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羊源类鼻疽伯克霍尔德菌BPSS1512基因克隆、原核表达及其蛋白的生物信息学分析 被引量：3
1
作者 曹瑞勇 聂鑫 +9 位作者 李宝宝 张振兴 黄海峰 李亚颖 彭冬梅 李国华 朱姝 杨小健 杜丽 王凤阳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第8期2234-2240,共7页
为克隆羊源类鼻疽伯克霍尔德菌BPSS1512基因,并对其编码的蛋白进行生物信息学分析,以类鼻疽伯克霍尔德菌基因组为模板,参照GenBank中Burkholderia pseudomallei K96243株基因组DNA序列(登录号:NC_006351.1)设计引物,PCR扩增BPSS1512基因... 为克隆羊源类鼻疽伯克霍尔德菌BPSS1512基因,并对其编码的蛋白进行生物信息学分析,以类鼻疽伯克霍尔德菌基因组为模板,参照GenBank中Burkholderia pseudomallei K96243株基因组DNA序列(登录号:NC_006351.1)设计引物,PCR扩增BPSS1512基因,构建重组质粒,SDS-PAGE和Western blotting分析其蛋白表达,DNAMAN等软件对BPSS1512基因编码的氨基酸序列进行分析。结果显示,PCR扩增成功得到1 425bp的特异性条带,BamHⅠ和HindⅢ双酶切后得到约为5 000和1 500bp的条带,表明重组质粒pET-28a-BPSS1512构建成功,IPTG浓度为10mmol/L,诱导时间8h为最适宜的诱导条件。BPSS1512基因编码的蛋白质分子质量为53ku,在包涵体中表达;在BPSS1512蛋白二级结构中,α-螺旋、延伸链和无规卷曲分别占24.05%、14.77%、61.18%,并且疏水性区域分布在-2.0^+2.4之间,说明BPSS1512蛋白具有较强的疏水性,本试验结果可为类鼻疽病的防制提供参考依据。 展开更多
关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 bpss1512基因 克隆 原核表达 生物信息学分析
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类鼻疽菌T3SS1 的BPSS1395 基因在番茄植株感染中的作用研究 被引量：2
2
作者 袁思琪 胡艺 +6 位作者 唐梦灵 饶承龙 胡治强 邓铃 李倩 谢建平 毛旭虎 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期973-980,共8页
目的研究类鼻疽菌T3SS1的BPSS1395基因在番茄植株感染中的作用。方法类鼻疽菌野生株BPC006感染番茄幼苗根部,以大肠杆菌感染组作为对照,通过PCR技术检测番茄幼苗叶片中细菌的存在,并通过透射电镜观察番茄幼苗叶片细胞中类鼻疽菌的定位... 目的研究类鼻疽菌T3SS1的BPSS1395基因在番茄植株感染中的作用。方法类鼻疽菌野生株BPC006感染番茄幼苗根部,以大肠杆菌感染组作为对照,通过PCR技术检测番茄幼苗叶片中细菌的存在,并通过透射电镜观察番茄幼苗叶片细胞中类鼻疽菌的定位。类鼻疽菌感染第3、7、10、14、17、21天后,随机选取幼苗叶片,通过胞内存活实验检测类鼻疽菌在叶片细胞中的增殖。采用同源重组技术构建BPSS1395基因的敲除株和回补株,分别以类鼻疽菌野生株BPC006、敲除株ΔBPSS1395、回补株c-ΔBPSS1395感染番茄幼苗根部后,首先直接观察叶片的病理变化;其次提取感染第14和21天各组植物叶片的基因组,通过PCR对细菌的定植进行鉴定;最后采用胞内存活实验检测各菌株在叶片细胞内的增殖情况。结果类鼻疽菌感染番茄植株后,在提取的番茄幼苗叶片基因组中,能扩增出BPSS1395基因条带,而对照组未扩增出大肠杆菌特异性条带;通过透射电镜观察到类鼻疽菌存在于叶片细胞中,且叶片细胞内的类鼻疽菌数量随着感染时间的延长而增加。敲除株ΔBPSS1395感染番茄幼苗后,叶片无任何疾病症状,而野生株BPC006和回补株c-ΔBPSS1395感染组的叶片有些许的萎蔫。此外,在敲除株ΔBPSS1395感染组提取的植物基因组中未检测到类鼻疽菌的存在,而回补株c-ΔBPSS1395表现出和野生株相似的叶片细胞内的增殖能力。结论类鼻疽菌T3SS1的BPSS1395基因有利于该菌在番茄幼苗感染中的定植和增殖。 展开更多
关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 bpss1395 植株感染 番茄幼苗
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类鼻疽伯克霍尔德菌BPSS1622蛋白免疫原性鉴定与亚细胞定位 被引量：1
3
作者 金浩龙 胡艺 +4 位作者 李倩 马腾飞 韩丹 胡志强 毛旭虎 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期771-776,共6页
