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茯苓多糖参与调节BCoV诱导的宿主细胞IFN-β信号通路细胞因子的表达 被引量:2
1
作者 贺泂杰 崔东安 +3 位作者 唐豪 王玲 杨峰 王胜义 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期526-531,共6页
以牛肾细胞(MDBK)细胞为研究对象,MDBK细胞接种牛冠状病毒(BCoV),应用Real-time PCR检测茯苓多糖对BcoV N基因表达水平及BcoV诱导的MDBK细胞中RLR干扰素信号通路上相关细胞因子表达水平的影响。结果,茯苓多糖可抑制BCoV N基因的表达;茯... 以牛肾细胞(MDBK)细胞为研究对象,MDBK细胞接种牛冠状病毒(BCoV),应用Real-time PCR检测茯苓多糖对BcoV N基因表达水平及BcoV诱导的MDBK细胞中RLR干扰素信号通路上相关细胞因子表达水平的影响。结果,茯苓多糖可抑制BCoV N基因的表达;茯苓多糖可促进RLR通路细胞因子RIG-I、MDA5、MAVS、TBK1、IRF3及IFN-β的表达,并缓解BCoV对宿主细胞RIG-I、MDA5、MAVS、TBK1、IRF3及IFN-β细胞因子的前期抑制。结果表明,茯苓多糖可调节RLR通路细胞因子表达水平,抑制BCoV病毒的复制。这一研究结果为茯苓多糖治疗BCoV引起的犊牛腹泻提供了理论依据。 展开更多
关键词 茯苓多糖 犊牛腹泻 牛冠状病毒 细胞因子 bcov N基因
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BVDV、BRV和BCoV TaqMan三重RT-qPCR检测方法的建立 被引量:4
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作者 孙亚杰 关平原 +3 位作者 周伟光 徐晓静 希尼尼根 于景丽 《中国动物检疫》 CAS 2021年第3期99-106,共8页
为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛轮状病毒(BRV)和牛冠状病毒(BCoV)的快速检测方法,根据GenBank中登录的BVDV 5'-UTR、BRV NSP5和BCoV N基因序列设计特异性引物和探针,通过优化反应体系和条件,建立了同时检测上述3种病毒的TaqMan三... 为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛轮状病毒(BRV)和牛冠状病毒(BCoV)的快速检测方法,根据GenBank中登录的BVDV 5'-UTR、BRV NSP5和BCoV N基因序列设计特异性引物和探针,通过优化反应体系和条件,建立了同时检测上述3种病毒的TaqMan三重RT-qPCR方法。该方法仅对BVDV 5'-UTR、BRV NSP5和BCoV N基因扩增呈阳性,而对牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒、魏氏梭菌(A型、B型和D型)、多杀性巴氏杆菌(A型和B型)等犊牛腹泻相关病原扩增均呈阴性;最低检出限为10拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于2%。利用本研究建立的TaqMan三重RT-qPCR方法对29份临床样品进行检测,获得BVDV、BRV、BCoV的4种混合感染型,其中BVDV与BCoV的混合感染率最高(27.6%);与已有单重RT-qPCR方法比较,发现两种方法检测BVDV、BRV和BCoV的符合率分别为100%、96.5%、100%。结果表明,本研究建立的TaqMan三重RT-qPCR方法具有特异性强、敏感性高、重复性好、可行性高等优点,可为今后BVDV、BRV和BCoV共感染引起的牛腹泻性疾病的鉴别诊断和流行病学调查提供新技术手段。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 牛轮状病毒 牛冠状病毒 TaqMan三重RT-qPCR 混合感染
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河南省犊牛腹泻7种病原流行情况调查 被引量:2
3
作者 王向佩 秦帅 +4 位作者 冯亚杰 张洋 刘晓曼 孙贝贝 张震 《中国奶牛》 2025年第1期26-30,共5页
为了深入了解造成河南省犊牛腹泻的主要病原及其流行情况,明确犊牛腹泻病因、扩充河南省内犊牛腹泻病原的流行数据,本研究对河南省内犊牛腹泻粪便送检样品采用荧光定量PCR法进行7种常见腹泻病原检测。结果表明,河南省犊牛腹泻常见病原... 为了深入了解造成河南省犊牛腹泻的主要病原及其流行情况,明确犊牛腹泻病因、扩充河南省内犊牛腹泻病原的流行数据,本研究对河南省内犊牛腹泻粪便送检样品采用荧光定量PCR法进行7种常见腹泻病原检测。结果表明,河南省犊牛腹泻常见病原中隐孢子虫检出率最高,达到41.18%(42/102);BCoV和BRV其次,分别为24.51%(25/102)、14.71%(15/102);BVDV检出率3.92%(4/102);沙门氏菌和大肠杆菌K99检出率均为1.96%(2/102),副结核分枝杆菌未检出。除单一感染外,还有较多的混合感染情况,且病原流行情况有地区差异。 展开更多
关键词 隐孢子虫 bcov BRV BVDV 混合感染
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致犊牛腹泻常见病毒的检测及风险因素分析 被引量:3
