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可生物素化H-2K^d-BSP融合蛋白的原核表达和纯化 被引量:3
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作者 钱亚云 刘静 +3 位作者 张伟 潘兴元 龚卫娟 季明春 《实用临床医药杂志》 CAS 2008年第4期1-4,共4页
目的构建可生物素化的H-2Kd-BSP融合基因的表达载体,原核表达H-2Kd-BSP融合蛋白,以制备H-2Kd-肽四聚体。方法采用RT-PCR技术从小鼠SP2/0细胞中克隆小鼠MHC-Ⅰ类分子H-2Kd基因的胞外区,拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列(BSP)后,插入pET-... 目的构建可生物素化的H-2Kd-BSP融合基因的表达载体,原核表达H-2Kd-BSP融合蛋白,以制备H-2Kd-肽四聚体。方法采用RT-PCR技术从小鼠SP2/0细胞中克隆小鼠MHC-Ⅰ类分子H-2Kd基因的胞外区,拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列(BSP)后,插入pET-22b高效表达载体多克隆位点,诱导表达后对表达产物进行纯化,用Western印迹法分析鉴定纯化融合蛋白。结果成功构建pET-H-2Kd原核表达载体,测序证实H-2Kd-BSP融合基因序列正确。pET-H-2Kd原核表达载体可在大肠杆菌BL21中高效诱导表达H-2Kd-BSP融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的36%,主要以包涵体形式表达;经反复洗涤纯化,纯化蛋白纯度可达90%以上。纯化蛋白可被H-2Kd分子特异性单克隆抗体SF1-1.1所识别。结论可生物素化H-2Kd-BSP融合蛋白的原核表达和纯化为进一步制备H-2Kd-肽四聚体奠定了实验基础。 展开更多
关键词 H-2K^d H-2K^d—bsp融合蛋白 可生物素化序列
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人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP融合蛋白表达载体的构建及其表达 被引量:1
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作者 熊敏 杨敬宁 +1 位作者 李青 吴雄文 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期1-4,共4页
目的构建并表达了人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP(scHLA-A2)融合蛋白表达载体,为进一步制备HLA-A2四聚体及其功能研究奠定了基础。方法应用重叠延伸PCR(overlap-PCR)对编码HLA-A2的cDNA序列进行一个碱基的同义突变,并将β2m和HLA-A2胞外... 目的构建并表达了人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP(scHLA-A2)融合蛋白表达载体,为进一步制备HLA-A2四聚体及其功能研究奠定了基础。方法应用重叠延伸PCR(overlap-PCR)对编码HLA-A2的cDNA序列进行一个碱基的同义突变,并将β2m和HLA-A2胞外段亚单位两段编码序列的cDNA通过一疏水性多肽接头(Gly4Ser)3的DNA序列进行前后拼接,并利用引物所带的BSP编码序列,构建单链β2m-HLA-A2-BSP融合基因,将测序正确的β2m-HLA-A2-BSP融合基因插入原核表达载体pET-22b中,转化BL21(DE3)细菌,SDS-PAGE检测其表达,融合蛋白于体外抗原肽存在条件下稀释复性后由Western blot鉴定其空间构象。结果经DNA序列分析表明:同义突变与预期结果一致,β2m和HLA-A2-BSPl、inker的连接顺序、方向及序列完全正确,表达载体转化BL21(DE3)细菌后可表达β2m-HLA-A2-BSP融合蛋白,SDS-PAGE显示该融合蛋白分子量为45 kD,与理论值一致,将融合蛋白与特异性抗原肽在体外进行稀释复性后经Western blot鉴定表明该复合物能与HLA-Ⅰ类分子特异性结合的单克隆抗体W6/32结合。结论人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP融合蛋白的构建及其表达获得成功,经体外复性可获得HLA-Ⅰ类分子天然构象。 展开更多
关键词 重叠延伸聚合酶链式反应 β2m-HLA-A2-bsp融合蛋白 同义突变
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双链DNA片段的碱基空间模式BSP——基因组调控区的一种可能的信息编码方式
