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坏死性凋亡在奶牛乳房炎源性无乳链球菌诱导bMECs炎性反应中的机制研究 被引量:1
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作者 王月 陈莉 +1 位作者 邓昭举 韩博 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第9期1-13,共13页
奶牛乳房炎是牧场最常见的疾病之一,无乳链球菌引发的奶牛乳房炎在发达国家和我国的流行率逐年上升。假激酶混合谱系激酶样蛋白(MLKL)是细胞坏死性凋亡的关键信号蛋白,当MLKL被磷酸化激活后,可易位至细胞膜并诱导膜透化,从而导致坏死性... 奶牛乳房炎是牧场最常见的疾病之一,无乳链球菌引发的奶牛乳房炎在发达国家和我国的流行率逐年上升。假激酶混合谱系激酶样蛋白(MLKL)是细胞坏死性凋亡的关键信号蛋白,当MLKL被磷酸化激活后,可易位至细胞膜并诱导膜透化,从而导致坏死性凋亡。为了探究MLKL介导的坏死性凋亡在无乳链球菌诱导奶牛乳腺上皮细胞(bMECs)炎性反应中的分子机制,本试验通过构建无乳链球菌C28和B19菌株感染bMECs的体外模型,采用Annexin V-FITC/PI双染法、Western blot试验、免疫荧光和酶联免疫吸附试验对凋亡、坏死、坏死性凋亡和炎性指标进行检测。结果显示,与感染0 h相比,C28和B19菌株感染9 h时bMECs凋亡细胞数量开始下降,坏死细胞数量增多,丝氨酸/苏氨酸激酶3(RIPK3)和磷酸化假激酶混合谱系激酶样蛋白(p-MLKL)表达量显著升高(P<0.05或P<0.01),含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-8(Caspase-8)表达量显著降低(P<0.05),表明无乳链球菌诱导bMECs死亡的方式为程序性坏死。无乳链球菌诱导bMECs中大量MLKL定位至线粒体,p-MLKL向细胞膜转位。与C28和B19菌株感染组相比,沉默MLKL基因可显著降低p-MLKL表达量(P<0.05),表明MLKL参与无乳链球菌诱导的bMECs程序性坏死。与C28和B19菌株感染组相比,沉默MLKL基因可显著降低无乳链球菌诱导的bMECs中核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)和含半胱天冬酶募集结构域表达的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的表达量(P<0.05),极显著降低TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-18的释放量(P<0.01,P<0.001或P<0.000 1)。结果表明,MLKL作为无乳链球菌诱导bMECs引发坏死性凋亡的执行蛋白,可激活bMECs中NLRP3炎性小体信号通路,最终促进炎性反应的发生。 展开更多
关键词 奶牛乳房炎 无乳链球菌 奶牛乳腺上皮细胞(bmecs) 坏死性凋亡 假激酶混合谱系激酶样蛋白(MLKL)
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冰片通过下调TLR4-NF-κB通路缓解LPS诱导的BMECs损伤 被引量:5
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作者 喻斌 梁涛 +3 位作者 卢金福 吕高虹 卞勇 阮鸣 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期1-6,共6页
目的研究冰片对脂多糖(LPS)引发脑微血管内皮细胞(BMECs)损伤的保护作用及潜在机制。方法原代培养和鉴定大鼠BMECs,并用LPS诱发炎性损伤。利用CCK-8法检测细胞的存活率,并以此优化冰片的给药剂量。继而通过ELISA检测TNF-α、IL-6和IL-8... 目的研究冰片对脂多糖(LPS)引发脑微血管内皮细胞(BMECs)损伤的保护作用及潜在机制。方法原代培养和鉴定大鼠BMECs,并用LPS诱发炎性损伤。利用CCK-8法检测细胞的存活率,并以此优化冰片的给药剂量。继而通过ELISA检测TNF-α、IL-6和IL-8的生成,DCFH-DA探针检测ROS含量,Hoechst 33342染色检测细胞凋亡率,Western blot检测TLR4、p-p65、p65、p-IκBα和IκBα的表达。结果冰片剂量优化结果表明其在10 mg·L^(-1)和20 mg·L^(-1)具有良好的剂量-效应依赖性。以它们为低、高剂量,发现冰片可显著减少TNF-α、IL-6和IL-8的分泌和ROS的生成,降低凋亡细胞百分率,减少TLR4、p-p65和IκBα的表达,并增加p65和p-IκBα的表达。结论冰片可通过下调TLR4-NF-κB通路缓解BMECs的炎症反应,进而减少大脑损伤。 展开更多
关键词 冰片 脂多糖 bmecs TLR4-NF-κB通路
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几种药物对脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)分泌炎性因子的影响 被引量:5
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作者 冯峰 马维武 +1 位作者 管翠萍 周学章 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2387-2391,共5页
通过脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)建立体外炎症模型,探究不同药物对炎症模型细胞分泌炎性因子的抑制作用,为阐明药物抗炎机制奠定基础。本研究通过CCK-8法筛选LPS的最... 通过脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)建立体外炎症模型,探究不同药物对炎症模型细胞分泌炎性因子的抑制作用,为阐明药物抗炎机制奠定基础。本研究通过CCK-8法筛选LPS的最佳致炎剂量,确定细胞炎症模型;将氟尼辛葡甲胺、亚硫酸氢钠穿心莲内酯、苦木、莲胆作用于炎症模型细胞,以地塞米松作为阳性对照,ELISA法检测各组细胞培养液上清中炎性因子TNF-α、IL-6和IL-1β的表达变化情况。研究发现,经LPS(10mg/L)刺激BMECs 24h,炎症模型组细胞培养上清中TNF-α和IL-1β的含量显著高于空白对照组(P<0.05),IL-6的含量极显著高于空白对照组(P<0.01);氟尼辛葡甲胺(10mg/L)、亚硫酸氢钠穿心莲内酯(5mg/L)、苦木(5mg/L)、莲胆(5mg/L)在使用质量浓度下均能不同程度地抑制炎症模型组BMECs分泌TNF-α、IL-6和IL-1β,其中亚硫酸氢钠穿心莲内酯对炎症细胞具有很好的抗炎作用,为以后体内的抗炎作用研究奠定基础。 展开更多
