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水稻抗褐飞虱基因Bph3调控蛋白B8AK41的外源表达、纯化及亚细胞定位
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作者 卿冬进 卢柏亦 +8 位作者 彭宇婧 戴高兴 陈韦韦 李经成 周维永 黄所生 潘英华 黄娟 邓国富 《西南农业学报》 北大核心 2025年第1期107-114,共8页
【目的】外源表达获得B8AK41蛋白,并检测B8AK41蛋白亚细胞定位,为研究该蛋白在水稻抗褐飞虱上的生物学功能提供基础。【方法】对B8AK41蛋白序列进行跨膜区预测,构建原核表达载体诱导外源蛋白表达,纯化目标蛋白并鉴定蛋白多肽序列;构建... 【目的】外源表达获得B8AK41蛋白,并检测B8AK41蛋白亚细胞定位,为研究该蛋白在水稻抗褐飞虱上的生物学功能提供基础。【方法】对B8AK41蛋白序列进行跨膜区预测,构建原核表达载体诱导外源蛋白表达,纯化目标蛋白并鉴定蛋白多肽序列;构建双元表达载体并转入水稻原生质体检测蛋白亚细胞定位。【结果】通过对B8AK41蛋白的跨膜结构域分析,发现该蛋白第47~99位氨基酸区域可能存在跨膜结构域,因此选取第100~374位氨基酸进行外源表达蛋白片段。通过SDS-PAGE电泳分析外源表达的B8AK41蛋白,结果显示B8AK41蛋白在28℃IPTG诱导下成功表达,采用亲和层析方法可纯化得到分子量在35~40 kD的His6-B8AK41-His6融合蛋白。通过质谱分析纯化得到的蛋白,其中有3条属于B8AK41蛋白的肽段,证明外源表达纯化的B8AK41蛋白完全正确。采用荧光共聚焦显微镜观察到B8AK41蛋白定位在细胞内质网上。【结论】水稻抗褐飞虱基因Bph3的正调控蛋白B8AK41的非跨膜区能够在大肠杆菌中表达,通过亲和层析方法纯化得到融合蛋白His6-B8AK41-His6,后续可将B8AK41蛋白用于抗体制备。B8AK41蛋白定位在水稻细胞内质网上,为研究蛋白功能提供基础。 展开更多
关键词 水稻 褐飞虱 bph3基因 B8AK41蛋白 外源表达 亚细胞定位
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利用BAC-ISH对抗性基因Bph3物理定位及水稻第四染色体着丝粒识别的研究
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作者 覃瑞 鄢彗民 宋运淳 《化学与生物工程》 CAS 2003年第5期28-32,共5页
用水稻BAC克隆21K19作探针进行了ISH。这个克隆是由第4染色体着丝粒连锁的RFLP标记RZ69筛选得到。在Cot-Ⅰ DNA封阻条件下,DAB均获得第4染色体着丝粒区和间期染色质上的一对信号。这一方法不仅可用于特定染色体识别,而且可区分其长臂和... 用水稻BAC克隆21K19作探针进行了ISH。这个克隆是由第4染色体着丝粒连锁的RFLP标记RZ69筛选得到。在Cot-Ⅰ DNA封阻条件下,DAB均获得第4染色体着丝粒区和间期染色质上的一对信号。这一方法不仅可用于特定染色体识别,而且可区分其长臂和短臂。因此,还获得了第四染色体的臂比值以作为它的形态识别依据。由于RFLP标记RZ69与抗性基因Bph3紧密连锁,从而确定抗性基因Bph3位于水稻第4染色体着丝粒处。相对于常规的RFLP-FISH,BAC-ISH可以提高5倍以上的检出率。 展开更多
关键词 BAC-ISH 抗性基因 bph3 物理定位 水稻 第四染色体 着丝粒 识别
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Comparative Physical Mapping of Bph3 with BAC-FISH in Oryza officinalis and O. sativa 被引量:3
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作者 鄢慧民 覃瑞 +2 位作者 金危危 何光存 宋运淳 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2002年第5期583-587,共5页
A FISH procedure was adopted to physical mapping rice RFLP marker RZ69 and the BAC clone 38J9 screened by RZ69 which is linked to gene Bph3 in Oryza saliva L. and O. officinalis Well ex: Watt. The FISH results showed ... A FISH procedure was adopted to physical mapping rice RFLP marker RZ69 and the BAC clone 38J9 screened by RZ69 which is linked