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布鲁氏菌分泌蛋白BPE043的功能及其对细胞凋亡基因表达的影响 被引量：1
1
作者 王书利 李梦含 +5 位作者 高萌萌 王倩 郑好 张荷婷 李志强 李启峰 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期21-28,共8页
本研究旨在分析布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统(T4SS)效应蛋白BPE043在布鲁氏菌感染过程和调控细胞凋亡基因表达中的作用。以流产布鲁氏菌2308(S2308)为亲本株,通过同源重组的方法构建布鲁氏菌BPE 043基因缺失株(2308ΔBPE 043)和回补株(2308ΔBP... 本研究旨在分析布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统(T4SS)效应蛋白BPE043在布鲁氏菌感染过程和调控细胞凋亡基因表达中的作用。以流产布鲁氏菌2308(S2308)为亲本株,通过同源重组的方法构建布鲁氏菌BPE 043基因缺失株(2308ΔBPE 043)和回补株(2308ΔBPE 043-C)。将亲本株、缺失株和回补株在相同起始浓度下培养,观察它们的生长变化。亲本株、缺失株和回补株感染小鼠,测定小鼠脾脏的荷菌量。亲本株、缺失株和回补株侵染小鼠巨噬细胞RAW 264.7,检测细菌的胞内存活能力。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot技术检测布鲁氏菌侵染后细胞凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Bax和Bcl-2的表达水平。结果显示,亲本株、缺失株和回补株在体外培养的生长趋势基本相同。2308ΔBPE 043感染小鼠脾脏的荷菌量显著低于S2303感染组,且在感染2周后,缺失株感染组脾脏荷菌量的下降趋势较亲本株感染组明显。布鲁氏菌侵染宿主细胞8 h后,2308ΔBPE 043的胞内存活能力显著低于S2308。布鲁氏菌侵染宿主细胞24 h后,2308ΔBPE 043侵染组凋亡基因Caspase-3、Caspase-8和Bax表达水平显著高于S2308侵染组,Bcl-2表达水平显著低于S2308侵染组。2308ΔBPE 043侵染组Caspase-3和Caspase-8的蛋白表达水平,以及Caspase-3和Caspase-8的活性显著高于S2308侵染组。本研究发现,T4SS效应蛋白BPE043在布鲁氏菌感染和胞内存活过程中发挥重要作用,是布鲁氏菌重要的毒力因子,为进一步探究BPE043在布鲁氏菌持续性感染中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 bpe043 胞内存活 毒力 凋亡
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布鲁氏菌IV型分泌系统效应蛋白BPE043的功能和致病机制研究 被引量：6
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作者 罗文博 付梦姣 +8 位作者 焦俊 冯俊霞 卢志宇 胡雪媛 温博海 赵晓冬 熊小路 周冬生 柯跃华 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期618-623,共6页
目的研究布鲁氏菌IV型分泌系统效应蛋白BPE043在布鲁氏菌感染和胞内生存过程中的作用。方法以羊种布鲁氏菌104株为起始菌株,通过同源重组的方法构建布鲁氏菌BPE043基因缺失株。将布鲁氏菌野生株104和突变株104ΔBPE043在相同的起始浓度... 目的研究布鲁氏菌IV型分泌系统效应蛋白BPE043在布鲁氏菌感染和胞内生存过程中的作用。方法以羊种布鲁氏菌104株为起始菌株,通过同源重组的方法构建布鲁氏菌BPE043基因缺失株。将布鲁氏菌野生株104和突变株104ΔBPE043在相同的起始浓度下培养,观察它们生长变化的趋势;用野生株和突变株分别感染小鼠,构建小鼠体内感染模型,测定小鼠脾重并计算脾脏细菌载量;利用免疫共沉淀技术筛选BPE043蛋白的宿主互作蛋白。结果成功构建了布鲁氏菌BPE043基因缺失株。与野生株相比,突变株104ΔBPE043在体外培养的生长趋势和野生株基本相同;小鼠感染实验显示,在感染1周后,两组小鼠脾均肿大,但突变株104ΔBPE043感染组小鼠脾重低于野生株104感染组小鼠脾重;在感染后两周,两组小鼠脾肿大现象开始减轻。在细菌载量方面,在感染1周后,突变株104ΔBPE043感染小鼠的脾脏细菌载量低于野生株104感染小鼠;在感染后2周,突变株感染组的脾细菌载量下降趋势更明显。免疫共沉淀实验显示BPE043蛋白与鼠源小分子GTP结合蛋白Rab4和Rab11存在相互作用。结论布鲁氏菌IV型分泌系统效应蛋白BPE043是布鲁氏菌重要的毒力因子。本研究为进一步探索BPE043基因在布鲁氏菌感染和胞内生存中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 bpe043基因 生长曲线 体内感染 互作蛋白
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