关键词 亚硫酸氢钠穿心莲内酯 脂多糖 bmecs 炎性因子
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水牛Novel-miR-57对Bcap-37和BMECs细胞DOK4基因的调控作用 被引量:2
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作者 蔡小艳 李雅辉 +6 位作者 鲍正潘 陈秋萍 李胜 周宇 邓凯 石德顺 刘庆友 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期269-279,共11页
【目的】筛选Novel-miR-57调控靶基因,并明确其对靶基因的调控作用及生物功能,为揭示水牛乳腺上皮细胞(BMECs)的分化机理提供科学依据。【方法】利用MiRscan预测Novel-miR-57二级结构;以自编软件Ensembl(v80)注释的水牛mRNA截取3'-... 【目的】筛选Novel-miR-57调控靶基因,并明确其对靶基因的调控作用及生物功能,为揭示水牛乳腺上皮细胞(BMECs)的分化机理提供科学依据。【方法】利用MiRscan预测Novel-miR-57二级结构;以自编软件Ensembl(v80)注释的水牛mRNA截取3'-非翻译区(3'-UTR)作为预测数据库,采用Miranda(v3.3a)对Novel-miR-57进行靶基因预测;运用实时荧光定量PCR筛选重点靶基因。以化学合成的Novel-miR-57模拟物Mimics和抑制剂Inhibitor,分别转染人类乳腺癌细胞(Bcap-37)及BMECs细胞,以验证Novel-miR-57与靶基因的表达相关性。【结果】Novel-miR-57前体序列形成7个茎环结构,成熟序列位于第1、2和3个茎环结构间,其结合自由能为-53.70 kcal/mol。以结合自由能低于-20.00 kcal/mol为标准,最终筛选出34个可能的靶基因,共与42条KEGG信号通路存在关联,其富集的信号通路主要有代谢通路(ID:bta01100)、PI3K-Akt信号通路(ID:bta04151)、MAPK信号通路(ID:bta04010)和细胞因子—细胞因子受体相互作用(ID:bta04060)等;经实时荧光定量PCR检测分析发现DLX3、CANCNG3、DOK4、NFKBID、C17orf53、RTN1和FBXO10等7个靶基因在非泌乳期的相对表达量极显著高于泌乳期(P<0.01),二者间相差100.0倍以上,且与NovelmiR-57的相对表达量呈负相关。7个靶基因中仅DOK4基因与Novel-miR-57的表达具相关性,以200 nmol/L Inhibitor转染B-cap37细胞能显著提高DOK4基因表达(P<0.05,下同),添加100 nmol/L Mimics则显著抑制DOK4基因表达。以100 nmol/L Mimics转染BMECs细胞,Novel-miR-57和DOK4基因的相对表达量显著提高;而以200 nmol/L Inhibitor转染BMECs细胞,Novel-miR-57和DOK4基因的表达均受到显著抑制。【结论】Novel-miR-57含有7个茎环结构,且其成熟序列位于第1~3个茎环上。Novel-miR-57过表达可下调Bcap-37细胞DOK4基因表达或上调BMECs细胞DOK4基因表达,即Novel-miR-57对靶基因的调控作用因乳腺细胞生理状态不同而存在差异。 展开更多
关键词 水牛 Novel-miR-57 靶基因 bmecs细胞 Bcap-37细胞 调控作用
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通窍活血汤含药脑脊液对OGD/R损伤大鼠BMECs的保护作用 被引量:9
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作者 戴纪恒 吴思鹏 +2 位作者 汪宁 王艳 吴倩 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第14期42-52,共11页
目的:探讨通窍活血汤含药脑脊液对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的保护作用及潜在机制。方法:通过酶消化法提取原代BMECs,并将细胞随机分为6组,分别为正常组,OGD/R组,通窍活血汤(TQHXT)组(20%),尼莫地平(NM... 目的:探讨通窍活血汤含药脑脊液对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的保护作用及潜在机制。方法:通过酶消化法提取原代BMECs,并将细胞随机分为6组,分别为正常组,OGD/R组,通窍活血汤(TQHXT)组(20%),尼莫地平(NMDP)组(10μmol·L^-1),卡博替尼(BMS)组(1μmol·L^-1)和合用药组。除正常组外,其余各组细胞在氧糖剥夺2 h后迅速复糖复氧24 h进行OGD/R造模并分组给药。采用细胞免疫荧光染色法鉴定BMECs,观察OGD/R损伤大鼠BMECs的形态学和超微结构改变并检测细胞跨膜电阻(TEER)值变化。用试剂盒检测细胞内一氧化氮(NO)水平、乳酸脱氢酶(LDH)活性、活性氧(ROS)荧光强度和组织型纤溶酶原激活因子(tPA)含量。采用流式细胞术检测细胞内钙离子浓度及细胞凋亡,观察血管新生标记因子CD34的表达,用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中紧密连接蛋白(ZO-1),血管内皮生长因子(VEGF),黏着斑激酶(FAK)和桩蛋白(Paxillin)蛋白的表达情况。结果:与正常组比较,OGD/R组细胞皱缩、变圆,细胞TEER值和细胞中ZO-1蛋白表达显著降低,细胞中NO,LDH及ROS水平显著升高,tPA含量显著降低,细胞中钙离子浓度和细胞凋亡显著增加,细胞中CD34有所表达,VEGF,FAK和Paxillin蛋白表达显著升高(P<0.01);与OGD/R组比较,TQHXT组细胞损伤明显改善,细胞TEER值和细胞中ZO-1蛋白表达显著升高,细胞中NO,LDH及ROS含量显著降低,tPA含量显著升高,细胞中钙离子浓度和细胞凋亡显著减少,细胞中CD34表达增加,VEGF,FAK和Paxillin蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:通窍活血汤含药脑脊液对OGD/R损伤大鼠BMECs具有保护作用,该保护作用可能是通过VEGF/VEGF受体2(R2)/FAK/Paxillin信号通路促进血管生成来发挥作用。 展开更多