to gene Bph3 in Oryza saliva L. and O. officinalis Well ex: Watt. The FISH results showed that both 38J9 and RZ69 were located in the middle of 4S in O. officinalis and the centromere area of 4S in O. sativa. In O. officinalis the percentage distances from the centromere to the hybridization sites were 20.00 +/- 5.40 and 22.12 +/- 3.44, the detection rates were 50.00% and 6.14%, but in O. sativa they were 0 and 0, 56.10% and 6.29% correspondingly. The results obtained from the BAC and RFLP clone were almost the same in the cultivated rice and O. officinalis. It was suggested that die marker RZ69 of the cultivated rice and its homologous sequence in O. officinalis were in the same BAC clone, the homologous sequence of Bph3 in O. officinalis should be located at the sites hybridized by both RZ69 and 38J9. Many signals on different chromosomes of O. officinalis were observed under no blocking with Cot-1 DNA, showing that the repetitive sequences were also homologous between O. sativa and O. officinalis. The identification of chromosome 4 of O. officinalis is based on comparative map with RG214 and BAC clone screened by RG214. The feasibility of comparative physical mapping performed between O. sativa and O. officinalis with rice BAC clones was discussed. 展开更多
关键词 Oryza officinalis BAC-FISH comparative physical mapping bph3
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水稻抗褐飞虱基因Bph3特异性分子标记开发及应用 被引量:6
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作者 邓钊 石媛媛 +4 位作者 赵新辉 秦鹏 刘开雨 王凯 杨远柱 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期3563-3568,共6页
Bph3是一个对褐飞虱具有广谱、持久抗性的主效基因,对水稻抗褐飞虱育种具有重要利用价值,但其至今仍缺乏基因特异性标记,限制了分子辅助育种中对它的高效利用。本研究通过对Bph3不同等位基因编码区进行测序比对,获得两个Bph3特异性SNP位... Bph3是一个对褐飞虱具有广谱、持久抗性的主效基因,对水稻抗褐飞虱育种具有重要利用价值,但其至今仍缺乏基因特异性标记,限制了分子辅助育种中对它的高效利用。本研究通过对Bph3不同等位基因编码区进行测序比对,获得两个Bph3特异性SNP位点SNP1(Bph3为T,其余为C)和SNP2(Bph3为C,其余为T)。在等位基因特异性PCR(allele-specific polymerase chain reaction,AS-PCR)方法的基础上,开发两对显性标记特异扩增两个SNP位点来分别鉴定Bph3和其余等位基因型,组合使用两对显性标记即可获得一套鉴定Bph3基因型的共显性标记。使用该套标记对水稻品种基因组DNA进行PCR扩增,鉴定PCR产物条带大小即可区分Bph3不同基因型。利用该方法对Bph3基因进行分子标记辅助选择育种,可快速有效的将其导入目标水稻品种,加快水稻抗褐飞虱品种选育进程。 展开更多
关键词 抗褐飞虱 bph3 AS-PCR 分子标记辅助选择
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标记辅助培育水稻抗稻褐飞虱和稻白叶枯病基因聚合系 被引量:28
