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细胞自噬通量探针模型构建及酒体微量成分对细胞自噬的影响
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作者 黄业余 罗蕊琪 +2 位作者 钟恒 王德良 黄丹 《中国酿造》 北大核心 2026年第2期145-151,共7页
为建立高效评估白酒微量成分自噬调节活性的方法,该研究以人正常肝细胞LO2为载体,采用慢病毒转导与流式细胞术分选的方法构建并筛选稳定高效表达细胞自噬通量探针GFP-LC3-RFP-LC3ΔG的细胞株。通过流式细胞术检测绿色荧光蛋白(GFP)/红... 为建立高效评估白酒微量成分自噬调节活性的方法,该研究以人正常肝细胞LO2为载体,采用慢病毒转导与流式细胞术分选的方法构建并筛选稳定高效表达细胞自噬通量探针GFP-LC3-RFP-LC3ΔG的细胞株。通过流式细胞术检测绿色荧光蛋白(GFP)/红色荧光蛋白(RFP)荧光强度的比值,并结合免疫印记(WB)分析LC3和P62蛋白表达水平,系统评价白酒中两种微量成分(月桂酸和4-甲基愈创木酚)对细胞自噬的影响。结果表明,成功构建并筛选得到稳定高效表达细胞自噬通量探针GFP-LC3-RFP-LC3ΔG的细胞株LO2-GFP-RFP,其能灵敏响应细胞自噬调节,通过对其进行饥饿处理可使GFP/RFP值从85.05%降至80.61%,而通过饥饿处理同时加入自噬抑制剂巴佛洛霉素A1(BafA1)后可使GFP/RFP值回升至83.22%。通过自噬通量探针结合流式检测技术与WB相互印证了月桂酸和4-甲基愈创木酚在一定浓度范围内对细胞自噬的调控作用。该研究证实基于自噬通量探针结合流式检测技术适用于白酒微量成分自噬活性的快速筛选,为解析白酒健康效应提供了有效方法平台。 展开更多
关键词 细胞自噬通量探针模型 构建 免疫印记 月桂酸 4-甲基愈创木酚
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Decoupling Conditions for Elasto-plastic Consolidation Question Based on Numerical Modeling Method 被引量:1
2
作者 Cheng Tao Wang Jingtao Dong Bichang 《Journal of China University of Geosciences》 SCIE CSCD 2005年第4期363-368,共6页
Elasto-plastic consolidation is one of the classic coupling questions in geomechanics. To solve this problem, an elasto-plastic constitutive model is derived based on the numerical modeling method. The model is applie... Elasto-plastic consolidation is one of the classic coupling questions in geomechanics. To solve this problem, an elasto-plastic constitutive model is derived based on the numerical modeling method. The model is applied to Blot's consolidation theory. Incremental governing partial differential equations are established using this method. According to the stress path, the decoupling condition of these equations is discussed. Based on these conditions, an incremental diffusion equation and uncoupling governing equations are presented. The method is then applied to numerical analyses of three examples. The results show that (1) the effect of the stress path should be taken into account in the simulation of the soil consolidation question; (2) this decoupling method can predict the evolvement of pore water pressure; (3) the settlement using cam-clay model is less than that using numerical model because of dilatancy. 展开更多
关键词 numerical modeling method blot's consolidation stress path constitutive model liquisolid coupling decouple incremental diffusion equation dilatancy.
