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BMP-12重组腺病毒载体转染外周血MSCs向肌腱/韧带细胞分化研究 被引量:2
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作者 付维力 陈刚 +2 位作者 唐新 李棋 李箭 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期472-476,共5页
目的探讨携带BMP-12基因的腺病毒载体转染诱导外周血MSCs向肌腱/韧带细胞分化的效果。方法取3~4月龄新西兰兔外周血,体外分离培养外周血MSCs至第3代。采用Ad Easy腺病毒载体系统制备BMP-12重组腺病毒载体。将BMP-12重组腺病毒体体外转... 目的探讨携带BMP-12基因的腺病毒载体转染诱导外周血MSCs向肌腱/韧带细胞分化的效果。方法取3~4月龄新西兰兔外周血,体外分离培养外周血MSCs至第3代。采用Ad Easy腺病毒载体系统制备BMP-12重组腺病毒载体。将BMP-12重组腺病毒体体外转染第3代外周血MSCs,转染后24 h通过流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测转染效率,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,转染后8、24 h在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达;转染后0、7、14 d,采用免疫组织化学染色观察I型胶原表达情况;实时定量PCR检测肌腱/韧带特异基因Tenomodulin、Tenascin-C和Decorin m RNA表达水平,并设未转染细胞作为对照组。结果转染后24 h,倒置相差显微镜观察示细胞生长增殖缓慢,细胞形态清晰;FCM检测示,转染组转染效率为99.57%,未转染组为2.46%;转染后8 h,荧光显微镜下即可见GFP表达,随培养时间延长GFP表达逐渐增多,24 h时几乎所有细胞均可见GFP表达。免疫组织化学染色示,随转染时间延长,Ι型胶原表达逐渐增强;转染组转染后14 d,肌腱/韧带特异基因Tenomodulin、Tenascin-C和Decorin m RNA表达水平分别为0.061±0.013、0.029±0.008、0.679±0.067,均显著高于未转染组的0.004±0.002、0.003±0.001、0.142±0.024,差异有统计学意义(t=—7.700,P=0.031;t=—5.741,P=0.020;t=—12.998,P=0.000)。结论 BMP-12重组腺病毒载体可明显促进外周血MSCs向肌腱/韧带成纤维细胞表型分化,并促进肌腱/韧带特异基因表达和细胞外基质产生,为外周血MSCs用于肌腱/韧带再生提供了依据。 展开更多
关键词 外周血MSCs bmp-12 重组腺病毒载体 肌腱/韧带再生 基因工程 细胞治疗
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过表达BMP-12的兔BM-MSCs在3D打印PLGA支架上的增殖与分化特性研究 被引量:1
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作者 崔磊 陈鹏 +3 位作者 张文涛 谢小肖 李伟 江长青 《实用手外科杂志》 2021年第3期368-374,共7页
目的探讨过表达骨形态发生蛋白-12(Bone Morphogenic Protein 12,BMP-12)的兔骨髓间充质干细胞(Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,BM-MSCs)在3D打印聚乳酸-羟基乙酸(Polylactic-co-glycolic Acid,PLGA)支架上的增殖与分化特... 目的探讨过表达骨形态发生蛋白-12(Bone Morphogenic Protein 12,BMP-12)的兔骨髓间充质干细胞(Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,BM-MSCs)在3D打印聚乳酸-羟基乙酸(Polylactic-co-glycolic Acid,PLGA)支架上的增殖与分化特性。方法采用3D打印技术制备PLGA支架,并检测其降解性能,分离、培养兔BM-MSCs,使用BMP-12重组腺病毒表达载体转染兔BMMSCs,并将其种植在PLGA支架上,检测支架的细胞毒性及种植的细胞在支架上的增殖活性,通过实时荧光定量PCR和Westernblot技术检测种子细胞Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、BMP-12、SCX、Tnmd、Tnc的基因和蛋白表达水平。