牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)核蛋白基因原核表达载体的构建及其重组蛋白的纯化与鉴定 被引量：3

1

作者 李艳婷 王珊珊 +2 位作者 张露 孙光野 侯喜林 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1680-1685,共6页

利用RT-PCR方法扩增出牛呼吸道合胞体病毒(BRV)核蛋白基因(N)中1 176bp的特异性片段,将目的片段定向克隆到pET-32a(+)原核表达载体,转化BL21(DE3)表达菌;经IPTG进行诱导,并探讨IPTG浓度、诱导时间对重组蛋白的影响。表达的大肠杆菌超声... 利用RT-PCR方法扩增出牛呼吸道合胞体病毒(BRV)核蛋白基因(N)中1 176bp的特异性片段,将目的片段定向克隆到pET-32a(+)原核表达载体,转化BL21(DE3)表达菌;经IPTG进行诱导,并探讨IPTG浓度、诱导时间对重组蛋白的影响。表达的大肠杆菌超声破碎后,沉淀物用含有1%TritonX-100的PBS溶液洗去膜碎片和膜蛋白。在尿素变性条件下,用镍柱亲和层析法纯化NP包涵体,并通过梯度透析方法进行透析复性,Western blot检测目的蛋白的反应原性。结果显示,酶切和测序成功构建阳性重组质粒,将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导后发现该重组蛋白主要以包涵体形式存在于细菌中,大小约为60 000,最佳诱导条件为0.000 8 mol/L IPTG诱导4h。通过BCA法测定镍柱纯化的N蛋白质量浓度为0.534g/L,复性后质量浓度为0.397g/L。Western blot检测表明N蛋白具有反应原性。结果表明,在大肠杆菌中成功表达并纯化出N蛋白,并通过复性获得具有反应原性的N蛋白,为N蛋白下一步的应用奠定基础。 展开更多

关键词 brsv核蛋白 包涵体 变性 纯化 复性

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BRSV和BPIV-3双重PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：10

2

作者 王嵩 林红丽 +5 位作者 王宇鹏 刘振格 王杰 杨明发 余丽芸 侯喜林 《黑龙江八一农垦大学学报》 2014年第5期35-38,共4页

为建立一种快速诊断牛呼吸道合胞体病毒(BRSV),牛副流感病毒3型(BPIV-3)病毒病的方法,根据Genbank中登录的BRSV核衣壳蛋白N基因序列和BPIV-3的核衣壳蛋白N基因序列,利用分子生物学软件Primer5.0设计2对特异引物,经过条件优化,建立了BRSV... 为建立一种快速诊断牛呼吸道合胞体病毒(BRSV),牛副流感病毒3型(BPIV-3)病毒病的方法,根据Genbank中登录的BRSV核衣壳蛋白N基因序列和BPIV-3的核衣壳蛋白N基因序列,利用分子生物学软件Primer5.0设计2对特异引物,经过条件优化,建立了BRSV和BPIV-3的双重PCR检测方法。采用该方法检测BRSV和BPIV-3参考毒株,特异性良好。对参考毒株进行梯度稀释检测,结果该方法检测BRSV的敏感性可达10 TCID50·100μL-1,BPIV-3可达10 TCID50·100μL-1。应用建立的双重PCR方法能够从临床样品中检测出BRSV和BPIV-3。表明建立的双重PCR方法具有特异、敏感、快速的特点,可用于BRSV和BPIV-3的临床检测。 展开更多

关键词 牛呼吸道合胞体病毒 牛副流感病毒3型 双重反转录聚合酶链反应

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BHV-1、BRSV、BPIV-3和BVDV四重荧光PCR检测方法的建立与应用 被引量：6