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CSF1R^(+/-)小鼠的构建和基因鉴定
3
作者 周园园 刘崇 +4 位作者 王安琪 张慧茹 邱佳琪 朱梦娟 涂佳杰 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第5期884-889,共6页
目的构建集落刺激因子1受体杂合(CSF1R^(+/-))小鼠并分析其基因型,为疾病病理机制及药物靶点提供动物模型基础。方法根据Cre/Loxp系统设计一种线性化的靶向载体,在集落刺激因子1受体(CSF1R)基因第5外显子上游插入一个Loxp位点,在第5外... 目的构建集落刺激因子1受体杂合(CSF1R^(+/-))小鼠并分析其基因型,为疾病病理机制及药物靶点提供动物模型基础。方法根据Cre/Loxp系统设计一种线性化的靶向载体,在集落刺激因子1受体(CSF1R)基因第5外显子上游插入一个Loxp位点,在第5外显子下游插入一个双侧有Loxp位点的新霉素抗性盒(PGK-neo)。将线性化的靶向载体电穿孔至胚胎干细胞(ES)。将正确靶向的ES注射到C57BL/6J小鼠的胚泡中得到嵌合小鼠,与透明带3-Cre(Zp3-Cre)小鼠进行繁殖。新生小鼠出生后9~14天编号并剪鼠尾,提取小鼠的DNA,通过聚合酶链式反应(PCR)和琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型,筛选出CSF1R^(+/-)小鼠。应用流式细胞术检测小鼠巨噬细胞中CSF1R的表达;Western blot检测小鼠组织中CSF1R的蛋白表达。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示,野生小鼠(WT)扩增出453 bp的条带,CSF1R^(+/-)小鼠扩增出453 bp和650 bp的条带。流式细胞术结果显示,与WT组比较,CSF1R^(+/-)组小鼠的腹腔来源巨噬细胞(PM)和骨髓来源巨噬细胞(BMDM)中的CSF1R低表达(P<0.05)。Western blot结果显示,与WT组比较,CSF1R^(+/-)组小鼠脾脏、肾脏、脑组织中的CSF1R蛋白低表达(P<0.05)。结论成功构建、繁育和鉴定CSF1R^(+/-)小鼠,为进一步揭示CSF1R在免疫调节中的潜在机制研究提供动物模型基础。 展开更多
关键词 CSF1R PCR Western blot 流式细胞术 Cre/Loxp 动物模型
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甘草酸对海人藻酸癫痫大鼠模型癫痫发作及海马神经元损伤的影响
4
作者 陈艳 余艳华 +2 位作者 陈季南 李圣华 李军荣 《中国现代神经疾病杂志》 北大核心 2025年第4期303-310,共8页
目的探讨甘草酸对海人藻酸癫痫大鼠癫痫发作和海马神经元损伤的影响及可能作用机制。方法于大鼠海马组织注射海人藻酸制备癫痫模型,随机分为假手术组、癫痫模型组和甘草酸干预组(25 mg/kg组和50 mg/kg组),观察各组癫痫发作潜伏期及严重... 目的探讨甘草酸对海人藻酸癫痫大鼠癫痫发作和海马神经元损伤的影响及可能作用机制。方法于大鼠海马组织注射海人藻酸制备癫痫模型,随机分为假手术组、癫痫模型组和甘草酸干预组(25 mg/kg组和50 mg/kg组),观察各组癫痫发作潜伏期及严重程度、监测急性发作期异常脑电活动,免疫组化染色和免疫印迹法检测海马CA3区神经元损伤程度及高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达变化。结果与模型组相比,甘草酸25 mg/kg组和50 mg/kg组大鼠癫痫发作潜伏期延长[(109.33±42.84)min对(51.17±22.31)min,t=-2.950,P=0.015;(109.50±35.79)min对(51.17±22.31)min,t=-3.388,P=0.007],模型制备后6 h内达≥Ⅳ级发作频次减少[(2.83±0.75)次对(5.00±1.55)次,t=3.081,P=0.012;(2.67±1.75)次对(5.00±1.55)次,t=2.445,P=0.035],脑电图痫样放电减少。癫痫发作急性期,模型组大鼠海马CA3区神经元数目减少且少于假手术组[(40.33±5.69)个对(72.33±7.51)个;t=5.886,P=0.004],甘草酸25 mg/kg组和50 mg/kg组神经元数目增加且多于模型组[(58.33±2.52)个对(40.33±5.69)个,t=-5.014,P=0.007;(57.00±6.25)个对(40.33±5.69)个,t=-3.418,P=0.027]。免疫组化染色显示,模型组大鼠海马CA3区HMGB1表达水平[积分光密度值(IOD)]升高且高于假手术组[(3.79±0.50)×10^(6)IOD对(2.16±0.45)×10^(6)IOD;t=-4.216,P=0.014],甘草酸25 mg/kg组和50 mg/kg组海马CA3区HMGB1表达水平下降且低于模型组[(2.50±0.52)×10^(6)IOD对(3.79±0.50)×10^(6)IOD,t=3.090,P=0.037;(2.66±0.44)×10^(6)IOD对(3.79±0.50)×10^(6)IOD,t=2.955,P=0.042]。免疫印迹法显示,模型组大鼠海马组织HMGB1表达水平(相对灰度值)高于假手术组(1.19±0.17对0.54±0.14;t=-5.078,P=0.007),甘草酸25 mg/kg组和50 mg/kg组海马组织HMGB1表达降低且低于模型组(0.65±0.04对1.19±0.17,t=5.286,P=0.028;0.58±0.13对1.19±0.17,t=4.953,P=0.008)。结论甘草酸可延长癫痫模型大鼠发作潜伏期、降低发作严重程度、减少脑电图痫样放电,并缓解海马神经元损伤,其作用机制可能与抑制海马组织HMGB1表达有关。 展开更多
