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水牛BCL2L10基因的克隆、序列分析及其在卵母细胞中的表达
1
作者 王焕景 赵秀玲 +2 位作者 濮黎萍 张鹏飞 张明 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期550-556,共7页
本研究克隆了水牛BCL2-like 10(BCL2L10)基因序列,并用生物信息学技术分析了该序列的同源性、系统进化树、蛋白的理化性质以及高级结构。同时利用免疫荧光染色的方法检测了BCL2L10蛋白在水牛卵母细胞成熟前后的表达情况。结果表明,应用R... 本研究克隆了水牛BCL2-like 10(BCL2L10)基因序列,并用生物信息学技术分析了该序列的同源性、系统进化树、蛋白的理化性质以及高级结构。同时利用免疫荧光染色的方法检测了BCL2L10蛋白在水牛卵母细胞成熟前后的表达情况。结果表明,应用RT-PCR技术克隆得到的水牛BCL2L10基因序列全长600 bp,其中编码区长度为558 bp,共编码185个氨基酸。对该序列进行对比分析发现,水牛BCL2L10基因的核苷酸序列与野牛、牛、绵羊、小鼠、大鼠、野猪的同源性分别为99%、98%、96%、84%、81%、75%。生物进化树分析显示,水牛BCL2L10基因与牦牛、野牛的亲缘关系最近。生物信息学分析得到BCL2L10蛋白的分子量为21.6 k D,理论等电点为9.54。功能结构域预测显示BCL2L10蛋白属于BCL-2家族成员,参与细胞凋亡调控过程。免疫荧光染色结果发现,BCL2L10蛋白在水牛卵母细胞成熟过程中均有表达。 展开更多
关键词 水牛 bcl2l10 序列分析 表达模式
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急性髓系白血病BCL2L10基因启动子区异常甲基化定量研究 被引量：3
2
作者 杜传清 毛平 +1 位作者 王艳茹 羊乃康 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第20期3397-3400,共4页
目的:定量研究急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)中BCL2L10基因启动子区异常甲基化状态,探讨其与AML的临床关系。方法:应用焦磷酸测序法,对62例原发AML患者的骨髓进行BCL2L10基因启动区甲基化水平的定量检测,并以10例缺铁性... 目的:定量研究急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)中BCL2L10基因启动子区异常甲基化状态,探讨其与AML的临床关系。方法:应用焦磷酸测序法,对62例原发AML患者的骨髓进行BCL2L10基因启动区甲基化水平的定量检测,并以10例缺铁性贫血和巨幼细胞性贫血的骨髓标本及10例健康人外周血标本作为对照。结果:62例AML中32例标本BCL2L10基因启动区高甲基化,阳性率为51.6%,而20例对照组中1例标本BCL2L10基因启动区高甲基化,阳性率为5.0%;BCL2L10基因在AML患者中的高甲基化阳性率显著高于对照组(P<0.01);BCL2L10基因的甲基化状态与AML患者的年龄、性别及临床分型间均未出现显著相关性(P>0.05)。结论:BCL2L10基因启动子区异常甲基化在AML中普遍存在,其可能是引起AML的分子机制之一。 展开更多
关键词 白血病 DNA甲基化 bcl2l10基因 焦磷酸测序
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BCL2L10基因表达及其启动子甲基化在骨髓增生异常综合征中的临床意义 被引量：1
3
作者 及月茹 刘利 +4 位作者 严学倩 李国辉 陈怡 张阳萍 秦炜炜 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第17期1687-1692,共6页