关键词 通窍活血汤 含药脑脊液 氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R) 脑微血管内皮细胞(bmecs) 血管新生因子
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补阳还五汤含药血浆和血清对缺氧损伤大鼠BMECs纤溶系统和黏附分子表达影响及与体内实验的比较研究 被引量:6
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作者 罗银河 葛金文 +4 位作者 刘林 王国佐 易亚乔 廖君 石咏梅 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期3241-3246,共6页
目的:比较补阳还五汤含药血清和含药血浆对缺氧培养的大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)纤溶系统和黏附分子的表达与体内实验真实值的接近程度,为半体内实验选择含药血浆还是含药血清提供参考依据。方法:用颈内动脉线栓法建立局灶性脑缺血模... 目的:比较补阳还五汤含药血清和含药血浆对缺氧培养的大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)纤溶系统和黏附分子的表达与体内实验真实值的接近程度,为半体内实验选择含药血浆还是含药血清提供参考依据。方法:用颈内动脉线栓法建立局灶性脑缺血模型,缺氧培养箱孵育BMECs,采用ELISA法测定PAI-1、t PA的表达,RT-PCR法检测ICAM-1、VCAM-1 mRNA的含量,Western Blot法测定ICAM-1、VCAM-1蛋白的含量。结果:补阳还五汤含药血浆较含药血清更显著降低缺氧损伤大鼠BMECs PAI-1、增强t PA水平,含药血浆和含药血清均能明显降低ICAM-1、VCAM-1、ICAM-1 mRNA及VCAM-1 mRNA含量,与空白血浆、空白血清比较,差异显著(P<0.05);半体内实验的含药血浆与体内实验真实值各指标相关系数均高于含药血清。结论:含药血浆比含药血清更接近体内真实情况,在进行半体内实验研究中药复方对纤溶系统和黏附分子蛋白及mRNA表达的影响时,特别是研究纤溶系统PAI-1和t PA指标的表达时,建议优先选择血浆药理学方法。 展开更多
关键词 补阳还五汤 缺氧 脑微血管内皮细胞 血清药理学 血浆药理学 体内实验
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复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠BMECs的影响及microRNA-503的调控机制研究 被引量:1
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作者 沈俊逸 方邦江 +4 位作者 赵智明 刘春丽 壮雨雯 徐文俊 蔡辉 《浙江中医杂志》 2018年第10期718-721,共4页
目的:在细胞水平观察复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织脑微血管内皮细胞(BMECs)的影响,从microRNA-503调控途径探索复元醒脑汤治疗糖尿病脑梗死的具体作用靶点。方法:20只健康雄性SD大鼠,按照随机数字表法分为2组,每组10只,适应... 目的:在细胞水平观察复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织脑微血管内皮细胞(BMECs)的影响,从microRNA-503调控途径探索复元醒脑汤治疗糖尿病脑梗死的具体作用靶点。方法:20只健康雄性SD大鼠,按照随机数字表法分为2组,每组10只,适应性饲养3天后,一组常规饲养,另一组常规饲养的基础上以复元醒脑汤10.4g/kg/d灌胃,连续3d,于末次给药1h后腹主动脉采血,制备空白血清和中药血清。对糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织进行BMEC的分离培养,分别加入空白血清、中药血清,转染microR-503抑制剂,中药血清混合转染microR-503抑制剂,检测不同处理组含药血清对BMECs迁移、成管能力的影响,在细胞水平上利用实时荧光定量PCR检测脑组织microRNA-503,CCNE1、CDC25A的基因表达水平。结果:与空白血清组相比,复元醒脑汤中药血清以及microRNA-503抑制剂组都可以明显增强BMECs的迁移能力(P<0.01),联合用药效果最好。与空白血清组相比,microRNA-503抑制剂和复元醒脑汤含药血清都可以明显上调CCNE1和CDC25A的基因表达(P<0.05),从而抑制了microRNA-503的表达(P<0.05)。miR-503抑制剂和复元醒脑汤中药血清组都对小管形成有一定的促进作用;联合使用microRNA-503抑制剂和复元醒脑汤中药血清也能明显促进小管的形成。结论:复元醒脑汤通过促进CCNE1和CDC25A的表达,从而抑制microRNA-503的表达水平,间接提高了BMEC的成管和迁移能力,从而使得受损血管内皮修复功能得到改善,进而促进局部血管的再生和侧支循环的建立。 展开更多
关键词 复元醒脑汤 糖尿病脑梗死 bmecs microRNA-503大鼠
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复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠BMECs的影响及miRNA-320的调控机制研究 被引量:2
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作者 沈俊逸 赵智明 +3 位作者 刘春丽 壮雨雯 徐文俊 蔡辉 《天津中医药》 CAS 2019年第1期58-62,共5页