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作者 李许卿 《云南天文台台刊》 CSCD 北大核心 2002年第1期66-67,共2页
生物体可看作是一种特殊的信息处理系统 ,论文的第二章从这种观点出发讨论了生物细胞内最大的信息源基因组DNA序列的信息编码问题。首先探讨了基因组蛋白质编码区的信息编码问题 ;简要回顾转录水平的基因表达调控后 ,讨论了基因组基因... 生物体可看作是一种特殊的信息处理系统 ,论文的第二章从这种观点出发讨论了生物细胞内最大的信息源基因组DNA序列的信息编码问题。首先探讨了基因组蛋白质编码区的信息编码问题 ;简要回顾转录水平的基因表达调控后 ,讨论了基因组基因表达调控区的信息编码问题。第三章介绍了我们利用internet上可获取的开放的生物信息学资源 ,对基因组DNA调控区的一种可能的编码方式所进行的理论研究。这种可能的编码方式我们称之为双链DNA上的碱基空间模式BSP (BaseSpatialPattern)。首先 ,我们发现了由三联体BSP介导的一种 4与 2 0的关系 ,称为 4 -BSP -2 0关系。并推测 4 -BSP -2 0关系也许是某些DNA—蛋白质相互作用中的一种识别密码 ;第二 ,研究真核细胞转录调控中的DNA—蛋白质相互作用的实验数据表明 :某些DNA结合蛋白质对双螺旋核酸的专一性识别可能与BSP有关。并找到了 7组由其他生物学家公开发表的实验数据支持这一猜测 ;第三 ,研究了BSP的形式化描述问题 ,找到了一种基于等价类的BSP描述方法 ,并开发了相应的计算机处理算法。该描述方法简明且便于用计算机进行处理 ,更重要的是它提供了一种研究途径 ,可把BSP和 4 -BSP -2 0关系推广到单链DNA (ssDNA)和ssDNA -蛋白质相互作用的研究中 。 展开更多
关键词 bsp 编码 识别 DNA 蛋白质 生物体 碱基空间模式
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人新基因hbrp的染色体定位及其对TPK活性的抑制作用(简报) 被引量:2
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作者 张杰 冯晨 +6 位作者 刘莹 姜淼 杨嘉宁 陈菲 宋宇彤 王格 于秉治 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2005年第2期177-182,共6页
hbrp(Human BSP-Related Protein)是我们实验室最近在睾丸组织中克隆的一个人与BSP(bovine seminal plasma)蛋白相关的新基因.为了将有关该新基因信息与现有人类基因组转录图相整合,我们应用荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridiza... hbrp(Human BSP-Related Protein)是我们实验室最近在睾丸组织中克隆的一个人与BSP(bovine seminal plasma)蛋白相关的新基因.为了将有关该新基因信息与现有人类基因组转录图相整合,我们应用荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization-FISH)法进行了该基因的人染色体基因定位,结果成功地将hbrp基因定位在人19号染色体长臂1区3带上.hbrp基因是在对BSP蛋白功能的研究过程中发现并克隆的,其同源性分析发现,与其序列最相近的是BSP蛋白家族.hbrp基因编码的蛋白质氨基酸序列中含有四个纤连蛋白Ⅱ型结构域,而BSP蛋白结构中含有两个前后排列的纤连蛋白Ⅱ型结构域,表明该蛋白可能是一种与BSP蛋白相关的结合蛋白.以前的研究中,我们发现BSP不仅能抑制PKC的活性,还能抑制酪氨酸蛋白激酶(TPK)的活性,根据BSP的这一功能,对HBRP蛋白与TPK的关系进行了研究,结果证明HBRP蛋白对TPK活性有明显的抑制作用.现将实验方法及所观察结果报道如下: 展开更多
关键词 HBRP 新基因 染色体定位 抑制作用 TPK 活性 荧光原位杂交 19号染色体 基因定位 人类基因组 同源性分析 睾丸组织 基因信息 人染色体 研究过程 bsp 实验室 克隆 蛋白 转录
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碱溶酸沉法提取黑豆蛋白工艺优化 被引量:18
5
作者 张英蕾 姚鑫淼 +7 位作者 卢淑雯 赵蕊 李哲滨 季妮娜 沈卉芳 顾晓雯 尹彦洋 张守文 《中国食品添加剂》 CAS 2019年第1期60-68,共9页