目的探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者骨髓细胞中BCL2L10的表达及其启动子甲基化状态的临床意义。方法采用real-time PCR方法对56例MDS患者(MDS组)以及30例非白血病患者(非白血病对照组)骨髓标本的BCL2L10基... 目的探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者骨髓细胞中BCL2L10的表达及其启动子甲基化状态的临床意义。方法采用real-time PCR方法对56例MDS患者(MDS组)以及30例非白血病患者(非白血病对照组)骨髓标本的BCL2L10基因表达水平进行定量检测,MDS患者按修正的国际预后积分系统(IPSS-R评分)分为低/中危MDS组(IPSS-R评分≤4.5,33例)和高危MDS组(IPSS-R评分>4.5,23例)。采用甲基化特性PCR分析BCL2L10基因启动子区甲基化状态,同时在临床MDS样本和GEPIA数据库中对比分析BCL2L10表达水平与疾病预后的关系。结果MDS组患者BCL2L10基因表达水平较非白血病对照组显著降低(P<0.05),高危MDS组患者骨髓标本中BCL2L10基因表达水平显著低于非白血病对照组和低/中危MDS组(P<0.05)。BCL2L10基因表达水平受甲基化调控,高危MDS组患者BCL2L10基因启动子区甲基化阳性率(56.52%)明显高于非白血病对照组(36.67%,P<0.05)及低/中危MDS组(30.30%,P<0.05);且BCL2L10基因启动子区甲基化状态与MDS患者的危险度分层密切相关(χ~2=5.79,P<0.05),而与年龄、性别无统计学差异(P>0.05)。在24例未予以甲基化药物治疗的患者中,BCL2L10高表达组患者3年生存率低于BCL2L10低表达组(83.3%vs 50.0%),采用GEPIA数据库对BCL2L10在急性髓系白血病中进行预后比较,同样发现低表达组的预后较高表达组差,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论BCL2L10基因表达水平及其甲基化状态可作为判断MDS预后的指标之一。 展开更多
关键词 bcl2l10基因 甲基化 骨髓增生异常综合征 预后
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地西他滨对胃癌SGC7901细胞系BCL2L10基因表达及其生物学特性的影响
4
作者 孔秀敏 王晓兰 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期296-299,共4页
目的：观察抗肿瘤新药地西他滨对胃癌细胞系SGC7901中抗凋亡基因BCL2L10启动子甲基化及基因表达的影响，探讨其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法：用浓度为5、10μmol／L的地西他滨处理胃癌细胞SGC7901，应用甲基化特异性PCR检测BCL2L1... 目的：观察抗肿瘤新药地西他滨对胃癌细胞系SGC7901中抗凋亡基因BCL2L10启动子甲基化及基因表达的影响，探讨其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法：用浓度为5、10μmol／L的地西他滨处理胃癌细胞SGC7901，应用甲基化特异性PCR检测BCL2L10基因启动子甲基化状况，应用免疫印迹检测BCL2L10蛋白表达，MTS法检测细胞增殖情况，annexin V-FITC／PI双染检测细胞凋亡，siRNA干扰BCL2L10表达以探讨地西他滨可能的作用机制。结果：SGC7901细胞中BCL2L10基因以启动子甲基化方式失活，地西他滨呈剂量依赖方式逆转其甲基化程度，恢复基因表达，同时可见细胞增殖受到抑制，凋亡比例增加，而干扰BCL2L10可对抗地西他滨的抗肿瘤效应。结论：地西他滨可通过逆转胃癌SGC7901细胞系BCL2L10启动子甲基化而恢复其表达，表现出抗肿瘤活性，具有潜在的临床应用价值。 展开更多
关键词 胃癌 地西他滨 BL2L10 甲基化 凋亡
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基于CRISPR文库筛选调控结肠癌恶性表型的基因及其功能验证
5
作者 赵雨璐 杨嘉禾 +3 位作者 杨方媛 戴烨阳 陈程 褚晓源 《肿瘤研究与临床》 2026年第1期53-61,共9页