3

作者 姜利霞 王玉海 +6 位作者 何世成 胡巧云 王卫国 鲁杏华 武维保 谢怡灵 王昌建 《中国动物检疫》 CAS 2021年第10期98-106,共9页

为建立检测牛疱疹病毒(BHV-1)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)单一或混合感染的荧光PCR检测方法,根据BHV-1gB基因、BRSVF基因、BPIV-3 M基因和BVDV 5’UTR基因保守区序列分别设计特异性... 为建立检测牛疱疹病毒(BHV-1)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)单一或混合感染的荧光PCR检测方法,根据BHV-1gB基因、BRSVF基因、BPIV-3 M基因和BVDV 5’UTR基因保守区序列分别设计特异性引物和TaqMan荧光探针,经条件优化,成功建立了BHV-1、BRSV、BPIV-3和BVDV的四重荧光PCR检测方法。该方法对牛布鲁氏菌、猪瘟病毒、小反刍兽疫病毒、羊多杀性巴氏杆菌无特异性扩增;对BHV-1、BPIV-3和BVDV的最低检测量均为8.268 copies/μL,对BRSV的最低检测量为82.680 copies/μL;该方法重复性好,CV值为1%~2%。应用本方法检测采自湖南省内某屠宰场的865份样品,结果BHV-1、BRSV、BPIV-3和BVDV等4种病原均有检出,其阳性率分别为0.58%,0.81%,0.23%和0.81%。本研究建立的多重荧光PCR检测方法可同时对BHV-1、BRSV、BPIV-3和BVDV进行检测,为这4种病原的快速诊断和鉴别提供了技术支撑。 展开更多

关键词 多重荧光PCR 牛疱疹病毒1型 牛呼吸道合胞体病毒 牛副流感3型病毒 牛病毒性腹泻病毒

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牛呼吸道合胞体病毒G和F蛋白的生物学功能 被引量：2

4

作者 郭雪莲 李永琴 +5 位作者 李瑞乾 李昊 靳双媛 王雪妍 杜家伟 许立华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1478-1487,共10页

牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus, BRSV)是一种在世界范围内引起牛呼吸道疾病的病毒性病因之一,主要引起1岁龄以下犊牛的严重下呼吸道感染。BRSV共编码9种结构蛋白,其中附着蛋白(G蛋白)和融合蛋白(F蛋白)是BRSV... 牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus, BRSV)是一种在世界范围内引起牛呼吸道疾病的病毒性病因之一,主要引起1岁龄以下犊牛的严重下呼吸道感染。BRSV共编码9种结构蛋白,其中附着蛋白(G蛋白)和融合蛋白(F蛋白)是BRSV表面主要的包膜糖蛋白,参与病毒吸附、融合宿主细胞的过程。G和F蛋白含多种识别表位,能够刺激机体产生中和抗体反应,常常是牛呼吸道合胞体病(bovine respiratory syncytial disease, BRSD)疫苗开发所关注的重点。探究G和F蛋白在BRSV侵染中的作用机理对于病毒致病机理分析、疫苗开发具有重要意义。本文旨在对牛呼吸道合胞体病毒G和F蛋白的结构功能及有关疫苗的开发加以综述,以期为BRSV疫苗的研制和BRSD的防控提供参考。 展开更多

关键词 牛呼吸道合胞体病毒(brsv) 牛呼吸道合胞体病(BRSD) 附着蛋白(G蛋白) 融合蛋白(F蛋白) 疫苗

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牛呼吸道合胞体病毒G蛋白抗原区原核表达及反应原性鉴定 被引量：2

5

作者 武春霞 周雅坪 +6 位作者 郭婷 崔琦 王宇琛 田广原 思汗 孙衍立 郝永清 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第9期3438-3446,共9页