[目的]在细胞水平观察复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织脑微血管内皮细胞(BMECs)的影响,从微小RNA-320(miRNA-320)调控途径探讨复元醒脑汤治疗糖尿病脑梗死的作用机制。[方法]进行复元醒脑汤大鼠灌胃,制备含药血清和对照血清。... [目的]在细胞水平观察复元醒脑汤对糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织脑微血管内皮细胞(BMECs)的影响,从微小RNA-320(miRNA-320)调控途径探讨复元醒脑汤治疗糖尿病脑梗死的作用机制。[方法]进行复元醒脑汤大鼠灌胃,制备含药血清和对照血清。对糖尿病脑梗死大鼠的缺血脑组织进行BMECs的分离培养,分别加入对照血清、含药血清、转染miRNA-320 inhibitor、中药血清混合转染miRNA-320 inhibitor;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测各组BMECs的miRNA-320、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和胰岛素样生长因子受体-1(IGF-1R)基因表达水平,通过甲臜化合物(MTS)检测复元醒脑汤对BMECs增殖能力的影响;通过Transwell实验观察复元醒脑汤对BMECs迁移能力的影响;观察复元醒脑汤对BMECs小管形成能力的影响。[结果]与对照血清组相比,含药血清组、miRNA-320 inhibitor组、含药血清混合miRNA-320 inhibitor组均能使BMECs的增殖、迁移以及小管形成能力显著提高(P<0.01),同时显著降低了miRNA-320的表达水平,显著提高了IGF-1的表达水平。[结论]复元醒脑汤能够抑制糖尿病脑梗死大鼠缺血脑组织中miRNA-320表达,增加IGF-1的表达,进而促进BMECs的增殖、迁移及成管能力。 展开更多
关键词 复元醒脑汤 糖尿病 脑梗死 bmecs miRNA-320 IGF-1
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手足口病患儿外周血BMEC、RANTES、 MCP-1表达水平及临床意义 被引量:1
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作者 陈小妮 《内蒙古医学杂志》 2021年第6期737-738,741,共3页
目的分析手足口病(HFMD)患儿外周血脑微血管内皮细胞(BMEC)、正常T细胞表达分泌的活性调节蛋白(RANTES)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达水平及临床意义。方法选取2018年2月至2019年11月我院收治的76例HFMD患儿,依据病情严重程度分为轻... 目的分析手足口病(HFMD)患儿外周血脑微血管内皮细胞(BMEC)、正常T细胞表达分泌的活性调节蛋白(RANTES)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达水平及临床意义。方法选取2018年2月至2019年11月我院收治的76例HFMD患儿,依据病情严重程度分为轻症组(37例轻症患儿)、重症组(39例重症患儿),并选取正常小儿35例作为对照组,比较三组外周血BMEC、RANTES、MCP-1表达水平,重症组合并脑炎(合并E者)、合并脑炎与肺水肿(合并E+P者)患儿上述因子表达水平,HFMD患儿中肠道病毒71型(EV71)核酸阳性、阴性患儿上述因子表达水平。结果重症组外周血BMEC、RANTES、MCP-1表达水平显著高于轻症组、对照组,轻症组上述因子表达水平高于对照组(P<0.05);合并E+P者外周血BMEC、RANTES、MCP-1表达水平高于合并E者(P<0.05);EV71核酸阳性患儿外周血BMEC、RANTES、MCP-1表达水平高于EV71核酸阴性患儿(P<0.05)。结论外周血BMEC、RANTES、MCP-1参与HFMD疾病发生发展,检测外周血BMEC、RANTES、MCP-1对监测患儿疾病进展有重要意义。 展开更多
关键词 手足口病 bmec RANTES MCP-1
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金黄色葡萄球菌和大肠杆菌感染对BMEC炎性因子mRNA表达的影响 被引量:3
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作者 赵凌 潘阳阳 +5 位作者 何翃闳 李秦 樊江峰 王萌 崔燕 余四九 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期910-917,共8页
为了探讨金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)在不同时间点对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)相关炎性因子转录水平的调节作用。本试验通过体外培养BMECs并对其进行免... 为了探讨金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)在不同时间点对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)相关炎性因子转录水平的调节作用。本试验通过体外培养BMECs并对其进行免疫细胞化学方法鉴定。选取纯化后的原代BMECs,分别加入活菌比(MOI)为100∶1的最佳浓度的金黄色葡萄球菌或大肠杆菌对细胞进行感染,分别在感染后第0、3、6、9、12小时采样,采用qRT-PCR法检测IL1R1、IL-1β及TNF-α基因mRNA的表达情况。结果显示,在添加1×102CFU/m L金黄色葡萄球菌作用至第6小时IL1R1基因相对表达量显著高于其他时间点(P〈0.5);在添加1×104CFU/m L金黄色葡萄球菌作用至第9小时,IL-1β基因相对表达量显著高于其他时间点(P〈0.5);在添加1×103CFU/m L金黄色葡萄球菌作用至第12小时,TNF-α基因相对表达量显著高于其他时间点(P〈0.5)。在添加1×101CFU/m L大肠杆菌作用至第6小时,IL1R1基因相对表达量显著高于其他时间点(P〈0.5);在添加1×103CFU/m L大肠杆菌作用至第9小时,IL-1β基因相对表达量显著高于其他时间点(P〈0.5);在添加1×104CFU/m L大肠杆菌作用至第12小时,TNF-α基因相对表达量显著高于其他时间点(P〈0.5)。本试验结果表明,使用最佳浓度金黄色葡萄球菌或大肠杆菌作用于BMECs时,在最佳感染时间点可显著上调IL1R1、IL-1β及TNF-α基因mRNA的表达量。IL1R1、IL-1β及TNF-αmRNA表达量在临床上可作为创伤后炎症反应的敏感指标,能评价炎症反应的严重程度,对乳腺炎的病程诊断具有重要意义。本试验结果为进一步研究细菌感染引起乳腺炎的致病机理提供了理论依据。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 奶牛 乳腺上皮细胞 实时荧光定量PCR