关键词 癫痫 红藻氨酸 甘草酸 海马 神经元 高迁移率族蛋白质类 免疫组织化学 印迹法 蛋白质 大鼠 疾病模型 动物
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双相各向同性介质伪谱法地震波场数值模拟 被引量:9
5
作者 张军舵 乐友喜 王艳香 《石油物探》 EI CSCD 2008年第4期338-345,共8页
伪谱法是一种模拟精度和计算效率都较高的地震波场数值模拟方法。该方法通过对空间坐标的快速傅里叶变换实现数值计算,在时间域直接采用差分运算代替导数的求解,避免了求偏导数;不存在有限差分和有限元等方法对高频成分限制的问题,可以... 伪谱法是一种模拟精度和计算效率都较高的地震波场数值模拟方法。该方法通过对空间坐标的快速傅里叶变换实现数值计算,在时间域直接采用差分运算代替导数的求解,避免了求偏导数;不存在有限差分和有限元等方法对高频成分限制的问题,可以实现全频带地震波场模拟;对内存容量的需求远远低于有限元法。利用伪谱法实现双相各向同性介质地震波场数值模拟的基本原理是:首先基于Biot模型给出双相各向同性介质弹性波波动方程;然后推导出二维双相各向同性介质的伪谱法计算公式;最后对给定的介质模型进行模拟试算。模拟结果表明,弹性波在双相各向同性介质中以快纵波、横波和慢纵波3种方式传播。基于模拟结果,分析了各类波的传播规律,讨论了耗散系数和孔隙度对地震波传播的影响。 展开更多
关键词 双相介质Biot模型 各向同性 波场模拟 伪谱法
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小菜蛾碱性磷酸酯酶受体表达与分子模拟 被引量:2
6
作者 张霄 胡晓丹 +6 位作者 仲建锋 武爱华 徐重新 刘媛 张存政 谢雅晶 刘贤金 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第23期4555-4565,共11页
【目的】利用原核表达小菜蛾(Plutella xyllostella)中肠膜结合碱性磷酸酯酶(membrane-bound alkaline phosphatase,mALP)并经Ligand blot验证其具有与Cry1Ac毒素结合的能力;通过同源建模和分子对接研究Cry1Ac-mALP的结合模式,预测毒素... 【目的】利用原核表达小菜蛾(Plutella xyllostella)中肠膜结合碱性磷酸酯酶(membrane-bound alkaline phosphatase,mALP)并经Ligand blot验证其具有与Cry1Ac毒素结合的能力;通过同源建模和分子对接研究Cry1Ac-mALP的结合模式,预测毒素和受体结合区域及关键氨基酸位点(热点残基),为了解毒素-受体互作机制及分子改造增强Cry毒素活性的研究打下基础。【方法】针对小菜蛾mALP全长设计引物,并以小菜蛾c DNA为模板扩增mALP基因,双酶切后用T4连接酶连接至pET-26b原核表达载体,将构建的pET-26b-mALP载体转化Trans1-T1克隆感受态,挑取克隆并提取质粒后进行PCR、双酶切和测序验证,将验证无误的重组质粒转化E.coliBL21(DE3)表达感受态细胞,进行诱导表达。将诱导表达后的mALP转至PVDF膜上,通过Western blot和Ligand blot分别验证mALP是否成功表达以及是否具有与Cry1Ac毒素结合的能力。对mALP进行同源建模、分子动力学模拟以及模型评价,获得的mALP最佳三维结构与Cry1Ac毒素利用Patch DOCK和Fire Dock程序进行分子对接试验,对确定的最佳毒素-受体复合物进行结合区域和结合氨基酸位点分析,并通过计算机辅助的丙氨酸突变扫描试验确定毒素和受体参与的关键氨基酸残基。【结果】扩增出小菜蛾mALP基因并克隆至pET-26b原核表达载体,转化E.coli BL21(DE3)表达感受态后挑取阳性克隆提取质粒后进行PCR、双酶切和测序均显示构建正确。通过原核表达和Western blot验证成功表达了mALP蛋白,并经Ligand blot试验证实了原核表达的mALP具有和Cry1Ac毒素结合的能力。利用同源建模成功获得了mALP的三维结构,通过Patch DOCK和Fire Dock分子对接程序,获得毒素和受体的对接复合物,通过溶剂可及表面积变化计算和Ligplot分析,确定毒素结构域Ⅱ和结构域Ⅲ均参与了受体结合,并且毒素和受体均以疏水结合和氢键结合模式参与结合,最后通过热点残基预测发现Cry1Ac毒素和mALP中分别有3个氨基酸残基(376ASN、443SER和486SER)和4个氨基酸残基(452ARG、499THR、502TYR和513TYR)是参与互作的关键氨基酸位点。【结论】经原核表达的小菜蛾mALP同样具有与Cry1Ac毒素结合的能力,并利用分子模拟技术预测了小菜蛾mALP三维结构及与Cry1Ac毒素结合模式。 展开更多
关键词 碱性磷酸酯酶 原核表达 配体印迹 同源建模 分子对接 热点残基预测
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IL-31RA基因敲除小鼠纯合子模型的建立 被引量:2
7
作者 江涛 高婧 +2 位作者 岳欢 高雅倩 黄俊琼 《贵阳医学院学报》 CAS 2015年第3期229-233,共5页