结果PLGA支架具有良好的生物相容性和生物可降解性。在种植了过表达BMP-12的BM-MSCs的3 D打印PLGA支架上,BM-MSCs的Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、BMP-12、SCX、Tnmd、Tnc的mRNA和蛋白表达水平显著升高。结论本研究结果提示,在携带过表达BMP-12的BM-MSCs的3 D打印PLGA支架上,BMP-12的过表达促进了BM-MSCs的腱向分化。携带过表达BMP-12的BM-MSCs的PLGA支架可以为肌腱损伤修复提供一种新的治疗方法。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 PLGA支架 bmp-12 肌腱修复 3 D打印
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BMP-12在乳腺癌中的异常表达及潜在预后价值
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作者 陈瑶琦 史晓舜 +3 位作者 陈宇颂 陈婧仪 冯凤兰 李谨 《实用癌症杂志》 2016年第12期1915-1918,共4页
目的探讨BMP-12在乳腺癌中的表达情况及与其预后的相关性。方法 RT-PCR检测BMP-12 m RNA在乳腺癌细胞株中的表达情况;BMP-12在肿瘤原发病灶(n=108)和正常乳腺组织(n=29)中的表达情况采用实时定量PCR进行检测;免疫组化检测BMP-12蛋白在... 目的探讨BMP-12在乳腺癌中的表达情况及与其预后的相关性。方法 RT-PCR检测BMP-12 m RNA在乳腺癌细胞株中的表达情况;BMP-12在肿瘤原发病灶(n=108)和正常乳腺组织(n=29)中的表达情况采用实时定量PCR进行检测;免疫组化检测BMP-12蛋白在正常组织和乳腺癌组织中的表达情况。结果与正常乳腺组织和细胞系相比,BMP-12 m RNA在乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中的表达水平下调;免疫组化显示BMP-12蛋白在乳腺癌组织中的表达水平较正常组织明显降低;预后好的乳腺癌患者BMP-12 m RNA表达水平较高;总生存期长患者比生存期短的患者BMP-12表达水平高。结论 BMP-12低水平表达与乳腺癌患者预后不良相关,BMP-12可能是乳腺癌的潜在预后指示因子。 展开更多
关键词 bmp-12 乳腺癌 表达水平 预后
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BMP-12联合自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)藻酸钙载体复合物移植修复兔软骨缺损
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作者 张艳 黄云鹏 《实用手外科杂志》 2011年第3期259-259,共1页
目的 观察BMP-12诱导的BMSCs移植修复兔软骨缺损的效果,试图发现有效治疗软骨缺损的策略.方法 新西兰大白兔20只,兔龄3个月,体重2kg左右,左、右膝关节造成软骨缺损模型,左膝为实验组(A组),右膝为对照组(B组),将含有BMP-12的BMSCs藻... 目的 观察BMP-12诱导的BMSCs移植修复兔软骨缺损的效果,试图发现有效治疗软骨缺损的策略.方法 新西兰大白兔20只,兔龄3个月,体重2kg左右,左、右膝关节造成软骨缺损模型,左膝为实验组(A组),右膝为对照组(B组),将含有BMP-12的BMSCs藻酸钙载体复合物植入A组,将BMSCs藻酸钙载体复合物植入B组.结果 A,B组软骨缺损处均被透明软骨充填,A组透明软骨数量多于B组,随时间后移,缺损处被填充的越充分,A组填充的软骨细胞具有明显的陷窝且功能旺盛.结论 BMSCs可作为软骨缺损的组织工程种子细胞,BMP可加速诱导其分化为软骨细胞. 展开更多
关键词 bmp-12 BMSCS 软骨缺损
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BMP-12促进PLGA/明胶材料培养的人骨髓间充质干细胞增殖和成肌腱分化
