株,从其致病能力及其生长能力两部分进行测定,探究此信号途径是否在西瓜噬酸菌中调控致病机制。结果表明,基因Aave_2620的缺失显著降低Aac5菌株致病力、生物膜形成能力和生长能力,减弱烟草过敏性反应以及运动能力,互补菌株表型基本得到恢复。基因Aave_2620的缺失显著影响三型分泌系统相关基因、毒性相关基因以及鞭毛及趋化性相关基因在西瓜噬酸菌中的表达量。以上结果表明c-di-GMP代谢相关基因Aave_2620与西瓜噬酸菌的致病密切相关。 展开更多
关键词 西瓜噬酸菌 c-di-gmp 功能研究
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水稻白叶枯病菌c-di-GMP受体Clpxoo关键结合功能位点的确定 被引量:1
9
作者 李建宇 李波 +3 位作者 陈华民 杨凤环 何晨阳 田芳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期124-129,共6页
旨在确定水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)c-di-GMP信号受体Clpxoo的关键功能位点。通过对Clpxoo蛋白氨基酸位点基因突变,表达载体构建、蛋白诱导表达及其Ni-NTA Resin亲和层析,进行了Clpxoo及其点突变蛋白的原核表达... 旨在确定水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)c-di-GMP信号受体Clpxoo的关键功能位点。通过对Clpxoo蛋白氨基酸位点基因突变,表达载体构建、蛋白诱导表达及其Ni-NTA Resin亲和层析,进行了Clpxoo及其点突变蛋白的原核表达和产物纯化;通过等温滴定量热法(ITC),检测了Clpxoo及其点突变蛋白与c-di-GMP的结合作用。利用基因定点突变和桥接PCR方法,在优化的诱导表达和纯化条件下,成功地获得了Clpxoo点突变蛋白和与c-di-GMP不发生结合的Clpxoo点突变体。结果表明,Clpxoo蛋白第70位天冬氨酸和第99位谷氨酸是与c-di-GMP结合的关键功能位点。 展开更多
关键词 水稻白叶枯病菌 c-di-gmp 信号受体蛋白 点突变体 结合作用
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外源性C-di-GMP对变形链球菌产酸、耐酸能力的影响 被引量:3
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作者 闫文娟 吴补领 +4 位作者 屈铁军 高杰 赵红萍 苏凌云 余擎 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2009年第9期510-512,共3页
目的:初步探讨外源性c-di-GMP对变形链球菌产酸、耐酸能力的影响。方法:外源性c-di-GMP与生理盐水分别加入至含变形链球菌UA159菌液的BHI培养基中,比较两组对变形链球菌产酸、耐酸能力的影响。结果:c-di-GMP处理组与生理盐水组相比,产... 目的:初步探讨外源性c-di-GMP对变形链球菌产酸、耐酸能力的影响。方法:外源性c-di-GMP与生理盐水分别加入至含变形链球菌UA159菌液的BHI培养基中,比较两组对变形链球菌产酸、耐酸能力的影响。结果:c-di-GMP处理组与生理盐水组相比,产酸、耐酸能力明显下降,差异有统计学意义,经t检验,P<0.05。结论:c-di-GMP可以抑制变形链球菌的产酸、耐酸能力,可以单独也可以与其它的抗龋制剂联合应用控制龋病。 展开更多
关键词 c—dj—GMP 变形链球菌 产酸 耐酸
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铜绿假单胞菌生物被膜组成及其受群体感应系统和c-di-GMP调控的研究进展 被引量:19
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作者 王帅涛 高倩倩 +1 位作者 成娟丽 林金水 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1106-1122,共17页
作为人类条件性感染的前三大病原菌之一的铜绿假单胞菌,是一种革兰氏阴性细菌,对免疫功能低下和囊性纤维化患者可以造成严重和持续性感染。造成这种持续感染的原因主要是由于细菌接收外界信号后,在自身调控网络的协同作用下,会依附于固... 作为人类条件性感染的前三大病原菌之一的铜绿假单胞菌,是一种革兰氏阴性细菌,对免疫功能低下和囊性纤维化患者可以造成严重和持续性感染。造成这种持续感染的原因主要是由于细菌接收外界信号后,在自身调控网络的协同作用下,会依附于固体表面,并产生胞外多糖、基质蛋白和胞外DNA等大分子物质形成高度结构化的膜状复合物将自身包裹形成生物被膜群体结构。生物被膜可以有效帮助细菌定殖、提高细菌对抗菌物质和宿主免疫反应的抵抗能力、促进群落细菌的细胞-细胞之间的信号交流等,是临床治疗中病原菌慢性感染和反复感染最重要的原因之一。本篇综述重点介绍了铜绿假单胞菌生物被膜的各组成成分及其在生物被膜形成中的重要功能,并进一步阐述了群体感应系统(las、rhl、pqs与iqs)和c-di-GMP对铜绿假单胞菌生物被膜形成的调控作用。通过本篇综述可以更清晰地了解细菌生物被膜形成和调控的过程,为开发新的治疗生物被膜感染策略提供帮助。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 生物被膜 胞外多糖 胞外DNA、基质蛋白 群体感应系统 c-di-gmp
