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基于Fc段工程化改造效应功能的抗体药物研究进展
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作者 向丽 鲁澄宇 《广东医科大学学报》 2026年第1期109-118,共10页
随着生物技术的发展,抗体药物在疾病治疗中发挥着关键作用,而野生型抗体难以满足临床各种疾病的治疗需要。IgG类抗体因其在血清中的高占比而备受关注,其独特的Y型结构使其具有抗原结合与生物活性介导的双重功能,Fc段(Fragment crystalli... 随着生物技术的发展,抗体药物在疾病治疗中发挥着关键作用,而野生型抗体难以满足临床各种疾病的治疗需要。IgG类抗体因其在血清中的高占比而备受关注,其独特的Y型结构使其具有抗原结合与生物活性介导的双重功能,Fc段(Fragment crystallizable)在其中扮演着极其重要的角色。基于此,Fc段的工程化改造成为抗体药物设计与开发的关键研究方向。本文聚焦于IgG类抗体Fc区域,阐述其在抗体药物中的关键作用机制,包括与Fcγ受体及新生儿Fc受体的相互作用对免疫效应和半衰期的影响,详细介绍了Fc区域改造的多种策略,如氨基酸突变和糖基化修饰,并分别探讨了这些策略对抗体效应功能的增强或减弱作用,以及对抗体半衰期的影响。通过对不同改造类型生物活性功能的比较,举例说明Fc段改造在抗体药物开发中的研究成果,展望未来进一步探索Fc区域改造的可能性,为抗体药物的研发提供思路与启示。 展开更多
关键词 抗体 fc区域 fc工程化改造 效应功能 半衰期
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凝结海恩德里克斯氏菌BC07对盐酸洛哌丁胺诱导小鼠便秘的缓解作用
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作者 孔素芬 朱明明 +1 位作者 朱建国 方曙光 《食品工业科技》 北大核心 2026年第4期435-442,共8页
目的:研究凝结海恩德里克斯氏菌BC07对盐酸洛哌丁胺诱导小鼠便秘的影响。方法:将30只小鼠随机分为对照组(NC)、模型组(MC)、BC07组,每组10只,NC组和MC组灌胃生理盐水,BC07组灌胃凝结海恩德里克斯氏菌BC07菌液,持续14 d。第15~17 d使用... 目的:研究凝结海恩德里克斯氏菌BC07对盐酸洛哌丁胺诱导小鼠便秘的影响。方法:将30只小鼠随机分为对照组(NC)、模型组(MC)、BC07组,每组10只,NC组和MC组灌胃生理盐水,BC07组灌胃凝结海恩德里克斯氏菌BC07菌液,持续14 d。第15~17 d使用盐酸洛哌丁胺造模,观察小鼠首粒黑便排出时间及肠转运情况,收集小鼠粪便,血清,盲肠和结肠样本。结果:摄入凝结海恩德里克斯氏菌BC07能够显著增加便秘小鼠的粪便水分含量(P<0.05),缩短小鼠首粒黑便排出时间(P<0.05),促进小肠的推进率;同时还能有效调节便秘小鼠胃动素(Motilin,MTL)、血管活性肠肽(Vasoactive intestinal peptide,VIP)、P物质(Substance P,SP)、生长抑素(Somatostatin,SS)的浓度,并能降低小鼠血清中细胞促炎因子IL-6和TNF-α的含量,提高抗炎因子IL-10的水平;此外,补充凝结海恩德里克斯氏菌BC07后,能有效调节便秘小鼠的肠道菌群结构,增加小鼠肠道有益菌群的相对丰度,显著降低有害菌群的相对丰度(P<0.05)。结论:凝结海恩德里克斯氏菌BC07具有提高粪便水分含量、减轻排便困难的作用,推测可能通过调节胃肠肽递质、改善肠道菌群结构、促进肠道蠕动来缓解便秘。 展开更多
关键词 凝结海恩德里克斯氏菌bc07 便秘 调节
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适用于箭载测量系统的FC-AE-1553总线混合重传机制
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作者 郭冲 李硕 +3 位作者 王报华 王昕 邓世件 徐天慧 《遥测遥控》 2026年第1期142-147,共6页
FC-AE-1553(光纤通道航空电子环境1553协议)总线已逐步应用于运载火箭测量系统,相比于1553B、RS422等总线接口,具有多节点、高带宽、低延时、传输介质轻质化、抗电磁干扰等技术特征,可实现箭地数据传输总线的升级换代。本文以FC-AE-155... FC-AE-1553(光纤通道航空电子环境1553协议)总线已逐步应用于运载火箭测量系统,相比于1553B、RS422等总线接口,具有多节点、高带宽、低延时、传输介质轻质化、抗电磁干扰等技术特征,可实现箭地数据传输总线的升级换代。本文以FC-AE-1553总线在箭载测量系统中的应用为背景,提出了一种基于超时重传与集中重传的混合数据重传机制。其主要思想是针对时间触发网络宝贵的时隙资源,优化重传时隙分配策略,提高重传时隙利用率,进而提高网络负载能力。仿真结果表明:采用基于超时重传与集中重传的混合重传机制,可以提高总线通信不畅时的关键遥测数据获取比例以及时隙利用率。 展开更多
关键词 运载火箭 测量系统 fc-AE-1553 重传机制 时隙利用率
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AChR-Fc融合蛋白靶向BCR选择性识别、清除AChR反应性B细胞 被引量:2
