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人4-1BBL胞外区基因的克隆与表达研究 被引量：7
1
作者 姜文国 熊冬生 +6 位作者 邵晓枫 王金宏 许元富 刘芳 郭红星 朱祯平 杨纯正 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期703-707,共5页
用RTPCR方法从人单核THP1细胞系克隆人41BBL胞外区基因,将其重组到pAYZ表达载体中,构建成人41BBL胞外区基因表达载体。将该载体转化大肠杆菌16C9,获得稳定表达,表达产物主要以可溶性状态存在;SDSPAGE和Westernblot分析显示,其分子量约为... 用RTPCR方法从人单核THP1细胞系克隆人41BBL胞外区基因,将其重组到pAYZ表达载体中,构建成人41BBL胞外区基因表达载体。将该载体转化大肠杆菌16C9,获得稳定表达,表达产物主要以可溶性状态存在;SDSPAGE和Westernblot分析显示,其分子量约为22kD,与预期结果一致。这是首次在大肠杆菌中获得41BBL胞外区可溶性表达。生物学活性检测显示41BBL对于维持T淋巴细胞系因子释放非常有益,同时PI单染表明它能抑制Jurkat细胞的凋亡。这将在抗肿瘤免疫治疗中具有潜在应用前景。 展开更多
关键词 4-1bbl 协同刺激分子 原核表达
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BBL教学法在神经内科实习教学中的应用 被引量：3
2
作者 郭俊 李宏增 +2 位作者 赵代弟 吴芳 李柱一 《现代生物医学进展》 CAS 2015年第12期2341-2344,共4页
目的:探讨BBL教学法在神经内科临床实习中的应用效果。方法:以第四军医大学2009级、2010级临床医学专业五年制60名学生为研究对象,随机分为试验组和对照组,在神经内科实习教学中分别接受BBL教学法或传统教学法,以试卷考试和问卷调查评... 目的:探讨BBL教学法在神经内科临床实习中的应用效果。方法:以第四军医大学2009级、2010级临床医学专业五年制60名学生为研究对象,随机分为试验组和对照组,在神经内科实习教学中分别接受BBL教学法或传统教学法,以试卷考试和问卷调查评价教学效果。结果:试验组和对照组基础理论知识和病历书写成绩无明显差异,但试验组的病例分析成绩和总成绩与对照组比较有统计学差异(P<0.05)。学生对BBL教学法的效果评价明显优于传统教学法,BBL教学法对学生在实习兴趣、独立思维能力、自主解决问题能力、团队协作能力、灵活运用知识能力、人文关怀意识等方面的提升明显好于传统教学法。结论:BBL教学法在保证学生掌握基础知识的同时,提升了学生的各项能力,适合在神经内科实习教学中推广应用。 展开更多
关键词 神经内科 五年制 临床实习教学 bbl
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人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白的构建和表达 被引量：6
3
作者 刘荣 姜文国 +5 位作者 刘芳 张砚君 范冬梅 杨铭 熊冬生 杨纯正 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期543-545,549,共4页
目的:构建和表达人4-1BBL胞外区/抗CD20双功能融合蛋白,并测定该融合蛋白的生物学活性。方法:采用PCR和ovelap PCR方法构建人4-1BBL胞外区/抗CD20双功能融合蛋白,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层析法纯化该产物,并用150g/L SDS-... 目的:构建和表达人4-1BBL胞外区/抗CD20双功能融合蛋白,并测定该融合蛋白的生物学活性。方法:采用PCR和ovelap PCR方法构建人4-1BBL胞外区/抗CD20双功能融合蛋白,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层析法纯化该产物,并用150g/L SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化产物;采用FACS法鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性。结果:DNA序列测定结果表明:人4-1BBL胞外区/抗CD20双功能融合蛋白已构建成功,表达可溶性产物的产量达4mg/L以上,具有与Raji细胞(CD20+)和A549(4-1BB+)细胞结合的活性。结论:利用融合蛋白形式,首次成功地构建了人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白,并获得较高表达。表达产物具有与相应2个靶抗原结合的活性。 展开更多
关键词 4-1bbl CD20 融合蛋白 免疫治疗
