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人RACK1蛋白在HEK-293T和BL21细胞中的表达及COS7细胞的定位 被引量：5
1
作者 乔正 赵健 +4 位作者 潘林鑫 李春雨 徐雪琴 刘晓颖 范礼斌 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第9期1189-1192,共4页
目的构建可以表达有活性的蛋白激酶C受体(RACK1)的重组质粒,检测其在细胞内的表达与定位情况。方法设计上下游引物,以RACK1全长cDNA序列为模板,PCR扩增出RACK1序列,分别构建到载体pcDNA3.1和pGEX-5X-3。转染pcDNA3.1-FLAG-RACK1到人胚... 目的构建可以表达有活性的蛋白激酶C受体(RACK1)的重组质粒,检测其在细胞内的表达与定位情况。方法设计上下游引物,以RACK1全长cDNA序列为模板,PCR扩增出RACK1序列,分别构建到载体pcDNA3.1和pGEX-5X-3。转染pcDNA3.1-FLAG-RACK1到人胚胎肾细胞(HEK-293T)和非洲绿猴肾成纤维细胞(COS7细胞),转化pGEX-5X-3-RACK1到大肠杆菌BL21感受态细胞中表达,Western blot法和考马斯亮蓝染色法检测RACK1表达情况,免疫荧光法研究其细胞内定位。结果成功构建了pcDNA3.1-FLAG-RACK1和GEX-5X-3-RACK1重组质粒。Western blot证明了其在HEK-293T细胞中的表达,考马斯亮蓝染色显示其在BL21菌株也能大量表达,免疫荧光显示RACK1在COS7的细胞核与细胞质中均有分布。结论人RACK1在HEK-293T细胞和BL21菌株中均能有效表达,在COS7细胞的胞质、胞核均有分布,为进一步研究人RACK1基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 RACK1 基因表达 细胞定位 bl21
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基因工程菌E.coli BL21/pET-DsbA-MalQ发酵产麦芽糖转糖基酶的研究 被引量：3
2
作者 王水兴 李燕萍 +3 位作者 许杨 夏慧玲 吴凌伟 郁振军 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第8期285-289,共5页
为了获得最佳的基因工程菌E.coli BL21/pET-DsbA-MalQ发酵产酶条件,通过进行诱导时间﹑诱导温度﹑IPTG的浓度﹑诱导前菌液浓度(OD600)等因素梯度实验,研究各因素对发酵产酶的影响。实验结果表明,基因工程菌的最佳诱导条件分别为:诱导时... 为了获得最佳的基因工程菌E.coli BL21/pET-DsbA-MalQ发酵产酶条件,通过进行诱导时间﹑诱导温度﹑IPTG的浓度﹑诱导前菌液浓度(OD600)等因素梯度实验,研究各因素对发酵产酶的影响。实验结果表明,基因工程菌的最佳诱导条件分别为:诱导时间为2.5h,诱导温度为30℃,IPTG浓度为0.5mmol/L,诱导前OD600值为0.5。在最佳工艺条件下,粗酶液的酶活为130U,相当于出发菌产酶效率的135倍。 展开更多
关键词 E.COLI bl21/pET-DsbA-MalQ 诱导时间 诱导温度 IPTG浓度 麦芽糖转糖基酶
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重组大肠杆菌BL21(pET28a-eIF5A)的抗逆性分析 被引量：5
3
作者 李晓泽 姜静 +2 位作者 李德斌 田梗 王玉成 《生物技术》 CAS CSCD 2006年第3期25-28,共4页
目的:分析重组大肠杆菌BL21(pET28a-eIF5A)的抗逆性。方法:将来源于柽柳的eIF5A基因构建到原核表达载体pET28a中,在原核表达的基础上,利用分光光度计检测重组大肠杆菌BL21(pET28a-eIF5A)的抗逆性。结果:BL21(pET28a-eIF5A)的抗盐碱性明... 目的:分析重组大肠杆菌BL21(pET28a-eIF5A)的抗逆性。方法:将来源于柽柳的eIF5A基因构建到原核表达载体pET28a中,在原核表达的基础上,利用分光光度计检测重组大肠杆菌BL21(pET28a-eIF5A)的抗逆性。结果:BL21(pET28a-eIF5A)的抗盐碱性明显高于对照菌株BL21(pET28a),其中重组大肠杆菌BL21(pET28a-eIF5A)的抗NaCl的临界浓度为0.8mol/L,抗NaHCO3的临界浓度为0.52mol/L,不具有抗AgNO3和抗旱性。结论:重组大肠杆菌BL21(pET28a-eIF5A)具有良好的抗NaCl和NaHCO3特性,该抗性的证明为eIF5A基因在植物抗逆基因工程中的应用提供了资料。 展开更多