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作者 常婷 林宏 +1 位作者 刘煜 李柱一 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 北大核心 2012年第1期17-21,共5页
目的研究乙酰胆碱受体(AChR)-Fc融合蛋白选择性识别、清除AChR反应性B细胞的作用。方法克隆人AChRα1亚单位胞外段基因(Hα1-210),插入含有CMV启动子、小鼠Kappa链先导序列以及人IgG1从铰链区到CH3基因片段的真核表达载体pAN1782中,构... 目的研究乙酰胆碱受体(AChR)-Fc融合蛋白选择性识别、清除AChR反应性B细胞的作用。方法克隆人AChRα1亚单位胞外段基因(Hα1-210),插入含有CMV启动子、小鼠Kappa链先导序列以及人IgG1从铰链区到CH3基因片段的真核表达载体pAN1782中,构建重组表达载体pAN-Hα1-210,表达AChR-Fc融合蛋白;同分泌乙酰胆碱受体抗体(AChRAb)的杂交瘤细胞TIB175共孵育,采用流式细胞仪观察、分析AChR-Fc融合蛋白同杂交瘤细胞的亲和力以及对杂交瘤细胞增殖和凋亡的影响。结果成功构建真核表达载体pAN-Hα1-210,在CHO-K1细胞中稳定表达具有一定生物活性的AChR-Fc融合蛋白;AChR-Fc融合蛋白对TIB175细胞具有较高的亲和力,可特异性抑制该细胞的增殖并促进其凋亡。结论 AChR-Fc融合蛋白可特异性识别、清除AChR反应性B细胞,为进一步靶向B细胞治疗重症肌无力奠定基础。 展开更多
关键词 重症肌无力 融合蛋白 靶向治疗 自身反应性B细胞 fcγRⅡB
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牛IgG Fc受体Ⅱ结合IgG1的Fc线性结合表位鉴定
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作者 李青梅 杨继飞 +4 位作者 赵东 邢云瑞 范璐 郭军庆 张改平 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第5期1026-1035,共10页
旨在鉴定牛IgG Fc受体Ⅱ(boFcγRⅡ)上的IgG1 Fc线性结合表位,解析IgG-Fcγ相互作用的分子基础。构建稳定表达boFcγRⅡ转染细胞,在COS-7细胞表面表达boFcγRⅡ分子,利用NS0细胞分泌表达boFcγRⅡ胞外区,以镍亲和层析从小鼠腹水中纯化b... 旨在鉴定牛IgG Fc受体Ⅱ(boFcγRⅡ)上的IgG1 Fc线性结合表位,解析IgG-Fcγ相互作用的分子基础。构建稳定表达boFcγRⅡ转染细胞,在COS-7细胞表面表达boFcγRⅡ分子,利用NS0细胞分泌表达boFcγRⅡ胞外区,以镍亲和层析从小鼠腹水中纯化boFcγRⅡ重组蛋白。设计合成boFcγRⅡ膜远端胞外域(EC2)多肽,与IgG-free牛血清白蛋白(BSA)偶联,以Dot-blot检测牛IgG1与偶联多肽的结合能力,进一步对IgG结合多肽进行截短和突变分析,鉴定Fc结合表位及其关键氨基酸残基;通过竞争ELISA和玫瑰花环抑制试验测定Fc结合多肽对牛IgG1结合的抑制作用。结果显示,boFcγRⅡ分子在COS-7转染细胞表面稳定表达,其IgG1-RBC玫瑰花环形成率达90%左右;可溶性boFcγRⅡ重组蛋白特异结合牛IgG1。^(122)FYQDRKSKIF^(131)为boFcγRⅡ特异结合牛IgG1的最短多肽,为boFcγRⅡ的Fc线性结合表位,位于受体EC2结构域C-C′环;以Ala分别替换线性表位Phe^(122)、Tyr^(123)、Arg^(126)、Lys^(127)、Ser^(128)、Lys^(129)或Phe^(131)残基均导致该Fc结合表位多肽丧失结合牛IgG的活性,表明这些残基为boFcγRⅡFc线性结合表位的关键氨基酸。Fc结合表位多肽显著抑制牛IgG1与可溶性boFcγRⅡ重组蛋白的结合,其半数抑制浓度(IC_(50))为20.05μmol/L;并有效抑制牛IgG1致敏红细胞在boFcγRⅡ转染细胞的玫瑰花环形成,其IC_(50)为80.15μmol/L。结果表明,boFcγRⅡ存在Fc结合的线性结合表位,该表位多肽具有调节细胞表面boFcγRⅡ与牛IgG1相互作用的能力,为深入理解boFcγRⅡ-IgG相互作用奠定了基础。 展开更多
关键词 牛IgG fc受体 fc结合表位 牛IgG1 合成多肽 玫瑰花环抑制
原文传递
猪氨基肽酶N受体结合区Fc融合表达及其病毒结合活性分析
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作者 郭宏伟 刘妍 +4 位作者 赵绪永 龚婷 马辉 刘薇 郑鸣 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第9期44-52,共9页
