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新疆南疆微小牛蜱Bm86基因及其编码蛋白剖析 被引量:2
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作者 刘永宏 赵丽 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第8期45-49,共5页
为了能高效表达理想的微小牛蜱抗原,本研究对新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室已获得的Bm86基因(Bm86Tarim)进行遗传进化分析,并对其编码蛋白进行生物学信息分析。结果显示本研究获得的新疆南疆微小牛蜱Bm86Tarim序列与已登... 为了能高效表达理想的微小牛蜱抗原,本研究对新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室已获得的Bm86基因(Bm86Tarim)进行遗传进化分析,并对其编码蛋白进行生物学信息分析。结果显示本研究获得的新疆南疆微小牛蜱Bm86Tarim序列与已登录的所有国外Bm86基因完整阅读框序列的核苷酸和氨基酸同源性分别为95.9%-98.6%和93.8%-97.8%,差异极小;遗传进化树分析结果显示本研究毒株与已登录多数毒株在同一分支内;生物学信息预测结果显示该蛋白不稳定,不溶性的概率为93.26%,有4个潜在糖基化位点。本试验结果为后续Bm86基因表达、免疫抗原制备和抗微小牛蜱疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 微小牛蜱 bm86基因 bm86蛋白
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微小牛蜱Bm86基因的克隆与原核表达 被引量:7
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作者 樊瑞泉 罗建勋 +8 位作者 杨孝朴 殷宏 高金亮 关贵全 刘志杰 党志胜 马米玲 任巧云 刘爱红 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2007年第1期15-19,共5页
根据已发表的Bm86基因序列,设计表达型引物,利用RT-PCR技术,从微小牛蜱饥饿幼蜱的研磨物中扩增Bm86基因,将PCR产物连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T easy-Bm86.测序分析表明:克隆的微小牛蜱Bm86基因序列与GenBank上登录的Bm8... 根据已发表的Bm86基因序列,设计表达型引物,利用RT-PCR技术,从微小牛蜱饥饿幼蜱的研磨物中扩增Bm86基因,将PCR产物连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T easy-Bm86.测序分析表明:克隆的微小牛蜱Bm86基因序列与GenBank上登录的Bm86基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为97%和95.6%.然后对重组克隆载体pGEM-T easy-Bm86进行双酶切,获得带有粘性末端的Bm86基因片段,并将此片段定向亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-Bm86,将其转化到BL21宿主菌中,用IPTG进行诱导表达.SDS-PAGE检测表明表达产物为分子量为88 Ku的融合蛋白,目的蛋白约占蛋白总量的39%,表达量约为1.08 mg/mL.Western blot分析表明此表达产物能被兔抗微小牛蜱阳性血清所识别. 展开更多
关键词 微小牛蜱 bm86基因 克隆 表达
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微小牛蜱Bm86基因的原核表达与表达条件的优化 被引量:3
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作者 马米玲 关贵全 +5 位作者 李有全 刘爱红 任巧云 牛庆丽 殷宏 罗建勋 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期531-533,共3页
根据微小牛蜱Bm86基因序列设计引物,在重组质粒pMD18-T-Bm86中克隆,并将其定向亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)株,用不同浓度异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在不同时间进行诱导表达。十二烷基硫酸钠-聚丙烯... 根据微小牛蜱Bm86基因序列设计引物,在重组质粒pMD18-T-Bm86中克隆,并将其定向亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)株,用不同浓度异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在不同时间进行诱导表达。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测结果表明,37℃条件下经1mmol/LIPTG诱导8h后,目的重组蛋白表达量最大,表达相对分子质量(Mr)约为94000的包涵体蛋白,与预期大小一致,目的蛋白约占蛋白总量的29%。蛋白质印迹(Western blotting)分析表明,该重组蛋白可被兔抗微小牛蜱全蜱阳性血清所识别。 展开更多
关键词 微小牛蜱 bm86基因 表达
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微小牛蜱Bm86基因的真核表达 被引量:4
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作者 李文卉 罗建勋 +7 位作者 殷宏 关贵全 马米玲 刘志杰 刘爱红 党志胜 高金亮 任巧云 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第9期718-722,共5页
采用RT-PCR技术从微小牛蜱饥饿幼蜱破解物中扩增到Bm86基因,将其与巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K重组构建了重组表达载体pPIC9K-Bm86,测序正确后将其用SacⅠ内切酶线性化后采用电穿孔法转化巴斯德毕赤酵母菌GS115,经G418抗性筛选... 采用RT-PCR技术从微小牛蜱饥饿幼蜱破解物中扩增到Bm86基因,将其与巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K重组构建了重组表达载体pPIC9K-Bm86,测序正确后将其用SacⅠ内切酶线性化后采用电穿孔法转化巴斯德毕赤酵母菌GS115,经G418抗性筛选高拷贝重组菌株后用甲醇诱导表达,SDS-PAGE和Western-blotting分析结果表明,诱导表达的培养上清液中表达出具有反应活性的68 ku重组Bm86蛋白,目的蛋白约占培养上清液中蛋白总量的32%以上,诱导96 h目的蛋白的表达量为0.36 mg/mL。 展开更多
关键词 微小牛蜱 bm86基因 毕赤酵母 真核表达