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热约束的BBL布局算法研究 被引量：6
4
作者 徐宁 洪先龙 +1 位作者 陈松 董社勤 《计算机辅助设计与图形学学报》 EI CSCD 北大核心 2005年第6期1312-1315,共4页
在集成电路芯片的现有精确热模型的基础上,提出一种简化的近似模型,与原模型相比,该近似模型的计算复杂度大大降低.提出了基于该模型的集成电路芯片热分布约束布局优化算法.用该近似模型来计算各热源的温度值和对其他热源的温度贡献值,... 在集成电路芯片的现有精确热模型的基础上,提出一种简化的近似模型,与原模型相比,该近似模型的计算复杂度大大降低.提出了基于该模型的集成电路芯片热分布约束布局优化算法.用该近似模型来计算各热源的温度值和对其他热源的温度贡献值,然后用叠加原理计算出VLSI芯片上各点的温度值.热分布优化算法以芯片的平均温度和芯片面积作为优化目标,用模拟退火方法求解.实验结果表明,在考虑热约束的布局结果中,芯片上各点的温度分布均匀,最热点的温度显著降低,而芯片面积的增加却很少. 展开更多
关键词 热约束 bbl布局
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共刺激分子4-1BBL和B7-1在人脑胶质瘤细胞中的表达 被引量：4
5
作者 牟永告 彭辉 +3 位作者 张俊英 邵翠杰 吴长有 陈忠平 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第3期326-329,共4页
背景与目的:4-1BBL和B7-1为诱导和维持T细胞活化提供了重要的共刺激信号,目前被认为是提高抗肿瘤免疫的治疗靶点。本研究探讨4-BBL和B7-1在7株胶质瘤细胞系表面的表达情况。方法:用流式细胞仪检测7株胶质瘤细胞株表面的共刺激分子4-1BBL... 背景与目的:4-1BBL和B7-1为诱导和维持T细胞活化提供了重要的共刺激信号,目前被认为是提高抗肿瘤免疫的治疗靶点。本研究探讨4-BBL和B7-1在7株胶质瘤细胞系表面的表达情况。方法:用流式细胞仪检测7株胶质瘤细胞株表面的共刺激分子4-1BBL和B7-1的表达,同时用MTT法分析胶质瘤细胞系对抗癌药物长春新碱(VCR)敏感性,并分析4-1BBL的表达与耐药性的相关性。结果:发现在所检测的胶质瘤细胞表面有不同程度的表达4-1BBL,但均不表达B7-1。其中T98G和MGR1细胞表面的4-1BBL表达>30%,对VCR不敏感,UW28、SKMG1、MGR2、SF767、SKMG4细胞表面的4-1BBL表达<10%,对VCR敏感。结论:本研究所检测的胶质瘤细胞均不表达共刺激分子B7-1,但有不同程度的表达4-1BBL,并且4-1BBL高表达的胶质瘤细胞对长春新碱敏感性差。 展开更多
关键词 胶质瘤 人脑胶质瘤细胞株 4-1bbl B7-1 长春新碱 药敏性
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小鼠4-1BBL cDNA的克隆和表达及其抗肝癌的免疫作用 被引量：3
6
作者 刘承利 窦科峰 +4 位作者 朱帮福 臧晓霞 柴玉波 杜可军 陈苏民 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期118-122,共5页
目的 :克隆小鼠 4 1BBL基因 ,构建其真核表达载体 ,并观察其在抗肝癌免疫中的作用。方法 :取C5 7BL/6小鼠脾细胞 ,经PHA诱导后 ,以RT PCR克隆 4 1BBLcDNA ,测序 ,构建真核表达质粒 pcDNA3.1(+) m4 1BBL。以重组体转染小鼠肝癌细胞He... 目的 :克隆小鼠 4 1BBL基因 ,构建其真核表达载体 ,并观察其在抗肝癌免疫中的作用。方法 :取C5 7BL/6小鼠脾细胞 ,经PHA诱导后 ,以RT PCR克隆 4 1BBLcDNA ,测序 ,构建真核表达质粒 pcDNA3.1(+) m4 1BBL。以重组体转染小鼠肝癌细胞Hepa1 6 ,经G4 18筛选后 ,以RT PCR、间接免疫荧光及流式细胞仪 ,检测m4 1BBL以获得稳定高表达克隆。然后将其制成肿瘤细胞疫苗与同源小鼠脾淋巴细胞混合培养 ,采用MTT比色法测定淋巴细胞的特异性杀伤活性。结果 :从小鼠脾细胞中克隆到m4 1BBLcDNA ,经测序完全正确。所构建的真核表达质粒pcDNA3.1(+) m4 1BBL ,在小鼠肝癌细胞Hepa1 6中获得稳定高效表达。与野生型Hepa1 6细胞相比较 ,m4 1BBL基因转染的Hepa1 6细胞疫苗能较有效地诱导淋巴细胞产生针对野生型Hepa1 6细胞的特异性杀伤活性 (P <0 .0 1)。结论 :将m4 1BBL基因导入肝癌细胞中表达 ,能提高其免疫原性 。 展开更多
关键词 小鼠 4-1bbl 基因克隆 协同刺激分子 肿瘤疫苗
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4-1BBL联合Hsp70-肿瘤抗原肽抑制小鼠黑色素瘤肺转移 被引量：4
7