为了探究猪氨基肽酶N(pAPN)病毒结合受体功能区域与传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的结合活性,本试验采用重叠延伸聚合酶链式反应(SOE-PCR)技术将pAPN胞外区分为5段并与Fc片段融合,构建酵母分泌表达载体pPICZαA-pAPN... 为了探究猪氨基肽酶N(pAPN)病毒结合受体功能区域与传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的结合活性,本试验采用重叠延伸聚合酶链式反应(SOE-PCR)技术将pAPN胞外区分为5段并与Fc片段融合,构建酵母分泌表达载体pPICZαA-pAPN-Fc进行融合表达,在分子和细胞水平对比分析5个Fc融合蛋白与PEDV和TGEV结合能力及对病毒核衣壳蛋白(N)基因mRNA转录和复制的影响,筛选潜在病毒结合受体功能关键区。结果显示,pAPN1-Fc、pAPN_(2)-Fc、pAPN_(3)-Fc、pAPN_(4)-Fc和pAPN_(5)-Fc共5个融合片段均可在毕赤酵母X33中高效分泌表达,并可与pAPN兔多克隆抗体特异性结合。PEDV和TGEV结合活性酶联免疫吸附试验(ELISA)分析结果显示,pAPN_(2)-Fc、pAPN_(3)-Fc、pAPN_(4)-Fc、pAPN_(5)-Fc融合蛋白具有不同程度的PEDV和TGEV结合活性,且同种融合蛋白与TGEV的结合能力高于PEDV,其中pAPN_(2)(574~678aa)和pAPN_(3)(669~773aa)区域与病毒的结合能力较强。实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)和免疫荧光共聚焦试验结果显示,融合蛋白pAPN_(2)和pAPN_(3)-Fc抑制PEDV和TGEV N基因mRNA转录和复制的能力较强。结果表明,pAPN胞外区域574~773aa可同时结合PEDV和TGEV,并能抑制病毒N基因mRNA转录和复制能力,pAPN 574~773aa可能是PEDV和TGEV结合受体的共同关键区域。本试验结果可为PEDV和TGEV的感染机制研究及抗病毒药物设计提供理论依据。 展开更多
关键词 猪氨基肽酶N 肠道冠状病毒 fc融合表达 病毒结合活性
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BLyS受体TACI、BCMA与人IgG1 Fc融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达与鉴定 被引量:6
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作者 田瑞阳 黄玉辉 +6 位作者 陈悦 韩威 俞缨 刘惠 翁忠辉 杨胜利 龚毅 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第3期401-407,共7页
从人肝脏和肾脏cDNA文库中扩增了人IgG1Fc与B淋巴细胞刺激因子 (BLyS)的受体TACI及BCMA的胞外编码区 ,构建了TACI Fc及BCMA Fc融合表达质粒pSec1 Fc TACI与 pSec1 Fc BCMA ,并使用电穿孔法转染COS 7细胞 ,从 1L无血清培养上清中可纯... 从人肝脏和肾脏cDNA文库中扩增了人IgG1Fc与B淋巴细胞刺激因子 (BLyS)的受体TACI及BCMA的胞外编码区 ,构建了TACI Fc及BCMA Fc融合表达质粒pSec1 Fc TACI与 pSec1 Fc BCMA ,并使用电穿孔法转染COS 7细胞 ,从 1L无血清培养上清中可纯化得到分泌表达的TACI Fc与BCMA Fc融合蛋白约 2mg。为获得TACI Fc与BCMA Fc的稳定来源 ,构建了TACI Fc与BCMA Fc的CHO稳定表达细胞株。免疫沉淀和ELISA结果显示 ,TACI Fc及BCMA Fc能特异性地结合其配体BLyS而不与BLyS同家族的TNF结合。TACI Fc及BCMA 展开更多
关键词 融合蛋白 哺乳动物细胞 表达 鉴定 肝脏 肾脏 CDNA
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加氢裂化催化剂FC-86与FC-76的工业应用效果对比 被引量:1
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作者 李世伟 《石油炼制与化工》 北大核心 2025年第3期32-37,共6页
FC-86催化剂在某石化企业加氢裂化装置上成功进行了工业应用。FC-86催化剂采用新型混捏技术制备,高效DMY分子筛的创制和低成本氧化铝的应用简化了制备操作单元,提高了L酸酸量、降低了堆密度。对比FC-86催化剂与FC-76催化剂的加氢裂化性... FC-86催化剂在某石化企业加氢裂化装置上成功进行了工业应用。FC-86催化剂采用新型混捏技术制备,高效DMY分子筛的创制和低成本氧化铝的应用简化了制备操作单元,提高了L酸酸量、降低了堆密度。对比FC-86催化剂与FC-76催化剂的加氢裂化性能发现:在二者加氢裂化性能相近的前提下,与FC-76催化剂使用周期相比,使用FC-86催化剂的重石脑油收率增加0.62百分点,喷气燃料收率下降0.43百分点,柴油收率保持相当,催化剂装填量下降3.29 t;同时,重石脑油芳烃潜含量下降0.95百分点,柴油十六烷指数提高2.1,喷气燃料烟点提高4.1 mm,尾油质量基本相当。这说明,FC-86催化剂的应用可以有效降低催化剂成本和装填量,具有较好应用效果。 展开更多
关键词 加氢裂化 DMY分子筛 fc-86催化剂 工业应用
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带iTNC530数控系统的BC型双转台五轴机床的后处理构造技术研究