关键词 真核生物起始因子5A 大肠杆菌 重组大肠杆菌bl21 抗逆性
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枯草杆菌纳豆激酶基因的克隆及其在E.coliBL21(DE3)plysS中的表达 被引量：3
4
作者 张立全 刘慧 +6 位作者 苏慧敏 扈廷茂 侯鑫 扈会平 邢万金 常福厚 王永胜 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期284-287,共4页
用CTAB法从枯草杆菌(纳豆株)中提取基因组DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增获得837bp的DNA片段,将该基因片断克隆到pMD18-T载体上,筛选重组子,通过限制性内切酶、PCR技术和测序分析确定该重组子所含插入片断为纳豆激酶基因.利用基因重组技... 用CTAB法从枯草杆菌(纳豆株)中提取基因组DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增获得837bp的DNA片段,将该基因片断克隆到pMD18-T载体上,筛选重组子,通过限制性内切酶、PCR技术和测序分析确定该重组子所含插入片断为纳豆激酶基因.利用基因重组技术构建了纳豆激酶基因的融合表达载体,转化E.coliBL21(DE3)plysS后经IPTG诱导在大肠杆菌中高效表达,经SDS-PAGE电泳及bandscan软件分析融合蛋白分子量约为33.4kD,约占菌体总蛋白29.4%. 展开更多
关键词 枯草杆菌 纳豆激酶 克隆表达 bl21(DE3)plysS
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一步法制备大肠杆菌BL21(DE3)菌株感受态细胞及转化条件优化 被引量：7
5
作者 张迹 李智 +1 位作者 张宇 袁巧云 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第12期529-532,共4页
大肠杆菌BL21(DE3)菌株是大肠杆菌表达系统最常用的宿主菌株,因此人们需要1种便捷有效的感受态细胞制备和转化方法。一步法感受态细胞制备操作方便,只加1种试剂即可,更快捷稳定,转化也更方便,不需要热激。研究大肠杆菌感受态细胞一步法... 大肠杆菌BL21(DE3)菌株是大肠杆菌表达系统最常用的宿主菌株,因此人们需要1种便捷有效的感受态细胞制备和转化方法。一步法感受态细胞制备操作方便,只加1种试剂即可,更快捷稳定,转化也更方便,不需要热激。研究大肠杆菌感受态细胞一步法制备对BL21菌株的适用性,并对转化过程中的关键参数进行探索和优化。结果表明,该一步法制备的BL21菌株感受态细胞可获得106CFU/μg DNA转化效率,完全能够满足常规转化要求。转化过程中相关参数的最佳条件为冰水浴30 min,室温放置10 min,37℃、150 r/min振荡复苏40 min。 展开更多
关键词 感受态细胞制备 一步法 大肠杆菌bl21(DE3)菌株 转化条件
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内源性血管生成抑制因子Arresten的序列测定及在E.coli BL21中的表达 被引量：1
6
作者 唐海英 郑金平 +1 位作者 陈显久 解军 《中国药物与临床》 CAS 2007年第6期410-412,共3页