作者 邱惠 张桂梅 +3 位作者 张慧 袁野 李东 冯作化 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第7期781-786,共6页
背景与目的正调节性共刺激分子表达偏低是肿瘤逃避机体免疫系统攻击的重要原因之一,增加这些分子的表达是促进抗肿瘤免疫的研究热点。小鼠黑色素瘤B16-F1细胞株是弱免疫原性癌细胞株。本研究旨在观察4-1BBL联合Hsp70-抗原肽对小鼠黑色... 背景与目的正调节性共刺激分子表达偏低是肿瘤逃避机体免疫系统攻击的重要原因之一,增加这些分子的表达是促进抗肿瘤免疫的研究热点。小鼠黑色素瘤B16-F1细胞株是弱免疫原性癌细胞株。本研究旨在观察4-1BBL联合Hsp70-抗原肽对小鼠黑色素瘤肺转移的抑制作用,并探讨其机制。方法建立小鼠黑色素瘤肺转移模型,Hsp70-B16抗原肽小鼠皮下免疫,同时从尾静脉注射4-1BBL表达质粒p4-1BBL。于接种后第17天,解剖小鼠取肺组织,解剖显微镜下计数黑色素瘤肺转移结节的数目,并检测小鼠部分免疫学指标及肝、肾功能。结果4-1BBL联合Hsp70-B16抗原肽治疗组小鼠黑色素瘤肺转移结节数降至50±8,明显少于二者单独治疗组的500±80和450±40;联合治疗组小鼠血清IL-2和IFN-γ的分泌水平分别增加了4倍和3倍,与对照组相比均存在显著性差异(P<0.01);单独应用4-1BBL基因或与Hsp70-B16抗原肽联合应用对小鼠肝、肾的功能均无明显影响。结论表达4-1BBL联合应用Hsp70-B16抗原肽主要通过增强外周T淋巴细胞功能活性而有效抑制小鼠黑色素瘤肺转移。 展开更多
关键词 4-1bbl Hsp70-抗原肽 联合作用 黑色素瘤/免 疫疗法 肺肿瘤/继发性 小鼠
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靶向4-1BBL和CD3双信号的协同抗肿瘤作用机制研究 被引量：3
8
作者 姜文国 张树平 +4 位作者 刘荣 李崴 张研君 邵晓枫 王金宏 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2010年第21期1201-1204,共4页
目的:探讨人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白增强抗CD3/抗CD20 diabody介导的靶向杀伤作用及其机制。方法:通过表达纯化人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白及抗CD3/抗CD20 diabody,利用台盼蓝计数观察联合应用人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白及... 目的:探讨人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白增强抗CD3/抗CD20 diabody介导的靶向杀伤作用及其机制。方法:通过表达纯化人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白及抗CD3/抗CD20 diabody,利用台盼蓝计数观察联合应用人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白及抗CD3/抗CD20 diabody对淋巴细胞增殖的影响;采用ELISA检测白介素-2(IL-2)水平。RT-PCR检测穿孔素和颗粒酶mRNA的表达。Calcein检测其联合应用抗CD3/抗CD20双功能抗体及PBL对靶细胞Raji细胞的杀伤作用。结果:人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白增强抗CD3/抗CD20 diabody对靶细胞Raji细胞的杀伤作用,其机制可能是促进淋巴细胞增殖,减少细胞死亡,促进IL-2分泌及上调穿孔素和颗粒酶mRNA表达。结论:人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白与抗CD3/抗CD20diabody联合应用,分别靶向4-1BBL和CD3双信号发挥协同抗肿瘤作用,为肿瘤免疫治疗提供了新的思路。 展开更多
关键词 4—1bbl CD20 B淋巴细 胞靶向治疗
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同时表达4-1BBL B7.1及B7.2三个共刺激分子基因小鼠肝癌细胞系的建立和意义 被引量：3
9
作者 李国强 王学浩 +1 位作者 印洁 俞悦 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第22期1261-1264,共4页
