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肺癌细胞中NF-κB2基因表达及启动子区域甲基化状态分析
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作者 蒋文斌 李时飞 +6 位作者 王丰 许雪青 杨绍俊 贾双荣 李发科 商亚 陈鸣 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期432-435,共4页
目的研究肺癌细胞和人正常支气管细胞(human bronchial epithelial cell,HBE)中NF-κB2的表达情况及其启动子区CpG岛的甲基化状态。方法采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法检测肺癌细胞和正常支气管细胞NF-κB2基因mRNA的表达情况... 目的研究肺癌细胞和人正常支气管细胞(human bronchial epithelial cell,HBE)中NF-κB2的表达情况及其启动子区CpG岛的甲基化状态。方法采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法检测肺癌细胞和正常支气管细胞NF-κB2基因mRNA的表达情况;采用Western blot技术检测NF-κB2前体蛋白p100的表达情况;采用重亚硫酸盐测序(Bisulfite Sequencing PCR,BSP)技术检测NF-κB2启动子区CpG岛的甲基化状态。结果肺腺癌细胞株A549、肺鳞癌细胞株SK-MES-1和小细胞肺癌细胞株NCI-H446的NF-κB2 mRNA的表达分别是HBE细胞株的6.42±0.91倍(P<0.05,t=5.828)、2.78±0.52倍(P<0.05,t=3.219)、2.79±0.33倍(P<0.05,t=4.611);3种肺癌细胞中p100蛋白较HBE细胞均上调表达;4种细胞株中所扩增片段的CpG位点均呈非甲基化状态。结论肺癌细胞及HBE细胞中NF-κB2启动子区域的CpG位点处于非甲基化状态,说明NF-κB2基因表达情况与甲基化状态无直接关系,其启动子区的甲基化修饰未直接参与该基因的表达调控,可能存在其他相关的调控机制,有待进一步的探索。 展开更多
关键词 NF-kB2 肺肿瘤 甲基化 bisulfite-sequencing PCR(BSP)
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TIF1γ基因启动子区域突变和甲基化与非小细胞肺癌的关系研究 被引量：3
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作者 汪龙强 雷哲 +2 位作者 刘霞 刘仍允 张洪涛 《中国肺癌杂志》 CAS 北大核心 2013年第5期227-232,共6页
背景与目的TIF1γ(transcription intermediary factor 1gamma)属于转录中介因子1家族的成员,可干扰TGF-β/Smad信号通路,抑制TGF-β介导的信号传导,且TIF1γ在多种肿瘤细胞的表达减弱或缺失表明TIF1γ在癌症的发生发展过程中起到抑癌... 背景与目的TIF1γ(transcription intermediary factor 1gamma)属于转录中介因子1家族的成员,可干扰TGF-β/Smad信号通路,抑制TGF-β介导的信号传导,且TIF1γ在多种肿瘤细胞的表达减弱或缺失表明TIF1γ在癌症的发生发展过程中起到抑癌的作用。本研究旨在探索TIF1γ在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞与组织中的表达差异以确定TIF1γ与肺癌发生关系以及肺癌细胞中TIF1γ表达调控的潜在机制。方法选取13例NSCLC患者癌组织以及对应的癌旁组织样本,培养正常支气管上皮细胞HBE和NSCLC细胞株:A549和95C。运用Real-time PCR和Westernblot检测细胞与组织中TIF1γ基因的表达,并用ImageJ灰度扫描软件计算TIF1γ的相对表达量。通过DNA测序的方法检测TIF1γ基因启动子区域突变情况,并采用Bisulfite-sequencing PCR(BSP)克隆测序方法检测TIF1γ基因启动子区域甲基化情况。结果相对于HBE,TIF1γmRNA和蛋白在A549和95C中明显下调(P<0.05),13对组织样本中,9个(69.2%)癌旁组织样本里TIF1γ mRNA的表达量高于癌组织样本(P<0.05)。突变检测表明TIF1γ基因启动子区-287﹣-5在细胞株中没有突变发生。经BSP克隆测序方法分析发现在TIF1γ基因启动子-287﹣-5区域里存在5个可被甲基化的CpG位点(-214、-128、-124、-65和-55)。但这些CpG位点的甲基化频率在NSCLC细胞株中相比HBE没有明显差异。结论TIF1γ在NSCLC的发生中可能起抑癌的作用,TIF1γ基因启动子区域-287﹣-5在正常细胞和NSCLC细胞中都没有发生突变,但在-287﹣-5区域中存在5个可被甲基化的CpG位点。 展开更多
关键词 肺肿瘤 TIF1γ 甲基化 bisulfite-sequencing PCR
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