靶向BCMA/CD3的双特异性抗体药物的质量控制研究 被引量：1

1

作者 杜加亮 武刚 +7 位作者 段茂芹 李萌 倪永波 崔永霏 郭璐韵 梅玉婷 王兰 于传飞 《山西医科大学学报》 CAS 2024年第9期1219-1227,共9页

目的 研究并建立靶向B细胞成熟抗原(BCMA)和白细胞分化抗原3(CD3)的双特异性抗体(双抗)药物的关键质量属性(CQA)质量控制方法。方法 从特异性鉴别、纯度、电荷异质性、产品相关杂质、翻译后修饰和生物学活性几个方面对靶向BCMA/CD3的双... 目的 研究并建立靶向B细胞成熟抗原(BCMA)和白细胞分化抗原3(CD3)的双特异性抗体(双抗)药物的关键质量属性(CQA)质量控制方法。方法 从特异性鉴别、纯度、电荷异质性、产品相关杂质、翻译后修饰和生物学活性几个方面对靶向BCMA/CD3的双抗药物开展质量控制研究。采用基于赖氨酰肽链内切酶(Lys-C)酶切和反相高效液相色谱(RP-HPLC)技术的肽图法对靶向BCMA/CD3的双抗药物进行特异性鉴别确认;采用分子排阻色谱法(SEC)和还原/非还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳法(CE-SDS)进行纯度控制;采用离子交换色谱法(IEC)测定电荷异质性和产品相关杂质;采用反相超高效液相色谱(RPUHPLC)和在线质谱联用的多属性监测方法(MAM)监测靶向BCMA/CD3双抗中的翻译后修饰;采用T细胞激活和报告基因法测定该双抗的生物学活性。结果 肽图法检测可有效识别双抗中的关键肽段,起到特异性鉴别确认的作用;SEC和CE-SDS法可有效区分双抗中的主成分、聚体和片段,对有效成分的纯度控制发挥关键作用;IEC法可有效区分酸碱变异体、目标双抗及亲代残留同源二聚体,有利于产品相关杂质的控制;MAM法可检测到天冬氨酸异构化和天冬酰胺脱酰胺化等翻译后修饰的存在,可作为CQA控制的有力补充;T细胞激活结合报告基因法可有效评估该双抗的生物学活性。结论 针对靶向BCMA/CD3的双抗药物的理化和生物学特性,研究并建立了针对其CQA的质量控制方法,从质量可控的角度确保该类双抗产品的临床安全性和有效性。 展开更多

关键词 bcma CD3 双特异性抗体 多发性骨髓瘤 关键质量属性 多属性监测方法

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抗BCMA CAR-T细胞治疗复发难治性AQP4-IgG血清阳性视神经脊髓炎谱系疾病的术后管理

2

作者 陈黛琪 许艳梅 +1 位作者 肖萍 李芳芳 《神经损伤与功能重建》 2024年第11期639-643,共5页

目的:总结11例复发难治性AQP4-IgG血清阳性视神经脊髓炎谱系疾病患者行抗BCMA CAR-T细胞治疗后神经系统症状的管理经验。方法:对11例抗BCMA CAR-T细胞治疗回输后患者行一般护理观察、细胞因子释放综合征、神经系统症状管理、心理护理、... 目的:总结11例复发难治性AQP4-IgG血清阳性视神经脊髓炎谱系疾病患者行抗BCMA CAR-T细胞治疗后神经系统症状的管理经验。方法:对11例抗BCMA CAR-T细胞治疗回输后患者行一般护理观察、细胞因子释放综合征、神经系统症状管理、心理护理、适时康复管理。结果:在中位随访5.5个月(范围1~14个月)期间,11例患者停用所有皮质类固醇和免疫抑制剂后实现无药物缓解均无复发;11例患者报告扩展残疾评定和生活质量的改善。结论:回输后密切观察、早期发现神经系统症状并给予有效管理,减轻患者痛苦,确保抗BCMA CAR-T细胞疗法治疗复发难治性AQP4-IgG血清阳性视神经脊髓炎谱系疾病临床顺利实施。 展开更多

