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携带Bclxl基因的重组腺相关病毒的制备和鉴定
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作者 李工博 彭炬 卢光琇 《现代生物医学进展》 CAS 2010年第1期34-36,49,共4页
目的:制备携带Bclxl基因的重组腺相关病毒,并鉴定其感染细胞有效性。方法:抽提BALB/c小鼠脾脏总RNA,通过RT-PCR获得cDNA,然后设计引物通过PCR获得Bclxl基因的编码序列。将得到的Bclxl编码序列插入腺相关病毒质粒pAAV-MCS中的多克隆位点... 目的:制备携带Bclxl基因的重组腺相关病毒,并鉴定其感染细胞有效性。方法:抽提BALB/c小鼠脾脏总RNA,通过RT-PCR获得cDNA,然后设计引物通过PCR获得Bclxl基因的编码序列。将得到的Bclxl编码序列插入腺相关病毒质粒pAAV-MCS中的多克隆位点,从而构建出重组腺相关病毒质粒pAAV-Bclxl。将质粒转染细胞后使用Western Blot和流式分析检测Bclxl蛋白的表达。进一步包装制备了携带Bclxl基因的重组腺相关病毒颗粒,用其感染HT1080细胞后用流式细胞仪分析了感染前后细胞中Bclxl基因的表达情况。结果:质粒转染后细胞中Bclxl蛋白的表达水平显著高于转染前,病毒感染后细胞中Bclxl蛋白的表达水平显著高于感染前。结论:携带Bclxl基因的重组腺相关病毒颗粒包装成功,能高效感染细胞,为后续的遗传改造树突细胞打下了基础。 展开更多
关键词 bclxl基因 重组腺相关病毒 树突细胞
原文传递
全脑缺血-再灌注大鼠不同时相海马CA1区Bcl-2、Bcl-xL及Bax蛋白的表达 被引量:3
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作者 章翔 李兵 +2 位作者 张志文 张戈 蒋小帆 《中国危重病急救医学》 CAS CSCD 2001年第8期457-459,共3页
目的 :通过系统观察大鼠全脑缺血再灌注后不同时相海马 CA1区神经元 Bcl 2、Bcl x L 及 Bax蛋白表达的改变 ,探讨该区神经元短暂脑缺血后产生选择性敏感的机制。方法 :通过四血管闭塞法建立大鼠全脑缺血再灌注模型 ,利用免疫组织化学方... 目的 :通过系统观察大鼠全脑缺血再灌注后不同时相海马 CA1区神经元 Bcl 2、Bcl x L 及 Bax蛋白表达的改变 ,探讨该区神经元短暂脑缺血后产生选择性敏感的机制。方法 :通过四血管闭塞法建立大鼠全脑缺血再灌注模型 ,利用免疫组织化学方法观察再灌注后 1、3、5日海马 CA 1区神经元 Bcl 2、Bcl x L及 Bax蛋白表达的情况 ;并同时与海马 CA 1区神经元的病理形态学改变进行对比。结果 :全脑缺血再灌注后 1日 ,海马 CA1区 Bcl 2和 Bcl x L 蛋白呈阴性表达 ,Bax蛋白呈弱阳性表达 ;海马 CA1区神经元未见明显形态学改变。全脑缺血再灌注后 3日 ,海马 CA1区 Bcl 2和 Bcl x L 蛋白表达仍为阴性 ,而 Bax蛋白则呈明显阳性表达 ;海马 CA1区可见部分神经元死亡 ;全脑缺血再灌注后 5日 ,海马 CA1区 Bcl 2、Bcl x L 及 Bax蛋白则呈阴性表达 ;海马 CA1区神经元大部分死亡。结论 :全脑缺血再灌注后海马 CA1区神经元 Bcl 2和 Bcl x L 蛋白表达的抑制可能是其对短暂脑缺血产生选择性敏感的机制之一。 展开更多
关键词 BCL-2 BCL-XL BAX 选择性敏感 缺血再灌注 脑缺血
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流式细胞术检测局灶性脑缺血-再灌注Bcl-xL和Bax蛋白表达 被引量:2
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作者 徐忠信 钱佳利 +2 位作者 包晓群 李巍 饶明俐 《中国危重病急救医学》 CAS CSCD 2001年第8期473-475,共3页
目的 :探讨 Bcl x L、Bax在局灶性脑缺血再灌注中的表达及作用。方法 :用线栓法复制大脑中动脉脑缺血再灌注模型 ,流式细胞术 ( FCM)检测 Bcl x L、Bax蛋白表达。结果 :缺血 3小时再灌注 ,随缺血再灌注时间延长 ,半影区 Bax表达逐渐增... 目的 :探讨 Bcl x L、Bax在局灶性脑缺血再灌注中的表达及作用。方法 :用线栓法复制大脑中动脉脑缺血再灌注模型 ,流式细胞术 ( FCM)检测 Bcl x L、Bax蛋白表达。结果 :缺血 3小时再灌注 ,随缺血再灌注时间延长 ,半影区 Bax表达逐渐增强 ,再灌注 2 4和 4 8小时达高峰 ,而 Bcl x L 表达早期增强后即呈下降趋势 ,Bcl x L/ Bax比率呈动态变化。结论 :Bcl x L 表达增高 ,有利于促进神经细胞存活 ,Bcl x L 与 Bax比率的转变 ,可促进神经细胞凋亡。 展开更多
关键词 脑缺血 再灌注 局灶性 细胞凋亡 BCL-XL BAX
暂未订购
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