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BCKDK通过激活Wnt/β-catenin信号通路调控子宫内膜癌细胞的增殖与凋亡
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作者 黄丽 龚豪 +1 位作者 胡珊 龚坤雪 《中南医学科学杂志》 2026年第1期39-43,90,共6页
目的探究支链α-酮酸脱氢酶激酶(BCKDK)基于Wnt/β-catenin信号通路对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的影响。方法采用实时定量PCR和Western blotting法分别检测子宫内膜癌组织与癌旁组织、正常人子宫内膜上皮细胞以及子宫内膜癌细胞系HEC-1-... 目的探究支链α-酮酸脱氢酶激酶(BCKDK)基于Wnt/β-catenin信号通路对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的影响。方法采用实时定量PCR和Western blotting法分别检测子宫内膜癌组织与癌旁组织、正常人子宫内膜上皮细胞以及子宫内膜癌细胞系HEC-1-A和Ishikawa中BCKDK的表达水平。通过慢病毒感染技术构建BCKDK低表达的子宫内膜癌细胞模型,并采用CCK-8法分析细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting法检测CyclinD1、CDK2、caspase-3、caspase-9、Wnt3a及β-catenin等蛋白表达水平。进一步在BCKDK低表达细胞中加入Wnt/β-catenin信号通路激活剂LiCl,观察其对BCKDK抑制所引起的细胞增殖和凋亡的影响。结果子宫内膜癌组织BCKDK mRNA表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。不同分化程度、临床分期及淋巴结转移的子宫内膜癌组织中BCKDK mRNA水平比较,差异有显著性(P<0.05)。与正常人子宫内膜上皮细胞相比,HEC-1-A和Ishikawa两种子宫内膜癌细胞系中BCKDK蛋白及mRNA表达均明显上调(P<0.05)。与阴性对照组相比,shBCKDK组的BCKDK蛋白和mRNA表达、细胞活力、CyclinD1与CDK2蛋白表达、Wnt3a和β-catenin蛋白表达均显著降低,细胞凋亡率、caspase-3和caspase-9蛋白表达则显著升高;而在加入LiCl激活Wnt/β-catenin通路后,shBCKDK+LiCl组的上述所有指标变化均较shBCKDK组出现显著逆转(P<0.05)。结论BCKDK在子宫内膜癌细胞表达异常升高,下调BCKDK表达可抑制HEC-1-A、Ishikawa细胞增殖,并促进其凋亡,其机制可能与调节Wnt/β-catenin信号通路有关。 展开更多
关键词 bckdk 子宫内膜癌 细胞增殖 细胞凋亡 WNT/Β-CATENIN信号通路
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儿茶酚胺释放对心肌BCKDK表达的影响及其机制研究 被引量：1
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作者 李越洋 熊振宇 +4 位作者 常盼 张玲 闫文俊 张富洋 陶凌 《心脏杂志》 CAS 2020年第3期221-227,233,共8页
目的探究在缺血、高血压、心衰等疾病条件下儿茶酚胺释放对心肌细胞中支链酮酸脱氢酶激酶(BCKDK)的表达影响及其作用机制。方法使用异丙肾上腺素(ISO)腹腔注射模拟小鼠心脏儿茶酚胺导致的心肌病变模型。小鼠分为对照(Vehicle)组和ISO注... 目的探究在缺血、高血压、心衰等疾病条件下儿茶酚胺释放对心肌细胞中支链酮酸脱氢酶激酶(BCKDK)的表达影响及其作用机制。方法使用异丙肾上腺素(ISO)腹腔注射模拟小鼠心脏儿茶酚胺导致的心肌病变模型。小鼠分为对照(Vehicle)组和ISO注射(ISO)组。分别使用ISO、过氧化氢(H2O2)、鱼藤酮(rotenone)和抗霉素(antimycin)A模拟多种病理刺激处理心肌细胞。使用Western blot检测BCKDK、含有NHL重复序列蛋白(NHLRC)1和热休克蛋白(Hsp)70蛋白水平表达;实时荧光定量PCR检测BCKDK mRNA水平表达;免疫荧光检测BCKDK、NHLRC1和Hsp70的细胞内定位;免疫共沉淀探究蛋白-蛋白相互作用和BCKDK泛素化水平。结果与Con组相比,ISO处理显著增加BCKDK蛋白水平(P<0.01),而mRNA水平无显著差异,BCKDK与NHLRC1的结合降低且泛素化水平降低。而过表达NHLRC1上调BCKDK泛素化水平并降低其蛋白表达。与ISO组相比,Hsp70敲低能完全逆转ISO诱导的BCKDK升高和泛素化降低逆转ISO诱导的支链氨基酸(BCAA)代谢紊乱(P<0.01)。结论ISO暴露通过诱导Hsp70与BCKDK结合竞争性抑制NHLRC1介导的BCKDK泛素化,从而导致BCKDK的上调和心肌细胞中BCAA分解代谢紊乱。 展开更多
关键词 支链酮酸脱氢酶激酶 支链氨基酸 异丙肾上腺素 NHLRC1 热休克蛋白70
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