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从HFRS患者的PBMC建立BLCL及其意义
1
作者 潘蕾 白雪帆 +2 位作者 黄长形 李光玉 陈伟红 《中国病毒学》 CSCD 2004年第5期439-443,共5页
体外研究汉滩病毒(Hantaanvirus,HTNV)S基因及其5’端、3’端在BLCL(EBV-transformedBlymphoblastoidcellline,BLCL)内稳定表达的意义,为核蛋白T细胞表位的研究奠定基础。本研究从肾综合征出血热(HFRS)患者的外周血单个核细胞(PBMC)建立... 体外研究汉滩病毒(Hantaanvirus,HTNV)S基因及其5’端、3’端在BLCL(EBV-transformedBlymphoblastoidcellline,BLCL)内稳定表达的意义,为核蛋白T细胞表位的研究奠定基础。本研究从肾综合征出血热(HFRS)患者的外周血单个核细胞(PBMC)建立与HTNV特异性CTL同源的患者自身的EB病毒转化的B淋巴母细胞系,将含有不同HTNVS基因片段的重组真核表达载体转染入BLCL,获得长期稳定表达,作为靶细胞系,为下一步进行CTL杀伤试验提供靶细胞系。设计4条引物,用PCR方法从PBV220-S22原核质粒中扩增出S基因全读码框(37-1326bp)及S基因5’端(37-501bp),S基因3’端(502-1326bp),用TA克隆将其克隆入pcDNA3.1/V5-His-TOPO载体中,成功构建pcDNA3.1-S及pcDNA3.1-S-N、pcDNA3.1-S-C真核表达载体,并通过脂质体转染至BLCL细胞中,进行了稳定表达。间接免疫荧光成功检测到pcDNA3.1-S及pcDNA3.1-S-N、pcDNA3.1-S-C在BLCL细胞中的表达。pcDNA3.1-S及pcDNA3.1-S-N、pcDNA3.1-S-C真核表达载体有较高的转染效率,目的基因能在宿主细胞中长期稳定表达,有利于研究HTNV-S基因在T细胞表位研究中的意义。建立的特异性CTL克隆对表达完整NP、NP羧基和氨基端肽段的靶细胞均有比较明显的杀伤效应,平均杀伤率分别为50.2%、39.0%和25.4%。 展开更多
关键词 汉滩病毒 S基因 核蛋白 blcl
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HFRS患者BLCL的建立及HTNVS基因片段在其内获得长期稳定的表达
2
作者 潘蕾 白雪帆 +1 位作者 黄长形 李光玉 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期326-326,共1页
虽然对汉坦病毒核蛋白(HV NP)氨基端蛋白的原核表达产物的抗原性及免疫原性已进行了许多研究,并已用于出血热的诊断,但该抗原表位的精确一级结构及其基因定位迄今尚未完全明确。而研究T细胞表位的前提是首先要构造含病原体抗原基因片段... 虽然对汉坦病毒核蛋白(HV NP)氨基端蛋白的原核表达产物的抗原性及免疫原性已进行了许多研究,并已用于出血热的诊断,但该抗原表位的精确一级结构及其基因定位迄今尚未完全明确。而研究T细胞表位的前提是首先要构造含病原体抗原基因片段的表达载体质粒。 展开更多
关键词 HFRS患者 blcl HTNVS基因 汉坦病毒核蛋白
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河套地区边界层辐合线形成及其对流触发作用
3
作者 孙永刚 孟雪峰 +4 位作者 计燕霞 崔曲馨 刘珂 云静波 姜雨蒙 《气象》 北大核心 2025年第1期85-96,共12页
利用加密小球探空、野外地面加密观测站、ERA5再分析资料、临河新一代天气雷达等资料,对2022年7—8月内蒙古黄河河套地区由河套灌区与库布奇沙漠地表差异形成的边界层辐合线(BLCL)及其在对流触发中的作用进行了详细分析。结果表明:河套B... 利用加密小球探空、野外地面加密观测站、ERA5再分析资料、临河新一代天气雷达等资料,对2022年7—8月内蒙古黄河河套地区由河套灌区与库布奇沙漠地表差异形成的边界层辐合线(BLCL)及其在对流触发中的作用进行了详细分析。结果表明:河套BLCL是由地表差异、边界层大气环流、复杂地形共同影响所形成,主要发生在河套灌区东南部的库布奇沙漠地区,长度在100~200 km,为浅薄系统,垂直厚度约为1000~1100 m。BLCL日变化明显,在12:00—17:00为高发时段,占80%。7—8月BLCL形成概率高达60%,且有39%的BLCL会触发对流。