目的构建内源性血管生成抑制因子Arresten基因的原核表达载体,并对其进行序列测定和在E.coli BL21中进行表达。方法从健康产妇的胎盘组织中提取总RNA,经反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出Arresten基因,对其序列测定后构建重组质粒pBV... 目的构建内源性血管生成抑制因子Arresten基因的原核表达载体,并对其进行序列测定和在E.coli BL21中进行表达。方法从健康产妇的胎盘组织中提取总RNA,经反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出Arresten基因,对其序列测定后构建重组质粒pBV220-Arr转化E.coli BL21进行原核表达。结果成功筛选出Arresten基因,并将基因序列和蛋白序列提交基因库,成功构建了重组质粒pBV220-Arr,重组质粒在菌株中获得表达。结论构建的原核表达重组体pBV220-Arr能高效表达重组Arresten蛋白。 展开更多
关键词 Arresten基因 序列测定 E.COLI bl21 基因克隆表达
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重组人PD-L1在大肠杆菌BL-21中的表达、纯化和鉴定 被引量：1
7
作者 陈娇 张金鸽 +3 位作者 王辉 计宝辉 孔祥丽 张平 《华西药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期487-490,共4页
目的分离纯化人程序死亡蛋白-1(PD-L1)基因,制备重组人PD-L1蛋白,为进一步研究PD-L1在肿瘤免疫逃逸中的作用和机制建立基础。方法通过RT-PCR分离纯化人PD-L1基因,并将其克隆到原核表达质粒pGEX-4T-1中,经酶切,测序鉴定分析后,转化大肠杆... 目的分离纯化人程序死亡蛋白-1(PD-L1)基因,制备重组人PD-L1蛋白,为进一步研究PD-L1在肿瘤免疫逃逸中的作用和机制建立基础。方法通过RT-PCR分离纯化人PD-L1基因,并将其克隆到原核表达质粒pGEX-4T-1中,经酶切,测序鉴定分析后,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。产物经GST蛋白纯化系统进行纯化后,用10%SDS-PAGE及Western Blot分析鉴定。结果经RT-PCR分离纯化的PD-L1 cDNA分子由645 bp构成,编码相对分子量约25 KD的蛋白,并与GST形成融合蛋白。GST-PD-L1融合蛋白相对分子量约46 KD。Western Blot结果显示,该蛋白能被兔抗GST和抗PD-L1抗体识别。结论成功构建了PD-L1原核表达载体,并在大肠杆菌BL21中获得高效表达。 展开更多
关键词 程序死亡蛋白-1 原核表达 纯化和鉴定 大肠杆菌bl-21
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重组人脂联素融合蛋白在大肠埃希菌BL21中的表达 被引量：1
8
作者 杨霄鹏 吕同德 +3 位作者 刘斌 王晓辉 唐瑜 贾庆华 《兰州大学学报（医学版）》 CAS 2011年第1期6-10,共5页
目的在大肠埃希菌BL21中对构建的重组人脂联素质粒pET-32a(+)/AP进行诱导表达,并对产物进行纯化、鉴定。方法将pET-32a(+)质粒和重组pET-32a(+)/AP质粒转化到大肠埃希菌BL21中进行诱导表达,建立表达体系,筛选高表达的克隆子,用不同诱导... 目的在大肠埃希菌BL21中对构建的重组人脂联素质粒pET-32a(+)/AP进行诱导表达,并对产物进行纯化、鉴定。方法将pET-32a(+)质粒和重组pET-32a(+)/AP质粒转化到大肠埃希菌BL21中进行诱导表达,建立表达体系,筛选高表达的克隆子,用不同诱导时间和不同异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导浓度确定最佳诱导条件,用Ni^(2+)金属层析柱进行蛋白亲和层析,对纯化蛋白进行浓缩,蛋白质印迹鉴定所诱导的蛋白。结果得到分子量为43 kD的新生蛋白,经蛋白质印迹鉴定为重组脂联素融合蛋白。结论将重组pET-32a(+)/AP质粒转化到大肠埃希菌BL21中,建立表达体系,且获得高效表达。 展开更多
关键词 脂联素 大肠埃希菌bl21 表达 诱导 纯化
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重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21的传代稳定性 被引量：2
9
作者 李睿 王革 +1 位作者 钱秋娟 王秉翔 《微生物学免疫学进展》 2012年第4期1-5,共5页