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作者 阳海宁 韦绍丽 +14 位作者 李孝琼 张月雄 刘驰 陈乔 岑贞陆 韦素美 杨朗 黄凤宽 何文强 刘开雨 黄大辉 马增凤 黄悦悦 宋建东 李容柏 《分子植物育种》 CAS CSCD 2010年第1期11-19,共9页
稻白叶枯病和稻褐飞虱是水稻的主要病虫害,利用优良的抗性基因培育抗性基因聚合系对于防治稻白叶枯病和稻褐飞虱具有重要意义。本研究通过回交与分子标记辅助选择相结合的方法,将抗稻白叶枯病基因Xa23和抗稻褐飞虱基因Bph3分别导入主栽... 稻白叶枯病和稻褐飞虱是水稻的主要病虫害,利用优良的抗性基因培育抗性基因聚合系对于防治稻白叶枯病和稻褐飞虱具有重要意义。本研究通过回交与分子标记辅助选择相结合的方法,将抗稻白叶枯病基因Xa23和抗稻褐飞虱基因Bph3分别导入主栽杂交水稻品种的保持系先B、天B、盟B、龙特甫B和桂B中。结果表明,获得稳定的单抗性基因导入系1436份和双抗性基因聚合系144份。人工接种鉴定结果显示,Xa23导入系和Xa23Bph3聚合系对抗稻白叶枯水平达到中抗和接近高抗的水平(1.1~3.0级),Bph3导入系和Xa23Bph3聚合系抗褐飞虱水平达中抗到抗的级别(3.2~4.0级)。农艺性状分析显示多数抗性基因聚合系的株高、剑叶长宽度、每穗粒数、结实率、千粒重等主要农艺性状与受体差异不显著,只有少数聚合系有1~2个性状的差异。SSR标记分析表明抗性基因聚合系的遗传背景回复率达89.6%~97.8%,等位性位点纯合度达95.6%~99.9%。初步证明本研究已成功地获得抗稻白叶枯病和稻褐飞虱基因的聚合系,这些抗性改良保持系具有良好的应用前景,并为建立完善的分子设计育种平台提供了重要育种材料基础。 展开更多
关键词 杂交水稻 保持系 bph3Xa23基因聚合 基因导入系 设计育种
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培育水稻恢复系抗稻褐飞虱基因导入系和聚合系 被引量:23
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作者 刘开雨 卢双楠 +10 位作者 裘俊丽 李孝琼 马增凤 陈乔 李粲 韦素美 黄凤宽 张月雄 刘驰 黄大辉 李容柏 《分子植物育种》 CAS CSCD 2011年第4期410-417,共8页
稻褐飞虱是水稻的主要虫害之一,培育优良的抗性基因聚合系对于防治稻褐飞虱具有重要的意义。本研究通过回交、分子标记辅助选择和接虫鉴定三者相结合的办法,将抗稻褐飞虱基因Bph3和Bph24(t)分别导入主栽杂交水稻恢复系广恢998、9311、... 稻褐飞虱是水稻的主要虫害之一,培育优良的抗性基因聚合系对于防治稻褐飞虱具有重要的意义。本研究通过回交、分子标记辅助选择和接虫鉴定三者相结合的办法,将抗稻褐飞虱基因Bph3和Bph24(t)分别导入主栽杂交水稻恢复系广恢998、9311、R15、明恢63、R29中,最终获得遗传稳定的Bph3导入系32份和Bph24(t)导入系22份,获得Bph3Bph24(t)优良聚合系13份。人工接虫鉴定结果显示,Bph3和Bph24(t)导入系对稻褐飞虱抗性达到中抗至抗的水平,平均分别为3.96级和3.84级,其中Bph24(t)导入系对稻褐飞虱抗性略强于Bph3导入系;Bph3Bph24(t)聚合系抗性最强,对稻褐飞虱抗性达到2.38~2.65级、平均2.52级的抗级水平,表明抗性基因聚合对稻褐飞虱的抗性具有累加基因效应。SSR标记分析表明抗性基因导入系、聚合系的遗传背景回复率达到90%以上。农艺性状分析显示,所选的多数基因聚合系的株高、剑叶长宽度、有效穗、千粒重等主要农艺性状与受体恢复系差异不显著。证明本研究已成功获得5个主栽杂交水稻恢复系的抗稻褐飞虱基因导入系和聚合系,这些抗性改良恢复系具有良好应用前景,并且为建立完善的水稻抗性育种平台提供了重要育种材料基础。 展开更多
关键词 稻褐飞虱 bph3Bph24(t)聚合系 抗性基因导入系 BPHR96 恢复系 水稻育种
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水稻OsLecRK1基因介导的抗褐飞虱功能分析 被引量:1
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作者 宋旭明 王谆静 +4 位作者 麦迪乃·萨比尔 廖志洪 邓建宇 朱旭东 周国鑫 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2021年第5期1210-1219,共10页