目的重组表达类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei)BPSS1622蛋白并鉴定其免疫原性及亚细胞定位。方法以pET-22b为表达载体,在大肠埃希菌BL21中表达BPSS1622蛋白;亲和层析纯化目的蛋白;用纯化后蛋白免疫新西兰兔获得抗血清;EL... 目的重组表达类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei)BPSS1622蛋白并鉴定其免疫原性及亚细胞定位。方法以pET-22b为表达载体,在大肠埃希菌BL21中表达BPSS1622蛋白;亲和层析纯化目的蛋白;用纯化后蛋白免疫新西兰兔获得抗血清;ELISA及Western blot鉴定纯化蛋白的免疫原性,并对类鼻疽杆菌BPSS1622蛋白进行亚细胞定位,探讨其生物学功能。结果以菌株BPC006基因组DNA为模板,通过PCR获得目的基因,构建pET-22b/BPSS1622重组质粒;转化至E.coli BL21获得工程菌株,经IPTG诱导表达、纯化得到了相对分子质量为22 000的目的蛋白;制备的抗血清ELISA效价高达1∶1 200 000,并能与目的蛋白发生特异性抗原抗体反应;亚细胞定位发现BPSS1622蛋白定位于类鼻疽杆菌的胞壁及胞膜中。结论成功克隆和表达了类鼻疽杆菌的BPSS1622蛋白,制备了免疫血清,该蛋白定位于细菌的细胞膜和细胞壁中,预测该蛋白具有ATP依赖的RNA解旋酶活性,为疾病诊断和预防奠定了基础。 展开更多
关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 bpss1622蛋白 免疫血清 亚细胞定位
原文传递
类鼻疽伯克霍尔德菌BPSS0180基因的克隆、原核表达及生物信息学分析 被引量：1
4
作者 张振兴 聂鑫 +9 位作者 杨小健 曹瑞勇 李宝宝 黄海峰 朱姝 李国华 彭冬梅 李亚颖 王凤阳 杜丽 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第11期3313-3319,共7页
试验旨在对类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,B.pseudomallea)的BPSS0180基因进行克隆和原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。参照GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌K96243标准株BPSS0180基因序列设计1对引物,对类鼻疽... 试验旨在对类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,B.pseudomallea)的BPSS0180基因进行克隆和原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。参照GenBank中类鼻疽伯克霍尔德菌K96243标准株BPSS0180基因序列设计1对引物,对类鼻疽伯克霍尔德菌hn-1株进行PCR扩增获得BPSS0180基因片段。将得到的BPSS0180基因连接到pET-28a(+)载体,构建pET-28a(+)-BPSS0180重组质粒,转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,提取质粒进行酶切鉴定。鉴定正确后,将构建成功的pET-28a(+)-BPSS0180重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blotting进行分析。应用DNAMAN、ProtParam、SOPMA和Protscale对BPSS0180基因序列进行生物信息学分析。结果显示,本试验成功克隆了1 146bp的BPSS0180基因,诱导表达得到的His-BPSS0180融合蛋白大小约为45ku,且主要以包涵体形式存在。BPSS0180蛋白的分子式为C_1779H_2809N_545O_536S_7,分子质量为40.6ku,消光系数为40 575,疏水指数为85.43。其不稳定系数为46.52,属于不稳定蛋白;理论等电点(pI)为5.54,为酸性蛋白;总平均疏水性(GRAVY)是-0.261,为亲水性蛋白。该蛋白的二级结构以α-螺旋(58.79%)和无规卷曲(32.02%)为主,预测其在哺乳动物网织红细胞的半衰期为30h。本试验结果为进一步探究类鼻疽伯克霍尔德菌的BPSS0180基因提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 bpss0180基因 克隆 原核表达 生物信息学分析
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数字图书馆服务动态定制中的组合工具 被引量：5
5
作者 张晓青 张晓林 《现代图书情报技术》 CSSCI 北大核心 2004年第9期8-12,28,共6页
在简要介绍基于 Web服务组合的服务动态定制机制后 ,着重分析介绍了包括 BPML、BPSS、WS-CI、BPEL 4 WS等在内的 Web服务组合工具。
关键词 数字图书馆Web服务组合 动态定制BPML bpss WSCI BPEL4WS
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