4
作者 何艳飞 覃城皇 +4 位作者 徐肖文 冼茵儿 项志杰 陈颖钰 郭爱珍 《华中农业大学学报》 北大核心 2025年第1期174-182,共9页
为了解犊牛腹泻主要病毒的流行现状和优势毒株,2021年11月至2023年10月间,运用RT-PCR技术对来自湖北、湖南、河南、广西、贵州、甘肃、山东和内蒙古等地41个牧场的264头腹泻犊牛的264份样品(58份肛拭子、15份肠组织和191份粪便)进行了... 为了解犊牛腹泻主要病毒的流行现状和优势毒株,2021年11月至2023年10月间,运用RT-PCR技术对来自湖北、湖南、河南、广西、贵州、甘肃、山东和内蒙古等地41个牧场的264头腹泻犊牛的264份样品(58份肛拭子、15份肠组织和191份粪便)进行了牛轮状病毒(bovine rotavirus,BRV)、牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)、牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的检测,进一步对以上3种病毒在不同地区、年龄、季节和品种的分布进行了分析。结果显示,BRV、BCoV和BVDV的个体阳性检出率分别为14.02%(95%CI:8.44~16.68)、10.23%(95%CI:6.85~14.53)和12.12%(95%CI:10.06~18.80),78.05%(95%CI:62.39~89.44)的牧场为犊牛腹泻病毒阳性场,29.27%(95%CI:16.13~45.54)的牧场存在有混合感染,BRV与BCoV是最为常见的混合感染组合,检出率为3.42%(95%CI:1.32~5.88)。BRV在我国北方地区、冬季和≤5周龄的犊牛中检出率较高,BCoV在我国北方地区和夏冬季节检出率高,而BVDV在各地区、年龄、品种等方面,检出率无显著差异。结果表明3种病毒在我国11个省份地区的41个牧场的腹泻犊牛中普遍存在,BRV和BCoV是导致犊牛腹泻的主要病毒,并且其流行情况受到地区、季节和年龄的影响,这提示在防控措施中应该考虑这些因素。 展开更多
关键词 犊牛腹泻 BRV bcov BVDV 检测 风险因素分析
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牛冠状病毒S蛋白生物信息学分析及其受体结合域的多克隆抗体制备
5
作者 韩翔舒 宫震 +9 位作者 刘淑悦 范昊宇 付修龙 李晓卓 梁纤纤 郑启铭 李月 平继辉 蒋松 夏俊 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第8期69-77,共9页
旨在预测和分析牛冠状病毒(BCoV)S蛋白的结构和潜在功能,并进行克隆表达及多克隆抗体的制备,为疫苗研究和实验室诊断提供基础。利用生物信息学软件预测分析S蛋白生物学特性,克隆其受体结合域(RBD)基因并与原核表达载体pET-30a(+)连接,... 旨在预测和分析牛冠状病毒(BCoV)S蛋白的结构和潜在功能,并进行克隆表达及多克隆抗体的制备,为疫苗研究和实验室诊断提供基础。利用生物信息学软件预测分析S蛋白生物学特性,克隆其受体结合域(RBD)基因并与原核表达载体pET-30a(+)连接,构建重组质粒后转化BL21感受态细胞并利用IPTG诱导表达,表达的蛋白经镍柱纯化后免疫小鼠,制备多克隆抗体并检测。结果:S蛋白由1364个氨基酸组成,相对分子质量为150.81 kDa,等电点为5.51,不稳定指数为33.22,脂溶性指数为87.22;该蛋白1~1307 aa为胞外区,1308~1330 aa为跨膜区,1331~1363 aa为胞内区,1~14 aa为信号肽,310~612 aa为RBD;有36个潜在的B细胞表位,RBD中包含12个;该蛋白α-螺旋占27.95%,β-折叠占23.04%,无规则卷曲占49.01%;分析S蛋白三级结构,与二级结构预测结果基本一致;成功克隆了S蛋白RBD,大小与预期相符,与载体pET-30a(+)连接后经双酶切、测序验证表明载体构建成功;经SDS-PAGE与Western blot验证蛋白成功表达后,将纯化后的蛋白免疫小鼠并分离血清,效价可达1∶128000;经间接免疫荧光试验与Western blot验证多克隆抗体能够识别病毒S蛋白,证明重组蛋白具有良好的免疫原性,可诱导产生病毒特异性抗体。结论:成功分析和预测了BCoV S蛋白的结构及功能,并获得S蛋白RBD的重组蛋白及多克隆抗体,为后续的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 S蛋白 受体结合域 生物特性 多克隆抗体
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四川省甘孜州牦牛4种腹泻病原调查及病毒宏基因组学检测 被引量:1
6
作者 李劲 肖晨冬 +7 位作者 吴建平 杨怀珍 计慧姝 罗勇 扎西泽仁 奉奇 蓝岚 潘瑶 《中国动物检疫》 2025年第3期21-26,共6页