目的通过菌株传代方法观察携带致死因子(lf)基因的重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21的传代稳定性。方法将重组菌株pET-28(a)/LF/BL21在含有卡那霉素的LB培养基中连续传代至100代,比较第1、10、20、50、100代菌株的菌落形态、细菌形态、生... 目的通过菌株传代方法观察携带致死因子(lf)基因的重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21的传代稳定性。方法将重组菌株pET-28(a)/LF/BL21在含有卡那霉素的LB培养基中连续传代至100代,比较第1、10、20、50、100代菌株的菌落形态、细菌形态、生化特性、质粒保有率、生长速度等的差异;取各代次菌株提取质粒DNA且分别进行双酶切及PCR鉴定、DNA测序;诱导表达各代次菌株,比较各代次菌株的重组rLF蛋白的表达水平及免疫反应性。结果各代次菌株菌落形态、生化特性、生长速度等方面与原始种子库无明显差异;在传至100代时的质粒保有率为76%;各代次菌株重组质粒电泳图谱、酶切图谱、PCR图谱未改变,未见lf基因变异;各代次菌株的总蛋白电泳图谱r、LF蛋白表达量r、LF蛋白的免疫反应性与原始种子库无明显差异。结论重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21具有较好的传代稳定性。 展开更多
关键词 重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/bl21 传代稳定性
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人OX40L在BL-21大肠杆菌中的表达和生物学功能研究
10
作者 施勤 陈永井 +4 位作者 孙建军 马泓冰 姜智 毛一香 张学光 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期163-167,171,共6页
目的克隆和表达人可溶性OX40L重组蛋白(sOX40L),探讨OX40L信号在T细胞对乳腺癌细胞反应中的协同刺激效应。方法运用基因工程技术在大肠杆菌中表达人重组融合蛋白GSTsOX40L,Westernblot分析表达蛋白的特异性;采用体外T细胞和乳腺癌细胞... 目的克隆和表达人可溶性OX40L重组蛋白(sOX40L),探讨OX40L信号在T细胞对乳腺癌细胞反应中的协同刺激效应。方法运用基因工程技术在大肠杆菌中表达人重组融合蛋白GSTsOX40L,Westernblot分析表达蛋白的特异性;采用体外T细胞和乳腺癌细胞混合培养体系,观察对T细胞生长和增殖的影响。结果构建了GSTsOX40L原核表达体系,从而进行重组蛋白的有效表达;纯化的重组蛋白通过免疫印迹分析能被特异性单抗识别,并在体外培养体系中显示出协同刺激T细胞对乳腺肿瘤细胞的反应性促进T细胞生长、增殖以及IL2的分泌。结论成功地研制了具有生物学活性的sOX40L,为体外激发肿瘤特异性T细胞提供良好的物质基础。 展开更多
关键词 OX40L bl-21大肠杆菌 表达 生物学功能
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TAT-hEGF融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中高效自我表达 被引量：1
11
作者 智庆文 苗爱玲 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期89-91,100,共4页
为了获得TAT-hEGF融合蛋白在E.coliBL21(DE3)中高效表达,构建了原核表达载体pRSET-tat-hegf,将其转化E.coliBL21(DE3)得到重组工程菌BL21(DE3)/pRSET-tat-hegf。工程菌在无IPTG的诱导下实现了高效表达,TAT-hEGF融合蛋白的表达量占总菌... 为了获得TAT-hEGF融合蛋白在E.coliBL21(DE3)中高效表达,构建了原核表达载体pRSET-tat-hegf,将其转化E.coliBL21(DE3)得到重组工程菌BL21(DE3)/pRSET-tat-hegf。工程菌在无IPTG的诱导下实现了高效表达,TAT-hEGF融合蛋白的表达量占总菌体蛋白的45.6%,主要以包涵体形式存在。 展开更多