以溶解温度、料液比、pH和溶解时间为因素,以黑豆蛋白提取率为评价指标,在单因素实验基础上,采用响应面优化碱溶酸沉法提取黑豆蛋白工艺条件,结论为:料液比11.93∶1、pH 8.1、温度42℃、时间1.6h。按照最佳条件进行三次验证试验,得最佳... 以溶解温度、料液比、pH和溶解时间为因素,以黑豆蛋白提取率为评价指标,在单因素实验基础上,采用响应面优化碱溶酸沉法提取黑豆蛋白工艺条件,结论为:料液比11.93∶1、pH 8.1、温度42℃、时间1.6h。按照最佳条件进行三次验证试验,得最佳提取率为51.88%,与理论转化率(53.21%)相近,相对偏差为2.50%,表明得到的最佳提取条件可靠。其中料液比、溶解温度对提取率的影响显著,其中影响较大的因素为料液比,溶解温度次之。 展开更多
关键词 黑豆蛋白 工艺优化 碱溶酸沉法
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人牛精浆蛋白相关新基因的cDNA克隆、定位和表达 被引量:8
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作者 罗阳 张学 +3 位作者 刘莹 姜莉 刘兴元 于秉治 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期191-196,共6页
为了研究牛精浆 (bovineseminalplasma ,BSP)蛋白及其相关蛋白在受精及受精卵发育中的重要作用 ,寻找BSP蛋白相关新基因 .采用cDNA末端快速扩增 (RACE)技术 ,克隆了一个BSP蛋白相关基因的cDNA序列 .应用辐射杂种细胞系 (RH)技术进行了... 为了研究牛精浆 (bovineseminalplasma ,BSP)蛋白及其相关蛋白在受精及受精卵发育中的重要作用 ,寻找BSP蛋白相关新基因 .采用cDNA末端快速扩增 (RACE)技术 ,克隆了一个BSP蛋白相关基因的cDNA序列 .应用辐射杂种细胞系 (RH)技术进行了基因染色体定位 .通过RT PCR检测了该基因在人体各组织中的表达情况 .并将该基因编码的蛋白进行了原核表达 .新基因的cDNA长度为 10 5 2bp ,其开放阅读框架 (ORF)编码了一个含 2 2 3个氨基酸残基的蛋白质 ,氨基酸序列中含有 4个纤连蛋白Ⅱ结构域 ,与BSP蛋白在结构上具有一定的相似性 ,称其为人BSP相关蛋白 (humanBSP relatedproteins ,HBRP) .该基因定位于染色体 19q13,在大肠杆菌中表达为 5 2kD的融合蛋白 .研究结果提示 ,应用RACE方法克隆了一种新的人类与BSP蛋白相关的基因 ,推测其编码蛋白是与BSP蛋白功能相关的结合蛋白 ,通过基因重组技术大量获得表达蛋白 ,对进一步研究新蛋白的生物学功能具有重要的意义 . 展开更多
关键词 人牛精浆蛋白相关新基因 CDNA克隆 定位 表达
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转谷氨酰胺酶催化的糖基化修饰对黑豆蛋白抗氧化活性的影响 被引量:6
7
作者 张英蕾 尹彦洋 +7 位作者 姚鑫淼 卢淑雯 赵蕊 李哲滨 季妮娜 沈卉芳 顾晓雯 张守文 《中国食品添加剂》 CAS 2019年第2期77-84,共8页
以DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、总还原能力、总抗氧化能力、清除亚硝酸盐能力作为评价指标,比较了酶法糖基化黑豆蛋白、湿热法糖基化黑豆蛋白、黑豆分离蛋白、自交联黑豆蛋白和Trolox的抗氧化能力,结果表明:酶法糖基化黑... 以DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、总还原能力、总抗氧化能力、清除亚硝酸盐能力作为评价指标,比较了酶法糖基化黑豆蛋白、湿热法糖基化黑豆蛋白、黑豆分离蛋白、自交联黑豆蛋白和Trolox的抗氧化能力,结果表明:酶法糖基化黑豆蛋白、湿热法糖基化黑豆蛋白以及Trolox抗氧化能力均高于自交联黑豆蛋白以及黑豆分离蛋白,其中酶法糖基化黑豆蛋白以及Trolox的抗氧化能力强于湿热法糖基化黑豆蛋白。 展开更多
关键词 壳寡糖 黑豆蛋白 糖基化 抗氧化
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牛精清蛋白及其作用 被引量:2
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作者 孙志杰 李青旺 +2 位作者 赵红卫 孙秀柱 罗桂芬 《黄牛杂志》 2004年第1期36-39,共4页
牛精清(bovineseminalplasmaBSP)蛋白家族共有四种蛋白质,分别为BSP A1、BSP A2、BSP A3、和BSP 30 KDa。BSP结构上由a和b两个功能区组成。a区是肝素结合位点,b区与磷脂胆碱结合。BSP主要由精囊腺和输精管的壶腹部分泌。在雄性生殖道内... 牛精清(bovineseminalplasmaBSP)蛋白家族共有四种蛋白质,分别为BSP A1、BSP A2、BSP A3、和BSP 30 KDa。BSP结构上由a和b两个功能区组成。a区是肝素结合位点,b区与磷脂胆碱结合。BSP主要由精囊腺和输精管的壶腹部分泌。在雄性生殖道内BSP保证精子的稳定,在雌性生殖道内BSP协同高密度磷脂蛋白、肝素诱导精子获能。 展开更多