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新疆南疆地区微小牛蜱Bm86基因克隆及鉴定 被引量:2
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作者 代艳艳 廖秋萍 +6 位作者 贾桂珍 周桐 罗福江 周玉琴 王帅 赵丽 刘永宏 《江苏农业科学》 北大核心 2015年第1期24-26,共3页
为了克隆及鉴定新疆南疆地区微小牛蜱Bm86基因,参照Gen Bank登录的微小牛蜱Bm86基因序列,设计了可以扩增Bm86基因完整阅读框架的引物,对微小牛蜱进行总RNA提取、RT-PCR、克隆、测序、序列分析。结果表明,获得的Bm86基因长1 953 bp,与Gen... 为了克隆及鉴定新疆南疆地区微小牛蜱Bm86基因,参照Gen Bank登录的微小牛蜱Bm86基因序列,设计了可以扩增Bm86基因完整阅读框架的引物,对微小牛蜱进行总RNA提取、RT-PCR、克隆、测序、序列分析。结果表明,获得的Bm86基因长1 953 bp,与Gen Bank中登录号为M29321、HQ014398的微小牛蜱Bm86基因核苷酸同源性分别为99%、97%,且为一个完整的开放阅读框架。本研究获得的微小牛蜱Bm86基因,为获得基因工程疫苗的候选抗原及中国抗微小牛蜱疫苗制备奠定了基础。 展开更多
关键词 南疆 微小牛蜱 bm86基因 克隆
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新疆南疆微小牛蜱Bm86/Bm91双基因原核表达载体的构建 被引量:1
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作者 代艳艳 赵丽 +4 位作者 周桐 罗福江 周玉琴 王帅 刘永宏 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期33-37,共5页
为构建微小牛蜱Bm86和Bm91双基因原核表达载体,以新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室获得的Bm86和Bm91克隆基因阳性菌或质粒DNA为模板,参照GenBank登录的微小牛蜱Bm86和Bm91基因序列和所用载体序列,设计可以扩增Bm86和Bm91基因... 为构建微小牛蜱Bm86和Bm91双基因原核表达载体,以新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室获得的Bm86和Bm91克隆基因阳性菌或质粒DNA为模板,参照GenBank登录的微小牛蜱Bm86和Bm91基因序列和所用载体序列,设计可以扩增Bm86和Bm91基因完整阅读框架的引物,然后对新疆南疆微小牛蜱Bm86和Bm91基因进行PCR扩增、纯化、酶切后连接,构建双基因重组质粒pET-32a-Bm并鉴定。结果显示,成功构建Bm86和Bm91双基因重组质粒pET-32a-Bm,经测序鉴定和初始获得的Bm86和Bm91基因序列一致,未发生变异。 展开更多
关键词 微小牛蜱 bm86基因 Bm91基因 构建
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微小牛蜱Bm86基因的克隆及真核表达载体的构建 被引量:1
7
作者 李文卉 罗建勋 +8 位作者 刘磊 党志胜 高金亮 关贵全 刘志杰 刘爱红 马米玲 任巧云 殷宏 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第2期124-128,共5页
为了克隆微小牛蜱Bm86 基因及构建该基因的表达载体,以微小牛蜱饥饿幼蜱的破解物提取的总RNA为模板,参照已发表的微小牛蜱Bm86基因的核苷酸序列,设计了1对引物,采用RT-PCR技术获得微小牛蜱Bm86基因;将Bm86基因克隆入载体,并进行序列分析... 为了克隆微小牛蜱Bm86 基因及构建该基因的表达载体,以微小牛蜱饥饿幼蜱的破解物提取的总RNA为模板,参照已发表的微小牛蜱Bm86基因的核苷酸序列,设计了1对引物,采用RT-PCR技术获得微小牛蜱Bm86基因;将Bm86基因克隆入载体,并进行序列分析,结果证明,克隆的Bm86基因序列与GenBank上登录的Bm86基因序列的同源性达97.4%,而且该序列包含完整的开放阅读框。将该基因克隆入真核表达载体 pPIC9K,构建并获得了重组真核表达载体pPIC9K-Bm86。 展开更多
关键词 微小牛蜱 bm86基因 克隆 重组表达载体
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Inhibition of <i>Ehrlichia canis</i>and <i>Babesia canis</i>transmission among ticks fed together on dogs vaccinated with Bm86 antigen 被引量:1
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作者 Alina Rodríguez-Mallon Gervasio H. Bechara +5 位作者 Rosangela M. Zacarias Efrain Benavides-Ortiz Jose Luis Soto-Rivas Arlen Patricia Gómez-Ramírez Javier Andrés Jaimes-Olaya Mario Pablo Estrada-García 《Open Journal of Animal Sciences》 2013年第3期24-32,共9页
GAVAC (Heber Biotec S.A, Havana, Cuba) is a commercially available vaccine developed with the Rhipicephalus (Boophilus) microplus Bm86 recombinant antigen. Bm86 is a “concealed” antigen that is present in the plasma... GAVAC (Heber Biotec S.A, Havana, Cuba) is a commercially available vaccine developed with the Rhipicephalus (Boophilus) microplus Bm86 recombinant antigen. Bm86 is a “concealed” antigen that is present in the plasmatic membrane of tick gut epithelial cells with unknown function so far. It is well known that after vaccination in the last fifteen years in Cuba, there was a significant decrease of babesiosis (Babesia bovis and Babesia bigemina) and anaplasmosis (Anaplasma marginale) in cattle. A reduced transmission capacity of ticks fed on tick-immune animals and humans has been