褐飞虱Nilaparvata lugens St l是对水稻最具破坏性的害虫之一,OsLecRK1是水稻Bph3基因簇中对褐飞虱抗性贡献最大的基因。本文对RHTd(含Bph3)等材料进行了褐飞虱抗性评价,克隆并构建了OsLecRK1过量表达突变体水稻,利用该突变体分析了OsL... 褐飞虱Nilaparvata lugens St l是对水稻最具破坏性的害虫之一,OsLecRK1是水稻Bph3基因簇中对褐飞虱抗性贡献最大的基因。本文对RHTd(含Bph3)等材料进行了褐飞虱抗性评价,克隆并构建了OsLecRK1过量表达突变体水稻,利用该突变体分析了OsLecRK1基因对褐飞虱若虫存活率、若虫发育历期等生物学参数的影响。结果表明,含Bph3基因水稻RHTd对褐飞虱的抗性明显地强于含Bph1基因水稻Mudgo和bph2基因水稻ASD7,RHTd水稻的褐飞虱受害指数仅为Mudgo和ASD7水稻的53.5%和24.1%。过量表达OsLecRK1基因能显著地增加水稻对褐飞虱的驱避性和抗生性,褐飞虱雌成虫偏好于在野生型水稻上产卵;突变体水稻上的褐飞虱若虫存活率显著地降低,仅为野生型水稻上若虫存活率的75.2%~81.8%,且若虫发育历期显著地延长,羽化率和初羽化雌成虫体重均显著地降低;此外,褐飞虱在突变体水稻上取食分泌的蜜露量只有野生型上的40.3%~60.9%,褐飞虱单雌产卵量只为野生型51%~61.2%,卵孵化率只有野生型的52.2%~56.7%,均显著地减少。结果表明,含Bph3基因水稻RHTd对褐飞虱的抗性明显地高于分别含Bph1、bph2的水稻Mudgo和ASD7;水稻Bph3基因座的OsLecRK1单个基因过量表达即可显著增加水稻对褐飞虱的抗性,OsLecRK1协同影响褐飞虱的多个生物学参数降低褐飞虱的适合度。 展开更多
关键词 水稻 褐飞虱 bph3 OsRLKs 抗虫性
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褐飞虱IR56种群的致害特征 被引量:4
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作者 郑瑜 何佳春 +4 位作者 万品俊 赖凤香 孙燕群 林晶晶 傅强 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期552-558,共7页
含Bph3抗褐飞虱基因的水稻品种自20世纪80年代在东南亚推广后,迄今仍对褐飞虱有较好的抗性,受到我国抗褐飞虱育种专家的重视。在IR56水稻(含Bph3基因)上连续40多代胁迫饲养获得褐飞虱IR56寄主种群,从褐飞虱的生长、发育、繁殖以及水稻... 含Bph3抗褐飞虱基因的水稻品种自20世纪80年代在东南亚推广后,迄今仍对褐飞虱有较好的抗性,受到我国抗褐飞虱育种专家的重视。在IR56水稻(含Bph3基因)上连续40多代胁迫饲养获得褐飞虱IR56寄主种群,从褐飞虱的生长、发育、繁殖以及水稻品种的抗感反应(SSST法测定)两方面对该种群的致害性进行了研究。结果表明:1)在抗性水稻IR56上,褐飞虱IR56种群的羽化率、初羽化成虫体质量、成虫寿命、产卵量、蜜露排泄量、体质量增量等均较褐飞虱TN1种群显著增加,若虫历期则显著缩短;与感虫水稻TN1上的IR56种群或TN1种群相比,除成虫寿命、蜜露排泄量和体质量增量显著下降外,羽化率、产卵量、卵孵化率无显著差异,初羽化成虫体质量、若虫历期尽管差异显著但数值上较接近(其差值不及IR56水稻上IR56种群与TN1种群差值的1/2)。2)水稻品种苗期抗性反应显示IR56水稻对褐飞虱IR56种群的抗性级别为7级,明显弱于对褐飞虱TN1种群的3级,但略强于TN1水稻对褐飞虱IR56种群或TN1种群的9级。显然,与褐飞虱TN1种群相比,褐飞虱IR56种群对抗性水稻IR56有较强的致害能力,与IR56种群或TN1种群对TN1水稻的强致害水平尽管有一定的差距,但多数指标较为接近。含Bph3基因的水稻品种RathuHeenati对IR56种群抗性为1级,推测可能与该水稻品种存在Bph3以外的其他抗虫基因有关。 展开更多
关键词 褐飞虱 致害性 IR56种群 Bh3基因
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Identifi cation of BPH Resistant Gene in Changseongbyeo
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作者 Y.D. Kim S.H. Shin +4 位作者 J.K. Lee J.C. Ko K.H. Kim J.K. Ko C.K. Kim 《分子植物育种》 CAS CSCD 2007年第2期177-177,共1页
BPH (Brown planthopper, Nilaparvata lugens Stal) is a major insect of rice and give a lot of damages around Korea, Japan and East-West Asia. Especially, Increase of the environmentally friendly cultivation in South
关键词 植物漏斗 基因研究 抵抗基因 植物研究
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