关键词 抗bcma CAR-T细胞疗法 复发难治性AQP4-IgG血清阳性视神经脊髓炎谱系疾病 神经系统症状 护理管理策略

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FDA调查接受靶向BCMA或CD19的自体嵌合抗原受体(CAR)-T细胞免疫治疗后发生T细胞恶性肿瘤的严重风险

3

作者 无 《中国药物警戒》 2024年第1期19-19,共1页

美国食品药品监督管理局(FDA)发布消息,已收到接受靶向BCMA或CD19的自体CAR-T细胞免疫治疗后患者出现T细胞恶性肿瘤(包括嵌合抗原受体CAR阳性淋巴瘤)的报告。这些报告来自临床试验和/或上市后不良事件(AE)。FDA已确定,T细胞恶性肿瘤的... 美国食品药品监督管理局(FDA)发布消息,已收到接受靶向BCMA或CD19的自体CAR-T细胞免疫治疗后患者出现T细胞恶性肿瘤(包括嵌合抗原受体CAR阳性淋巴瘤)的报告。这些报告来自临床试验和/或上市后不良事件(AE)。FDA已确定,T细胞恶性肿瘤的风险适用于目前批准的所有经基因修饰的靶向BCMA和靶向CD19的自体CAR-T细胞免疫疗法。接受过多种同类产品治疗的患者发生了T细胞恶性肿瘤。 展开更多

关键词 T细胞免疫 嵌合抗原受体 CD19 CAR bcma 临床试验 恶性肿瘤 基因修饰

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美国FDA向靶向BCMA或CD19的自体嵌合抗原受体(CAR)-T细胞免疫治疗类产品相关企业发送标签安全性内容变更通知函

4

《中国医药导刊》 2024年第2期148-148,共1页

美国食品药品管理局(FDA)发函要求企业修改靶向BCMA或CD19的自体嵌合抗原受体(CAR)-T细胞免疫治疗类产品标签的安全性内容,增加继发性恶性肿瘤相关风险提示。此类产品标签信息应包含以下内容:1.黑框警告,处方信息要点接受靶向BCMA或CD1... 美国食品药品管理局(FDA)发函要求企业修改靶向BCMA或CD19的自体嵌合抗原受体(CAR)-T细胞免疫治疗类产品标签的安全性内容,增加继发性恶性肿瘤相关风险提示。此类产品标签信息应包含以下内容:1.黑框警告,处方信息要点接受靶向BCMA或CD19的自体CAR-T细胞免疫治疗后出现了T细胞恶性肿瘤。 展开更多

关键词 T细胞免疫 嵌合抗原受体 继发性恶性肿瘤 CD19 CAR bcma 产品标签 靶向

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FDA调查接受靶向BCMA或CD19的自体嵌合抗原受体(CAR)-T细胞免疫治疗后发生T细胞恶性肿瘤的严重风险

5

《中国医药导刊》 2024年第1期76-76,共1页

美国食品药品管理局(FDA)发布消息,已收到接受靶向BCMA或CD19的自体CAR-T细胞免疫治疗后患者出现T细胞恶性肿瘤(包括嵌合抗原受体CAR阳性淋巴瘤)的报告。这些报告来自临床试验和/或上市后不良事件(AE)。

关键词 嵌合抗原受体 T细胞免疫 CD19 CAR 临床试验 bcma 恶性肿瘤 淋巴瘤

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美国FDA向靶向BCMA或CD19的自体嵌合抗原受体(CAR)-T细胞免疫治疗类产品相关企业发送标签安全性内容变更通知函

6

《中国药物警戒》 2024年第3期360-360,共1页

美国食品药品管理局(FDA)发函要求企业修改靶向BCMA或CD19的自体嵌合抗原受体(CAR)-T细胞免疫治疗类产品标签的安全性内容,增加继发性恶性肿瘤相关风险提示。此类产品标签信息应包含以下内容:1.黑框警告,处方信息要点接受靶向BCMA或CD1... 美国食品药品管理局(FDA)发函要求企业修改靶向BCMA或CD19的自体嵌合抗原受体(CAR)-T细胞免疫治疗类产品标签的安全性内容,增加继发性恶性肿瘤相关风险提示。此类产品标签信息应包含以下内容:1.黑框警告,处方信息要点接受靶向BCMA或CD19的自体CAR-T细胞免疫治疗后出现了T细胞恶性肿瘤。2.黑框警告,处方信息接受靶向BCMA或CD19的自体CAR-T细胞免疫治疗后出现了T细胞恶性肿瘤。[见警告与注意事项]3.警告与注意事项-继发性恶性肿瘤,处方信息要点继发性恶性肿瘤:接受靶向BCMA或CD19的自体CAR-T细胞免疫治疗后出现了T细胞恶性肿瘤。 展开更多