目的:建立IL-31RA基因敲除小鼠纯合子模型,为IL-31RA基因相关研究提供动物模型。方法:IL-31RA基因敲除小鼠严格按照SPF级要求的动物饲养标准进行饲养繁殖,采用聚合酶链式反应(PCR)法鉴定子代小鼠的基因型,RT-PCR法鉴定小鼠IL-31RA mRNA... 目的:建立IL-31RA基因敲除小鼠纯合子模型,为IL-31RA基因相关研究提供动物模型。方法:IL-31RA基因敲除小鼠严格按照SPF级要求的动物饲养标准进行饲养繁殖,采用聚合酶链式反应(PCR)法鉴定子代小鼠的基因型,RT-PCR法鉴定小鼠IL-31RA mRNA的表达,Western blot鉴定IL-31RA蛋白的表达,HE染色观察小鼠重要脏器的形态学变化。结果:PCR法成功检测出子代小鼠的3种基因型,纯合子基因敲除小鼠未检测出IL-31RA mRNA和IL-31RA蛋白的表达,IL-31RA基因敲除小鼠的重要脏器的形态学特征与野生型小鼠比较无明显变化;基因敲除小鼠可成功饲养繁殖,亦可获得较多的基因敲除纯合子小鼠。结论:成功构建了IL-31RA基因敲除小鼠纯合子模型。 展开更多
关键词 白细胞介素31 基因敲除 聚合酶链反应(PCR) 反转录PCR WESTERN blot 模型 动物
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小菜蛾中肠氨肽酶基因PxAPN5的克隆、原核表达及蛋白质同源建模分析 被引量:2
8
作者 许炼 高焕娟 +3 位作者 潘志针 朱育菁 陈清西 刘波 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1272-1280,共9页
【目的】克隆和表达小菜蛾Plutella xylostella氨肽酶基因,并进行基因序列分析和同源建模分析。【方法】以小菜蛾中肠c DNA为模板克隆分析氨肽酶基因序列,原核表达氨肽酶蛋白并进行酶活性测定,应用配体印迹分析氨肽酶与Cry2Ab蛋白的结合... 【目的】克隆和表达小菜蛾Plutella xylostella氨肽酶基因,并进行基因序列分析和同源建模分析。【方法】以小菜蛾中肠c DNA为模板克隆分析氨肽酶基因序列,原核表达氨肽酶蛋白并进行酶活性测定,应用配体印迹分析氨肽酶与Cry2Ab蛋白的结合,通过蛋白质建模对突变位点进行分析。【结果】从小菜蛾中肠c DNA扩增出氨肽酶基因,该基因全长2 853 bp,编码950个氨基酸,预测蛋白分子量为107.3871 k Da,等电点为5.24;进化树分析显示,克隆得到的氨肽酶基因属于APN家族5,将其命名为Px APN5(Gen Bank登录号:KM034756)。Px APN5蛋白具有鳞翅目昆虫氨肽酶蛋白的保守性特征,即含有N-糖基化位点、O-糖基化位点和GPI锚定位点,具有"HEXXH"锌蛋白酶结构域和C端跨膜区域。在大肠杆菌Escherichia coli中原核表达Px APN5,表达产物经SDS-PAGE电泳,在110 k Da附近出现特异性条带;酶活性测试显示菌体破碎上清液具有氨肽酶活性,比活力为1 047.2 U/g。配体印迹结果显示表达的Px APN5能与Cry2Ab蛋白特异性结合。多序列比对结果表明,与其他已报道的小菜蛾氨肽酶相比,Px APN5氨基酸序列有3个保守性位点发生了突变,并通过蛋白质建模的方式表征突变位点。【结论】本研究成功克隆和表达了具有氨肽酶活性的小菜蛾氨肽酶,并发现其能与Cry2Ab蛋白特异性结合;通过蛋白质建模对氨肽酶突变位点的特征及功能进行了预测。这些结果对小菜蛾氨肽酶的功能性研究提供了理论基础。 展开更多
关键词 小菜蛾 氨肽酶基因 基因分析 原核表达 酶活性 配体印迹 同源建模
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G蛋白在快速老化痴呆小鼠SAMP8脑组织中的表达 被引量:3
9
作者 阚伯红 张海霞 +1 位作者 于建春 韩景献 《天津医药》 CAS 北大核心 2010年第11期980-982,共3页
目的:观察在不同月龄小鼠SAMP8皮质和海马中G蛋白的表达情况。方法:利用Western-blot方法检测Gαq/11、Gαi和GαS蛋白在8月龄和18月龄快速老化痴呆小鼠SAMP8的表达,并以正常老化小鼠SAMR1作为对照研究。结果:与同月龄SAMR1相比,Gαq/11... 目的:观察在不同月龄小鼠SAMP8皮质和海马中G蛋白的表达情况。方法:利用Western-blot方法检测Gαq/11、Gαi和GαS蛋白在8月龄和18月龄快速老化痴呆小鼠SAMP8的表达,并以正常老化小鼠SAMR1作为对照研究。结果:与同月龄SAMR1相比,Gαq/11、Gαi和Gαs蛋白在8月龄小鼠SAMP8皮质和海马组织中的表达无明显异常(P>0.05),而到18月龄时,SAMP8皮质部位Gαq/11表达量低于SAMR1(P<0.05),海马部位Gαq/11和Gαi的表达量低于SAMR1(P<0.05)。结论:18月龄SAMP8脑组织中Gαq/11和Gαi的异常表达参与了阿尔茨海默病(AD)的病理进展,并有望作为AD治疗的一个靶点。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 GTP结合蛋白质类 印迹法 蛋白质 小鼠 模型 动物
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当归多糖对衰老模型大鼠脾脏结构与功能的影响 被引量:23
10
作者 张梦思 邹婷 +3 位作者 叶渊文 贾道勇 张岩岩 王亚平 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期257-264,共8页