为调查四川省甘孜藏族自治州(简称“甘孜州”)引起犊牦牛腹泻的主要病原及病毒组成,采集216份腹泻犊牦牛粪便样品,利用实时荧光定量PCR方法对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、贾第虫和隐孢子虫进行了检测,并利用宏基因组学... 为调查四川省甘孜藏族自治州(简称“甘孜州”)引起犊牦牛腹泻的主要病原及病毒组成,采集216份腹泻犊牦牛粪便样品,利用实时荧光定量PCR方法对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、贾第虫和隐孢子虫进行了检测,并利用宏基因组学技术对腹泻牦牛粪便样品进行了病毒测序分析。结果显示:216份腹泻牦牛粪便样品的个体病原阳性率为52.78%,其中BVDV、BCoV、贾第虫和隐孢子虫个体病原阳性率分别为23.61%、6.02%、17.59%、15.74%,不同采样区县检出的病原种类不同;混合感染率为15.79%,其中双重、三重感染率分别为10.53%、5.26%;在粪便样品中检出15种病毒,其中与牦牛腹泻相关的病毒有BVDV、BCoV、牛疱疹病毒4型、牛嵴病毒、牛轮状病毒、牛星状病毒。结果说明:BVDV、BCoV、贾第虫和隐孢子虫是导致甘孜州牦牛腹泻的重要病原,且存在混合感染情况。此外,牛疱疹病毒4型、牛轮状病毒、牛星状病毒和牛嵴病毒也流行于甘孜州腹泻牦牛群中。建议持续对牦牛腹泻开展流行病学调查,并采取相应的防控措施。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 牛冠状病毒 贾第虫 隐孢子虫 病毒宏基因组学
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Remarks on BCOV invariants and degenerations of Calabi-Yau manifolds
7
作者 Kefeng Liu Wei Xia 《Science China Mathematics》 SCIE CSCD 2019年第1期171-184,共14页
For a one parameter family of Calabi-Yau threefolds, Green et al.(2009) expressed the total singularities in terms of the degrees of Hodge bundles and Euler number of the general fiber. In this paper,we show that the ... For a one parameter family of Calabi-Yau threefolds, Green et al.(2009) expressed the total singularities in terms of the degrees of Hodge bundles and Euler number of the general fiber. In this paper,we show that the total singularities can be expressed by the sum of asymptotic values of BCOV(BershadskyCecotti-Ooguri-Vafa) invariants, studied by Fang et al.(2008). On the other hand, by using Yau's Schwarz lemma, we prove Arakelov type inequalities and Euler number bound for Calabi-Yau family over a compact Riemann surface. 展开更多
关键词 bcov INVARIANTS CALABI-YAU MANIFOLDS SINGULARITIES Arakelov INEQUALITIES
原文传递
内蒙古牛冠状病毒全基因组测序与遗传进化分析 被引量:1
8
作者 其勒木格 王旭芬 +4 位作者 侯琳 张嘉磊 马聿田 张志丹 周伟光 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期4984-4995,共12页
【目的】了解内蒙古地区牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)流行毒株的全基因组特征和遗传进化情况,为有效防控BCoV感染提供参考。【方法】本研究对疑似感染BCoV的犊牛脾脏进行宏病毒组测序和步移RT-PCR扩增,获得BCoV全基因组序列,并... 【目的】了解内蒙古地区牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)流行毒株的全基因组特征和遗传进化情况,为有效防控BCoV感染提供参考。【方法】本研究对疑似感染BCoV的犊牛脾脏进行宏病毒组测序和步移RT-PCR扩增,获得BCoV全基因组序列,并对其进行生物信息和遗传进化分析。利用Oligo 7.0软件设计特异性引物扩增S基因,并对其进行遗传进化、氨基酸序列变异、抗原表位预测及三级结构预测分析。【结果】本研究从疑似感染BCoV的犊牛脾脏中成功获得大小为30971 bp的BCoV全基因组序列,NCBI登录号为PP352170.1,该全基因组核苷酸序列与BCoV爱尔兰株ABGEB0-62相似性最高,为99.2%,并与该株亲缘关系最近,同时与BCoV法国株BCoV_2014_13和挪威株Nes_2012-01-03属于同一进化分支;扩增出的S基因核苷酸长度为4092 bp,与BCoV爱尔兰株ABGEB0-62 S基因序列亲缘关系最近,处于同一进化分支,但核苷酸序列与BCoV内蒙古株NMG1 S基因相似性最高,为99.4%;S基因编码的氨基酸与Mebus株比对发现,有15个氨基酸变异位点(S1亚基12个,S2亚基有3个),其中变异的氨基酸残基154、260、499-520、718、1192、1344位氨基酸处于抗原表位区,并导致S蛋白三级结构发生改变。【结论】本研究利用宏病毒组测序和基因组5′-端步移RT-PCR法获得内蒙古BCoV株全基因组序列,其S蛋白抗原表位区氨基酸位点发生变异和三级结构改变,预示S蛋白抗原性发生了改变;S1亚基的多态性区域氨基酸位点的变异预示S蛋白的致病性发生变化。 展开更多