关键词 TAT—hEGF融合蛋白 人表皮生长因子 包涵体 E.COLI bl21(DE3)
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基因工程菌株BL21(DE3)(pECB-ST1)菌种的限定代次及保存条件试验 被引量：1
12
作者 邓光存 吕玉玲 +1 位作者 王玉炯 许崇波 《宁夏农学院学报》 2002年第2期24-26,共3页
本文对基因工程菌株BL2 1(DE3) (pECB -ST1)菌种的限定代次及保存条件进行了详细研究。实验结果证实 ,基因工程菌株BL2 1(DE3) (pECB -ST1)基础种子体外传至 10代 ,其效力、培养特性均不发生变化 ,表明基因工程菌株BL2 1(DE3) (pECB -S... 本文对基因工程菌株BL2 1(DE3) (pECB -ST1)菌种的限定代次及保存条件进行了详细研究。实验结果证实 ,基因工程菌株BL2 1(DE3) (pECB -ST1)基础种子体外传至 10代 ,其效力、培养特性均不发生变化 ,表明基因工程菌株BL2 1(DE3) (pECB -ST1)是一株良好的疫苗生产菌株。基因工程菌株BL2 1(DE3) (pECB -ST1)甘油菌种和冻干菌种分别在 2 0℃保存 2年和 3年 ,菌种的数量未明显减少 。 展开更多
关键词 保存条件 基因工程菌株bl21 DE3 pECB-ST1 菌种 限定代次 基因工程灭活苗
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大肠杆菌BL21生长状态的研究 被引量：1
13
作者 郭晓丽 《衡水学院学报》 2011年第1期40-41,44,共3页
以大肠杆菌菌株BL21为材料,测定其生长曲线及在不同浓度NaHCO3、NaCl处理下的生长状态.结果表明:大肠杆菌BL21具有稳定的生长状态,高浓度的胁迫条件均可抑制其生长,低浓度的NaCl抑制作用不明显,而低浓度的NaHCO3则极为敏感.
关键词 大肠杆菌bl21 生长 状态
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P185^(c-erBb-2)胞外区结构域在大肠杆菌BL21中的表达分析
14
作者 王颖 曾庆银 +3 位作者 何晓红 孟庆繁 高波 傅学奇 《吉林大学自然科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期76-78,共3页
以 PET-HT为表达载体 ,探讨在大肠杆菌 BL2 1中高效表达 P1 85c- er Bb- 2胞外区结构域蛋白的最佳条件 .经 SDS-PAGE与软件分析 ,确定其最佳表达时间为 3 h,当菌液密度为 0 .7时 ,所表达的蛋白含量最高 ,而 IPTG在一定浓度范围内对表达... 以 PET-HT为表达载体 ,探讨在大肠杆菌 BL2 1中高效表达 P1 85c- er Bb- 2胞外区结构域蛋白的最佳条件 .经 SDS-PAGE与软件分析 ,确定其最佳表达时间为 3 h,当菌液密度为 0 .7时 ,所表达的蛋白含量最高 ,而 IPTG在一定浓度范围内对表达含量不产生影响 . 展开更多
关键词 P185c-erBb-2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 表达 大肠杆菌 bl21 跨膜糖蛋白 胞外区结构域
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黄淮南片麦区区试小麦品种(系)的遗传多样性及Pm21和1BL/1RS分子检测 被引量：8
15
作者 高晓慧 任翠翠 +2 位作者 宋杰 李小军 茹振钢 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期779-785,共7页