关键词 T细胞免疫 继发性恶性肿瘤 嵌合抗原受体 CD19 CAR bcma 产品标签 处方信息

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美国FDA向靶向BCMA或CD19的自体嵌合抗原受体(CAR)-T细胞免疫治疗类产品相关企业发送标签安全性内容变更通知函

7

《中国药物评价》 2024年第1期34-34,共1页

美国食品药品管理局(FDA)发函要求企业修改靶向BCMA或CD19的自体嵌合抗原受体(CAR)-T细胞免疫治疗类产品标签的安全性内容,增加继发性恶性肿瘤相关风险提示。此类产品标签信息应包含以下内容:1.黑框警告,处方信息要点:接受靶向BCMA或CD1... 美国食品药品管理局(FDA)发函要求企业修改靶向BCMA或CD19的自体嵌合抗原受体(CAR)-T细胞免疫治疗类产品标签的安全性内容,增加继发性恶性肿瘤相关风险提示。此类产品标签信息应包含以下内容:1.黑框警告,处方信息要点:接受靶向BCMA或CD19的自体CAR-T细胞免疫治疗后出现了T细胞恶性肿瘤。 展开更多

关键词 T细胞免疫 嵌合抗原受体 继发性恶性肿瘤 CD19 CAR bcma 产品标签 靶向

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靶向BCMA或CD19的CAR-T细胞免疫治疗后发生T细胞恶性肿瘤的风险

8

《中国处方药》 2024年第2期I0001-I0001,共1页

近日,美国食品药品管理局(FDA)发布消息,已收到接受靶向B细胞成熟抗原(BCMA)或抗白细胞分化抗原19(CD19)的自体嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞免疫治疗后出现T细胞恶性肿瘤(包括CAR阳性淋巴瘤)的病例报告。这些报告来自临床试验和/或上市后... 近日,美国食品药品管理局(FDA)发布消息,已收到接受靶向B细胞成熟抗原(BCMA)或抗白细胞分化抗原19(CD19)的自体嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞免疫治疗后出现T细胞恶性肿瘤(包括CAR阳性淋巴瘤)的病例报告。这些报告来自临床试验和/或上市后不良事件(AE)。 展开更多

关键词 细胞免疫治疗 T细胞免疫 嵌合抗原受体 CD19 病例报告 CAR bcma 临床试验

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FDA调查接受靶向BCMA或CD19的自体嵌合抗原受体(CAR)-T细胞免疫治疗后发生T细胞恶性肿瘤的严重风险

9

《中国药物评价》 2024年第1期77-77,共1页

美国食品药品管理局(FDA)发布消息,已收到接受靶向BCMA或CD19的自体CAR-T细胞免疫治疗后患者出现T细胞恶性肿瘤(包括嵌合抗原受体CAR阳性淋巴瘤)的报告。这些报告来自临床试验和/或上市后不良事件(AE)。

关键词 嵌合抗原受体 T细胞免疫 CD19 CAR 临床试验 bcma 恶性肿瘤 淋巴瘤

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基于BCMA突变体构建BCMA CAR-T细胞体外杀伤功能评价模型

10

作者 张小雪 华静涵 +3 位作者 侯睿 刘丹 施明 曹江 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期493-500,共8页