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无血清条件下UC-MSCs和BMECs共培养对IGF-Ⅰ表达的影响 被引量:1
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作者 赵艳坤 邵伟 +1 位作者 雒诚龙 余雄 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第2期411-416,共6页
试验旨在探讨无血清条件下脐带间充质干细胞(UC-MSCs)和奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)共培养对类胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)表达的影响,将UC-MSCs和BMECs按1∶2直接共培养,对比单纯培养的两种细胞,48h时利用ELISA法检测各组上清IGF-Ⅰ浓度... 试验旨在探讨无血清条件下脐带间充质干细胞(UC-MSCs)和奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)共培养对类胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)表达的影响,将UC-MSCs和BMECs按1∶2直接共培养,对比单纯培养的两种细胞,48h时利用ELISA法检测各组上清IGF-Ⅰ浓度水平,再利用Transwell小室将两种细胞分离培养,实时荧光定量PCR检测各组细胞IGF-ⅠR、IGF-ⅠmRNA的表达。结果显示,共培养中IGF-Ⅰ浓度显著高于UC-MSCs组(P<0.05),极显著高于BMECs组(P<0.01);UC-MSCs/BMECs、BMECs/UC-MSCs组IGF-ⅠmRNA表达值均极显著高于单纯培养组(P<0.01),BMECs/UC-MSCs组显著高于UC-MSCs/BMECs组(P<0.05);UC-MSCs/BMECs、BMECs/UC-MSCs组IGF-ⅠR mRNA表达值显著或极显著高于单纯培养组(P<0.05;P<0.01),BMECs/UC-MSCs组较UCMSCs/BMECs组差异显著(P<0.05)。综上,体外无血清培养条件下,UC-MSCs和BMECs共培养可显著提高IGF-ⅠR及IGF-ⅠmRNA表达,IGF-Ⅰ浓度水平和IGF-ⅠR mRNA的表达具有一致性,IGF-Ⅰ主要存在于UCMSCs中。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 奶牛乳腺上皮细胞 无血清 共培养 类胰岛素样生长因子-Ⅰ 实时荧光定量PCR
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S100A9-RAGE/TLR4信号轴调控非小细胞肺癌脑转移和内皮黏附的作用
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作者 徐益多 周彦琪 +1 位作者 王健 龙江 《昆明医科大学学报》 2025年第9期23-36,共14页
目的探究非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)来源S100A9调控侵袭转移及激活转移土壤脑微血管内皮的机制。方法使用R语言提取TCGA数据库RNAseq数据,采用配对样本T检验,分析S100A9在NSCLC组织和正常肺组织中的表达,用ggplot... 目的探究非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)来源S100A9调控侵袭转移及激活转移土壤脑微血管内皮的机制。方法使用R语言提取TCGA数据库RNAseq数据,采用配对样本T检验,分析S100A9在NSCLC组织和正常肺组织中的表达,用ggplot2包进行可视化;用survival包进行比例风险假设检验和拟合生存回归,比较S100A9高/低表达组之间的预后情况,用survminer包和ggplot2包进行可视化。RTqPCR、Western Blot检测S100A9在NSCLC细胞系(A549、NCI-H1299)和正常肺上皮细胞(BEAS-2B)中的表达差异,利用A549细胞与人脑微血管内皮细胞(hCMEC/D3)共培养构建血瘤屏障BTB模型,并构建siS100A9敲低的A549细胞株,划痕愈合、Transwell实验检测不同处理组A549细胞的迁移、侵袭能力变化,CCK-8、流式细胞术检测不同浓度S100A9处理HCMEC/D3细胞后的增殖活性和对细胞周期的影响,RT-qPCR、Western Blot检测不同浓度S100A9处理hCMEC/D3细胞后对土壤传感器受体RAGE、TLR4和肿瘤跨内皮迁移相关黏附分子ICAM-1、VCAM-1、ALCAM的表达变化,并通过CCK-8、RT-qPCR、Western Blot检测FPS-ZM1、TAK242预阻滞RAGE、TLR4通路后,对不同浓度S100A9刺激下hCMEC/D3细胞的增殖活性和黏附分子表达的回复情况。结果TCGA数据库RNAseq数据挖掘与分析显示,肺癌组织样本中S100A9表达显著高于正常肺组织样本(P=0.03),Kaplan-Meier生存曲线图显示,S100A9高表达组的生存概率低于S100A9低表达组,提示S100A9高表达与患者更差的总体生存期显著相关[HR=1.46(1.10~1.95),P=0.01]。在细胞实验中,S100A9在NSCLC细胞系中高表达(P<0.05),敲低S100A9能抑制A549细胞的迁移和侵袭(P<0.05),敲低组在6、12、24、36、48 h的平均迁移抑制率为80.61%、75.70%、73.78%、69.54%、56.96%,平均侵袭抑制率为57.38%(48 h),同时S100A9靶向正调控BTB模型中hCMEC/D3细胞的增殖活性和细胞周期(P<0.05)。在机制上,S100A9通过土壤传感器受体RAGE、TLR4促进A549与hCMEC/D3交互通讯,上调hCMEC/D3细胞的ICAM-1、VCAM-1、ALCAM表达(P<0.05),回复实验证实S100A9-RAGE/TLR4调控轴能够影响肺癌脑转移的内皮黏附过程(P<0.05)。结论S100A9-RAGE/TLR4与肺癌脑转移进展有关,敲低S100A9能抑制肺癌细胞的侵袭转移,阻滞下游土壤传感器受体RAGE、TLR4能减弱脑微血管内皮的增殖生长,并抑制肺癌细胞与脑微血管内皮之间形成预转移黏附微环境。 展开更多