为了解当前黄淮麦区区试品种(系)的遗传特征,利用分布于小麦基因组的96对SSR标记分析2016年参加黄淮南片麦区品种试验的78个小麦品种(系)的遗传多样性,同时,对Pm21基因和1BL/1RS易位系进行分子检测。结果表明,96对SSR引物中有80对(83.3%... 为了解当前黄淮麦区区试品种(系)的遗传特征,利用分布于小麦基因组的96对SSR标记分析2016年参加黄淮南片麦区品种试验的78个小麦品种(系)的遗传多样性,同时,对Pm21基因和1BL/1RS易位系进行分子检测。结果表明,96对SSR引物中有80对(83.3%)在所有材料表现多态,共检测到307个等位变异,变幅为1~8,平均每个引物扩增3.84个等位变异;位点多态性信息含量(PIC)变幅为0.10~0.83,平均0.62;供试材料的遗传距离变幅为0.14~0.16,平均0.58。78个材料均不含有Pm21基因,69个(88.5%)材料属于1BL/1RS易位系。 展开更多
关键词 小麦 遗传多样性 1bl/1RS PM21
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BL21（DE_3）／PET－11做为人IL－2表达系统的研究 被引量：2
16
作者 公茂凯 章静波 +3 位作者 刘德培 张世馥 刘丕旭 董敏 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第1期60-65,共6页
ＢＬ２１（ＤＥ_３）／ＰＥＴ－１１做为人ＩＬ－２表达系统的研究公茂凯，章静波，刘德培，张世馥刘丕旭，董敏（中国医学科学院中国协和医科大学北京基础医学研究所，北京１００００５）关键词白细胞介素２，ＢＬ２１（ＤＥ_３），聚... ＢＬ２１（ＤＥ_３）／ＰＥＴ－１１做为人ＩＬ－２表达系统的研究公茂凯，章静波，刘德培，张世馥刘丕旭，董敏（中国医学科学院中国协和医科大学北京基础医学研究所，北京１００００５）关键词白细胞介素２，ＢＬ２１（ＤＥ_３），聚合酶链反应中图号Ｒ３９２。１２白细... 展开更多
关键词 白细胞介素2 bl21(DE3) 聚合酶链反应
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大肠杆菌BL21(DE3)lpxM突变株的构建 被引量：2
17
作者 张君 方宏清 +2 位作者 谢达平 刘志敏 陈惠鹏 《生物技术通讯》 CAS 2006年第4期489-492,共4页
目的:lpxM基因失活可以产生极低内毒素活性的脂多糖。构建大肠杆菌BL21(DE3)的lpxM突变株,并考察该突变株的生长状态和表达重组蛋白的能力。方法:构建同源臂长500bp左右的打靶载体,借助Red同源重组系统,使E.coliBL21(DE3)的lpxM基因发... 目的:lpxM基因失活可以产生极低内毒素活性的脂多糖。构建大肠杆菌BL21(DE3)的lpxM突变株,并考察该突变株的生长状态和表达重组蛋白的能力。方法:构建同源臂长500bp左右的打靶载体,借助Red同源重组系统,使E.coliBL21(DE3)的lpxM基因发生插入失活,再导入编码FLP位点特异性重组酶的质粒pCP20去除抗性基因。PCR鉴定发生插入突变的菌株,应用SDS-PAGE分析突变前后的脂多糖,考查对重组蛋白表达的影响。结果:PCR鉴定结果说明lpxM基因发生了插入突变。与出发株比较,突变株的脂多糖电泳图谱发生了明显变化,但其生长状态与表达重组蛋白的能力与出发株基本一致。结论:大肠杆菌BL21(DE3)的lpxM突变株可以用于重组蛋白的表达。 展开更多
关键词 大肠杆菌bl21(DE3) lpxM基因 Red同源重组系统
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氨基酸对大肠杆菌BL21生长影响的研究 被引量：1
18
作者 李凤辰 段纪甫 宫衡 《工业微生物》 CAS CSCD 2013年第3期29-31,共3页
研究了14种氨基酸对大肠杆菌BL21生长的影响。研究表明,在以氨基酸为唯一氮源的培养基中,氨基酸对菌体生长的影响可分为三类:(1)能完全被利用的氨基酸:谷氨酰胺、天冬酰胺、丝氨酸;(2)部分被利用对菌体生长有限制的氨基酸:谷氨酸、丙氨... 研究了14种氨基酸对大肠杆菌BL21生长的影响。研究表明,在以氨基酸为唯一氮源的培养基中,氨基酸对菌体生长的影响可分为三类:(1)能完全被利用的氨基酸:谷氨酰胺、天冬酰胺、丝氨酸;(2)部分被利用对菌体生长有限制的氨基酸:谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸、精氨酸和亮氨酸;(3)不能被利用的氨基酸:苯丙氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、赖氨酸和苏氨酸。而在无机氮源存在时,单一氨基酸对大肠杆菌生长的影响可分为两类:(1)能完全被利用的氨基酸:谷氨酰胺、天冬酰胺、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸;(2)对生长有一定促进作用的氨基酸:精氨酸、亮氨酸、组氨酸、赖氨酸等。 展开更多