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作者 孙文 郭磊磊 +1 位作者 朱新波 田衡 《机床与液压》 北大核心 2025年第16期70-75,共6页
以BC型双转台五轴机床为研究对象,构造该机床的后处理。建立BC型双转台五轴机床模型,对该机床的结构及运动学关系进行分析,在此基础上构造BC型双转台五轴机床的后处理通用算法。介绍HEIDENHAIN iTNC530数控系统常用的两种倾斜面加工代... 以BC型双转台五轴机床为研究对象,构造该机床的后处理。建立BC型双转台五轴机床模型,对该机床的结构及运动学关系进行分析,在此基础上构造BC型双转台五轴机床的后处理通用算法。介绍HEIDENHAIN iTNC530数控系统常用的两种倾斜面加工代码格式和两种五轴联动加工代码格式,对刀位源文件进行分析,利用后处理开发平台完成后处理器的构造。最后,以叶轮为加工对象,编制叶轮加工的刀具路径,通过将刀具路径后处理为数控程序,采用数控加工仿真软件对后处理后的程序进行仿真,验证该后处理算法的可行性。结果表明:基于BC型双转台五轴机床建立的运动学关系模型可精准描述各部件运动特性,所开发的通用后处理算法能够适配HEIDENHAIN iTNC530系统的倾斜面加工与五轴联动加工模式;通过叶轮加工仿真及验证,证明了该后处理构造正确可行,为同类机床后处理开发提供了参考。 展开更多
关键词 bc型双转台五轴机床 HEIDENHAIN iTNC530数控系统 后处理
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大豆皂苷Bc对伪狂犬病病毒体外复制影响的研究 被引量:2
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作者 高柯欣 李艳华 +5 位作者 张艳禾 汤艳东 安同庆 蔡雪辉 周双海 王淑杰 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第6期545-552,共8页
为研究大豆皂苷Bc(SS-Bc)对伪狂犬病病毒(PRV)复制的影响,本研究采用CCK-8法测定SS-Bc对Vero E6细胞的半数细胞毒性浓度(CC_(50))为253.6μg/m L,同时测定了SS-Bc对PRV的半数抑制浓度(IC_(50))为21.61μg/m L。根据上述结果,将不同浓度... 为研究大豆皂苷Bc(SS-Bc)对伪狂犬病病毒(PRV)复制的影响,本研究采用CCK-8法测定SS-Bc对Vero E6细胞的半数细胞毒性浓度(CC_(50))为253.6μg/m L,同时测定了SS-Bc对PRV的半数抑制浓度(IC_(50))为21.61μg/m L。根据上述结果,将不同浓度的SS-Bc(15μg/mL、30μg/mL、60μg/mL)与PRV-GFP(MOI 0.01)共处理Vero E6细胞,通过倒置荧光显微镜观察含绿色荧光的细胞数量,结合Image J软件分析荧光强度,并采用Reed-Muech法测定细胞上清中的病毒滴度(TCID_(50));进一步采用不同浓度的SS-Bc(30μg/mL、60μg/mL)分别与不同MOI的PRV-GFP(MOI0.05、MOI 0.1及MOI 0.5)共处理Vero E6细胞,24 h后检测上述指标。结果显示,与阳性对照组相比,SS-Bc处理组细胞的相对荧光强度值和细胞上清中病毒的TCID_(50)均极显著降低(P<0.01),且对病毒的抑制作用呈剂量依赖性,60μg/mL时效果最佳;即使在较高MOI PRV感染下,SS-Bc仍极显著抑制该病毒的增殖(P<0.01)。为了确定SS-Bc的最佳给药方式,本实验于PRV-GFP(MOI 0.01)感染后不同时间,以SS-Bc(60μg/mL)处理Vero E6细胞24 h后检测上述指标。结果显示,所有药物处理组的CPE数量、相对荧光强度值和细胞上清中病毒的TCID_(50)均极显著低于阳性对照组(P<0.01),其中PRV感染后1 h和3 h给药时抑制病毒增殖的效果更佳。进一步体外模拟病毒感染各阶段,将SSBc(60μg/mL)与PRV-GFP(MOI 0.1和1)以不同方式处理后接种Vero E6细胞,采用荧光定量PCR(qPCR)检测病毒吸附、内化及复制阶段gB基因mRNA的相对转录水平,在释放阶段测定细胞上清中病毒的TCID_(50),分析SS-Bc对PRV感染的影响。结果显示SS-Bc在PRV的吸附和复制阶段均显著降低了gB基因mRNA的转录水平(P<0.05),但SS-Bc在病毒的内化和释放阶段均无显著影响。综上所述,本研究首次证实SS-Bc在体外能够显著抑制PRV的增殖,主要作用于病毒的吸附和复制阶段;且无论在病毒接种前、同时或接种后给药,SS-Bc均表现出良好的抗病毒效果,其中在病毒进入细胞后给药效果更佳。本研究为SS-Bc作为潜在的抗PRV药物提供了科学依据,并为SS-Bc的进一步研究和临床应用奠定了基础。 展开更多
关键词 大豆皂苷bc 伪狂犬病病毒 抗病毒
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基于FPGA的高带宽FCS计算设计与实现
11
作者 李治辉 许芮铭 《无线互联科技》 2025年第10期102-105,共4页