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基于RNA适配体检测体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP
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作者 朱彦策 孔江南 +2 位作者 陈慧心 钟凯 张超 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期2145-2153,共9页
旨在建立简单、快速的检测体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP的方法。本研究以含有T7启动子、VC2GEMM-1核糖开关序列或其突变序列VC2/g20a、spinach2和tRNA序列的双链DNA为模板,利用T7RNA聚合酶体外转录体系制备VC2、VC2/g20aRNA适配体。... 旨在建立简单、快速的检测体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP的方法。本研究以含有T7启动子、VC2GEMM-1核糖开关序列或其突变序列VC2/g20a、spinach2和tRNA序列的双链DNA为模板,利用T7RNA聚合酶体外转录体系制备VC2、VC2/g20aRNA适配体。通过检测绿色荧光强度分析RNA适配体对c-di-GMP和cGAMP的结合能力。结果表明,转录得到的RNA经过加热变性、缓慢退火后得到VC2RNA适配体和VC2/g20a RNA适配体,在125mmol·L^(-1 )KCl和30mmol·L^(-1 )MgCl_2溶液中孵育180min的优化结合条件下,VC2适配体与c-di-GMP特异性结合,VC2/g20a适配体与cGAMP特异性结合;c-di-GMP对VC2适配体的半数效应浓度(EC50)为(89±1.7)nmol·L^(-1),cGAMP对VC2/g20a适配体的半数效应浓度为(309±4.5)nmol·L^(-1);VC2和VC2/g20a能够分别检测低至5nmol·L^(-1)和20nmol·L^(-1)的c-di-GMP和cGAMP;并且发现转录的RNA混合物在未纯化的情况下同样能够检测VC0179体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP。这种方法可以简单快速的检测VC0179体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP,并且为研究其他c-di-GMP和cGAMP合成酶活性提供潜在可能。 展开更多
关键词 RNA适配体 c-di-gmp cGAMP 荧光检测
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Biofilm与c-di-GMP专刊序言--微生物的社会性、c-di-GMP调控及研究新技术 被引量:2
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作者 钱韦 马旅雁 +1 位作者 谷立川 张炼辉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1351-1356,共6页
生物被膜(Biofilm)是微生物生存的主要形式。它是一种或多种微生物通过胞外多糖、胞外DNA、蛋白质等组成的基质聚集在一起形成的细胞多聚体。生物被膜中的微生物细胞之间存在密切的信号通讯,并且表现出与浮游生活时完全不同的生理代谢特... 生物被膜(Biofilm)是微生物生存的主要形式。它是一种或多种微生物通过胞外多糖、胞外DNA、蛋白质等组成的基质聚集在一起形成的细胞多聚体。生物被膜中的微生物细胞之间存在密切的信号通讯,并且表现出与浮游生活时完全不同的生理代谢特征,其发育过程受到环二鸟苷单磷酸(c-di-GMP)等细胞第二信使的控制。由于生物被膜在基础生命科学和医疗、工业、农业、环境治理等应用科学中的重要性,相关研究是微生物学领域的前沿之一。本期专刊从生物工程、研究技术、感染与免疫、环境生物学和植物病理学等角度,较系统地对生物被膜的形成机制、调控分子机理、理化特性和应用技术等进行了综述或研究,展示了我国在本领域的研究水平,同时也对本领域未来发展趋势进行了有益的讨论。 展开更多
关键词 生物被膜 环二乌苷单磷酸 调控机制 新技术
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WspR在大肠杆菌中的表达及其对c-di-GMP合成的影响