目的基于CRISPR文库筛选调控结肠癌恶性表型的基因,并进行功能验证。方法对结肠癌细胞株SW480进行CRISPR全基因组文库(Brunello文库)病毒大规模感染(感染复数为0.3),筛选、扩增后,收取2.3×107(×300覆盖度)细胞作为T0对照组;... 目的基于CRISPR文库筛选调控结肠癌恶性表型的基因,并进行功能验证。方法对结肠癌细胞株SW480进行CRISPR全基因组文库(Brunello文库)病毒大规模感染(感染复数为0.3),筛选、扩增后,收取2.3×107(×300覆盖度)细胞作为T0对照组;剩余细胞接种至裸鼠右侧腹股沟皮下,6周后取皮下肿瘤提取基因组DNA,与T0对照组细胞一同进行单链向导RNA(sgRNA)测序;以基因的对应差异显著性大小(RRA分数)<0.001为依据,获得阳性筛选基因和阴性筛选基因;对差异基因进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。通过癌症基因组图谱(TCGA)(更新时间2023年9月)和基因表达综合(GEO)(更新时间2014年5月)数据库GSE44076数据集中数据分析BCL2L10 mRNA在结肠癌组织与癌旁正常结肠组织中的差异表达情况。利用预后在线网站(https://kmplot.com/analysis/)分析BCL2L10表达与临床预后相关性。通过DNMIVD甲基化在线数据库和MethMarkerDB数据库分析BCL2L10在结肠癌与正常结肠组织中的甲基化水平。收集2023年1月至2024年2月南京大学医学院附属金陵医院行手术治疗的17例结肠癌患者的肿瘤组织及癌旁正常结肠组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测组织BCL2L10 mRNA的表达水平。取处于对数生长期的结肠癌HCT8和HCT116细胞,分别转染阴性对照序列(siNC组)和siBCL2L10干扰序列(siBCL2L10组)。采用CCK-8法、EdU染色法检测各组细胞增殖能力,Transwell法检测细胞迁移能力,蛋白质印迹法检测细胞相关凋亡蛋白cleaved-PAPR和cleaved-caspase-3的表达。另以二甲基亚砜(DMSO)(对照组)或2、5μmol/L 5-氮杂胞苷(5-Aza)处理HCT8和HCT116细胞。结果根据RRA分数<0.001,共筛选出39个阳性筛选基因和265个阴性筛选基因;对排名前10位的阳性筛选基因进行在线数据库的表达、预后分析以及文献查阅,选择BCL2L10进行后续实验。KEGG富集分析结果显示,阳性筛选基因与黏多糖合成、PI3K-Akt信号通路等相关;阴性筛选基因与黏着斑、干细胞多能性、O-聚糖生物合成等相关。利用TCGA和GEO数据库中数据分析结果显示,BCL2L10 mRNA在结肠癌组织中的相对表达水平均低于癌旁正常结肠组织(均P<0.001)。qRT-PCR检测结果显示,17对配对结肠癌组织标本BCL2L10 mRNA相对表达量为0.13±0.10,低于癌旁正常结肠组织(0.26±0.14),差异有统计学意义(t=2.34,P=0.033)。预后数据库分析结果显示,BCL2L10低表达组患者无复发生存(RFS)较高表达组差(P=0.010)。利用DNMIVD甲基化数据库和MethMarkerDB数据库分析结果显示,BCL2L10在肿瘤组织中甲基化水平高于正常结肠组织,且表达水平和甲基化水平呈负相关(均P<0.05)。2、5μmol/L 5-Aza处理组HCT116、HCT8细胞的BCL2L10 mRNA相对表达量均高于相应对照组(均P<0.001)。qRT-PCR检测结果显示,siBCL2L10组HCT116、HCT8细胞BCL2L10 mRNA相对表达量均低于对应的siNC组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。CCK-8法、EdU染色法检测结果显示,siBCL2L10组HCT116、HCT8细胞增殖能力均高于相应对照组(均P<0.05)。Transwell法结果显示,siBCL2L10组HCT116细胞[(287±29)个比(194±31)个,t=4.309,P=0.016]及HCT8细胞[(389±21)个比(231±16)个,t=11.59,P<0.001]48 h迁移细胞数均多于相应对照组。蛋白质印迹法检测结果显示,siBCL2L10组细胞中凋亡蛋白cleaved-PAPR和cleaved-caspase-3的表达均低于相应对照组。结论基于CRISPR文库筛选出的BCL2L10在结肠癌组织中表达下调,并与患者预后相关。敲低BCL2L10表达在体外可促进结肠癌细胞增殖和迁移。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 基因 bcl-2 CRISPR-Cas9系统 bcl2l10
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