文章深入探讨了基于现场可编程门阵列(Field-Programmable Gate Array,FPGA)实现高带宽帧校验序列(Frame Check Sequence,FCS)计算方法。阐述了高带宽FCS计算在现代高速数据通信系统中的关键意义,详细介绍了基于FPGA的实现方案,涵盖循... 文章深入探讨了基于现场可编程门阵列(Field-Programmable Gate Array,FPGA)实现高带宽帧校验序列(Frame Check Sequence,FCS)计算方法。阐述了高带宽FCS计算在现代高速数据通信系统中的关键意义,详细介绍了基于FPGA的实现方案,涵盖循环冗余校验-32(Cyclic Redundancy Check-32,CRC-32)计算算法优化、硬件架构设计以及实现验证等环节。通过实验验证,该方法显著提升了FCS计算带宽,能有效满足高速数据传输场景下对数据完整性校验的严苛要求。 展开更多
关键词 FPGA 高带宽 fcS计算 CRC-32 数据通信
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肝细胞癌组织中FOXF1、FCRL5表达及与患者临床病理特征和预后的关系
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作者 周林 向世春 +1 位作者 鲜成萼 张铁泉 《肝胆外科杂志》 2025年第2期149-154,共6页
目的分析肝细胞癌(HCC)组织中叉头盒F1(FOXF1)、Fc受体样5(FCRL5)表达及与患者临床病理特征和预后的关系。方法选择2019年1月至2021年12月本院收治的HCC患者80例,根据患者的预后情况将患者分为生存组和死亡组。采用免疫组化法检测癌组... 目的分析肝细胞癌(HCC)组织中叉头盒F1(FOXF1)、Fc受体样5(FCRL5)表达及与患者临床病理特征和预后的关系。方法选择2019年1月至2021年12月本院收治的HCC患者80例,根据患者的预后情况将患者分为生存组和死亡组。采用免疫组化法检测癌组织与癌旁组织中FOXF1、FCRL5表达;Spearman分析HCC癌组织中FOXF1、FCRL5的相关性;HCC癌组织FOXF1、FCRL5表达与预后的关系采用Kaplan-Meier生存曲线完成;预后不良的影影响因素采用COX回归完成。结果癌组织的FOXF1、FCRL5阳性表达率较高(P<0.05);Spearman分析显示,HCC患者癌组织中FOXF1、FCRL5呈正相关;癌组织FOXF1、FCRL5阳性表达患者肿瘤数目、分化程度、TNM分期、肿瘤最大直径与阴性表达患者比较差异显著(P<0.05);死亡组FOXF1、FCRL5阳性表达率均高于生存组(P<0.05);Kaplan-Meier生存曲线显示,FOXF1、FCRL5阳性表达患者3年生存率均低于阴性表达患者(P<0.05);多因素COX回归分析显示,TNM分期、FOXF1、FCRL5表达是HCC患者预后不良的影响因素(P<0.05)。结论在HCC癌组织中FOXF1、FCRL5呈现高表达,且两个指标均与临床病理特征和预后密切相关。 展开更多
关键词 肝细胞癌 叉头盒F1 fc受体样5 临床病理特征 预后
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BCMA-Fc-Myc融合蛋白的构建、表达及活性鉴定
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作者 朱燕锋 柴林 +1 位作者 臧梦存 孙剑 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期24-28,共5页
目的:旨在可溶性BAFF受体末端加上myc标签,构建BCMA-Fc-myc,用于竞争ELISA分析BAFF拮抗肽-Fc同BCMA-Fc-myc与BAFF的竞争性结合能力。方法:通过PCR法获得BCMA-Fc-Myc基因,进而构建重组子pET28a-BCMA-Fc-Myc,转入E.coli BL21(DE3)中进行... 目的:旨在可溶性BAFF受体末端加上myc标签,构建BCMA-Fc-myc,用于竞争ELISA分析BAFF拮抗肽-Fc同BCMA-Fc-myc与BAFF的竞争性结合能力。方法:通过PCR法获得BCMA-Fc-Myc基因,进而构建重组子pET28a-BCMA-Fc-Myc,转入E.coli BL21(DE3)中进行融合蛋白的表达。采用蛋白A凝胶亲和柱进行纯化以及ELISA法检测其生物活性。结果:成功获得了BCMA-Fc-Myc重组基因和pET28a-BCMA-Fc-Myc重组子。并表达和纯化得该融合蛋白,且其能够与BAFF特异性结合。结合活力呈现剂量依赖性,浓度50ng/μl时,两者的吸附达饱和。结论:此研究表达的BCMA-Fc-Myc融合蛋白具有结合BAFF的生物活性,可作为其他融合蛋白竞争性ELISA的对照蛋白,为用于筛选BAFF拮抗肽的竞争ELISA实验平台。 展开更多
关键词 BAFF bcMA—fc—Myc融合蛋白 构建 表达
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凝结芽孢杆菌BC30冻干保护剂的筛选及其对菌粉消化耐受性的影响 被引量:3
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作者 刘俊杰 陈宁宁 +5 位作者 徐玉娟 吴继军 余元善 彭健 邹波 李璐 《食品工业科技》 北大核心 2025年第12期154-164,共11页
