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巴尔通氏体效应蛋白BepE干扰人源Csk蛋白信号通路的结构与功能分析
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作者 张柯 刘清波 +1 位作者 胡永林 王大成 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2018年第1期51-58,共8页
巴尔通氏体作为多种人类疾病的病原菌,可分泌多种毒力效应蛋白.其中的7个毒力效应蛋白BepA^BepG由一个Ⅳ型分泌系统VirB注入宿主细胞内,干扰宿主细胞的多种信号传递通路.在这7个效应蛋白中,BepD^F的N端含有特征的EPIYA基序.注入宿主细胞... 巴尔通氏体作为多种人类疾病的病原菌,可分泌多种毒力效应蛋白.其中的7个毒力效应蛋白BepA^BepG由一个Ⅳ型分泌系统VirB注入宿主细胞内,干扰宿主细胞的多种信号传递通路.在这7个效应蛋白中,BepD^F的N端含有特征的EPIYA基序.注入宿主细胞后,这些EPIYA基序上的酪氨酸残基被宿主细胞中的SFK激酶磷酸化,磷酸化后的EPIYA基序可与宿主细胞中含SH2结构域的蛋白结合并干扰宿主细胞的SH2蛋白相关信号通路.在此之前,已经有多种病原菌的效应蛋白被发现含有EPIYA基序,并且通过磷酸化的EPIYA干扰哺乳动物宿主的SH2信号通路.这些毒性效应蛋白除EPIYA基序之外并没有明显的序列同源性.与此相应,在人类蛋白质组中目前只发现了6种含有EPIYA基序的蛋白,这个基序出现的频率显著低于基于随机预测的频率,这可能是在人类进化过程中含有EPIYA基序的蛋白会干扰正常信号通路传导而被淘汰.JAM-A是已报道的6个人体内EPIYA蛋白之一,它存在于人血小板中,可通过招募Csk至血小板来避免血栓的形成.已有的报道证明了BepE可与人源Csk相互作用,通过影响Csk的功能进而干扰一系列信号通路.人源Csk蛋白作为一个可以同时被来自于病原菌毒力蛋白和内源蛋白中磷酸化EPIYA基序识别并结合的分子,为我们研究并对比这两种含EPIYA基序的蛋白质对人类细胞中SH2信号通路的作用提供了一个理想的靶标.本文报道了Csk与BepE及JAM-A2种磷酸化多肽复合物高分辨率晶体结构并分别测定其亲和力.Csk与多肽复合物结构显示,Csk与2种多肽结合方式相似,都是通过SH2结构域与磷酸化酪氨酸结合,多肽链垂直于SH2结构域中的β片层.SPR实验结果显示,来源于巴尔通氏体的BepE比人源JAM-A与Csk亲和力高,这暗示毒力蛋白通过磷酸化的EPIYA基序以高亲和力结合人体内含SH2结构域的蛋白,进而干扰SH2蛋白所涉及的信号通路. 展开更多
关键词 巴尔通氏体 bepe EPIYA CSK 晶体结构
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汉赛巴尔通体效应蛋白BepE与血管内皮细胞迁移的相关性研究
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作者 蔡雨豪 王蒙 +3 位作者 王春艳 丁田耘 张浩然 袁聪俐 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2021年第5期1-6,共6页
本研究利用SacB介导的同源重组技术构建汉塞巴尔通体效应蛋白BepE的缺失突变菌株Bhe-ΔBepE以及效应蛋白BepE的回补表达菌株Bhe-pBepE。将Bhe、Bhe-ΔBepE与Bhe-pBepE分别感染人血管内皮细胞(HUVEC),24 h后进行细胞划痕实验,在0 h、6 h... 本研究利用SacB介导的同源重组技术构建汉塞巴尔通体效应蛋白BepE的缺失突变菌株Bhe-ΔBepE以及效应蛋白BepE的回补表达菌株Bhe-pBepE。将Bhe、Bhe-ΔBepE与Bhe-pBepE分别感染人血管内皮细胞(HUVEC),24 h后进行细胞划痕实验,在0 h、6 h、12 h与18 h对划痕区域进行定点拍摄,通过计算细胞迁移率比较三种菌感染后的HUVEC迁移能力。结果显示,3种菌感染后的HUVEC迁移能力并无显著区别,即Bhe效应蛋白BepE并没有促进血管内皮细胞迁移的作用。 展开更多
关键词 汉赛巴尔通体 效应蛋白bepe 基因敲除 细胞划痕
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