本研究旨在获得重组牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白并对其进行反应原性鉴定。从NCBI上找出G基因的核苷酸序列,分析其抗原区域,利用Primer Premier 5.0软件设计1对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增BRSV G基因片段,将目的片段连接到克隆载体... 本研究旨在获得重组牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白并对其进行反应原性鉴定。从NCBI上找出G基因的核苷酸序列,分析其抗原区域,利用Primer Premier 5.0软件设计1对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增BRSV G基因片段,将目的片段连接到克隆载体pMD19-T后,对其进行双酶切鉴定和测序。将双酶切后的目的片段进行胶回收,构建重组质粒pET-32a-G,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用Ni-IDA亲和层析法纯化经IPTG诱导表达的蛋白,并测定其浓度;通过SDS-PAGE和Western blotting方法对该蛋白进行分析与鉴定。结果显示,本试验成功克隆出大小约为567 bp的G基因,获得分子质量约为40 ku的可溶性重组蛋白,优化诱导条件后用SDS-PAGE对表达产物进行鉴定,在16℃、IPTG浓度1.2 mmol/L、诱导4 h时蛋白表达量最大;通过Western blotting检测发现,重组蛋白可与山羊源BRSV标准阳性血清发生特异性反应,说明该蛋白具有反应原性。综上,本研究成功表达并纯化了BRSV G蛋白,为建立BRSV抗体间接ELISA检测方法和BRSV亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 牛呼吸道合胞体病毒(brsv) G蛋白 原核表达 可溶性表达 反应原性

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脂筏在牛呼吸道合胞体病毒感染MDBK细胞中的作用 被引量：4

6

作者 李丽阳 刘洋 +2 位作者 王磊 李艳婷 侯喜林 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期643-647,共5页

为探讨脂筏在牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)感染MDBK细胞中的作用,采用胆固醇去除药物MβCD处理MDBK细胞。结果显示,细胞膜胆固醇含量明显降低,同时也降低BRSV感染水平,补充外源胆固醇后,病毒感染力可... 为探讨脂筏在牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)感染MDBK细胞中的作用,采用胆固醇去除药物MβCD处理MDBK细胞。结果显示,细胞膜胆固醇含量明显降低,同时也降低BRSV感染水平,补充外源胆固醇后,病毒感染力可部分恢复;表明细胞膜胆固醇的去除可以抑制BRSV的感染,BRSV的感染与细胞膜脂筏相关。进一步研究发现,胆固醇去除不会影响BRSV结合在靶细胞表面,但会抑制病毒进入靶细胞。在病毒感染后采用胆固醇去除药物MβCD处理MDBK细胞,对于病毒感染力的影响是轻微的。这些发现可有助于理解BRSV的感染机制,为研制安全、高效的疫苗和有效的治疗药物提供理论依据。 展开更多

关键词 牛呼吸道合胞体病毒 脂筏 MβCD MDBK细胞

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表达牛呼吸道合胞体病毒G蛋白基因的重组Ⅰ型牛疱疹病毒的构建与鉴定 被引量：8

7

作者 冯军科 朱远茂 +6 位作者 任宪刚 祖立闯 李娇 史鸿飞 高欲燃 童光志 薛飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期81-85,共5页

为构建表达牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白基因的牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)重组病毒,本研究将人工合成的BRSV全长G蛋白基因编码序列插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建TK基因缺失转移载体。利用磷酸钙-DNA沉淀法将该转移载体与亲本病毒BH... 为构建表达牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白基因的牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)重组病毒,本研究将人工合成的BRSV全长G蛋白基因编码序列插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建TK基因缺失转移载体。利用磷酸钙-DNA沉淀法将该转移载体与亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组DNA共转染牛鼻甲细胞后收获增殖的病毒。通过反向蚀斑筛选,得到重组病毒BHV-1/TK-/G+。PCR检测结果证实G蛋白基因已经插入到了亲本病毒BHV-1/TK-/LacZ+的基因组中,间接免疫荧光试验和western blot证实BHV-1/TK-/G+中的G蛋白基因在感染的细胞中获得了表达。本研究为研制BRSV及其他重要牛传染病的BHV-1病毒活载体疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 牛呼吸道合胞体病毒 G蛋白基因 牛疱疹病毒Ⅰ型 磷酸钙-DNA沉淀法

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牛呼吸道合胞体病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量：6

8

作者 李家伟 王建科 +2 位作者 张淑琴 张加力 郭利 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期867-871,共5页

牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)是引起牛呼吸道疾病的一种病毒性病原体。本研究建立一种利用环介导等温扩增技术(RT-LAMP)快速检测BRSV的新的方法,针对BRSV N基因(GeneBank:AF054668.1)设计4对特异性LAMP引物,每组引物特异性识别靶基因序列上... 牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)是引起牛呼吸道疾病的一种病毒性病原体。本研究建立一种利用环介导等温扩增技术(RT-LAMP)快速检测BRSV的新的方法,针对BRSV N基因(GeneBank:AF054668.1)设计4对特异性LAMP引物,每组引物特异性识别靶基因序列上4个独立区域,利用扩增靶DNA的Bst2.0 DNA聚合酶,63℃恒温水浴50 min完成病毒检测,使用钙黄绿素检测荧光目视和琼脂糖凝胶电泳方法,同时对牛的其他主要病毒进行特异性检测,结果证明特异性好。该RT-LAMP检测方法的灵敏度达到BRSV模板稀释的10^(-6)倍,可成功检测到临床样本中的BRSV基因组,为BRSV的临床检测提供了一种快速的试验手段,更适合BRS的诊断和临床现场快速检测。 展开更多

关键词 牛呼吸道合胞体病毒 环介导等温扩增技术 检测方法

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牛呼吸道合胞体病毒感染 被引量：5

9

作者 欧阳忠明 《中国畜禽传染病》 CSCD 1995年第1期62-63,共2页

牛呼吸道合胞体病毒感染欧阳忠明综述陆承平审校（南京农业大学动物医学系）牛呼吸道合胞体病毒（ＢＲＳＶ）感染可引致犊牛呼吸道疾病，给养牛业造成很大的经济损失，在欧共体国家被列为仅次于牛粘膜病（ＢＶＤ）及牛传染性鼻气管炎（... 牛呼吸道合胞体病毒感染欧阳忠明综述陆承平审校（南京农业大学动物医学系）牛呼吸道合胞体病毒（ＢＲＳＶ）感染可引致犊牛呼吸道疾病，给养牛业造成很大的经济损失，在欧共体国家被列为仅次于牛粘膜病（ＢＶＤ）及牛传染性鼻气管炎（ＩＢＲ）的三大重要牛病之一。近年对... 展开更多

关键词 牛病 呼吸道疾病 brsv 病毒感染

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成年奶牛自然感染呼吸性合胞体致死性肺炎

10

作者 安志兴 莫重辉 《动物医学进展》 CSCD 1997年第3期47-48,共2页

成年奶牛自然感染呼吸性合胞体致死性肺炎安志兴莫重辉摘译童德文校牛呼吸性合胞体病毒（ＢＲＳＶ），能引起不同年龄牛的肺部疾病。一般来说，报道过ＢＲＳＶ诱发犊牛的严重疾病，而成年牛不常发生。一般认为严重感染的病畜，在肺的前... 成年奶牛自然感染呼吸性合胞体致死性肺炎安志兴莫重辉摘译童德文校牛呼吸性合胞体病毒（ＢＲＳＶ），能引起不同年龄牛的肺部疾病。一般来说，报道过ＢＲＳＶ诱发犊牛的严重疾病，而成年牛不常发生。一般认为严重感染的病畜，在肺的前腹侧发生细支气管炎和支气管肺泡肺炎... 展开更多

关键词 牛病 乳牛 brsv 肺炎 感染

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新疆部分规模化奶牛场5种疫病的血清学调查 被引量：19

11

作者 李静 李岩 +3 位作者 范伟兴 袁立岗 齐亚银 蒲敬伟 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第11期24-27,共4页

为了解新疆地区部分规模化奶牛场牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛副流感3型病毒和牛支原体的感染状况，本试验采用酶联免疫吸附试验（ELISA ）检测试验区奶牛场中未接种上述疫病疫苗的奶牛血清，对自... 为了解新疆地区部分规模化奶牛场牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛副流感3型病毒和牛支原体的感染状况，本试验采用酶联免疫吸附试验（ELISA ）检测试验区奶牛场中未接种上述疫病疫苗的奶牛血清，对自然感染状况进行评估。结果表明，牛传染性鼻气管炎病毒抗体平均阳性率为82．5％（66/80），牛病毒性腹泻病毒抗体平均阳性率为88．8％（71/80），牛呼吸道合胞体病毒抗体平均阳性率为82．5％（66/80），牛副流感3型病毒抗体平均阳性率为91．3％（73/80），牛支原体抗体平均阳性率86．3％（69/80）；试验区牛场均存在2种～5种病原的混合感染现象，其中5种病原混合感染率为71．3％。结果显示在新疆地区部分规模化奶牛场中普遍存在上述5种病原的感染，且混合感染现象明显，奶牛生产中必须加强这些疫病的防控工作。 展开更多