目的探讨当归多糖(ASP)对衰老模型大鼠脾脏结构与功能影响及其机制。方法 SD大鼠随机分为正常对照组,ASP对照组,衰老模型组,ASP衰老模型组,每组10只。衰老模型组皮下注射D-半乳糖(120mg/kg)qd×42d;ASP衰老模型组注射D-半乳糖的剂... 目的探讨当归多糖(ASP)对衰老模型大鼠脾脏结构与功能影响及其机制。方法 SD大鼠随机分为正常对照组,ASP对照组,衰老模型组,ASP衰老模型组,每组10只。衰老模型组皮下注射D-半乳糖(120mg/kg)qd×42d;ASP衰老模型组注射D-半乳糖的剂量与时间同衰老模型组,第15天起腹腔注射ASP(100 mg/kg)qd×28d;正常对照组皮下注射等量生理盐水qd×42d;ASP对照组注射等量生理盐水qd×14d,第15天起腹腔注射ASP(同ASP衰老模型组)。药物注射完成后第2天,取脾脏测定脾指数,石蜡切片观察脾脏显微形态学;衰老β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察脾细胞百分率,CCK8测定脾细胞对刀豆蛋白A刺激的增殖能力;流式细胞术检测脾细胞周期与活性氧簇(ROS)含量;ELISA检测脾细胞分泌TNF-α、GM-CSF能力与丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量;Western blotting检测衰老相关蛋白P53、P21、RB蛋白表达。结果与正常对照组比较,D-半乳糖致衰老模型组大鼠脾指数,脾脏白髓面积比例,脾细胞对刀豆蛋白A刺激的增殖能力,S期比例及TNF-α、GM-CSF的分泌能力,SOD活性明显降低;脾细胞的SA-β-Gal阳性率,G1期与G2/M期细胞比例,ROS、MDA含量,P53、P21、RB蛋白表达显著增高。与衰老模型组比较,ASP使D-半乳糖致衰老模型大鼠脾指数,脾脏白髓面积比例,脾细胞对刀豆蛋白A刺激的增殖能力,S期比例与TNF-α、GM-CSF的分泌能力,SOD活性明显提高;脾细胞SA-β-Gal阳性率,G1期及G2/M期细胞比例,ROS、MDA含量,P53、P21、RB蛋白表达有显著抑制作用。结论 D-半乳糖复制的衰老模型大鼠脾脏结构与功能损伤明显,当归多糖对其致衰损伤有明确的保护作用。 展开更多
关键词 当归多糖 D-半乳糖 衰老模型 脾脏 免疫印迹法 大鼠
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姜黄素对帕金森病小鼠模型黑质多巴胺能神经元损伤的保护作用 被引量:11
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作者 潘静 丁健青 陈生弟 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2007年第5期447-452,共6页
目的研究姜黄素对由MPTP诱发的帕金森病小鼠模型的脑保护作用及其可能机制。方法应用免疫组织化学染色法和蛋白质印迹法(Western blotting)分别观察姜黄素干预前后帕金森病小鼠中脑黑质-纹状体系统中酪氨酸羟化酶、胶质纤维酸性蛋白阳... 目的研究姜黄素对由MPTP诱发的帕金森病小鼠模型的脑保护作用及其可能机制。方法应用免疫组织化学染色法和蛋白质印迹法(Western blotting)分别观察姜黄素干预前后帕金森病小鼠中脑黑质-纹状体系统中酪氨酸羟化酶、胶质纤维酸性蛋白阳性神经元数目的变化,以及酪氨酸羟化酶、诱导型一氧化氮合酶和胶质纤维酸性蛋白表达水平的变化。结果MPTP组小鼠中脑黑质酪氨酸羟化酶和胶质纤维酸性蛋白阳性神经元数目明显减少,与正常对照组及治疗组相比差异有统计学意义(均P<0.05)。经不同剂量(5mg/kg、50mg/kg和150mg/kg)的姜黄素干预治疗后,小鼠中脑纹状体中的酪氨酸羟化酶蛋白表达水平(相对灰度值)明显升高,而黑质中诱导型一氧化氮合酶和胶质纤维酸性蛋白表达水平明显降低,与MPTP组比较差异均有统计学意义(P<0.05);MPTP组与溶剂对照组(MPTP+DMSO)之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论姜黄素可以有效地拮抗MPTP诱导的帕金森病小鼠模型黑质多巴胺能神经元的丢失,其机制可能与姜黄素降低黑质多巴胺能神经元活性氧含量以及抑制炎症反应等作用有关。 展开更多
关键词 姜黄素 帕金森病 酪氨酸单氧化酶 神经胶质原纤维酸性蛋白质 一氧化氮合酶 免疫组织化学 印迹法 蛋白质 疾病模型 动物
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Logistic回归判别模型判别HIV抗体不确定者转归的可行性 被引量:8
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作者 陈慧萍 刘雷 +5 位作者 张连生 彭国平 蒋洪林 汤恒 彭庭海 阳凯 《中国艾滋病性病》 CAS 2014年第5期367-369,379,共4页
目的探讨用Logistic回归判别模型判别艾滋病病毒(HIV)抗体不确定者转归的可行性。方法对2002-2013年被诊断为HIV抗体不确定者,按照《全国艾滋病检测技术规范》进行随访检测。描述分析HIV抗体不确定者的流行病学特征,用Logistic回归模型... 目的探讨用Logistic回归判别模型判别艾滋病病毒(HIV)抗体不确定者转归的可行性。方法对2002-2013年被诊断为HIV抗体不确定者,按照《全国艾滋病检测技术规范》进行随访检测。描述分析HIV抗体不确定者的流行病学特征,用Logistic回归模型判别分析HIV抗体不确定者的转归。结果共有162例受检者被判定为"HIV抗体不确定"并成功随访,其中44例随访检测阳性,阳转率为27.16%(44/162)。Logistic回归判别模型的特异度、灵敏度分别为96.61%(114/118)、70.45%(31/44),总判别准确率为89.51%(145/162)。结论模型判别准确率良好,提示Logistic回归判别模型可以作为HIV的辅助诊断方法之一。 展开更多