目的:建立同时表达4-1BBL、B7.1及B7.2三个共刺激分子基因小鼠原发性肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)细胞系。方法:将B7.1和B7.2全长cDNA的质粒酶切,构建pcDNA3.1-B7.1-IRES-B7.2重组子,酶切法鉴定。用阳离子脂质体(Lipofectamin... 目的:建立同时表达4-1BBL、B7.1及B7.2三个共刺激分子基因小鼠原发性肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)细胞系。方法:将B7.1和B7.2全长cDNA的质粒酶切,构建pcDNA3.1-B7.1-IRES-B7.2重组子,酶切法鉴定。用阳离子脂质体(LipofectamineReagent)将重组子转染H22,经均霉素(Hygromycin,300!g/ml)筛选,阳性克隆命名为H22-CD80/CD86+细胞。逆转录-聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)检测目的基因在H22-CD80/CD86+变异株的表达。采用同样方法将pCI-neo-4-1BBL质粒转入H22-CD80/CD86+细胞,G418筛选,阳性克隆命名为H22-CD80/CD86/CD137L+细胞。流式细胞仪检测三种基因在细胞克隆中的表达。结果:pcDNA3.1-B7.1-IRES-B7.2重组子经酶切鉴定,同时获得B7.1(862bp)和B7.2(984bp)目的基因片段和5.6kbp线性化pcDNA3.1载体片段;重组子测序结果与Genebank中B7.1和B7.2序列相符,证实构建成功。RT-PCR及FCM检测结果显示B7.1、B7.2及4-1BBL基因分别在H22-CD80/CD86+细胞及H22-CD80/CD86/CD137L+细胞中获得稳定、高效联合表达。结论:pcDNA3.1-B7.1-IRES-B7.2重组子构建正确,H22-CD80/CD86/CD137L+变异株可同时稳定表达B7.1、B7.2和4-1BBL三个共刺激分子基因。 展开更多
关键词 基因重组 癌肝细胞 B7.1 B7.2 4-1bbl
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4-1BBL分子在人急性单核细胞白血病细胞系U937和SHI-1的表达及促生长作用 被引量：5
10
作者 仇红霞 张学光 +5 位作者 居颂光 居颂文 吴倩妮 刘高勤 周斌 王凤鸣 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期916-918,共3页
目的研究4-1BBL分子在人急性单核细胞白血病细胞系U937和SHI-1的表达及促生长作用。方法用流式细胞术(FCM)和RT-PCR法检测4-1BBL分子在U937、SHI-1细胞系的表达;将激发型4-1BBL单抗(1F1)与U937、SHI-1细胞系分别进行培养,细胞计数分析2... 目的研究4-1BBL分子在人急性单核细胞白血病细胞系U937和SHI-1的表达及促生长作用。方法用流式细胞术(FCM)和RT-PCR法检测4-1BBL分子在U937、SHI-1细胞系的表达;将激发型4-1BBL单抗(1F1)与U937、SHI-1细胞系分别进行培养,细胞计数分析2个细胞系的生长情况;收集U937细胞的培养上清,ELISA法检测细胞因子。结果FCM测得U937和SHI-1细胞有4-1BBL分子表达,RT-PCR法测得4-1BBLmRNA;细胞计数表明,1F1明显促U937、SHI-1细胞系生长(P<0·01);ELISA示1F1与U937细胞共培养48h,其上清液中IL-6含量(55·91±10·23)pg/ml,显著高于IgG1同型对照组的(12·14±3·8)pg/ml(P<0·01)。结论U937和SHI-1细胞系组成性表达4-1BBL分子;1F1与U937、SHI-1细胞的4-1BBL分子交联后,可促进U937、SHI-1细胞系生长,诱导U937细胞分泌细胞因子IL-6。 展开更多
关键词 4-1bbl配体 急性单核细胞白血病细胞系 逆向信号
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胃癌及癌周组织中4-1BBLIL-18mRNA及其蛋白表达 被引量：2
11
作者 宋振川 李勇 +5 位作者 王贵英 刘羽 郝英杰 王爱军 范立侨 赵群 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2004年第22期1277-1280,共4页
目的:通过检测胃癌、胃粘膜、胃周淋巴结、大网膜、小网膜及腹膜中4-1BBL、IL-18mRNA和蛋白表达以探讨胃癌局部的免疫状况及其免疫逃逸的机理。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测40例胃癌患者、胃粘膜、胃周淋巴结、大网膜、小... 目的:通过检测胃癌、胃粘膜、胃周淋巴结、大网膜、小网膜及腹膜中4-1BBL、IL-18mRNA和蛋白表达以探讨胃癌局部的免疫状况及其免疫逃逸的机理。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测40例胃癌患者、胃粘膜、胃周淋巴结、大网膜、小网膜及腹膜中的4-1BBL、IL-18mRNA表达;采用流式细胞术检测胃癌及癌周各组织中4-1BBL、IL-18的蛋白表达。结果:40例胃癌患者的癌组织、胃粘膜、大网膜、小网膜、腹膜及胃周淋巴结中均可检测出4-1BBL和IL-18mRNA和蛋白表达,但胃癌组织中4-1BBL和IL-18mRNA和蛋白表达均低于其它各组(P<0.05)。结论:胃癌组织内处于低免疫状态,推测肿瘤细胞免疫逃逸现象可能与4-1BBL和IL-18的缺乏有关。 展开更多
