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不结球白菜BcFBN6a参与叶绿素积累的功能分析
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作者 龚丽 柏艾梅 +5 位作者 梁志乐 朱桢栀 肖栋 张昌伟 侯喜林 李英 《南京农业大学学报》 北大核心 2026年第2期246-259,共14页
[目的]本文旨在克隆不结球白菜原纤维蛋白(FBN)BcFBN6a基因并探究其在叶绿素积累中的功能。[方法]以不结球白菜‘苏州青’cDNA为模板,同源克隆BcFBN6a的CDS序列,并与其他物种的同源蛋白序列进行保守结构域、系统进化和保守基序分析;构建... [目的]本文旨在克隆不结球白菜原纤维蛋白(FBN)BcFBN6a基因并探究其在叶绿素积累中的功能。[方法]以不结球白菜‘苏州青’cDNA为模板,同源克隆BcFBN6a的CDS序列,并与其他物种的同源蛋白序列进行保守结构域、系统进化和保守基序分析;构建BcFBN6a-pRI101载体并转化农杆菌,瞬时注射烟草叶片研究BcFBN6a的亚细胞定位;利用RT-qPCR技术,分析BcFBN6a在不同组织的表达模式;利用农杆菌介导的蘸花法和病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术分别获取过表达BcFBN6a转基因拟南芥和BcFBN6a沉默不结球白菜植株,研究BcFBN6a在叶绿素积累中的功能;利用GeneMANIA数据库预测BcFBN6a的互作蛋白,并通过酵母双杂交(Y2H)、双分子荧光互补(BiFC)和荧光素酶互补成像(LCI)试验进一步验证。[结果]BcFBN6a的ORF全长714 bp,含有典型的PAP保守结构域,与芜菁的亲缘关系最近,其编码蛋白定位于叶绿体。BcFBN6a基因在叶片中高表达。拟南芥中异源过表达BcFBN6a显著增加了叶片中叶绿素的积累,AtHEMA1(Glutamyl-tRNA reductase)、AtCHLH(Mg-chelatase H subunit)、AtGUN4(genome uncoupled 4)、AtPORB(protochlorophyllide oxidoreductase B)等叶绿素生物合成相关基因表达水平显著上调。VIGS诱导的BcFBN6a沉默植株中的叶绿素含量显著低于pTY空载对照,叶绿素合成相关基因表达下调。Y2H、BiFC和LCI试验联合分析表明,BcFBN6a能与BcGUN4相互作用。[结论]BcFBN6a能够正向调控不结球白菜叶片中叶绿素的积累,并筛选鉴定到一个互作蛋白BcGUN4。 展开更多
关键词 不结球白菜 质体脂质相关蛋白 bcfbn6a 叶绿素 BcGUN4
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