目的:为解决野生型B细胞成熟抗原(BCMA)被γ分泌酶切割导致表达不稳定的问题,构建抵抗γ分泌酶切割的BCMA突变体并构建靶细胞,用于评价BCMA CAR-T细胞的杀伤功能。方法:将野生型BCMA的穿膜域替换为人CD8α穿膜域,构建抵抗γ分泌酶切割的... 目的:为解决野生型B细胞成熟抗原(BCMA)被γ分泌酶切割导致表达不稳定的问题,构建抵抗γ分泌酶切割的BCMA突变体并构建靶细胞,用于评价BCMA CAR-T细胞的杀伤功能。方法:将野生型BCMA的穿膜域替换为人CD8α穿膜域,构建抵抗γ分泌酶切割的BCMA突变体(BCMA-CD8αTM),构建过表达该突变体的U266(U266^(BCMA Mut))、K562(K562^(BCMA Mut))、SKOV3(SKOV3^(BCMA Mut))和CHO(CHO^(BCMA Mut))细胞;构建装载NFAT-EGFP报告基因的BCMA CAR Jurkat细胞(BCMA-CAR-Jurkat-Reporter)与U266^(BCMA Mut)细胞共培养,采用FCM检测该细胞中EGFP表达水平以指示NFAT激活水平,荧光素酶法检测BCMA CAR-T细胞对Luciferase标记的K562^(BCMA Mut)细胞的杀伤作用,实时无标记动态细胞分析技术(RTCA)检测BCMA CAR-T细胞对SKOV3^(BCMA Mut)和CHO^(BCMA Mut)细胞的杀伤作用。结果:应用γ分泌酶抑制剂LY411575抑制γ分泌酶活性,显著增强野生型U266细胞表面BCMA表达水平,平均荧光强度上调10倍以上;但撤除抑制剂后BCMA表达水平逐渐降低(P<0.01);BCMA-CD8αTM突变体可抵抗γ分泌酶的切割作用,在U266细胞表面稳定表达(P>0.05);U266细胞及过表达BCMA-CD8αTM的U266细胞与BCMA-CAR-Jurkat-Reporter细胞共培养后都可激活Reporter系统、增强EGFP表达,但该效应在BCMA-CD8αTM过表达的U266细胞中更显著(P<0.01);BCMA-CD8αTM在BCMA表达阴性的K562、SKOV3和CHO 3种靶细胞中成功过表达,且在LY411575处理下该突变体的表达水平仅有小幅度升高;荧光素酶法检测结果显示,不同效靶比下,BCMA CAR-T细胞均可特异、高效杀伤过表达BCMA-CD8αTM的K562细胞;RTCA结果显示,不同效靶比下,BCMA CAR-T细胞均可有效识别、杀伤过表达BCMACD8αTM的SKOV3和CHO细胞,但同等效靶比下的Mock-T细胞无此效应。结论:本实验构建的BCMA-CD8αTM突变体能够抵抗γ分泌酶的切割,在多种靶细胞表面稳定表达,为评价BCMA CAR-T细胞体外杀伤的有效性和特异性提供多种检测手段。 展开更多

关键词 B细胞成熟抗原 Γ分泌酶 CD8α穿膜域 CAR-T细胞 杀伤功能评价

原文传递

BCMA基因5′上游序列生物信息学分析 被引量：3

11

作者 邓少丽 程小星 +1 位作者 袁涛 夏季 《重庆医学》 CAS CSCD 2008年第3期230-231,共2页

目的对BCMA基因5′上游序列进行生物信息学分析,获取基因调控的相关因素。方法从Genebank获取BCMA基因及其上游序列,利用Transfac 6.0等软件分析转录因子调控信息。结果BCMA基因5′上游序列无典型的TATA和CAAT盒,存在oct-1、cdxA、c-my... 目的对BCMA基因5′上游序列进行生物信息学分析,获取基因调控的相关因素。方法从Genebank获取BCMA基因及其上游序列,利用Transfac 6.0等软件分析转录因子调控信息。结果BCMA基因5′上游序列无典型的TATA和CAAT盒,存在oct-1、cdxA、c-myb等数个高度保守的潜在转录因子结合位点,存在2个可能的转录因子Blimp-1结合序列。结论BC-MA在调控B细胞增殖、分化中可能起着重要作用,转录因子Blimp-1可能调控BCMA基因的表达。 展开更多

关键词 bcma基因 转录因子 生物信息

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计算机辅助设计可溶性BLyS受体,eBCMA-Fc融合蛋白及其在大肠杆菌中的表达(英文) 被引量：2