关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 牛病毒性腹泻病毒 牛呼吸道合胞体病毒 牛副流感3型病毒 牛支原体

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基于牛呼吸道合胞体病毒融合前F蛋白的间接ELISA方法的建立与应用 被引量：7

12

作者 王磊 常继涛 于力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1126-1130,1158,共6页

为确定牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)在我国的流行情况,本研究以BRSV融合前F蛋白作为包被抗原,经各项条件优化后建立了检测BRSV抗体的间接ELISA方法:确定抗原最佳包被浓度为2 mg/L、待检血清的最佳稀释度为1∶100、最佳封闭液为3%明胶、羊抗... 为确定牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)在我国的流行情况,本研究以BRSV融合前F蛋白作为包被抗原,经各项条件优化后建立了检测BRSV抗体的间接ELISA方法:确定抗原最佳包被浓度为2 mg/L、待检血清的最佳稀释度为1∶100、最佳封闭液为3%明胶、羊抗牛Ig G-HRP的稀释度为1:8000,抗体阴阳性临界值为0.204。特异性试验结果显示,该ELISA方法与阿卡斑病毒(AKAV)、牛轮状病毒(BRV)、蓝舌病病毒(BTV)、口蹄疫病毒(FMDV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)以及牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的阳性血清无交叉反应。敏感性试验结果显示,当BRSV阳性血清稀释倍数达1∶6400时仍为阳性结果,表明该方法具有较高的敏感性。重复性试验结果显示,ELISA组内、组间最大变异系数分别为6.80%和8.80%,表明该方法的重复性良好。对195份临床牛血清样品检测结果显示,BRSV抗体阳性率为61.0%;对其中的143份血清同时进行病毒中和试验检测,结果显示二者符合率为89.5%。上述结果表明本研究建立的间接ELISA方法可以用于牛群中BRSV抗体的检测,为BRSV的血清流行病学调查提供可靠的技术手段。 展开更多

关键词 牛呼吸道合胞体病毒 融合前的F蛋白 间接ELISA 抗体检测

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四种牛病毒性呼吸道病一步法多重PCR方法的建立与应用 被引量：4

13

作者 张闫 郭福强 +8 位作者 刘小琛 段文龙 王利丽 白和平 陶勇 赵桂新 侯冠欣 张志强 史秋梅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1390-1397,共8页

牛病毒性呼吸道病(BRD)是一种世界性的并且由多个因素引起的传染病,也是危害我国牛养殖业的主要因素。本研究分别选取保守基因IBRV gB基因、BCoV N基因、BRSV F基因、BPIV3 HN基因,设计特异性引物,建立了IBRV、BCoV、BRSV、BPIV3一步法... 牛病毒性呼吸道病(BRD)是一种世界性的并且由多个因素引起的传染病,也是危害我国牛养殖业的主要因素。本研究分别选取保守基因IBRV gB基因、BCoV N基因、BRSV F基因、BPIV3 HN基因,设计特异性引物,建立了IBRV、BCoV、BRSV、BPIV3一步法多重PCR检测方法,并对一步法多重PCR方法反应体系与反应程序进行优化。一步法多重PCR的退火温度、延伸时间、循环数、引物浓度、酶用量分别为60℃、30 s、30次、0.6μmol/L、1.6μL。该方法对IBRV、BRSV、BCoV、BPIV3的最低检测限分别为3.72×10^(-3)、3.14×10^(-6)、2.86×10^(-4)、2.92×10^(-6)ng/μL。利用所建立的一步法多重PCR方法对临床90份样品进行检测,与经典单重PCR检测方法相比,阳性符合率为100%。 展开更多