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作者 姜杨 王璐璐 +5 位作者 侯继野 张晓东 徐桂清 王玉 沈雷 吴雨轩 《航天医学与医学工程》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期390-396,共7页
目的探讨三维培养条件下,骨形态发生蛋白-12(BMP-12)对人骨髓间充质干细胞(hBMSC)增殖和成肌腱分化的影响。方法静电纺丝技术制备PLGA/明胶材料。hBMSCs分为6组:对照组(Con),细胞正常培养;BMP-12组,细胞中添加10ng/mL BMP-12培养;Tricir... 目的探讨三维培养条件下,骨形态发生蛋白-12(BMP-12)对人骨髓间充质干细胞(hBMSC)增殖和成肌腱分化的影响。方法静电纺丝技术制备PLGA/明胶材料。hBMSCs分为6组:对照组(Con),细胞正常培养;BMP-12组,细胞中添加10ng/mL BMP-12培养;Triciribine组,BMP-12组细胞添加5μmol/L Triciribine;材料组(Material),hBMSCs种植在PLGA/明胶材料;3D-BMP-12组,材料组中添加10ng/mL BMP-12;3D-Triciribine组,3D-BMP-12组添加5μmol/L Triciribine。各组hBMSCs均进行成肌腱诱导分化。扫描电子显微镜检测材料结构;CCK-8法检测各组细胞增殖;Western blot检测各组Scleraxis(Scx)、Tenomodulin(TNMD)和Tenascin-R、Akt、p-Akt蛋白表达。结果与对照组相比,材料组、BMP-12组细胞生长数目均明显升高。与材料组相比,3D-BMP-12组hBMSCs细胞数量、Scx、TNMD和Tenascin-R蛋白表达均明显升高(P<0.01),3D-Triciribine组hBMSCs上述检测指标均分别比3D-BMP-12组显著降低(P<0.01)。3D-BMP-12组hBMSCs的Akt、p-Akt蛋白表达均显著升高,3D-Triciribine组Akt、p-Akt蛋白表达均明显降低(P<0.01)。结论 BMP-12能激活Akt信号通路,促进生物材料上hBMSCs增殖和成肌腱分化。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白-12 生物材料 间充质干细胞 细胞增殖 成肌腱分化
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健腰密骨片对成骨细胞增殖分化和BMP信号通路报导基因活性的影响 被引量:4
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作者 杨洲 唐德志 +3 位作者 姚长风 赵永见 施杞 王拥军 《上海中医药大学学报》 CAS 2014年第5期80-83,共4页
目的:探讨健腰密骨片对成骨细胞的影响及作用机制。方法:常规培养转染12×SBE-OC-Luc报导基因的成骨细胞株OCT-1细胞(以下简称12×SBE-OC-Luc-OCT1细胞),采用健腰密骨片含药血清进行干预48 h,并以骨形态发生蛋白(BMP)2纯化蛋白(... 目的:探讨健腰密骨片对成骨细胞的影响及作用机制。方法:常规培养转染12×SBE-OC-Luc报导基因的成骨细胞株OCT-1细胞(以下简称12×SBE-OC-Luc-OCT1细胞),采用健腰密骨片含药血清进行干预48 h,并以骨形态发生蛋白(BMP)2纯化蛋白(50 ng/ml)为阳性对照。用MTT法检测成骨细胞增殖率,实时荧光定量RT-PCR法检测成骨细胞中Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen)、骨钙素(osteocalcin)和BMP2mRNA的表达以及荧光素酶活性检测法检测成骨细胞12×SBE-OC-Luc的活性。结果:与正常对照组比较,健腰密骨片能明显促进成骨细胞的增殖(P<0.05);显著增加成骨细胞中typeⅠcollagen、osteocalcin和BMP2的mRNA表达量(P<0.05);能明显促进成骨细胞中BMP报导基因12×SBE-OC-Luc的荧光素酶活性(P<0.05)。结论:健腰密骨片可通过促进BMP2、typeⅠcollagen和osteocalcin的表达及BMP信号通路报导基因12×SBE-OC-Luc的活性,从而促进成骨细胞的增殖与分化。 展开更多
关键词 成骨细胞 OCT-1细胞株 12×SBE-OC-Luc报导基因 骨形态发生蛋白 健腰密骨片
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