12

作者 孙剑 冯建男 +2 位作者 林周 黎燕 沈倍奋 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期127-133,共7页

B细胞成熟抗原(BCMA)是B淋巴细胞刺激因子(BLyS)的受体之一.它的胞外区与人IgG1Fc的融合蛋白eBCMA-Fc,又称为诱饵受体,具有拮抗BLyS的活性.为了设计新的拮抗肽,基于BCMA和Fc的晶体结构,通过计算机图形学技术、分子模拟方法,建立了eBCMA... B细胞成熟抗原(BCMA)是B淋巴细胞刺激因子(BLyS)的受体之一.它的胞外区与人IgG1Fc的融合蛋白eBCMA-Fc,又称为诱饵受体,具有拮抗BLyS的活性.为了设计新的拮抗肽,基于BCMA和Fc的晶体结构,通过计算机图形学技术、分子模拟方法,建立了eBCMA-Fc融合蛋白的三维理论结构.利用均方根位移(root mean square distance,RMSD)对eBCMA-Fc融合蛋白与单体eBCMA、Fc构象差异进行分析.融合蛋白eBCMA-Fc中的eBCMA段与单体eBCMA的主链碳原子间RMSD值为0.036nm,Fc段与单体Fc的主链碳原子间RMSD值为0.064nm.结果表明,对比单体,融合蛋白eBCMA-Fc并未因eBCMA与Fc直接连接而发生构象的变化.分子对接方法显示,融合蛋白eBCMA-Fc中的BCMA与BLyS作用,而Fc扮演着稳定BCMA构象的支架作用.为进一步验证上述理论分析,构建eBCMA-Fc融合基因,并将载有eBCMA-Fc融合基因的原核表达质粒转化BL21(DE3)菌、在细菌中表达.目的蛋白经蛋白A亲和柱纯化大约为36kD,与理论预测值34kD相近.免疫印迹表明抗人IgG抗体能够识别eBCMA-Fc融合蛋白.ELISA证实,eBCMA-Fc融合蛋白能够结合BLyS.随着eBCMA-Fc融合蛋白增加,结合BLyS的融合蛋白也相应增加.而对照人IgG,即使在高浓度条件下,也不结合BLyS.此外,eBCMA-Fc融合蛋白能够抑制BLyS对B细胞肿瘤Daudi细胞的作用.这些研究为下一步设计和筛选BLyS拮抗肽提供了实验基础. 展开更多

关键词 B淋巴细胞刺激因子(BLyS) B细胞成熟抗原(bcma) 计算机辅助同源模建 分子对接 自身免疫性疾病

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小鼠BCMA基因启动子活性研究 被引量：1

13

作者 邓少丽 程小星 +1 位作者 蹇锐 蒋静 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期778-780,784,共4页

目的:探索B淋巴细胞成熟抗原(BCMA)基因5′上游序列的启动子活性,为进一步研究BCMA基因的表达调控机制提供实验依据。方法:构建由BCMA基因5′上游-820^+145、-607^+145、-359^+145、-157^+145、-93^+145 5个片段驱动的荧光素酶报告载体p... 目的:探索B淋巴细胞成熟抗原(BCMA)基因5′上游序列的启动子活性,为进一步研究BCMA基因的表达调控机制提供实验依据。方法:构建由BCMA基因5′上游-820^+145、-607^+145、-359^+145、-157^+145、-93^+145 5个片段驱动的荧光素酶报告载体pGL3-B820、pGL3-B607、pGL3-B359、pGL3-B157、pGL3-B93,通过转染J558L、293T、HeLa细胞检测荧光素酶的表达,观察荧光素酶相对活性。结果:5种5′删除体的转录激活性由大到小为pGL3-B157>pGL3-B607>pGL3-B359>pGL3-B93>pGL3-B820。pGL3-B157在3种细胞中的转录激活能力为J558L>HeLa>293T,且在J558L中的转录激活能力明显强于Hela和293T细胞。结论:BCMA基因5′上游序列"-820bp^+145bp"具有启动子活性,核心启动子可能位于-93^+145区域中。 展开更多