关键词 HIV抗体不确定者 Logistic回归判别模型 判别分析
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动物低氧实验箱自动控制系统的组建及其在缺氧缺血脑损伤动物模型制作中的应用 被引量:4
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作者 侯伟健 佟浩 +3 位作者 柏树令 陈庆和 田晓红 张保功 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期138-142,共5页
目的组配低氧实验箱测氧装置的自动反馈调节系统,构建完整恒稳的氧浓度自动调节机制,并利用其进行缺氧缺血脑损伤(HIBD)大鼠模型的制作。方法购买电子控氧仪,自制气体密闭箱,自主选配组合气体控制阀门和自动感应开关。连接高压氮气,使... 目的组配低氧实验箱测氧装置的自动反馈调节系统,构建完整恒稳的氧浓度自动调节机制,并利用其进行缺氧缺血脑损伤(HIBD)大鼠模型的制作。方法购买电子控氧仪,自制气体密闭箱,自主选配组合气体控制阀门和自动感应开关。连接高压氮气,使氮气经电磁控制阀门进入密闭箱;控氧仪测得的密闭箱内的氧浓度信号被输出传至电磁感应开关,后者根据设定的氧浓度阈值控制电磁阀门的通断,进而控制氮气的通入或停止,达到维持密闭箱内的氧浓度恒稳状态。利用该自动控制系统,处理7 d龄颈总动脉结扎术后新生大鼠,设定并调节密闭箱氧浓度为(8.4±0.4)%,持续2.5 h。动物处理后于不同时间点取脑组织,记录表观损伤程度后取材保存,然后利用Western blot及免疫组化方法检测处理后脑组织内分子表达。结果该系统可以稳定调控密闭箱内的氧浓度于设定范围内。颈总动脉结扎术后7 d龄大鼠,于缺氧箱中处理2.5 h后,存活率达80%~90%。动物脑组织及细胞内分子表达发生明显改变,效果明显。结论该低氧试验箱的氧浓度自动控制系统达到了较好程度的稳定性,适于进行缺氧缺血脑损伤动物模型的制作实验。 展开更多
关键词 低氧实验箱 自动控制系统 缺氧缺血脑损伤 大鼠模型 WESTERN blot 免疫组织化学
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选择性环氧合酶-2抑制剂筛选模型的验证 被引量:1
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作者 潘献柱 汪晓庆 +2 位作者 谢琳琳 汪思应 王林 《安徽医药》 CAS 2009年第8期879-881,共3页
目的验证大鼠腹腔巨噬细胞环氧合酶-2抑制剂体外筛选模型的可靠性。方法采用放免法测定用脂多糖刺激后的大鼠腹腔巨噬细胞前列腺素-2的产量,运用Western印迹法检测处理后的大鼠腹腔巨噬细胞COX-2和COX-1的表达。结果加入0.5μg.L-1浓度... 目的验证大鼠腹腔巨噬细胞环氧合酶-2抑制剂体外筛选模型的可靠性。方法采用放免法测定用脂多糖刺激后的大鼠腹腔巨噬细胞前列腺素-2的产量,运用Western印迹法检测处理后的大鼠腹腔巨噬细胞COX-2和COX-1的表达。结果加入0.5μg.L-1浓度的LPS刺激6 h后,大鼠腹腔巨噬细胞前列腺素-2的产量最高,COX-2蛋白表达量最高;加入阿司匹林后,大鼠腹腔巨噬细胞COX-1表达明显降低。结论大鼠腹腔巨噬细胞模型可用于COX-2抑制剂体外筛选。 展开更多
关键词 选择性COX-2抑制剂 巨噬细胞 筛选模型 WESTERN印迹
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4种阿尔茨海默病动物模型行为学改变及凋亡机制的比较 被引量:8
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作者 侯雪芹 张磊 +8 位作者 林雅萍 田会娟 张春霞 刘玉 杨从 王奇 陈云波 程淑意 方淑环 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期3185-3187,共3页
目的探讨4种常见阿尔茨海默病(AD)动物模型在研究凋亡机制领域中的优势。方法采用4种常见AD模型(东莨菪碱致记忆障碍模型、鹅膏蕈酸致痴呆大鼠模型、快速老化模型、双转基因小鼠模型),利用Morris水迷宫测试动物模型认知能力;免疫印迹检... 目的探讨4种常见阿尔茨海默病(AD)动物模型在研究凋亡机制领域中的优势。方法采用4种常见AD模型(东莨菪碱致记忆障碍模型、鹅膏蕈酸致痴呆大鼠模型、快速老化模型、双转基因小鼠模型),利用Morris水迷宫测试动物模型认知能力;免疫印迹检测Bcl-2蛋白表达水平;TUNEL染色检测凋亡水平。结果在凋亡机制研究探讨中,快速老化小鼠(SAM)在Morris水迷宫测试、Bcl-2蛋白表达以及凋亡检测中其正常组与模型组均有显著差异(P<0.05)。结论 SAM模型在老年痴呆凋亡机制中有明显优势,为中药治疗老年痴呆的临床前研究提供指导。 展开更多
关键词 老年痴呆模型 MORRIS水迷宫 免疫印迹 免疫组化
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三叉神经根慢性压迫损伤对三叉神经节细胞髓鞘碱性蛋白及P75表达的影响 被引量:2