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作者 凡责艳 木佳 +1 位作者 毛自朝 官会林 《云南师范大学学报(自然科学版)》 2014年第5期68-73,共6页
可得胶是土壤农杆菌ATCC31749分泌的一种胞外多糖,大多数细菌胞外多糖的合成受控于新近发现的第二信使环二鸟苷酸(c-di-GMP).细胞内c-di-GMP的产生受二鸟苷酸环化酶(diguanylate cyclase,DGC)合成和磷酸二酯酶(phosphodiesterase,PDE)... 可得胶是土壤农杆菌ATCC31749分泌的一种胞外多糖,大多数细菌胞外多糖的合成受控于新近发现的第二信使环二鸟苷酸(c-di-GMP).细胞内c-di-GMP的产生受二鸟苷酸环化酶(diguanylate cyclase,DGC)合成和磷酸二酯酶(phosphodiesterase,PDE)降解两条途径调控.在结构上,通常DGC含有GGDEF结构域,PDE含有EAL结构域.研究表明从绿脓杆菌(P.aeruginosa)中得到的类趋化系统蛋白WspR具有GGDEF结构域,具有DGC活性.本实验将WspR转入大肠杆菌中得到了表达,并用颜色反应得到证实c-di-GMP在E.coli大量合成.为进一步研究ATCC31749中WspR的作用机制,促进可得胶的合成提供切实可行的依据. 展开更多
关键词 土壤农杆菌ATCC31749 c-di-gmp WspR表达
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c-di-GMP在低温好氧颗粒污泥形成过程中的作用
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作者 支丽玲 王玉莹 +3 位作者 马鑫欣 衣雪松 王硕 李激 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第4期1560-1567,共8页
在低温条件下运行好氧颗粒污泥反应器,絮状污泥颗粒化过程中信号分子可通过传导作用引起各层物质之间的组分变化,通过研究胞外聚合物及污泥相关疏水性的变化规律,并观察此过程中微生物菌群的群落演替特点,揭示环二鸟苷酸(c-di-GMP)在低... 在低温条件下运行好氧颗粒污泥反应器,絮状污泥颗粒化过程中信号分子可通过传导作用引起各层物质之间的组分变化,通过研究胞外聚合物及污泥相关疏水性的变化规律,并观察此过程中微生物菌群的群落演替特点,揭示环二鸟苷酸(c-di-GMP)在低温好氧颗粒污泥形成过程中的变化规律与影响作用.结果表明:接种污泥在颗粒化过程中,胞外聚合物含量从48mg/gMLVSS增长至139mg/gMLVSS,其中以TB层蛋白质增长为主,在颗粒化过程中,c-di-GMP含量由62?g/gMLVSS增至600?g/gMLVSS,始终影响微生物运动及生物膜形成,促使具备胞外聚合物分泌功能的菌群加快分泌胞外聚合物,促进好氧颗粒污泥的形成.各个阶段污泥中微生物种群存在较大差异,在反应器运行初始阶段与c-di-GMP合成相关的菌群占据优势,同时在后期表现出较好的脱氮除磷能力,在低温条件下好氧颗粒污泥微生物菌群发生演替并最终形成稳定的菌群结构. 展开更多
关键词 c-di-gmp 低温 好氧颗粒污泥 胞外聚合物 群落演替
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环二鸟苷酸(c-di-GMP)作为潜在免疫佐剂的研究进展 被引量:1
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作者 丛晓燕 时建立 +6 位作者 孙文博 李俊 杜以军 吴家强 陈蕾 陈智 王金宝 《中国兽药杂志》 2014年第2期59-62,共4页
环二鸟苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)是在细菌中普遍存在的第二信使分子,参与调节多种生理功能,近年来研究发现环二鸟苷酸作为免疫调节剂作用于真核细胞可产生良好的免疫调节作用,实验研究表明其有可能成为具有潜力的疫苗佐剂。本... 环二鸟苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)是在细菌中普遍存在的第二信使分子,参与调节多种生理功能,近年来研究发现环二鸟苷酸作为免疫调节剂作用于真核细胞可产生良好的免疫调节作用,实验研究表明其有可能成为具有潜力的疫苗佐剂。本文综述了c-di-GMP的结构,生物学功能、免疫特性和作为疫苗佐剂研究等方面的最新研究进展。 展开更多
关键词 环二鸟苷酸 疫苗 佐剂 免疫
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TpbA通过调节c-di-GMP抑制鲍曼不动杆菌ATCC17978生物膜的形成
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作者 张玉英 黄菱 +1 位作者 赵建宁 师志云 《宁夏医学杂志》 CAS 2023年第1期1-4,共4页