关键词 牛冠状病毒(bcov) 全基因组 宏病毒组 S基因 遗传进化
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牛冠状病毒S和HE蛋白研究进展 被引量:3
9
作者 靳双媛 杜家伟 +2 位作者 王雪妍 郭雪莲 许立华 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3118-3127,共10页
牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)是引起新生犊牛腹泻、牛的呼吸道感染和成年牛冬痢的一种病原,主要通过粪-口感染和呼吸道气溶胶传播。研究表明,BCoV在亚临床感染的成年牛体内可持续存在,这可能是BCoV在牛群中广泛存在且能长期循... 牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)是引起新生犊牛腹泻、牛的呼吸道感染和成年牛冬痢的一种病原,主要通过粪-口感染和呼吸道气溶胶传播。研究表明,BCoV在亚临床感染的成年牛体内可持续存在,这可能是BCoV在牛群中广泛存在且能长期循环的原因。因此,BCoV的流行会对集约化牛场造成巨大的经济损失,BCoV的防控形势极其严峻。BCoV S蛋白包含主要的抗原位点,可与宿主表面的唾液酸(SA)结合,且S蛋白参与病毒与宿主细胞的吸附和膜融合过程,能促进宿主产生有效的中和抗体。BCoV HE蛋白具有乙酰酯酶活性和血凝活性,能与S蛋白协同附着于细胞表面并启动感染。S和HE蛋白均在病毒的组织或宿主嗜性及毒力等方面发挥重要作用,这些作用也为进一步开展BCoV病原研究及后续疫苗和药物的研制提供参考。笔者重点阐述了BCoV S和HE蛋白的分子结构及功能,以及BCoV基于S和HE蛋白的受体识别作用(包括利用N-乙酰-9-O-乙酰神经氨酸为糖结合受体,利用人类白细胞抗原Ⅰ类分子为蛋白结合受体)。受体识别是冠状病毒感染和致病的重要决定因素,也是宿主免疫监视和人类干预策略最重要的靶标之一。因此,充分了解BCoV S和HE蛋白的结构功能和受体识别作用对于了解病毒的致病机制及抗病毒药物、疫苗的研发具有重要意义。 展开更多
关键词 牛冠状病毒(bcov) S蛋白 HE蛋白 受体识别
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牛冠状病毒感染新生犊牛肺上皮细胞模型的建立 被引量:2
10
作者 陈秋会 蒋珊珊 +4 位作者 高萌萌 夏立勇 张国华 任亚超 周玉龙 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3577-3584,共8页
[目的]牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)是犊牛腹泻和上呼吸道疾病的主要病原,目前缺少敏感的适合BCoV体外培养的本动物细胞,限制了BCoV致病机制的深入研究。因此,本研究拟从犊牛肺脏组织中分离出牛肺上皮细胞(bovine lung epitheli... [目的]牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)是犊牛腹泻和上呼吸道疾病的主要病原,目前缺少敏感的适合BCoV体外培养的本动物细胞,限制了BCoV致病机制的深入研究。因此,本研究拟从犊牛肺脏组织中分离出牛肺上皮细胞(bovine lung epithelial cell,BLEC)建立BCoV体外感染本动物细胞模型。[方法]采用胰蛋白酶和Ⅰ型胶原蛋白酶两步酶消化法对新生犊牛肺脏组织进行肺上皮细胞初步提取,再利用上皮细胞贴壁时间不同的差异贴壁法纯化BLEC。通过间接免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)检测纯化后细胞中标志细胞角蛋白18(cytokeratin 18,CK-18)的表达来鉴定BLEC,并通过PCR方法对细胞进行病原纯净性检测,包括牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)、牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)、BPIV5、牛传染性鼻气管炎(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)、BCoV和支原体(Mycoplasma)。通过PCR和IFA检测BCoV对BLEC的易感情况,并绘制BCoV在BLEC上的一步生长曲线。[结果]分离纯化培养的BLEC形态均匀稳定、呈菱形或砖块状,无常见病原BRV、BVDV、BPIV3、BPIV5、IBRV、BCoV和支原体污染,上皮细胞标志CK-18呈阳性表达。犊牛腹泻来源的BCoV HLJ-325毒株感染BLEC 24 h后可观察到明显的细胞病变效应(cytopathic effect,CPE);PCR能扩增出BCoV N基因;IFA结果显示,BCoV感染BLEC呈现特异性红色荧光。通过实时荧光定量PCR检测BCoV含量建立病毒生长曲线,BCoV在感染BLEC后20 h时病毒载量最高,为4.46×10^(5)拷贝/mL。[结论]本研究成功分离制备了BLEC,证明BCoV易感染BLEC,构建了BCoV体外感染BLEC模型,为研究BCoV引起牛呼吸道疾病的致病机制奠定基础。 展开更多
