文摘目的探讨蝎毒多肽(peptide extract from scorpion venom,PESV)对白血病干细胞(leukemic stem cell,LSC)在体内多药耐药(multidrug resistance,MDR)的影响。方法培养K562/A02细胞,在对数生长期收集并经免疫磁珠法分选出K562/A02干细胞备用;40只BABL/c裸鼠,取5只注射K562/A02干细胞形成皮下瘤块备用;采用随机数字表法将35只裸鼠分为正常对照组、模型组、耐阿霉素(Adriamycin,ADM)组、PESV组和ADM+PESV高、中、低剂量组,每组5只。正常对照组不作处理,其余各组包埋瘤块组织,造模后模型组给予1 m L生理盐水腹腔注射,每天1次;ADM组腹腔注射ADM 0.05 mg,隔天1次;PESV组腹腔注射PESV 2μg,每天1次;ADM+PESV高、中、低剂量组腹腔注射ADM 0.05 mg,隔天1次,同时给予PESV(5、2、1μg)腹腔注射,每天1次。给药14天。流式细胞术检测P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp);RT-PCR检测乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)、多药耐药基因1(multidrug resistance 1,MDR1)m RNA表达;免疫组化法检测乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydrogenase 1,ALDH1);Western blot法检测磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)蛋白表达;ELISA检测核转录因子NF-κB含量。结果 K562/A02细胞经免疫磁珠分选前后的CD34+CD38-细胞比率分别为31.5%、92.8%,耐药率(IC50)分别为(60.33±10.68)μg/m L、(58.33±9.72)μg/m L,造模裸鼠成瘤率为100%。与模型组比较,ADM组各项检测指标比较,差异无统计学意义(P>0.05);PESV组BCRP、MDR1 m RNA和NF-κB因子水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);ADM+PESV高、中、低剂量组P-gp值降低,PI3K蛋白表达下调(P<0.05),ADM+PESV高、中剂量组BCRP m RNA表达降低,MDR1 m RNA表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05);ADM+PESV高剂量组PI3K蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。分别与ADM组和PESV组比较,ADM+PESV高剂量组P-gp、BCRP m RNA、MDR1 m RNA、PI3K和NF-κB水平明显均下调,差异有统计学意义(P<0.05)。各组ALDH1阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 PESV联合ADM具有下调白血病K562/A02干细胞P-gp、BCRP、MDR1、PI3K、NF-κB的表达水平,可以增强白血病K562/A02干细胞在体内对ADM的敏感度,具有逆转其多药耐药作用。