关键词 bcma 启动子 报告基因

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BCMA基因5'上游序列定点删除突变对启动子活性的影响

14

作者 邓少丽 程小星 +1 位作者 蹇锐 蒋静 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1014-1016,共3页

目的探索BCMA基因5'上游序列-24～-26位点删除突变对启动子活性的影响,为进一步研究BCMA基因的表达调控机制提供实验依据。方法设计一对突变引物,采用定点删除技术,删除BCMA基因5'上游序列-24～-26位点,电转J558L细胞检测荧光... 目的探索BCMA基因5'上游序列-24～-26位点删除突变对启动子活性的影响,为进一步研究BCMA基因的表达调控机制提供实验依据。方法设计一对突变引物,采用定点删除技术,删除BCMA基因5'上游序列-24～-26位点,电转J558L细胞检测荧光素酶的表达,观察荧光素酶相对活性。结果成功删除BCMA基因-24～-26"AAA",启动子活性明显下降。结论BCMA基因5'上游序列-24～-26位点可能是RNA聚合酶识别的重要位点,也可能为重要转录因子结合位点。 展开更多

关键词 bcma基因 启动子活性 基因突变

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对抗BCMA单链抗体体外亲和力成熟关键位点的模拟

15

作者 王步帆 武正华 +2 位作者 张青 赵亚雪 赵博 《昆明理工大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2020年第4期100-108,共9页

为提高人源化的抗B细胞成熟抗原(B-cell maturation antigen,BCMA)单链抗体(scFv)的亲和力,本研究通过计算机模拟初步探索其体外亲和力成熟的关键位点.首先利用ELISA检测噬菌体表面展示的抗BCMA的亲本单链抗体的结合活性,再通过同源模... 为提高人源化的抗B细胞成熟抗原(B-cell maturation antigen,BCMA)单链抗体(scFv)的亲和力,本研究通过计算机模拟初步探索其体外亲和力成熟的关键位点.首先利用ELISA检测噬菌体表面展示的抗BCMA的亲本单链抗体的结合活性,再通过同源模建搭建抗原-抗体复合三维结构,分析抗原-抗体间的相互作用,保留其互作界面处的关键残基,以增加其相互作用为目标而设计突变体,并利用重叠延伸PCR对scFv进行定点突变以构建突变体质粒,最后通过ELISA初步检测突变体的结合活性.结果显示:噬菌体表面展示的抗BCMA的亲本scFv具有结合抗原BCMA的活性,抗原-抗体间的非键相互作用主要为氢键和疏水相互作用,为增加抗原-抗体静电相互作用而设计了3株突变体,但根据ELISA检测结果显示静电相互作用并不是决定scFv和BCMA结合的关键因素,通过创造额外的静电作用,未能明显提高scFv的亲和力.通过计算机模拟构建了抗原-抗体复合物结构模型,确定了其亲和力成熟中应保留的关键位点,并发现静电作用并不是决定scFv与抗原亲和力的关键作用,推测氢键或其他作用力可能对亲和力的提高作用更大,为后续通过引入氢键等其他设计以提高抗体亲和力奠定了基础. 展开更多

关键词 抗bcma单链抗体 计算机辅助设计 体外亲和成熟 噬菌体展示

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BCMA-Fc-Myc融合蛋白的构建、表达及活性鉴定

16

作者 朱燕锋 柴林 +1 位作者 臧梦存 孙剑 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期24-28,共5页

目的:旨在可溶性BAFF受体末端加上myc标签,构建BCMA-Fc-myc,用于竞争ELISA分析BAFF拮抗肽-Fc同BCMA-Fc-myc与BAFF的竞争性结合能力。方法:通过PCR法获得BCMA-Fc-Myc基因,进而构建重组子pET28a-BCMA-Fc-Myc,转入E.coli BL21(DE3)中进行... 目的:旨在可溶性BAFF受体末端加上myc标签,构建BCMA-Fc-myc,用于竞争ELISA分析BAFF拮抗肽-Fc同BCMA-Fc-myc与BAFF的竞争性结合能力。方法:通过PCR法获得BCMA-Fc-Myc基因,进而构建重组子pET28a-BCMA-Fc-Myc,转入E.coli BL21(DE3)中进行融合蛋白的表达。采用蛋白A凝胶亲和柱进行纯化以及ELISA法检测其生物活性。结果:成功获得了BCMA-Fc-Myc重组基因和pET28a-BCMA-Fc-Myc重组子。并表达和纯化得该融合蛋白,且其能够与BAFF特异性结合。结合活力呈现剂量依赖性,浓度50ng/μl时,两者的吸附达饱和。结论:此研究表达的BCMA-Fc-Myc融合蛋白具有结合BAFF的生物活性,可作为其他融合蛋白竞争性ELISA的对照蛋白,为用于筛选BAFF拮抗肽的竞争ELISA实验平台。 展开更多