目的分析生物膜形成相关的酪氨酸磷酸酶A(TpbA)经调节3,5-环鸟苷二磷酸(c-di-GMP)影响鲍曼不动杆菌ATCC17978生物膜的形成。方法通过上海生工合成TpbA基因序列,构建pET-28a-TpbA载体,原核重组表达目的蛋白TpbA经亲和层析纯化后并用weste... 目的分析生物膜形成相关的酪氨酸磷酸酶A(TpbA)经调节3,5-环鸟苷二磷酸(c-di-GMP)影响鲍曼不动杆菌ATCC17978生物膜的形成。方法通过上海生工合成TpbA基因序列,构建pET-28a-TpbA载体,原核重组表达目的蛋白TpbA经亲和层析纯化后并用western blot验证,将该载体转入鲍曼不动杆菌ATCC17978,采用western blot和磷酸酶活性实验鉴定TpbA表达及活性,分析c-di-GMP表达水平及生物膜形成情况。结果在成功构建pET-28a-TpbA载体并证实表达TpbA的基础上,将该载体转入鲍曼不动杆菌ATCC17978,western blot表明TpbA过表达(P<0.05),磷酸酶活性实验证实过表达的TpbA具有酶活性(P<0.05)。进一步分析发现,ATCC17978中TpbA过表达能够降低c-di-GMP的水平(P<0.05),表明TpbA能够有效调节鲍曼不动杆菌的c-di-GMP。ATCC17978中c-di-GMP相关的生物膜形成在TpbA过表达作用下能够被显著抑制(P<0.05)。结论本研究初步证实了TpbA通过调节c-di-GMP,可以抑制ATCC17978生物膜形成,为抑制鲍曼不动杆菌生物膜的形成提供了新的潜在靶点和实验数据。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 TpbA c-di-gmp 生物膜
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H-NS Represses Biofilm Formation and c-di-GMP Synthesis in Vibrio parahaemolyticus 被引量:2
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作者 XUE Xing Fan ZHNAG Miao Miao +9 位作者 SUN Jun Fang LI Xue WU Qi Min YIN Zhe YANG Wen Hui NI Bin HU Ling Fei ZHOU Dong Sheng LU Ren Fei ZHANG Yi Quan 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 2022年第9期821-829,共9页
Objective This study aimed to investigate the regulation of histone-like nucleoid structuring protein(H-NS)on biofilm formation and cyclic diguanylate(c-di-GMP)synthesis in Vibrio parahaemolyticus RIMD2210633.Methods ... Objective This study aimed to investigate the regulation of histone-like nucleoid structuring protein(H-NS)on biofilm formation and cyclic diguanylate(c-di-GMP)synthesis in Vibrio parahaemolyticus RIMD2210633.Methods Regulatory mechanisms were analyzed by the combined utilization of crystal violet staining,quantification of c-di-GMP,quantitative real-time polymerase chain reaction,LacZ fusion,and electrophoretic-mobility shift assay.Results The deletion of hns enhanced the biofilm formation and intracellular c-di-GMP levels in V.parahaemolyticus RIMD2210633.H-NS can bind the upstream promoter-proximal DNA regions of scrA,scrG,VP0117,VPA0198,VPA1176,VP0699,and VP2979 to repress their transcription.These genes encode a group of proteins with GGDEF and/or EAL domains associated with c-di-GMP metabolism.Conclusion One of the mechanisms by which H-NS represses the biofilm formation by V.parahaemolyticus RIMD2210633 may be via repression of the production of intracellular c-di-GMP. 展开更多