为了提升凝结芽孢杆菌BC30(Bacillus coagulans BC30)冻干粉的活菌数和消化耐受性,通过单因素实验和响应面试验优化了凝结芽孢杆菌BC30复合冻干保护剂配比,探究了最佳复合冻干保护剂对凝结芽孢杆菌BC30的保护作用,并通过模拟体外消化揭... 为了提升凝结芽孢杆菌BC30(Bacillus coagulans BC30)冻干粉的活菌数和消化耐受性,通过单因素实验和响应面试验优化了凝结芽孢杆菌BC30复合冻干保护剂配比,探究了最佳复合冻干保护剂对凝结芽孢杆菌BC30的保护作用,并通过模拟体外消化揭示了最佳复合冻干保护剂对菌粉消化耐受性的影响规律。研究结果表明,当保护剂中脱脂乳粉、低聚果糖和谷氨酸钠分别为9.6%、10.9%和5.1%时,获得的凝结芽孢杆菌BC30冻干粉存活率和活菌数最高,分别为91.43%和1.60×10^(11)CFU/g,较优化前分别提高了51.43%和1.29倍。扫描电镜结果表明,添加最佳复合冻干保护剂的凝结芽孢杆菌BC30菌粉表面光滑,被保护剂完全覆盖。添加最佳复合冻干保护剂菌粉的乳酸脱氢酶(LDH)、胞外半乳糖苷酶(β-GAL)和Na^(+)-K^(+)-ATP酶活性与添加单一冻干保护剂菌粉存在显著差异,但其与未冻干菌体的酶活性类似,说明添加最佳复合冻干保护剂的凝结芽孢杆菌BC30细胞膜结构和功能维持较好,这一点在细胞的敏感性测试和细胞膜流动性分析中也得到证实。体外模拟消化后,添加最佳复合冻干保护剂的凝结芽孢杆菌BC30的存活率为95.41%,是未添加组的1.34倍。以上结果表明最佳复合冻干保护剂通过对细胞膜的保护作用来减少冷冻干燥对凝结芽孢杆菌BC30一些关键酶的损伤,进而提高了凝结芽孢杆菌BC30的冻干存活率和消化耐受性,为高活性高耐受性凝结芽孢杆菌BC30菌粉的制备提供了理论依据。 展开更多
关键词 凝结芽孢杆菌bc30 冷冻干燥保护剂 保护作用 体外消化 存活率
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IgG4亚型Fc突变体的构建及其对血液半衰期的影响 被引量:1
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作者 郭勋 谢惠君 张元 《生物工程学报》 北大核心 2025年第8期3143-3154,共12页
本研究旨在构建一系列IgG4(immunoglobulin G4)亚型的Fc(fragment crystallizable)重组蛋白突变体,筛选出血液半衰期显著提高的Fc突变体,分析基因突变位点与半衰期的关系,为IgG4亚型的抗体及Fc融合蛋白药物的开发提供理论依据。选取9个... 本研究旨在构建一系列IgG4(immunoglobulin G4)亚型的Fc(fragment crystallizable)重组蛋白突变体,筛选出血液半衰期显著提高的Fc突变体,分析基因突变位点与半衰期的关系,为IgG4亚型的抗体及Fc融合蛋白药物的开发提供理论依据。选取9个基因突变位点进行突变,并将不同的突变位点进行组合,通过分子克隆及点突变技术构建不同的突变子表达质粒pET24b-Fc。将以上质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),通过蛋白表达技术成功表达了具有不同突变的Fc重组蛋白,其中Fc2和Fc3突变体重组蛋白产量略低,其他突变体蛋白的表达未受影响;通过体外细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、钙黄绿素乙酰氧基甲酯/碘化丙啶(calcein acetoxymethyl ester/propidium iodide,calcein AM/PI)试剂盒及体内酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测不同Fc突变体的毒性,结果表明突变后的重组蛋白Fc具有良好的生物相容性和安全性。最后,利用荧光标记Fc突变体,通过体内实验探究不同突变对血液半衰期的影响,成功筛选出血液半衰期显著提高的Fc5突变体。本研究为IgG4亚型的抗体及Fc融合蛋白药物的优化设计提供了理论依据与实践基础。 展开更多
关键词 IGG4 fc突变体 半衰期 点突变 抗体 融合蛋白
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六味地黄丸通过FcγRⅡB/c-Src通路干预自噬防治阿尔茨海默病的分子机制 被引量:2
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作者 侯文晓 司蕊豪 +4 位作者 刘羽茜 朱仲康 殷正达 王旭 赵丹玉 《世界科学技术-中医药现代化》 北大核心 2025年第3期724-738,共15页
目的 研究六味地黄丸对SAMP8小鼠及Aβ刺激的BV2细胞模型自噬水平的影响及其机制,探讨补肾填精法通过干预自噬防治阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的分子机制。方法 取10只7月龄雄性抗老化小鼠(SAMR1)作为正常组,40只7月龄雄性... 目的 研究六味地黄丸对SAMP8小鼠及Aβ刺激的BV2细胞模型自噬水平的影响及其机制,探讨补肾填精法通过干预自噬防治阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的分子机制。方法 取10只7月龄雄性抗老化小鼠(SAMR1)作为正常组,40只7月龄雄性快速老化小鼠(SAMP8)随机均分成模型组,六味地黄丸低、中、高剂量组,每组10只。