关键词 BAFF bcma—Fc—Myc融合蛋白 构建 表达

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B细胞成熟抗原BCMA在细胞内诱导NF-κB的活化 被引量：1

17

作者 杨敏 刘娜 Adrian T.TING 《第四军医大学学报》 北大核心 2003年第19期1729-1732,共4页

目的 :研究细胞表面B细胞成熟抗原 (B cellmatu rationantigen ,BCMA)在B细胞激活因子刺激下 ,对转录因子NF κB是否具有激活作用 .方法 :采用电转移基因转染和卤化钙基因转染方法 ,将BCMA和C末端缺失 80个氨基酸残基的BCMA基因 (BCMAΔ... 目的 :研究细胞表面B细胞成熟抗原 (B cellmatu rationantigen ,BCMA)在B细胞激活因子刺激下 ,对转录因子NF κB是否具有激活作用 .方法 :采用电转移基因转染和卤化钙基因转染方法 ,将BCMA和C末端缺失 80个氨基酸残基的BCMA基因 (BCMAΔC80 )分别转染 3T8细胞及kbgfp细胞 ,观察与NF κB启动子下游的报告基因表达水平的变化 .结果 :BCMA在 3T8细胞中经BAFF激活后可上调报告质粒中CD14基因的表达 ,而C末端缺失 80个氨基酸残基的突变BCMA(BCMAΔC80 )则不具备此功能 .同时在另一报告细胞系kbgfp中亦观察到类似作用 .结论 :细胞表面的BCMA在被B细胞激活因子刺激后 ,可引起NF κB的活化 ,这一作用依赖于BCMA的C末端的 80个氨基酸残基 . 展开更多

关键词 B细胞成熟抗原 NF-ΚB 转录因子

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NSG小鼠多发性骨髓瘤模型评价BCMA-CAR-T的药效和毒性及RNAscop在检测CAR-T分布中的应用 被引量：1

18

作者 荣斌 吴纯启 +6 位作者 原野 尹纪业 瞿文生 李晓旭 范丹 贺小琼 王全军 《药物评价研究》 CAS 2019年第5期822-827,共6页

目的选择合适的小鼠模型,评价以B细胞成熟抗原为靶点的嵌合抗原受体T细胞(BCMA-CAR-T)治疗产品的抗多发性骨髓瘤作用及毒性,探讨RNAscope在CAR-T治疗中的应用。方法在免疫缺陷严重的NSG小鼠中建立MM. 1s-luc多发性骨髓瘤模型,随机分为... 目的选择合适的小鼠模型,评价以B细胞成熟抗原为靶点的嵌合抗原受体T细胞(BCMA-CAR-T)治疗产品的抗多发性骨髓瘤作用及毒性,探讨RNAscope在CAR-T治疗中的应用。方法在免疫缺陷严重的NSG小鼠中建立MM. 1s-luc多发性骨髓瘤模型,随机分为细胞外液组(每只小鼠100μL PBS缓冲液)、MOCK-T组(未转染的T细胞,剂量为100μL)和CAR-T低、中、高剂量组(分别每只计数1×10~6、5×10~6、10×10~6个CAR-T,每只一次性尾iv 100μL细胞悬液)。采用活体成像技术检测CAR-T治疗肿瘤的消退效果;酶联免疫吸附实验检测血浆中γ-干扰素(IFN-γ)水平;观察小鼠一般状态、体温、体质量;治疗后14 d对小鼠进行解剖和采样,利用RNAscope技术检测CAR-T在小鼠组织的特异性分布。结果成功建立了多发性骨髓瘤NSG小鼠移植肿瘤模型;在输注BCMA-CAR-T后3、7、12 d,生物发光成像显示,CAR-T组小鼠平均光子强度显著低于细胞外液、MOCK-T组(P<0.05),中、高剂量组的治疗效果明显高于低剂量组(P<0.05);CAR-T组的IFN-γ分泌水平显著高于细胞外液、MOCK-T组(P<0.05);记录CAR-T治疗组小鼠的一般情况,未见明显不良反应;RNAscope检测到CAR-T在输注14 d后少量特异性分布于骨髓和脾脏。结论本研究验证了BCMA-CAR-T抗多发性骨髓瘤药效明显,安全可靠,RNAscop技术可应用于CAR-T分布检测。 展开更多