BLCL形成的预报指标为:河套灌区杭锦后旗较库布奇沙漠哈百来更的2 m气温低2.5℃以上、露点温度高6℃以上、相对湿度高20%以上;河套套内库布奇沙漠和毛乌素沙地区域为持续强劲的偏南风,地面10 m风速大值中心大于4 m·s-1;海平面气压场西低东高,黄河“几”字弯为等压线密集带,气压梯度达3~4 hPa·100 km-1。BLCL的形成对对流触发具有重要意义,表现为对流触发、加强、组织等作用,在不同的环境条件和天气系统叠加配置下会触发局地对流、有组织强对流,导致河套地区暴雨等天气。河套BLCL在这一特定地区的生成和对流触发作用,与河套地区降水自西向东急剧增多的分布特征关系密切。 展开更多
关键词 河套地区 边界层辐合线 地表差异 复杂地形 对流触发 暴雨
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HLA-DRB1 ＊0803与HLA-DRB1 ＊0901等位特异性HBcAg表位肽的筛查与鉴定 被引量：2
4
作者 李辉文 何韦韦 +3 位作者 谭文婷 王莉 陈晓玲 邓国宏 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期833-838,共6页
目的鉴定HLA-DRB1*0803与HLA-DRB1*0901等位特异性HBV表位,进一步认识HLA-DR不同等位限制性表位的差异。方法 BLCL细胞表面高表达HLA-DR分子,从HBc Ag肽池负载的特征HLA-DR等位的BLCL细胞表面上收集相关多肽,多肽经过过滤、脱盐、浓缩... 目的鉴定HLA-DRB1*0803与HLA-DRB1*0901等位特异性HBV表位,进一步认识HLA-DR不同等位限制性表位的差异。方法 BLCL细胞表面高表达HLA-DR分子,从HBc Ag肽池负载的特征HLA-DR等位的BLCL细胞表面上收集相关多肽,多肽经过过滤、脱盐、浓缩等处理步骤后对其进行液质联用质谱分析(LC-MS),再结合生物信息学预测工具Net MHCⅡpan 3.0 Server初步确定其潜在候选表位。结果筛选出HLA-DRB1*0803限制性表位HBc17-31、HBc22-36、HBc27-41、HBc82-96、HBc87-101、HBc92-106、HBc117-131、HBc122-136共8条,HLA-DRB1*0901限制性表位HBc2-16、HBc7-21、HBc12-26、HBc27-41、HBc82-96、HBc87-101、HBc122-136共7条,其中相同的有4条。结论发现了HBc7-21、HBc22-36、HBc27-41、HBc82-96、HBc87-101、HBc92-106新的HLA-Ⅱ类分子表位,不同的HLA-DR等位限制的HBc Ag表位肽存在差异。 展开更多
关键词 HLA-DRB1＊0803 HLA-DRB1＊0901 blcl HBCAG 质谱
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EBV转化慢性乙型肝炎患者B淋巴母细胞系的建立 被引量：6
5
作者 张明霞 刁志宏 +2 位作者 何海棠 侯金林 骆抗先 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期330-332,共3页
目的体外建立慢性乙型肝炎患者永生化的B淋巴母细胞系(LCL)。方法用EB病毒感染自慢性乙型肝炎患者外周血中分离的单个核细胞(PBMC),加入CpGDNA免疫调节基序以诱导B淋巴细胞增殖,环胞菌素A(CysA)抑制T淋巴细胞的活性。光学显微镜下观察LC... 目的体外建立慢性乙型肝炎患者永生化的B淋巴母细胞系(LCL)。方法用EB病毒感染自慢性乙型肝炎患者外周血中分离的单个核细胞(PBMC),加入CpGDNA免疫调节基序以诱导B淋巴细胞增殖,环胞菌素A(CysA)抑制T淋巴细胞的活性。光学显微镜下观察LCL的形态特征,利用流式细胞术分析LCL细胞膜表面分子CD19和CD23的表达水平。结果46例患者PBMC经EBV感染4周后,42例转化成永生化B淋巴母细胞系,成功率为91.3%。转化后的B淋巴母细胞体积增大积聚成团,可进一步分裂增殖并长期传代培养。结论转化后的LCL保持了成熟B淋巴细胞的生物学特性,可作为体外研究HBV特异性免疫应答的刺激细胞和靶细胞。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 EB病毒 永生化 B淋巴母细胞系
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