关键词 一步法多重PCR 牛传染性鼻气管炎病毒 牛呼吸道合胞体病毒 牛冠状病毒 牛副流感病毒3型

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牛呼吸道合胞体病的检测方法与疫苗研究

14

作者 袁晓娟 樊章梅 《中国乳业》 2023年第3期71-74,91,共5页

牛呼吸道合胞体病是由牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)引起的传染病,临床以呼吸道症状为主(咳嗽、流涕、呼吸急促等),严重引起泌乳停止、怀孕母牛流产等,不利于养牛业健康发展。BRSV常见的传播方式是直接接触,高滴度的母源抗体可以减轻呼吸道... 牛呼吸道合胞体病是由牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)引起的传染病,临床以呼吸道症状为主(咳嗽、流涕、呼吸急促等),严重引起泌乳停止、怀孕母牛流产等,不利于养牛业健康发展。BRSV常见的传播方式是直接接触,高滴度的母源抗体可以减轻呼吸道症状。BRSV的诊断方法包括血清学和病原学检测,国内学者对该病研究出单重甚至多重ELISA、PCR法用于诊断,试验证明,它们都具有较好的特异性、敏感性和符合率。BRSV疫苗目前疫苗主要有灭活苗(220/69株)、减毒活疫苗(RB-94致弱株),现在亚单位疫苗成为研究热点,我国学者将牛疱疹病毒作载体表达BRSV的G蛋白重组疫苗,诱导黏膜免疫,从而保护牛。本病及时发现并早日诊断治疗,可有效控制。此外,应加强饲养管理、环境卫生的改善、提高牛只自身抵抗力等。 展开更多

关键词 牛呼吸道合胞体病毒(brsv) 检测方法 疫苗

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牛呼吸道合胞体病毒与菜牛非典型间质性肺炎的关系

15

作者 Coll.,JK 丁关娥 《国外兽医学（畜禽传染病）》 1989年第3期16-18,共3页

关键词 牛 ALP brsv 肺炎 呼吸器官 疾病

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牛呼吸道合胞体病毒通用型实时荧光RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量：3

16

作者 孙晓波 姜晓霞 +6 位作者 王以欣 牛超 韩言言 钟林翰 乔薪瑗 徐义刚 贾烁 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期554-563,共10页

为了建立牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)通用型实时荧光RT-PCR快速检测方法,本研究根据GenBank登录的各型BRSV N基因序列共有保守区域设计引物,首先建立了检测BRSV的常规RT-PCR方法。结果显示,该常规RT-PCR检测方法特异性良好,仅检测靶标病... 为了建立牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)通用型实时荧光RT-PCR快速检测方法,本研究根据GenBank登录的各型BRSV N基因序列共有保守区域设计引物,首先建立了检测BRSV的常规RT-PCR方法。结果显示,该常规RT-PCR检测方法特异性良好,仅检测靶标病毒呈阳性,检测限为1.71×10^(3) copies/μL。在此基础上,基于SYBR GreenⅠ染料建立了检测BRSV的实时荧光RT-PCR方法,该方法特异性良好,检测限为1.71×10^(1) copies/μL,其检测灵敏度显著高于常规RT-PCR方法。利用建立的常规RT-PCR方法和实时荧光RT-PCR方法对采集的46份牛鼻拭子样本和22份牛肺脏样本进行平行检测。结果显示,常规RT-PCR方法从牛鼻拭子和肺脏样本中分别检出10份和4份呈阳性,实时荧光RT-PCR方法分别检出13份和6份呈阳性,实时荧光RT-PCR方法的阳性检测率高于常规RT-PCR方法。本研究建立的BRSV通用型实时荧光RT-PCR方法为BRSV的临床检测和流行病学调查提供技术支持。 展开更多

关键词 牛呼吸道合胞体病毒 N基因 通用型real-time RT-PCR 样本检测

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致牛呼吸道疾病综合征主要病毒SYBR GreenⅠ实时PCR检测方法的建立与应用 被引量：9

17

作者 姜晓霞 孙晓波 +5 位作者 王以欣 张晓梅 赵毅 乔薪瑗 徐义刚 贾烁 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期269-277,共9页

