目的构建含有白细胞介素8(IL-8)基因的重组腺病毒,并观察其对BT549乳腺癌细胞增殖、细胞周期以及迁移能力的影响。方法以143B细胞c DNA为模版,PCR扩增IL-8基因,与穿梭质粒p Ad Track-TO4连接,构建重组穿梭质粒p Ad Track-TO4-IL-8,由Pm...目的构建含有白细胞介素8(IL-8)基因的重组腺病毒,并观察其对BT549乳腺癌细胞增殖、细胞周期以及迁移能力的影响。方法以143B细胞c DNA为模版,PCR扩增IL-8基因,与穿梭质粒p Ad Track-TO4连接,构建重组穿梭质粒p Ad Track-TO4-IL-8,由PmeⅠ线性化并电转入Ad Easier细菌中,获得重组腺病毒质粒p Ad IL-8,PacⅠ酶切经LipofectamineTM2000介导转入HEK293细胞进行包装扩增,检测滴度;反转录PCR检测BT549细胞中IL-8 mRNA的水平,ELISA检测BT549细胞培养上清液中IL-8的水平;流式细胞术检测细胞周期情况;MTT法检测细胞增殖能力;划痕愈合实验检测细胞迁移能力。结果PCR以及测序证实p Ad Track-TO4-IL-8构建成功;p Ad IL-8经酶切证实重组正确;重组腺病毒Ad IL-8感染BT549细胞,可高表达IL-8。过表达IL-8的BT549细胞迁移能力增强,但其增殖活性无明显变化、将细胞周期阻滞于S期。结论过表达IL-8可促进BT549细胞的迁移。展开更多
目的:探究天然物质蟾酥中的活性成分酯蟾毒配基(Resibufogenin,RBG)对三阴性乳腺癌(Triple negative breast cancer,TNBC)细胞的作用机制.方法:用MTT分析和流式细胞技术检测细胞活力和细胞周期的变化,用划痕实验检测肿瘤细胞迁移,用Anne...目的:探究天然物质蟾酥中的活性成分酯蟾毒配基(Resibufogenin,RBG)对三阴性乳腺癌(Triple negative breast cancer,TNBC)细胞的作用机制.方法:用MTT分析和流式细胞技术检测细胞活力和细胞周期的变化,用划痕实验检测肿瘤细胞迁移,用AnnexinV-FITC/PI双荧光探针染色检测细胞早期凋亡和晚期凋亡比率,用免疫印记分析自噬通路LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ等相关蛋白的表达.结果:酯蟾毒配基(RBG)在1-100μM范围内能抑制三阴性乳腺癌BT549细胞活力,并呈剂量依赖性.RBG作用于BT549细胞24小时和48小时的IC50值分别为(21.62±3.19)μM和(13.34±2.10)μM.RBG引起细胞发生周期阻滞,使三阴性乳腺癌BT549细胞阻滞在G2/M期.酯蟾毒配基引起的早期凋亡和晚期凋亡细胞的数量均显著增加.并且RBG使BT549细胞的划痕愈合能力显著降低,所以限制了BT549细胞的迁移.RBG使细胞的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,p62蛋白表达明显降低,p-PI3K和p-Akt也明显降低.结论:酯蟾毒配基抑制BT549细胞增殖,可能通过PI3K/Akt信号通路促进肿瘤细胞的凋亡和自噬.展开更多
文摘目的构建含有白细胞介素8(IL-8)基因的重组腺病毒,并观察其对BT549乳腺癌细胞增殖、细胞周期以及迁移能力的影响。方法以143B细胞c DNA为模版,PCR扩增IL-8基因,与穿梭质粒p Ad Track-TO4连接,构建重组穿梭质粒p Ad Track-TO4-IL-8,由PmeⅠ线性化并电转入Ad Easier细菌中,获得重组腺病毒质粒p Ad IL-8,PacⅠ酶切经LipofectamineTM2000介导转入HEK293细胞进行包装扩增,检测滴度;反转录PCR检测BT549细胞中IL-8 mRNA的水平,ELISA检测BT549细胞培养上清液中IL-8的水平;流式细胞术检测细胞周期情况;MTT法检测细胞增殖能力;划痕愈合实验检测细胞迁移能力。结果PCR以及测序证实p Ad Track-TO4-IL-8构建成功;p Ad IL-8经酶切证实重组正确;重组腺病毒Ad IL-8感染BT549细胞,可高表达IL-8。过表达IL-8的BT549细胞迁移能力增强,但其增殖活性无明显变化、将细胞周期阻滞于S期。结论过表达IL-8可促进BT549细胞的迁移。
文摘目的:探究天然物质蟾酥中的活性成分酯蟾毒配基(Resibufogenin,RBG)对三阴性乳腺癌(Triple negative breast cancer,TNBC)细胞的作用机制.方法:用MTT分析和流式细胞技术检测细胞活力和细胞周期的变化,用划痕实验检测肿瘤细胞迁移,用AnnexinV-FITC/PI双荧光探针染色检测细胞早期凋亡和晚期凋亡比率,用免疫印记分析自噬通路LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ等相关蛋白的表达.结果:酯蟾毒配基(RBG)在1-100μM范围内能抑制三阴性乳腺癌BT549细胞活力,并呈剂量依赖性.RBG作用于BT549细胞24小时和48小时的IC50值分别为(21.62±3.19)μM和(13.34±2.10)μM.RBG引起细胞发生周期阻滞,使三阴性乳腺癌BT549细胞阻滞在G2/M期.酯蟾毒配基引起的早期凋亡和晚期凋亡细胞的数量均显著增加.并且RBG使BT549细胞的划痕愈合能力显著降低,所以限制了BT549细胞的迁移.RBG使细胞的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,p62蛋白表达明显降低,p-PI3K和p-Akt也明显降低.结论:酯蟾毒配基抑制BT549细胞增殖,可能通过PI3K/Akt信号通路促进肿瘤细胞的凋亡和自噬.