reported for several tick-borne pathogens. Recent experiments have demonstrated that an anti-tick vaccine may contribute to the control of tick-borne pathogens not only by decreasing the exposure of susceptible hosts to ticks, but also by reducing the vector capacity of ticks. In this study, the potential of Bm86 vaccination to interfere with pathogen transmission among ticks was evaluated by using as experimental model the brown dog tick Rhipicephalus sanguineus and the tickborne Babesia canis and Ehrlichia canis pathogens. Dogs, vaccinated and not vaccinated, were infested with pathogen-infected ticks and noninfected nymphs of R. sanguineus. After feeding, the pathogen transmission to newly molted adults from co-feeding uninfected nymphs was studied by conventional PCR and qPCR. Results suggest that the anti-Bm86 antibodies could be able to block the transmission of B. canis and/or E. canis from infected to non-infected ticks. 展开更多
关键词 RHIPICEPHALUS sanguineus EHRLICHIA CANIS Babesia CANIS Tick-Borne Diseases DOGS bm86
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Changes in the Ovarian Polyamine Content and Seed Set Efficiency of Cotton by the Plant Growth Regulator BM86
9
作者 Androniki C. Bibi Derrick M. Oosterhuis Evangelos D. Gonias 《American Journal of Plant Sciences》 2012年第9期1328-1335,共8页
Naturally occurring polyamines in plants have been implicated in floral initiation, and fruit development. The plant growth regulator BM86 was formulated to stimulate seed production and fruit growth by enhancing poly... Naturally occurring polyamines in plants have been implicated in floral initiation, and fruit development. The plant growth regulator BM86 was formulated to stimulate seed production and fruit growth by enhancing polyamine synthe-sis. The objectives of this study were to determine the effect of BM86 on free polyamine content in cotton (Gos-sypium hirsutum L.) ovaries and on seed set efficiency, and also to investigate genotypic differences in ovarian polyamine content. BM86 was applied at the first flower stage and two weeks later at 2.34 mL/ha. This study showed that application of BM86 had a significant positive effect on ovarian polyamine content of cotton. Putrescine and sper-midine one week after the 1st BM86 application and putrescine two week after the 1st BM86 application, were significantly increased compared to the untreated control. Higher seed set efficiency with the BM86 application was observed when the total number of seeds was used for the calculation. However, when the number of harvestable seeds was used to calculate seed set efficiency BM86 had no significant effect. In addition, application of BM86 did not significantly alter seedcotton yield of the crop. Only small differences in ovarian polyamine content were detected among the genotypes tested, possibly due to the narrow genetic pool of the commercial cotton genotypes used. Application of BM86 can significantly increase cotton seed number by enhancing polyamines biosynthesis, but further research is needed to determine how to capitalize on the increased potential number of harvestable seeds. 展开更多
关键词 PUTRESCINE SPERMIDINE SPERMINE bm86 GOSSYPIUM hirusutm L. OVARIES
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