关键词 牛精清蛋白 结构 生物学特性 产生部位 分布 作用机理 精子获能
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釉基质蛋白对大鼠骨髓基质细胞合成非胶原蛋白的影响 被引量:3
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作者 侯小丽 谢光远 吴织芬 《口腔医学》 CAS 2008年第8期408-410,共3页
目的探讨釉基质蛋白对大鼠骨髓基质细胞合成非胶原蛋白的影响。方法采用全骨髓法培养大鼠骨髓基质细胞,通过免疫细胞化学和图像分析方法观察釉基质蛋白对骨髓基质细胞合成骨桥蛋白、骨涎蛋白的影响。结果实验组非胶原蛋白合成明显强于... 目的探讨釉基质蛋白对大鼠骨髓基质细胞合成非胶原蛋白的影响。方法采用全骨髓法培养大鼠骨髓基质细胞,通过免疫细胞化学和图像分析方法观察釉基质蛋白对骨髓基质细胞合成骨桥蛋白、骨涎蛋白的影响。结果实验组非胶原蛋白合成明显强于对照组。结论一定浓度的釉基质蛋白可以有效促进骨桥蛋白、骨涎蛋白的合成。 展开更多
关键词 釉基质蛋白 骨髓基质细胞 骨桥蛋白 骨涎蛋白
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人牛精浆相关蛋白的亚细胞定位及生物活性
10
作者 张杰 刘莹 +2 位作者 宗志红 宿文辉 于秉治 《细胞生物学杂志》 CSCD 2006年第2期243-247,共5页
利用红色荧光蛋白表达载体pDsRed1-N1与人睾丸中牛精浆相关蛋白基因(hbrp)重组为pDsRed1-N1/hbrp,真核表达载体pcDNA3.1-myc-his与hbrp重组为pcDNA3.1-myc-his/hbrp,分别转染HEK293细胞,建立稳定的真核表达细胞系。在荧光显微镜下观察H... 利用红色荧光蛋白表达载体pDsRed1-N1与人睾丸中牛精浆相关蛋白基因(hbrp)重组为pDsRed1-N1/hbrp,真核表达载体pcDNA3.1-myc-his与hbrp重组为pcDNA3.1-myc-his/hbrp,分别转染HEK293细胞,建立稳定的真核表达细胞系。在荧光显微镜下观察HBRP的亚细胞定位,并用放射自显影检测该细胞系的蛋白激酶C(PKC)活性。HBRP定位在细胞膜及胞浆近膜处;HBRP对PKC活性有明显的抑制作用。从而确定了人新的精子结合蛋白HBRP在细胞内的定位,并认定了HBRP为有生物活性的功能蛋白。 展开更多
关键词 人牛精浆相关蛋白 牛精浆蛋白 亚细胞定位 蛋白激酶C活性
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Antioxidant and free radical-scavenging activities of black soybean peptides (BSP)
11
作者 Ren Haiwei 《International Journal of Agricultural and Biological Engineering》 SCIE EI CAS 2010年第2期64-69,共6页
The antioxidant and free radical-scavenging activities of black soybean peptides(BSP)fractions(Fra-Ⅰ,Fra-Ⅱ,Fra-Ⅲ)were investigated using reducing power and DPPH·/superoxide/hydroxyl radical-scavenging assay.Th... The antioxidant and free radical-scavenging activities of black soybean peptides(BSP)fractions(Fra-Ⅰ,Fra-Ⅱ,Fra-Ⅲ)were investigated using reducing power and DPPH·/superoxide/hydroxyl radical-scavenging assay.The reducing power activity of Fra-Ⅲwas closer to that of BHT but lower than that of ascorbic acid.Fra-Ⅲshowed the strongest scavenging activity against free radicals.The radical-scavenging effect was in a dose-dependent manner and the IC50 values for DPPH·,superoxide and hydroxyl radicals were found to