关键词 S100A9 非小细胞肺癌 脑转移 脑微血管内皮细胞bmecs
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原代家兔脑微血管内皮细胞的体外提取、培养及鉴定
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作者 李柏霖 池茗 +1 位作者 张帆 唐元瑜 《神经解剖学杂志》 北大核心 2025年第2期201-205,共5页
目的:建立一种简单高效的原代家兔脑微血管内皮细胞(BMECs)体外提取、培养及鉴定方法。方法:将3周龄家兔脑皮质经剪碎、过筛及Ⅱ型胶原酶消化后获得纯净的脑微血管段并对其进行培养。结果:培养的目的细胞呈典型的“鹅卵石样”排列生长;... 目的:建立一种简单高效的原代家兔脑微血管内皮细胞(BMECs)体外提取、培养及鉴定方法。方法:将3周龄家兔脑皮质经剪碎、过筛及Ⅱ型胶原酶消化后获得纯净的脑微血管段并对其进行培养。结果:培养的目的细胞呈典型的“鹅卵石样”排列生长;免疫细胞化学染色法检测血管性血友病性因子(vWF),细胞质呈现为棕红色,表达为阳性。结论:物理过筛法结合化学酶消化法可简单高效地培养出活性强、纯度高的原代家兔BMECs。 展开更多
关键词 脑微血管内皮细胞 原代培养 鉴定 兔瘟 家兔
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表没食子儿茶素没食子酸酯对脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤和凋亡的干预作用 被引量:2
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作者 宝华 户春丽 +2 位作者 安彦昊 张春华 马燕芬 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2122-2131,共10页
【目的】探究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)炎症和凋亡的影响及其潜在的保护机制。【方法】利用LPS诱导BMECs构建细胞炎症模型。通过CCK-8检测细胞活力,筛选EGCG最佳浓度。将BMECs分为对... 【目的】探究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)炎症和凋亡的影响及其潜在的保护机制。【方法】利用LPS诱导BMECs构建细胞炎症模型。通过CCK-8检测细胞活力,筛选EGCG最佳浓度。将BMECs分为对照组、LPS处理组和EGCG+LPS共处理组,利用实时荧光定量PCR检测细胞中炎性因子、凋亡因子以及抗氧化相关基因mRNA表达水平;利用试剂盒检测BMECs的线粒体膜电位和活性氧(ROS)水平;通过流式细胞术检测BMECs凋亡情况。【结果】使用LPS处理BMECs后,与0 h相比,各时间段细胞中炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、IL-8和IL-1β基因mRNA表达量均极显著或显著升高(P<0.01;P<0.05),成功构建BMECs细胞炎性损伤模型。CCK-8检测细胞活力结果显示,EGCG最佳作用浓度为5μmol/L。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,LPS诱导的BMECs中IL-6、IL-8、丙二醛(MDA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)基因mRNA表达量均极显著升高(P<0.01),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、B细胞淋巴瘤蛋白-2(Bcl-2)基因mRNA表达量极显著降低(P<0.01);与LPS组相比,EGCG+LPS组细胞中IL-6、IL-8、IL-1β、MDA、Bax和Caspase-3基因mRNA表达量均显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01),GSH-Px、超氧化物歧化酶(SOD)、Bcl-2基因mRNA表达量均显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01)。线粒体膜电位检测结果显示,与对照组相比,LPS组BMECs红色荧光明显减弱,绿色荧光有所增强,而EGCG和LPS共孵育后则对BMECs红色荧光没有明显影响,绿色荧光相对减弱;ROS水平检测结果显示,与对照组相比,LPS组细胞绿色荧光明显增强,而EGCG和LPS共孵育后,细胞绿色荧光有所减弱。流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,LPS处理后死亡细胞和凋亡细胞明显增多,细胞凋亡率极显著升高(P<0.01),而EGCG和LPS共孵育后凋亡细胞则明显减少,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。【结论】EGCG可以通过抑制LPS诱导BMECs中ROS释放和缓解线粒体损伤等综合作用,缓解炎性反应并抑制细胞凋亡,研究结果为EGCG预防和治疗奶牛乳腺炎提供理论基础。 展开更多
关键词 奶牛乳腺上皮细胞(bmecs) 表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG) 脂多糖(LPS) 炎性损伤 细胞凋亡
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利用CRISPR/Cas9技术制备BLG基因敲除牛乳腺上皮细胞系 被引量:2