关键词 牛冠状病毒(bcov) 牛肺上皮细胞 分离纯化 感染模型
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1株牛源冠状病毒的分离鉴定及遗传进化分析 被引量:1
11
作者 刘文锴 汪萍 +8 位作者 金映红 薛晶 李月 梁纤纤 李晓卓 韩翔舒 郑启铭 蒋松 夏俊 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3100-3108,共9页
【目的】获得新疆地区牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)毒株,探究BCoV体外分离的最佳条件,了解BCoV新疆株的遗传进化情况,为BCoV疫苗候选株提供研究基础。【方法】通过RT-PCR对来自新疆地区7个牛场的腹泻犊牛小肠及其内容物(n=185)... 【目的】获得新疆地区牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)毒株,探究BCoV体外分离的最佳条件,了解BCoV新疆株的遗传进化情况,为BCoV疫苗候选株提供研究基础。【方法】通过RT-PCR对来自新疆地区7个牛场的腹泻犊牛小肠及其内容物(n=185)进行BCoV检测,将阳性样本经过处理后接种HCT-8细胞,通过间接免疫荧光试验(IFA)、Western blotting和透射电镜对分离的病毒进一步鉴定,通过Reed-Muench法测定分离株的半数组织培养感染剂量(TCID50),将分离毒株进行全基因组测序,并对测序结果进行遗传进化分析。【结果】腹泻样品BCoV检出率为64.9%,接种HCT-8细胞后成功分离到1株BCoV,命名为XJ-SHZ-37(GenBank登录号:OR750853);IFA可观察到孵育病毒的细胞有绿色的特异性荧光,而对照组没有;Western blotting检测结果显示,该分离株与BCoV N蛋白多克隆抗体发生特异性反应;透射电镜可观察到呈皇冠状的病毒颗粒;Reed-Muench法测定分离株的TCID50为10-7.9/0.1 mL;基因组测序及遗传进化结果表明,XJ-SHZ-37与从牛中分离到的冠状病毒科冠状病毒属的BCoV分离株ZJNB2106相似性最高。【结论】新疆地区7个牛场有较高的BCoV检出率,成功分离出1株能稳定遗传且能与BCoV N蛋白多克隆抗体特异性结合的分离株,该分离株有较高的病毒滴度,且通过遗传进化关系表明与中国牛源毒株ZJNB2106株进化亲缘关系最近。 展开更多
关键词 牛冠状病毒(bcov) 分离鉴定 全基因测序 遗传进化
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牛病毒性腹泻病毒与冠状病毒混合感染的PCR诊断 被引量:2
12
作者 李云龙 李召英 《中国乳业》 2024年第7期49-53,共5页
[目的]建立1种牛病毒性腹泻病毒(BVDV)与冠状病毒(BCoV)混合感染的PCR诊断方法。[方法]选择山东省某奶牛场内发生BVDV和BCoV混合感染的98头奶牛作为研究对象,采集其粪便和组织脏器,提取病毒基因组RNA,经反转录后,设计引物,进行PCR检测,... [目的]建立1种牛病毒性腹泻病毒(BVDV)与冠状病毒(BCoV)混合感染的PCR诊断方法。[方法]选择山东省某奶牛场内发生BVDV和BCoV混合感染的98头奶牛作为研究对象,采集其粪便和组织脏器,提取病毒基因组RNA,经反转录后,设计引物,进行PCR检测,分析检测情况及特异性、重复性。[结果]BVDV和BCoV混合感染病例40份(40.82%),其中粪便样本33份(40.27%),组织脏器样本7份(43.75%)。BVDV单一感染病例27份(27.55%),其中粪便样本21份(25.61%),组织脏器样本6份(37.50%)。BCoV单一感染病例32份(32.65%),其中粪便样本28份(34.15%),组织脏器样本4份(25.00%)。[结论]本研究中BVDV和BCoV混合感染的PCR诊断方法准确,具有良好的特异性和重复性,为今后临床正确诊断这两种病毒提供参考,也为后续精准科学防控奠定基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 冠状病毒(bcov) PCR 诊断
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牛冠状病毒N蛋白的原核表达及对小鼠免疫原性的初步评价 被引量:1
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作者 蒋倩 闵芳 +7 位作者 马志刚 梁宇萌 陶芯宇 丁晓军 李添庆 钟旗 姚刚 马雪连 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期2540-2548,共9页
牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)可引起新生犊牛腹泻和呼吸道疾病,严重时可导致犊牛死亡,给养牛业造成巨大的经济损失。目前我国尚未有自主研发的针对BCoV的疫苗,导致BCoV流行性高、传播范围广,因此开发具有保护性BCoV的疫苗是当... 牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)可引起新生犊牛腹泻和呼吸道疾病,严重时可导致犊牛死亡,给养牛业造成巨大的经济损失。目前我国尚未有自主研发的针对BCoV的疫苗,导致BCoV流行性高、传播范围广,因此开发具有保护性BCoV的疫苗是当务之急。本研究旨在表达BCoV N蛋白并分析其免疫原性,首先用PCR方法扩增N蛋白基因,构建pET-30a-N重组质粒,表达并纯化N蛋白,再将N蛋白与佐剂配伍免疫小鼠;采用间接ELISA检测小鼠IgG和IgA抗体水平及滴度,利用流式细胞术检测小鼠脾脏T淋巴细胞分群比例以及相关免疫细胞因子的释放情况。结果显示,成功获得BCoV可溶性N蛋白,大小约为55kDa;ELISA检测结果显示,免疫组小鼠血清IgG抗体效价为1∶51200,免疫组小鼠血清IgA抗体效价为1∶3200;流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,免疫组CD4+/CD8+T淋巴细胞亚群比例极显著升高(P<0.01),TNF-α释放显著增多(P<0.05),产生偏向辅助性T细胞增加和TNF-α分泌增多的细胞免疫应答。研究表明,通过原核表达系统能成功实现BCoV N蛋白的可溶性表达,且获得的BCoV N蛋白免疫原性良好,可诱导免疫小鼠产生强烈的体液免疫和细胞免疫反应。为开发安全有效的BCoV亚单位疫苗提供了重要的技术支持。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 N蛋白 亚单位疫苗 小鼠 免疫原性
原文传递
牛冠状病毒BCV-Aks-01新疆南疆株全基因组序列测定及其分子特征分析 被引量:10
14
作者 张婉琪 张迎春 +7 位作者 胡建军 彭安业 王青青 王娜 张莹钰 黄耀杰 崔鑫 雷红 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期583-592,共10页
为掌握牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)BCV-Aks-01新疆南疆株的全基因组序列、分子结构特征及遗传变异情况。本研究以新疆南疆某牛场BCV-Aks-01阳性样本为基础,以GenBank中BCoV参考株设计扩增引物和测序引物,提取样本中病毒核酸,对... 为掌握牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)BCV-Aks-01新疆南疆株的全基因组序列、分子结构特征及遗传变异情况。本研究以新疆南疆某牛场BCV-Aks-01阳性样本为基础,以GenBank中BCoV参考株设计扩增引物和测序引物,提取样本中病毒核酸,对BCV-Aks-01株进行全基因组扩增、测序、构建系统发生树及序列分析。结果表明,BCV-Aks-01新疆南疆株为BCoV,其全基因组长为30 975bp,与GenBank收录的参考株比较,核苷酸同源性高达98.8%,属于β类冠状病毒2a亚类,具有β类冠状病毒共同结构特征。首次获得BCV-Aks-01新疆南疆株全基因组序列并阐明了其基因组分子结构特征。 展开更多
关键词 牛冠状病毒(bcov) BCV-Aks-01全基因组序列 序列分析
原文传递
牛冠状病毒S基因的序列分析及原核表达 被引量:7
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作者 高国强 王梦心 +7 位作者 刘明明 于仁冬 侯喜林 周玉龙 武瑞 张国华 刘琳珊 任德强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第7期1740-1749,共10页
为了解牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)的S基因变异情况并建立ELISA检测方法,本研究对采自不同牛场的新生犊牛腹泻(CD)和成年牛冬痢(WD)腹泻样本提取总RNA,反转录合成cDNA,利用PCR扩增S全基因和S1基因。将S1基因目的片段连接表达载... 为了解牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)的S基因变异情况并建立ELISA检测方法,本研究对采自不同牛场的新生犊牛腹泻(CD)和成年牛冬痢(WD)腹泻样本提取总RNA,反转录合成cDNA,利用PCR扩增S全基因和S1基因。将S1基因目的片段连接表达载体pET-32a(+),并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经PCR、双酶切及测序验证正确后,进行IPTG诱导表达。结果显示,CD与WD分离株S基因核苷酸为98.4%,CD和WD分离株与参考毒株BCoV-ENT株核苷酸同源性最高,分别为98.4%和98.5%,CD分离株与参考毒株SUN5株的同源性最低,为97.5%,WD分离株与FRA/EPI/Caen/2003/13同源性最低,为97.3%。通过比对可知,分离株与已知毒株之间存在较大差异,为疫苗候选毒株筛选提供依据。本试验同时构建了pET-32a-S1表达载体,在0.2mmol/L IPTG诱导5h时,重组菌能在大肠杆菌BL21感受态细胞中产生大量的S1融合蛋白,获得约58ku表达产物。本试验成功表达了S1蛋白,并对BCoV进行了核苷酸进化分析,为疫苗免疫效果评价方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 牛冠状病毒(bcov) S基因 序列分析 原核表达
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内蒙古自治区部分地区规模化牛场牛冠状病毒流行病学调查 被引量:4