be 1.873,1.684 and 1.735 mg/mL,respectively.Amino acid analysis showed that Fra-Ⅲhad high hydrophobic amino acids(HAA)content and hydrophobicity.The molecular weight distribution of Fra-Ⅲwas found to vary from 100 to 1,000 Da mainly.The antioxidant activity of Fra-Ⅲis clearly related to the amino acid composition,the content of HAA and the molecular mass.The present study suggests that BSP with low molecular weight are useful nutritional antioxidant and potential functional factor for anti-aging. 展开更多
关键词 black soybean protein peptides(bsp) antioxidant activity free radical-scavenging activity amino acid composition molecular weight distribution
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A possible mode of the specific recognition of nucleic acids by proteins
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作者 LI Xuqing & LIU CiquanDepartment of Computer Science, Kunming University of Science and Technology, Kunming 650041, China Laboratory of Cellular and Molecular Evolution, Kunming Institute of Zoology, Chinese Academy of Sciences, Kunming 650223, China +1 位作者 Yunnan Observatory, Chinese Academy of Sciences, Kunming 650011, China 4. Modern Biological Center, Yunnan University, Kunming 650091, China 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2001年第11期930-934,共5页
Seven sets of protein target sites, which occur in several gene promoters, have been analyzed. The results suggest that there is a possible mode of specific recognition of double-helical nucleic acids by proteins. Thi... Seven sets of protein target sites, which occur in several gene promoters, have been analyzed. The results suggest that there is a possible mode of specific recognition of double-helical nucleic acids by proteins. This recognition mode is related to a special topological property of double-helical DNA, which is termed base spatial pattern (BSP) of DNA segment. BSP is the spatial topological property determined only by the spatial arrangement of the bases on double-helical DNA segment. 展开更多
关键词 protein nucleic ACIDS RECOGNITION base spatial pattern (bsp) target sites.
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