六味地黄丸低、中、高剂量组分别给予0.59、1.18、2.36 g·kg-1六味地黄丸浓缩液,正常组和模型组给予等体积生理盐水,每日灌胃2次,连续灌胃给药4周。免疫荧光检测各组小鼠海马中Aβ表达水平;Western blot检测各组小鼠海马中FcγRⅡB、SHP-1、c-Src的表达水平;培养BV2细胞并构建Fcγ受体Ⅱ-b(FcγRⅡB)过表达载体;用5μmol·L-1Aβ1-42处理BV2细胞建立AD状态细胞模型,制备六味地黄丸含药血清。细胞分为NC组,Aβ1-42组,空白血清组,含药血清组,Vector组,FcγRⅡB OE组,含药血清+FcγRⅡB OE组;免疫荧光检测各组细胞中Aβ蛋白的表达水平;Western blot检测各组细胞中p62、LC3Ⅱ/Ⅰ、FcγRⅡB、SHP-1、c-Src的表达水平。结果 与正常组相比较,模型组小鼠海马Aβ、FcγRⅡB、SHP-1、c-Src表达水平明显增高(P<0.01),与模型组相比较,六味地黄丸低、中、高剂量组Aβ、FcγRⅡB、SHP-1、c-Src表达水平明显下降(P<0.01),且表现出明显的剂量依赖关系;与NC组相比较,Aβ1-42组细胞Aβ、p62、FcγRⅡB、SHP-1、c-Src蛋白表达显著升高(P<0.01),LC3Ⅱ/Ⅰ显著降低(P<0.01);与Aβ1-42组和空白血清组相比,含药血清组Aβ、p62、FcγRⅡB、SHP-1、c-Src蛋白表达明显降低(P<0.01),LC3Ⅱ/Ⅰ明显升高(P<0.01);与NC组和Vector组相比较,FcγRⅡB OE组Aβ表达升高,p62、FcγRⅡB、SHP-1、c-Src蛋白表达明显升高(P<0.01),LC3Ⅱ/Ⅰ明显降低(P<0.01);与含药血清组相比较,含药血清+FcγRⅡB OE组Aβ、p62、FcγRⅡB、SHP-1、c-Src蛋白表达明显升高(P<0.01),LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论六味地黄丸通过抑制小胶质细胞FcγRⅡB/c-Src通路,提高自噬水平,改善AD。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 六味地黄丸 fcγRⅡB C-SRC 自噬
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不同贮藏温度对凝结芽孢杆菌BC30冻干菌粉稳定性的影响 被引量:1
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作者 刘俊杰 陈宁宁 +4 位作者 徐玉娟 吴继军 余元善 彭健 李璐 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第14期131-138,共8页
该研究通过分析3种不同贮藏温度对凝结芽孢杆菌BC30冻干菌粉存活率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性、β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-GAL)活性、Na^(+)-K^(+)-ATP酶活性、外观和生长能力的影响,揭示了贮藏温度对凝结... 该研究通过分析3种不同贮藏温度对凝结芽孢杆菌BC30冻干菌粉存活率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性、β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-GAL)活性、Na^(+)-K^(+)-ATP酶活性、外观和生长能力的影响,揭示了贮藏温度对凝结芽孢杆菌BC30冻干菌粉稳定性的影响规律。研究结果表明,贮藏于-20℃的菌粉凝结芽孢杆菌BC30存活率远高于其他组,且其外观与未贮藏组最为相似。随着贮藏温度的升高和贮藏时间的延长,冻干菌粉中凝结芽孢杆菌BC30存活率呈下降趋势。此外,贮藏过程中冻干菌粉的凝结芽孢杆菌BC30的LDH和Na^(+)-K^(+)-ATP活力呈逐渐下降趋势,而其凝结芽孢杆菌BC30的胞外β-GAL活力呈逐渐升高趋势。贮藏45 d后,贮藏于-20℃菌粉的凝结芽孢杆菌BC30存活率达82.43%,而贮藏于25℃菌粉的凝结芽孢杆菌BC30存活率仅有33.11%。贮藏于-20℃菌粉的LDH活力、Na^(+)-K^(+)-ATP活力和生长能力也远高于其他2组,同时其胞外β-GAL活力低于其他2组。相关性分析结果也表明凝结芽孢杆菌BC30冻干菌粉适宜用较低的温度进行贮藏,能够较好保留菌粉的活菌数、酶活性、外观形态和活力,研究结果为凝结芽孢杆菌BC30冻干菌粉的贮藏提供理论依据。 展开更多
关键词 凝结芽孢杆菌bc30 冻干菌粉 贮藏温度 存活率 酶活性 相关性分析
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传染性支气管炎病毒S1蛋白中和表位-Fc融合蛋白的表达及免疫原性鉴定
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作者 郭森 李慧昕 +2 位作者 韩宗玺 孙军峰 夏长友 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第11期5758-5769,共12页