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作者 丁修虎 林志平 +8 位作者 赵芳 陈坤琳 仲跻峰 张燕 高运东 李惠侠 王慧利 张建丽 丁强 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4475-4488,共14页
旨在利用CRISPR/Cas9系统构建BLG基因敲除牛乳腺上皮细胞系(bovine mammary epithelial cells,bMECs),同时检测BLG基因敲除后对细胞的影响。本研究利用体外切割试验筛选获得靶向牛的BLG基因的第一外显子序列的3条sgRNA,与CRISPR/Cas9表... 旨在利用CRISPR/Cas9系统构建BLG基因敲除牛乳腺上皮细胞系(bovine mammary epithelial cells,bMECs),同时检测BLG基因敲除后对细胞的影响。本研究利用体外切割试验筛选获得靶向牛的BLG基因的第一外显子序列的3条sgRNA,与CRISPR/Cas9表达载体电转染入bMECs,利用浓度为1.8μg·mL^(-1)嘌呤霉素和6μg·mL^(-1)稻瘟菌素双药筛和PCR分析鉴定获得BLG基因编辑的单克隆细胞株;利用Western blot(WB)验证细胞BLG表达;绘制生长曲线和CCK-8试验检测BLG基因敲除对bMECs细胞增殖的影响;同时根据sgRNA序列,对基因组上潜在脱靶位点进行PCR测序分析。经筛选和PCR序列分析,共筛选获得了9株BLG基因编辑细胞株,其编辑效率为90%(9/10),其中4株细胞株BLG基因大片段删除。序列分析结果显示,单克隆细胞株编辑位点呈现片段插入缺失和碱基替换等多种编辑类型,WB结果显示敲除细胞株BLG蛋白表达显著降低,且细胞生长曲线和CCK-8检测结果表明BLG基因敲除的细胞生长速度加快。本研究利用CRISPR/Cas9技术成果构建了牛乳腺上皮细胞BLG基因高效敲除方法,BLG基因敲除后可显著影响牛乳腺上皮细胞的增殖,为探究BLG敲除牛在乳腺上皮细胞水平探究其功能机制提供细胞模型。 展开更多
关键词 BLG基因 牛乳腺上皮细胞系 CRISPR/Cas9 基因编辑
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姜黄素通过PINK1/Parkin通路减轻OGD/R诱导的脑微血管内皮细胞损伤
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作者 覃玉群 赵建军 +3 位作者 王辉 温李滔 胡亚妮 付饶 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期593-600,共8页
目的:探究姜黄素激活PINK1/Parkin通路增强线粒体自噬,改善氧糖剥夺再灌注(OGD/R)引起内皮细胞损伤的作用机制。方法:建立小鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的OGD/R损伤模型,用不同浓度姜黄素处理内皮细胞,使用免疫荧光和透射电镜评估姜黄素... 目的:探究姜黄素激活PINK1/Parkin通路增强线粒体自噬,改善氧糖剥夺再灌注(OGD/R)引起内皮细胞损伤的作用机制。方法:建立小鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的OGD/R损伤模型,用不同浓度姜黄素处理内皮细胞,使用免疫荧光和透射电镜评估姜黄素对BMECs线粒体自噬的影响。细胞计数试剂盒8(CCK-8)、乳酸脱氢酶释放检测和跨内皮电阻值检测用于评估细胞增殖、损伤和屏障完整性。Western Blot检测姜黄素对PINK1/Parkin通路蛋白(LC-3 II/I、PINK1、Parkin及p62)表达的影响,采用Mdivi-1同时处理细胞,进一步确认线粒体自噬在姜黄素减轻OGD/R损伤中的作用。结果:姜黄素处理显著促进了线粒体自噬,并显著增加LC-3 II/I、PINK1和Parkin蛋白的表达(P<0.001),显著减少了p62蛋白的表达(P<0.001)。在OGD/R模型中,姜黄素显著提高了细胞增殖率(P<0.001),显著降低了乳酸脱氢酶释放(P<0.001),并显著改善了细胞屏障的电阻值(P<0.001)。而线粒体自噬抑制剂Mdivi-1可以逆转姜黄素的这些保护效果。结论:姜黄素通过激活PINK1/Parkin通路增强线粒体自噬,有效缓解BMECs在OGD/R条件下的细胞损伤。 展开更多
关键词 姜黄素 脑微血管内皮细胞 氧糖剥夺再灌注 线粒体自噬 PINK1/Parkin通路
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白藜芦醇激活过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α缓解脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤和细胞凋亡 被引量:1
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作者 马学虎 孙奕烁 +3 位作者 冀思同 曹佩佩 户春丽 马燕芬 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期5970-5980,共11页
为揭示白藜芦醇(RES)是否通过介导过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α(PGC-1α)起到缓解奶牛乳腺上皮细胞(bMECs)炎性反应,本试验对PGC-lα进行干扰(si-PGC-lα),采用单因素随机试验设计方法,设置si-NC+LPS组(含10μg/mL LPS... 为揭示白藜芦醇(RES)是否通过介导过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α(PGC-1α)起到缓解奶牛乳腺上皮细胞(bMECs)炎性反应,本试验对PGC-lα进行干扰(si-PGC-lα),采用单因素随机试验设计方法,设置si-NC+LPS组(含10μg/mL LPS配制的饥饿培养基)、si-PGC-lα+LPS组(si-PGC-lα干扰片段+含10μg/mL LPS配制的饥饿培养基)、si-NC+RES+LPS组(含10μg/mL LPS以及15μmol/L RES共同配制的饥饿培养基)、si-PGC-lα+RES+LPS组(si-PGC-lα干扰片段+10μg/mL LPS以及15μmol/L RES共同配制的饥饿培养基)。