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作者 陈柯佳 谢梦圆 +6 位作者 郭宇 尚和卫 常继涛 高登军 张娜 王建龙 徐晓静 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第14期77-81,共5页
为了解内蒙古地区规模化牛场牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)的流行情况,试验分别采用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR... 为了解内蒙古地区规模化牛场牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)的流行情况,试验分别采用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法对2020年采自内蒙古部分地区规模化牛场的500份血液样本的BCoV抗体和580份粪便样本的BCoV抗原进行检测,对不同地区、月龄和季节的BCoV抗体和抗原阳性率进行统计。结果表明:500份血液样本的BCoV抗体总阳性率为48.80%,其中呼和浩特市为51.50%,鄂尔多斯市为48.33%,巴彦淖尔市为45.00%;0~2月龄、3~6月龄、7~18月龄、18月龄以上牛血液样本的BCoV抗体阳性率分别为55.29%、40.00%、35.00%、52.94%;春季、夏季、秋季、冬季牛血液样本的BCoV抗体阳性率分别为67.22%、16.67%、23.75%、52.22%。580份粪便样本的BCoV抗原总阳性率为18.79%,其中呼和浩特市为16.79%,鄂尔多斯市为14.44%,巴彦淖尔市为30.00%;不同月龄牛均存在不同程度的BCoV感染,0~2月龄、3~6月龄、7~18月龄、18月龄以上牛粪便样本的BCoV抗原阳性率分别为34.42%、10.00%、11.76%、8.42%;春季、夏季、秋季、冬季牛粪便样本的BCoV抗原阳性率分别为25.94%、1.67%、15.29%、16.84%。说明内蒙古地区BCoV呈普遍流行趋势,在春季牛更易感染BCoV,0~2月龄牛更易感染BCoV,因此应做好内蒙古地区BCoV的防控工作,并加强对易感牛群BCoV的血清学、病原学监测,实时调整疫病防控措施,减少牛腹泻疾病的发生。 展开更多
关键词 牛冠状病毒(bcov) 酶联免疫吸附测定(ELISA) 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 流行病学调查 内蒙古地区
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2017-2018年山东省奶牛场犊牛腹泻相关病毒病原学检测 被引量:19
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作者 张亮 张云飞 +9 位作者 蒋仁新 任亚初 张淼 楚会萌 解晓莉 程凯慧 杨美 王基隆 孙阳阳 杨宏军 《中国动物检疫》 CAS 2020年第6期16-20,共5页
为了解山东省奶牛养殖场中引起犊牛腹泻相关病毒的流行情况,2017-2018年,在全省13个地区51家规模化奶牛养殖场,采集624份犊牛腹泻病料样品,进行牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛肠道病毒(BEV)、牛冠状病毒(BCo V)和牛轮状病毒(BRV)PCR检测,... 为了解山东省奶牛养殖场中引起犊牛腹泻相关病毒的流行情况,2017-2018年,在全省13个地区51家规模化奶牛养殖场,采集624份犊牛腹泻病料样品,进行牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛肠道病毒(BEV)、牛冠状病毒(BCo V)和牛轮状病毒(BRV)PCR检测,并对检测结果采用SPSS 20.0软件进行数据统计以及显著性差异分析(Pearson卡方检验)。结果显示:BVDV、BEV、BCo V、BRV个体检出率分别为34.58%、11.78%、8.84%、17.70%,群体检出率分别为47.83%、38.89%、35.71%、33.33%,BVDV检出率显著高于其他3种病毒(P<0.01),且有流行加重趋势;鲁西北、鲁中、鲁西南、半岛地区4种病毒的检出率有差异,其中鲁中地区的BVDV检出率明显高于其他地区(P<0.01)。结果表明,BVDV、BEV、BCo V、BRV 4种病原在山东省奶牛场中流行广泛,以BVDV流行最为严重,尤其是鲁中地区,且有流行加重趋势,成为导致奶牛场犊牛腹泻的主要病毒性因素,建议有针对性地开展防控与净化。本检测初步摸清了山东省不同地区引起奶牛犊牛腹泻相关病毒的感染情况,可为山东省制定奶牛腹泻病综合防控措施提供数据支撑。 展开更多
关键词 犊牛腹泻 病原学检测 牛病毒性腹泻病毒 牛肠道病毒 牛冠状病毒 牛轮状病毒
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牛冠状病毒N蛋白抗体库构建与单链抗体筛选 被引量:2
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作者 肖丽荣 李彬 +3 位作者 王家伟 成杰 别鹏飞 史秋梅 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2022年第10期29-34,共6页