为构建禽传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白的免疫原,本研究通过比对已公布的S1中和表位和当前我国流行的GI-19型代表毒株ck/CH/LDL/091022(LDL091022)S1蛋白氨基酸序列,鉴定第22—100和410—492位氨基酸区域为中和表位优势区,分别命名为B1... 为构建禽传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白的免疫原,本研究通过比对已公布的S1中和表位和当前我国流行的GI-19型代表毒株ck/CH/LDL/091022(LDL091022)S1蛋白氨基酸序列,鉴定第22—100和410—492位氨基酸区域为中和表位优势区,分别命名为B1和B2。构建表达LDL091022 B1和B2的质粒以及在C端融合鸡IgY Fc片段的质粒,通过Western blot和IFA检测发现融合IgY Fc片段后能够显著提高蛋白的表达量。转染Expi 293F细胞表达并纯化获得了融合IgY Fc片段的重组蛋白B1-Fc和B2-Fc。通过Western blot和ELISA鉴定B1-Fc和B2-Fc与LDL091022血清的反应性,结果发现B2-Fc与血清的反应性明显优于B1-Fc。将质粒pCAGGS-B2-Fc和重组蛋白B2-Fc免疫SPF鸡,通过ELISA和IFA检测血清中的抗体水平,结果显示B2-Fc加强免疫后能够有效诱导针对B2表位的抗体,且IFA结果显示血清能与LDL091022-S1蛋白和B2-Fc发生特异性反应。进一步利用中和试验检测血清中和效价为16。上述结果表明,本研究制备的IBV S1蛋白中和表位-Fc融合蛋白具有良好的表达水平和免疫原性,能够诱导机体产生一定水平的中和抗体,为进一步研发新型IBV亚单位疫苗提供了借鉴。 展开更多
关键词 禽传染性支气管炎病毒 S1亚基 中和表位 IgY fc片段 免疫原性
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LV-23BC催化剂在渣油FCC装置上的应用 被引量:1
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作者 范威林 《工业催化》 CAS 2002年第3期18-20,共3页
本文介绍了LV 2 3BC催化剂在庆化炼油厂Ⅱ套催化裂化装置上工业应用情况及使用效果。结果表明 ,LV 2 3BC具有良好的抗金属污染及渣油裂化能力、焦炭选择性和液化气选择性较高、催化剂单耗低、稳定性好等特点。
关键词 fcC装置 LV-23bc 渣油裂化 催化剂 工业应用
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BC02佐剂增强老年小鼠水痘带状疱疹病毒gE蛋白特异性免疫应答研究
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作者 李军丽 李效池 +4 位作者 都伟欣 魏家正 苏城 沈小兵 赵爱华 《中国病原生物学杂志》 北大核心 2025年第11期1393-1397,共5页
目的 评估BC02佐剂配伍gE蛋白在老年小鼠模型中的免疫效性能,为优化老年群体带状疱疹疫苗设计提供实验依据。方法 将青年(6~8周龄)和老年(13月龄)BALB/c小鼠随机分为PBS组、gE+AS01B组和gE+BC02组(n=6/组),间隔4周,经大腿肌肉注射免疫2... 目的 评估BC02佐剂配伍gE蛋白在老年小鼠模型中的免疫效性能,为优化老年群体带状疱疹疫苗设计提供实验依据。方法 将青年(6~8周龄)和老年(13月龄)BALB/c小鼠随机分为PBS组、gE+AS01B组和gE+BC02组(n=6/组),间隔4周,经大腿肌肉注射免疫2次(间隔4周)疫苗。采用ELISA检测血清gE特异性IgG及其亚类抗体水平,ELISpot分析脾淋巴细胞IFN-γ、IL-2和IL-4分泌能力,流式细胞术检测CD4^(+)T细胞亚群(IFN-γ^(+)、IL-2^(+)、IL-4^(+)、IL-17+)及记忆T细胞(IFN-γ^(+)、IL-2^(+))比例。结果 gE+BC02组在青年和老年小鼠中均诱导了显著升高的gE特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体,且抗体水平无年龄差异。细胞免疫应答方面,老年小鼠中,gE+AS01B组诱导的IFN-γ^(+)CD4^(+)(0.188±0.08 vs 0.086±0.06)和IL-2^(+)CD4^(+)(0.448±0.07 vs 0.338±0.07)T细胞比例为gE+BC02疫苗的2.19和1.33倍;而青年小鼠gE+BC02组IL-17+CD4^(+)(0.144±0.03 vs 0.092±0.023)T细胞比例则为gE+AS01B组的1.57倍。记忆T细胞应答分析显示,gE+BC02组老年小鼠IFN-γ^(+)和IL-2^(+)记忆T细胞比例较青年组显著降低53.94%(0.456±0.14 vs 0.99±0.37)和41.83%(0.356±0.12 vs 0.612±0.24),其余无显著性差异。结论 BC02佐剂可有效激活老年小鼠的体液免疫应答,但其诱导的Th1型细胞免疫应答稍弱于AS01B佐剂,且均存在年龄相关差异。本研究为开发适合老年人群的带状疱疹疫苗提供了重要实验依据,提示未来可通过优化BC02佐剂配方来增强Th1型免疫应答。 展开更多
关键词 bc02佐剂 水痘带状疱疹病毒 gE蛋白 老年小鼠 免疫应答
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