关键词 氨基酸 利用 生长 大肠杆菌bl21
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基于重组工程法高转化效率的大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株构建 被引量：2
19
作者 张飞飞 石牡丹 尚广东 《安徽农业科学》 CAS 2015年第20期29-31,72,共4页
[目的]提高最常用的异源蛋白表达宿主菌E.coli BL21(DE3)的转化效率。[方法]利用基于质粒的重组工程系统和双链断裂修复功能。[结果]敲除了编码降解外源DNA的I型限制性内切酶的hsdR基因,获得了高转化效率以及其他功能与BL21(DE3)仍保持... [目的]提高最常用的异源蛋白表达宿主菌E.coli BL21(DE3)的转化效率。[方法]利用基于质粒的重组工程系统和双链断裂修复功能。[结果]敲除了编码降解外源DNA的I型限制性内切酶的hsdR基因,获得了高转化效率以及其他功能与BL21(DE3)仍保持一致的LS1928菌株。[结论]获得的LS1928菌株可能会作为获得催化用酶的关键材料,进而在蛋白质工程等研究领域有着重要的作用。 展开更多
关键词 重组工程 基因敲除 双链断裂修复 大肠杆菌bl21(DE3)
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利用小泛素蛋白修饰分子融合技术在大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组抗菌肽LLv 被引量：1
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作者 殷文霞 王为栋 +4 位作者 刘晓东 邵坤 单虎 张洪亮 王述柏 《青岛农业大学学报（自然科学版）》 2023年第4期265-269,共5页
为了研究在大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中利用小分子泛素蛋白(small ubiquitin-like modifier,SUMO)融合技术表达重组抗菌肽LLv(antimicrobial peptide LLv)的方法。试验以天然抗菌肽LL-37氨基酸组成及分子结构为依据,人工设计了LLv的氨... 为了研究在大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中利用小分子泛素蛋白(small ubiquitin-like modifier,SUMO)融合技术表达重组抗菌肽LLv(antimicrobial peptide LLv)的方法。试验以天然抗菌肽LL-37氨基酸组成及分子结构为依据,人工设计了LLv的氨基酸序列和基因序列。利用SUMO融合技术,构建重组大肠杆菌表达载体pSUMO-LLv在E.coli BL21(DE3)中表达SUMO-LLv,并研究异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl beta-D-thiogalacyranoside,IPTG)浓度和诱导时间对融合蛋白SUMO-LLv表达的影响,同时分析融合蛋白SUMO-LLv表达的可溶性并分离纯化目的蛋白LLv。结果表明:建立的E.coli BL21(DE3)的pSUMO-LLv重组表达载体,经DNA测序验证构建正确;SUMO-LLv的诱导表达最佳条件是IPTG浓度0.5 mmol/L,诱导表达时间为2 h;融合蛋白SUMO-LLv主要存在于菌液上清液中,表达含量为11.34μg/mL;免疫印迹试验(Western blot)鉴定证明融合蛋白具有良好的反应原性;采用Ni柱亲和层析法在诱导菌液中成功纯化到了目的蛋白LLv,大小为5 kDa。说明在E.coli BL21(DE3)中利用SUMO融合技术表达重组抗菌肽LLv的方法可行。 展开更多
关键词 LLv SUMO 融合蛋白 诱导表达 E.coli bl21(DE3)
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