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作者 林仁 罗丽丽 +3 位作者 李秋华 陈婷 邱荣晖 罗道枢 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期707-712,共6页
目的 探讨三叉神经节中卫星胶质细胞与神经元相互作用对三叉神经痛(TN)的影响。方法 在SD大鼠假手术组(n=24)和三叉神经根慢性压迫诱导的TN大鼠模型组(n=24)中,运用免疫荧光和Western blotting方法,研究髓鞘碱性蛋白(MBP)、胶质纤维酸... 目的 探讨三叉神经节中卫星胶质细胞与神经元相互作用对三叉神经痛(TN)的影响。方法 在SD大鼠假手术组(n=24)和三叉神经根慢性压迫诱导的TN大鼠模型组(n=24)中,运用免疫荧光和Western blotting方法,研究髓鞘碱性蛋白(MBP)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及P75神经营养因子受体(P75NTR)在三叉神经节中的表达情况。结果 TN模型组P75NTR表达较假手术组增高,术后第7天和第14天的表达增高有统计学意义(P<0. 01);MBP在TN模型组的表达较假手术组均降低,特别在第7和14天的表达降低有统计学意义(P<0. 05);卫星胶质细胞标志物GFAP在TN模型组术后第7、14和21天表达增高(P<0. 01)。结论 大鼠三叉神经根区慢性压迫损伤引起三叉神经节神经元MBP和P75NTR表达改变和卫星胶质细胞的活化,可能影响神经元-卫星胶质细胞的相互作用,参与TN大鼠口面部周围伤害性信息向中枢的传递。 展开更多
关键词 三叉神经痛 三叉神经节 卫星胶质细胞 动物模型 免疫印迹法 免疫荧光 大鼠
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RNAi沉默MCM7基因对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤影响研究 被引量:4
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作者 孙雯 曹骥 +6 位作者 卢晓旭 朱伶群 杨春 欧超 骆成飘 李瑗 苏建家 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2015年第1期7-12,共6页
目的探讨微小染色体维持蛋白7(miniehromosome maintenanceprotein7,MCM7)基因RNAi(RNA interference)的重组慢病毒载体,对人肝癌细胞SMMC-7721 MCM7基因表达和裸鼠移植瘤生长的影响。方法构建重组逆转录慢病毒载体MCM7-shRNA,以MCM7基... 目的探讨微小染色体维持蛋白7(miniehromosome maintenanceprotein7,MCM7)基因RNAi(RNA interference)的重组慢病毒载体,对人肝癌细胞SMMC-7721 MCM7基因表达和裸鼠移植瘤生长的影响。方法构建重组逆转录慢病毒载体MCM7-shRNA,以MCM7基因沉默重组慢病毒颗粒(LV-shRNA-MCM7)感染SMMC-7721细胞,作为实验组;以对照慢病毒颗粒(LV-shRNA-NC)感染SMMC-7721细胞,作为阴性对照组;空白对照组常规培养,不做任何处理。通过嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株。3组细胞分别接种至裸鼠皮下,建立人肝癌裸鼠移植瘤模型。观察裸鼠成瘤情况、移植瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线;4周后测定肿瘤体积和质量,并用RT-PCR、实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法及免疫组织化学法检测移植瘤中MCM7的表达情况。结果 MCM7-shRNA慢病毒载体构建成功。裸鼠接种癌细胞后第6天均有肿瘤形成,与空白对照组和阴性对照组相比,实验组的肿瘤生长速度明显减慢,实验组、阴性对照组和空白对照组的瘤体平均体积分别为(27.72±7.80)、(81.86±10.91)和(79.75±16.61)mm3,差异有统计学意义,F=61.949,P<0.05;实验组、阴性对照组和空白对照组的瘤体平均质量分别为(0.19±0.06)、(0.501±0.14)和(0.509±0.18)g,差异有统计学意义,F=18.41,P<0.05。实验组MCM7mRNA的相对表达量为0.253±0.198,阴性对照组1.213±0.548,空白对照组1.201±0.744,实验组相比阴性对照组和空白对照组明显下降,差异有统计学意义,F=4.091,P<0.05;实验组MCM7蛋白相对表达量为0.207±0.015,阴性对照组1.116±0.062,空白对照组1.088±0.040,实验组相比阴性对照组和空白对照组明显下降,差异有统计学意义,F=292.778,P<0.05。MCM7蛋白在阴性对照组和空白对照组中阳性表达率均为100%(10/10),在实验组中为30%(3/10),实验组明显低于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义,χ2=18.261,P<0.001。结论慢病毒沉默SMMC-7721细胞MCM7基因表达能有效抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,MCM7基因可能成为肝癌基因治疗的有效靶点。 展开更多