为快速筛选获得牛冠状病毒(BCoV)特异性抗体,本试验用重组的牛冠状病毒N蛋白免疫BALB/c小鼠,从免疫小鼠脾细胞中提取总RNA,反转录成cDNA后,分别扩增抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,采用重叠延伸PCR法将VH、VL拼接为完整的单链... 为快速筛选获得牛冠状病毒(BCoV)特异性抗体,本试验用重组的牛冠状病毒N蛋白免疫BALB/c小鼠,从免疫小鼠脾细胞中提取总RNA,反转录成cDNA后,分别扩增抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,采用重叠延伸PCR法将VH、VL拼接为完整的单链抗体(scFv)基因,将scFv基因与酶切的噬菌粒连接,电转入感受态细胞中,过夜培养获得初级噬菌体抗体库,测定库容为8×10^(8)PFU。自库中随机挑取15个单克隆的噬菌体通过PCR鉴定,结果显示其中13个克隆扩增出约800 bp大小的目的片段,阳性率为86.7%,说明噬菌体抗体库构建成功。该抗体库经4轮富集淘选和酶联免疫吸附试验检测,最终获得32株与N蛋白特异性反应的噬菌体克隆。将32株阳性克隆进行PCR鉴定并测序,分析序列后发现有19株阳性单链抗体基因正确,选取阳性值较高的5株阳性单链抗体检测其噬菌体抗体结合活性,其中阳性单链抗体scFv-154与N蛋白的结合活性较高。本试验为进一步探讨单链抗体在牛冠状病毒病诊断和防控技术领域的应用提供了依据。 展开更多
关键词 bcov N蛋白 单链抗体 噬菌体展示
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2020年四川省部分地区腹泻牛群牛冠状病毒感染情况调查 被引量:7
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作者 邓飞 陈弟诗 +6 位作者 陈斌 邵靓 陈冬 周莉媛 李丽 邱明双 丁梦蝶 《中国动物检疫》 2021年第9期13-16,共4页
为了解四川省主要养牛地区腹泻牛群中牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)感染情况,采集眉山、南充、达州、巴中、雅安、甘孜等6个市州53个场户的牛腹泻粪便样品共387份,采用荧光RT-PCR方法进行BCoV检测。结果显示:53个场点中,检出阳... 为了解四川省主要养牛地区腹泻牛群中牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)感染情况,采集眉山、南充、达州、巴中、雅安、甘孜等6个市州53个场户的牛腹泻粪便样品共387份,采用荧光RT-PCR方法进行BCoV检测。结果显示:53个场点中,检出阳性场点11个,群体阳性检出率为20.8%;387份样品中,检出阳性样品65份,个体阳性检出率为16.8%。从群间分布看,规模场群体阳性检出率(72.7%)与个体阳性检出率(21.4%)均高于散养户(7.1%和3.1%),差异均极显著(P<0.01);牦牛个体阳性检出率为28.8%,高于黄牛(14.1%)和奶牛(11.1%),差异均有统计学意义,分别为P<0.01和P<0.05。结果表明,BCoV在四川省已形成一定的污染面,是造成牛腹泻的重要病原之一,需要加强对其流行的综合防控。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 腹泻牛群 流行病学调查 荧光RT-PCR
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牛冠状病毒纳米PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:7
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作者 孙飞雁 李智杰 +6 位作者 魏宇 孙亮 王喜伟 王楠 叶京飞 冯二凯 郭利 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1221-1226,共6页
为了更加快速地检测牛冠状病毒(BCoV),本试验根据BCoV的具有较高保守性的N基因序列设计1对特异性引物,结合纳米金颗粒材料,通过反应条件和体系优化,建立一种新型的快速灵敏的BCoV检测方法,并应用于临床检测。特异性试验与敏感性试验结... 为了更加快速地检测牛冠状病毒(BCoV),本试验根据BCoV的具有较高保守性的N基因序列设计1对特异性引物,结合纳米金颗粒材料,通过反应条件和体系优化,建立一种新型的快速灵敏的BCoV检测方法,并应用于临床检测。特异性试验与敏感性试验结果表明,本试验建立的nano-PCR方法对BCoV特异,与牛轮状病毒(BRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)均无交叉反应。nano-PCR的敏感性是普通PCR的100倍,普通PCR最低核酸检测量为2.24×10^(3)copies/μL,nano-PCR最低核酸检测量为2.24×10^(1)copies/μL。应用所建立的方法对采集的43份腹泻牛的粪拭子、鼻拭子、肺部组织样品进行检测,检出BCoV阳性样品17份,普通PCR检出阳性样品11份,两种方法的符合率为100%。此次建立的nano-PCR在检测牛冠状病毒时具有更高的特异性和敏感性,对临床上的快速诊断及检测具有一定的意义。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 nano-PCR 快速诊断
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