结果发现:si-PGC-lα后加入LPS可显著或极显著上调炎性因子白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)的mRNA相对表达水平和含量(P<0.05或P<0.01),极显著上调氧化因子丙二醛(MDA)的mRNA相对表达水平(P<0.01),显著或极显著上调促凋亡因子B-细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(BAX)的mRNA相对表达水平和bMECs凋亡率(P<0.05或P<0.01),极显著降低抗氧化基因谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的mRNA相对表达水平(P<0.01);而RES可逆转这一反应。当si-PGC-lα后再用RES处理则无法缓解LPS诱导的bMECs产生的氧化应激、炎性反应和细胞凋亡,说明RES是通过激活PGC-1α起到缓解LPS诱导的bMECs炎性损伤和细胞凋亡。由此可见,外源添加RES可通过激活PGC-1α起到缓解LPS诱导的bMECs线粒体损伤、氧化应激、炎性反应并抑制细胞凋亡。 展开更多
关键词 白藜芦醇 过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α 奶牛乳腺上皮细胞 氧化应激 炎性损伤
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丹红注射液对缺氧损伤脑微血管内皮细胞的保护机制 被引量:20
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作者 周鹏 何昱 +5 位作者 杨洁红 张宇燕 周惠芬 赵涛 付巍 万海同 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第24期4844-4848,共5页
为研究丹红注射液对缺氧损伤脑微血管内皮细胞(r BMECs)的保护机制。该实验采用原代培养乳鼠脑微血管内皮细胞并进行Ⅷ因子鉴定,建立缺氧4 h损伤模型的同时,丹红注射液(25,50,100 m L·L-1)作用于r BMECs,生化法检测细胞中超氧化物... 为研究丹红注射液对缺氧损伤脑微血管内皮细胞(r BMECs)的保护机制。该实验采用原代培养乳鼠脑微血管内皮细胞并进行Ⅷ因子鉴定,建立缺氧4 h损伤模型的同时,丹红注射液(25,50,100 m L·L-1)作用于r BMECs,生化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,RT-PCR法检测细胞MMP-9,ICAM-1,P53 mRNA表达水平,透射电镜观察细胞超显微结构变化。结果表明缺氧使原代培养的r BMECs受到明显损伤,与模型组比较,丹红注射液(50,100 m L·L-1)可显著对抗缺氧造成的损伤,增强SOD活性,降低MDA水平,明显下调MMP-9,ICAM-1,P53 mRNA的表达,丹红注射液100 m L·L-1能够保护细胞正常的形态、显微结构、维持细胞间紧密连接,抑制缺氧诱导的细胞凋亡。从结果中可以得出丹红注射液对缺氧损伤r BMECs具有明显的保护作用,其机制与增强细胞抗氧化能力,抑制炎症反应及细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 丹红注射液 乳鼠脑微血管内皮细胞(r bmecs) 缺氧 抗氧化 炎症 细胞凋亡
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HIV/SIV入侵血脑屏障的分子机制探讨 被引量:2
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作者 黄丹 丛喆 +3 位作者 徐珮 金光 高锡强 魏强 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第11期81-85,共5页
HIV/SIV侵入中枢神经系统(CNS),造成严重的神经病理学改变,引发艾滋病相关的神经认知性障碍(HAND)。尽管有效地使用了高效抗逆转录病毒疗法,HAND在慢性感染者中的发病率仍然很高。通常认为,HIV/SIV在感染早期即可通过感染脑毛细血管内... HIV/SIV侵入中枢神经系统(CNS),造成严重的神经病理学改变,引发艾滋病相关的神经认知性障碍(HAND)。尽管有效地使用了高效抗逆转录病毒疗法,HAND在慢性感染者中的发病率仍然很高。通常认为,HIV/SIV在感染早期即可通过感染脑毛细血管内皮细胞或破坏内皮细胞间的紧密连接穿透血脑屏障进入CNS,但其机制尚不明确。目前有几种比较公认的假说,包括病毒直接入侵假说、单核/巨噬细胞入侵假说、T细胞诱导假说和液相入胞假说。本文将就HIV/SIV入侵血脑屏障的分子机制作一综述。 展开更多
关键词 bmecs 血脑屏障 趋化因子受体
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神经血管单元的体外神经模型构建 被引量:4
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作者 王翀 顾雯 +3 位作者 赵康峰 张宏伟 李毅民 白雪涛 《毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期448-450,共3页
目的建立一种可以模拟血脑屏障的体外细胞模型。方法体外分离培养3种细胞(神经胶质细胞,血管内皮细胞和海马神经元),对培养的细胞进行细胞形态及细胞学鉴定,最终建立成包含此3种细胞的三维模型即神经血管单元(NVU)。结果本试验成功培养... 目的建立一种可以模拟血脑屏障的体外细胞模型。方法体外分离培养3种细胞(神经胶质细胞,血管内皮细胞和海马神经元),对培养的细胞进行细胞形态及细胞学鉴定,最终建立成包含此3种细胞的三维模型即神经血管单元(NVU)。结果本试验成功培养了了体外神经血管单元并进行相关的细胞学鉴定,同时对模型的完整性和通透性进行了验证。结论此模型的成功建立不仅可以用于替代体内血脑屏障(BBB),同时对于药物研发及化学物神经毒性的筛选及研究具有重要的意义。 展开更多
关键词 神经血管单元(NVU) 神经胶质细胞 微血管内皮细胞(bmecs) 海马神经元 免疫荧光试验 4h渗漏试验 跨内皮电阻试验(TEER)
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