为鉴别检测引起牛呼吸道疾病综合征的主要病毒性病原,包括牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)和牛副流感病毒(BPIV),本研究分别以IBRV g B基因、BVDV 5′-UTR基因、BRSV N基因和BPIV HN基... 为鉴别检测引起牛呼吸道疾病综合征的主要病毒性病原,包括牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)和牛副流感病毒(BPIV),本研究分别以IBRV g B基因、BVDV 5′-UTR基因、BRSV N基因和BPIV HN基因为靶基因,通过BLAST比对,基于靶基因的保守区域设计引物,经过反应体系优化,建立了检测IBRV、BVDV、BRSV和BPIV的单一和多重SYBR GreenⅠ实时PCR方法。结果显示,建立的方法检测灵敏性高,对IBRV、BVDV、BRSV和BPIV的最低检测限分别为5.86×10^(1)、5.02×10^(1)、1.02×10^(2)和2.42×10^(1)copies/μL。检测特异性强,仅IBRV、BVDV、BRSV和BPIV为方法阳性,其他病毒均为阴性。采集了259份临床表现为呼吸道疾病症状的牛血液样本,利用建立的方法进行检测,结果显示,阳性检出率分别为BVDV 22.78%、BPIV 11.97%、IBRV 5.02%、BRSV 31.66%,经基因测序复核,本方法的检测准确率为100%。此外,在阳性样本中存在多种病毒混合感染的情况,其中BRSV和BVDV混合感染率为5.02%,BRSV和BPIV混合感染率为3.47%,BPIV和BVDV混合感染率为1.93%,BRSV和IBRV混合感染率为1.16%,BRSV、BVDV和BPIV混合感染率为0.39%。以上结果表明,本研究建立的方法具有良好的检测灵敏性、特异性和准确性,可同时检测IBRV、BVDV、BPIV和BRSV,为病毒性牛呼吸道疾病综合征主要病原的快速检测和流行病学调查提供了必要的技术支持。 展开更多

关键词 牛呼吸道疾病综合征 牛传染性鼻气管炎病毒 牛病毒性腹泻病毒 牛副流感病毒 牛呼吸道合胞体病毒 SYBR GreenⅠ实时PCR方法

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牛呼吸道合胞体病毒的流行和诊断 被引量：10

18

作者 王瑞 姚学军 +2 位作者 刘艳霞 阚纯利 见满振 《当代畜牧》 2017年第2期15-16,共2页

牛呼吸道合胞体病毒(Bovine respiratory syncytial virus,BRSV)是一种常见的可引起牛呼吸道疾病的病原。BRSV在世界各地广泛分布,感染率差异较大。在我国,BRSV血清抗体平均阳性率为69.6%。本病主要通过呼吸道或直接接触传播。

关键词 brsv 流行病学 传播 诊断

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牛病毒性腹泻病毒、牛呼吸道合胞体病毒和牛副流感病毒3型三重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：9

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作者 索阳 陈继勇 《畜牧与兽医》 北大核心 2013年第6期10-13,共4页

根椐GenBank中牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)和牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV-3)3种病毒基因序列,设计合成引物,建立... 根椐GenBank中牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)和牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV-3)3种病毒基因序列,设计合成引物,建立3种病毒的三重RT-PCR方法。用这3对引物对同一样品中的BVDV、BRSV和BPIV-3核酸模板进行三重RT-PCR扩增,结果显示:可同时扩增BVDV的466 bp,BRSV的735 bp和BPIV-3的258 bp的特异性片段,而对其他4种病原的PCR扩增结果均为阴性;敏感性测定结果表明,该三重RT-PCR技术能检出10 pg的BVDV、1 pg的BPIV-3和10 pg的BRSV模板。用37份临床病料对本研究多重RT-PCR技术和单项RT-PCR技术进行对比验证,结果显示:两者的总符合率为100%。结果表明:建立的多重RT-PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对这3种病毒的同时检测和鉴别诊断。 展开更多

关键词 三重聚合酶链式反应 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 牛呼吸道合胞体病毒(brsv) 牛副流感病毒3型(BPIV-3)

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