关键词 bcma-CAR-T 多发性骨髓瘤 生物发光成像 药效 毒性 RNAscope γ-干扰素

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BCMA CAR-T细胞调节骨髓瘤长期免疫应答的研究进展

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作者 曾子安 周玉生 +1 位作者 匡双玉 徐晓芳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1543-1548,共6页

多发性骨髓瘤是一种异质性的血液肿瘤疾病,在骨髓微环境中,浆细胞恶性增殖导致的肿瘤免疫逃逸和累积的基因组畸变推动了疾病的进展,进展中损伤的免疫功能易使疾病复发。然而,近年来靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的嵌合抗原受体T细胞疗法使骨... 多发性骨髓瘤是一种异质性的血液肿瘤疾病,在骨髓微环境中,浆细胞恶性增殖导致的肿瘤免疫逃逸和累积的基因组畸变推动了疾病的进展,进展中损伤的免疫功能易使疾病复发。然而,近年来靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的嵌合抗原受体T细胞疗法使骨髓瘤症状产生持久且深度的缓解,复发/难治性骨髓瘤的治疗取得了突破性进步。因此,本文综述了BCMA CAR-T治疗复发/难治性骨髓瘤的最新研究进展,为进一步恢复患者抗肿瘤免疫能力及形成长期免疫应答提供参考。 展开更多

关键词 bcma 嵌合抗原受体T细胞 复发/难治性骨髓瘤 免疫应答

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抗人BCMA抗体的人源化设计及其体外活性鉴定

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作者 刘若琦 范冬梅 +3 位作者 雷晓敏 卢杨 袁向飞 熊梦裳 《生命的化学》 CAS 2022年第4期788-796,共9页

BCMA高特异地表达于多发性骨髓瘤细胞表面,是多发性骨髓瘤的理想治疗靶点。为了降低鼠源抗体的人抗鼠抗体反应,使其在临床得到更好的应用,本文基于鼠源抗人BCMA抗体序列,获得了靶向人BCMA的人源化抗体,并在体外验证人源化是否影响该抗... BCMA高特异地表达于多发性骨髓瘤细胞表面,是多发性骨髓瘤的理想治疗靶点。为了降低鼠源抗体的人抗鼠抗体反应,使其在临床得到更好的应用,本文基于鼠源抗人BCMA抗体序列,获得了靶向人BCMA的人源化抗体,并在体外验证人源化是否影响该抗体的亲和性和特异性。本文将抗人BCMA抗体69G8的可变区序列与人源抗体序列库进行比对,确定人源化抗体模板。利用Discovery Studio软件对抗人BCMA抗体69G8进行人源化设计,获得人源化抗体h69G8,随后利用293T真核表达系统对人源化前后的69G8进行scFv形式的表达并进行亲和力测定。人源化的69G8全抗被合成出来后,对其进行亲和常数、内化特性以及结合特异性等方面的比较,发现其亲和力等特性并无改变。在此基础上,对人源化全抗进行合成,结果亦证明其保留了鼠源抗体的高亲和力、高特异性以及内化特性。本实验对鼠源抗人BCMA抗体69G8进行了人源化,人源化不影响其体外结合活性和亲和力,为69G8未来在临床更好地应用打下了基础。 展开更多

关键词 bcma 多发性骨髓瘤 抗体人源化 亲和力

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