关键词 Vibrio parahaemolyticus BIOFILM H-NS c-di-gmp
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鼠伤寒沙门氏菌c-di-GMP结合蛋白YcgR的表达、纯化及活性鉴定 被引量:1
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作者 闫春娟 欧阳震霖 冉淦侨 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期771-779,共9页
【背景】在鼠伤寒沙门氏菌中,c-di-GMP结合蛋白YcgR通过与鞭毛运动蛋白的相互作用,抑制鞭毛运动速度,使细菌由浮游生长向生物膜产生及侵染宿主的静止状态转变。然而,目前关于该蛋白的结构、功能以及与c-di-GMP结合后调控细菌运动状态的... 【背景】在鼠伤寒沙门氏菌中,c-di-GMP结合蛋白YcgR通过与鞭毛运动蛋白的相互作用,抑制鞭毛运动速度,使细菌由浮游生长向生物膜产生及侵染宿主的静止状态转变。然而,目前关于该蛋白的结构、功能以及与c-di-GMP结合后调控细菌运动状态的分子机制还不清楚。【目的】通过原核表达,获得高纯度的YcgR蛋白,并对其二级结构稳定性以及c-di-GMP结合活性进行表征,为进一步确定YcgR的结构以及阐明c-di-GMP如何通过结合YcgR而减缓细菌运动速度的分子机制奠定基础。【方法】通过构建重组大肠肝菌对YcgR进行原核表达;通过Ni-NTA镍离子亲和层析柱和体积排阻色谱两步纯化获得高纯度的YcgR蛋白;预测YcgR蛋白质结构,利用圆二色光谱仪(CD)测定其二级结构;通过等温滴定量热法(ITC)和热转移技术(Protein thermal shift)研究YcgR与c-di-GMP的结合活性。【结果】菌落PCR和质粒测序结果表明,表达YcgR的重组大肠杆菌构建成功;SDS-PAGE和体积排阻色谱显示YcgR的分子量大约为28 kD,在溶液中以二聚体的形式存在;通过预测和对比,发现YcgR的结构与同源蛋白PP4396高度相似,都有一个响应c-di-GMP的PilZ结构域,且CD结果显示YcgR具有稳定的二级结构;ITC和Thermal Shift结果表明,YcgR与c-di-GMP有较强的结合活性,其Kd值为50 nmol/L。【结论】首次实现了鼠伤寒沙门氏菌YcgR蛋白的原核表达及纯化,表征了其c-di-GMP结合活性,为进一步研究YcgR蛋白与细菌信号分子c-di-GMP调控鞭毛运动的分子机制奠定基础,并为鼠伤寒沙门氏菌抗感染药物的研发和治疗提供新的策略。 展开更多
关键词 沙门氏菌 YcgR蛋白 c-di-gmp 克隆表达及纯化 结构预测
原文传递
黄单胞菌中c-di-GMP二鸟苷酸环化酶和磷酸二酯酶的生物信息学分析
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作者 邹霞 黄良博 何进 《计算生物学》 2014年第4期68-82,共15页
黄单胞菌是一类重要的作物病原菌,其信号转导机制及其与寄主植物的相互作用一直是微生物学、植物病理学及植物学工作者研究的热点问题。c-di-GMP是一种广泛存在于细菌中的第二信使分子,参与细菌的粘附、胞外多糖的合成、生物膜形成、运... 黄单胞菌是一类重要的作物病原菌,其信号转导机制及其与寄主植物的相互作用一直是微生物学、植物病理学及植物学工作者研究的热点问题。c-di-GMP是一种广泛存在于细菌中的第二信使分子,参与细菌的粘附、胞外多糖的合成、生物膜形成、运动性及毒力等许多细菌生理过程的调节。c-di-GMP主要由含有GG(D/E)EF结构域的二鸟苷酸环化酶合成,由含有EAL或HD-GYP结构域的磷酸二酯酶降解,其在胞内的浓度受到二鸟苷酸环化酶与c-di-GMP特异性磷酸二酯酶的协同调节。本文对黄单胞菌属中十五株具有完整基因组序列的菌株中含有这三类结构域的蛋白进行了包括分布规律、进化树、COG及GO分析在内的生物信息学分析,揭示了GG(D/E)EF、EAL与HD-GYP结构域蛋白在黄单胞菌属中的进化差异及其与侵染对象的关联性;研究结果也表明这些结构域蛋白主要为信号转导蛋白,参与基因转录和细胞运动。这些结果为构建c-di-GMP介导的调控网络和寻找新的控制黄单胞菌的药物靶标奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 黄单胞菌 第二信使信号分子 c-di-gmp 二鸟苷酸环化酶 磷酸二酯酶 生物信息学
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