关键词 肝肿瘤 RNA干扰 基因 MCM7 动物模型 基因治疗 印迹法 蛋白质 裸鼠
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中药脑溢安改善脑出血大鼠神经元有氧代谢的药效机制 被引量:12
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作者 唐涛 罗团连 +1 位作者 黎杏群 张花先 《中国临床康复》 CSCD 2003年第16期2288-2289,共2页
目的通过观察脑出血大鼠诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase,iNOS)在星形胶质细胞中的表达及中药脑溢安的影响,探讨脑出血的机制和中药的脑保护作用。方法100只动物按数字表法随机分成假手术组(25只)、手术组(75只)。其... 目的通过观察脑出血大鼠诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase,iNOS)在星形胶质细胞中的表达及中药脑溢安的影响,探讨脑出血的机制和中药的脑保护作用。方法100只动物按数字表法随机分成假手术组(25只)、手术组(75只)。其中手术组造模后又随机分入模型组、脑溢安治疗组、AG治疗组,每组25只。采用胶原酶复制大鼠脑出血模型,以免疫荧光双标组化法和蛋白质印迹法观察脑出血后iNOS的表达情况。结果脑出血后,模型组大鼠表达iNOS的反应性星形胶质细胞主要是分布在基底核血肿上部周边;蛋白印迹结果显示,模型组大鼠基底核区iNOS从12h,1d阳性信号逐渐增强(t=15.3,P<0.01),4d达峰值(t=36.4,P<0.01),7d信号稍弱(t=27.73,P<0.01);脑溢安组和氨基胍组的阳性信号较前者弱。结论脑出血后,患侧基底核反应性星形胶质细胞中的iNOS表达增强;脑溢安可能通过抑制星形胶质细胞中的iNOS表达,实现其脑保护作用。 展开更多
关键词 中药 脑溢安 脑出血 大鼠 神经元 有氧化谢 药效机制 一氧化氮合酶
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退变兔腰椎间盘纤维环中丝裂原活化蛋白激酶的表达及意义 被引量:4
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作者 王庆来 吕存贤 周江涛 《浙江中医药大学学报》 CAS 2012年第11期1214-1217,共4页
[目的]利用Western Blot法检测兔腰椎间盘退变动物模型和正常腰椎间盘纤维环组织中p38 MAPK的表达,探讨p38 MAPK在腰椎间盘退变过程中的作用。[方法]取清洁级新西兰大白兔20只,随机分为造模组和对照组,采用"异常应力负荷及椎间失稳... [目的]利用Western Blot法检测兔腰椎间盘退变动物模型和正常腰椎间盘纤维环组织中p38 MAPK的表达,探讨p38 MAPK在腰椎间盘退变过程中的作用。[方法]取清洁级新西兰大白兔20只,随机分为造模组和对照组,采用"异常应力负荷及椎间失稳法"造模;2个月后MRI检查论证造模是否成功;造模成功后取两组动物腰4、5纤维环检测p38 MAPK表达。[结果]造模组纤维环中p38 MAPK表达明显升高,和对照组比较具有显著差异(P<0.05)。[结论]兔退行性变椎间盘纤维环中p38 MAPK表达异常升高,表明p38 MAPK参与并促进了椎间盘组织纤维环的退变,如早期进行干预,有可能抑制椎间盘的退变。 展开更多
关键词 P38丝裂原活化蛋白激酶 WESTERN blot 腰椎间盘退变动物模型
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NRP-1在胃癌组织及细胞系中的表达及临床意义 被引量:9
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作者 张立 张迪 +5 位作者 周培华 王孝珑 王炜 陈南征 李孝彬 孙学军 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期82-86,共5页
目的研究神经纤毛蛋白1(NRP-1)在胃癌组织的表达,探讨其与胃癌发生、发展及临床病理因素的关系及可能的临床意义。方法应用免疫组织化学染色检测180例胃癌患者的胃癌组织及癌旁组织标本NRP-1表达,用免疫印迹方法检测胃癌组织及不同分化... 目的研究神经纤毛蛋白1(NRP-1)在胃癌组织的表达,探讨其与胃癌发生、发展及临床病理因素的关系及可能的临床意义。方法应用免疫组织化学染色检测180例胃癌患者的胃癌组织及癌旁组织标本NRP-1表达,用免疫印迹方法检测胃癌组织及不同分化程度的胃癌细胞NRP-1表达,K-M生存曲线和多因素回归模型用于分析胃癌预后。结果胃癌组织中NRP-1表达水平明显高于癌旁组织(P<0.001),胃癌组织中NRP-1高表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移、AJCC分期、T分期呈正相关(P<0.05)。多因素生存分析表明高表达NRP-1是胃癌患者总生存期的独立预后因子。结论过表达NRP-1可能在胃癌进展中发挥着重要作用,过表达NRP-1可作为生物标志物预测胃癌患者的不良预后。 展开更多
关键词 神经纤毛蛋白-1(NRP-1) 胃癌 免疫组织化学 免疫印迹 生存曲线 多因素回归模型
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