关键词 胃癌 RT—PCR 流式细胞术 4—1bbl IL-1 8
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BBL布局算法研究 被引量：5
12
作者 徐宁 洪先龙 董社勤 《计算机辅助设计与图形学学报》 EI CSCD 北大核心 2004年第9期1216-1219,共4页
针对不可二划分结构的布局问题 ,在序列对的基础上 ,结合结群技术 ,利用禁忌搜索算法 ,以芯片面积和连线总长作为优化目标求解BBL布局问题 用两个规模较大的MCNC标准例子进行了测试 ,并与其他文献中的结果进行了比较 实验结果表明 。
关键词 bbl布局算法 序列对 结群技术 禁忌搜索算法 自动布图设计 集成电路
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转4-1BBL基因的小鼠肝癌细胞瘤苗刺激脾细胞产生细胞因子的研究 被引量：2
13
作者 刘承利 臧晓霞 +3 位作者 窦科峰 朱帮福 张洪义 张宏义 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期115-117,共3页
目的研究转4-1BBL基因的小鼠肝癌细胞瘤苗体外刺激同系小鼠脾细胞产生细胞因子(IL-2、TNF-α和GM-CSF)的能力。方法以丝裂霉素C(MMC)处理高表达转m4-1BBL基因的小鼠Hepa1-6肝癌细胞,制成肿瘤细胞瘤苗(TCV),体外与同系小鼠脾淋巴细胞共... 目的研究转4-1BBL基因的小鼠肝癌细胞瘤苗体外刺激同系小鼠脾细胞产生细胞因子(IL-2、TNF-α和GM-CSF)的能力。方法以丝裂霉素C(MMC)处理高表达转m4-1BBL基因的小鼠Hepa1-6肝癌细胞,制成肿瘤细胞瘤苗(TCV),体外与同系小鼠脾淋巴细胞共同培养后,观察其对脾细胞产生细胞因子(IL-2、TNF-α和GM-CSF)的影响。结果TCV-4-1BBL刺激后,脾细胞体外分泌细胞因子IL-2、TNF-α和GM-CSF的水平明显增高。结论转4-1BBL基因的小鼠肝癌细胞瘤苗能刺激脾细胞产生细胞因子IL-2、TNF-α和GM-CSF。 展开更多
关键词 小鼠 4-1bbl 共刺激分子 肿瘤疫苗 肝细胞癌 细胞因子
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BBL结合双语教学在八年制医学生内科学见习带教中的应用 被引量：8
14
作者 刘纪实 王成红 +2 位作者 邓芳 彭小青 张浩 《大学教育》 2013年第14期68-70,共3页
本文随机选择本校2012年9月~2013年1月八年制医学生60名,按照学分单双数进行分组,单数学生30名采用BBL结合双语教学,设为实验组;双数学生30名采用传统教学方法,设为对照组;观察两组学生出科临床综合考核成绩、平时成绩及调查问卷评估表,... 本文随机选择本校2012年9月~2013年1月八年制医学生60名,按照学分单双数进行分组,单数学生30名采用BBL结合双语教学,设为实验组;双数学生30名采用传统教学方法,设为对照组;观察两组学生出科临床综合考核成绩、平时成绩及调查问卷评估表,对BBL结合双语教学法应用价值进行评估。最后发现,BBL联合双语教学法不仅有助于学生外语表达能力的提高,还能提高医学生独立运用知识解决实际问题的能力和团队协作能力,深受学生们的欢迎,值得在今后的教学工作中加以推广。 展开更多
关键词 bbl教学法 双语教学 八年制医学生
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含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒减毒沙门氏菌株的构建与鉴定 被引量：2
15
作者 叶建新 仉元亭 +2 位作者 陈卫昌 张学光 任大明 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期336-339,345,共5页
目的:构建含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒的SL3261(减毒鼠伤寒沙门氏菌)疫苗菌。方法:将质粒pIRES2-EGFP-4-1BBL转入LB5000(鼠伤寒沙门氏菌)进行甲基化,利用修饰后重组质粒转化终宿主菌SL3261,抗生素筛选后挑取单个菌落扩增进行抽提质粒和PC... 目的:构建含pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒的SL3261(减毒鼠伤寒沙门氏菌)疫苗菌。方法:将质粒pIRES2-EGFP-4-1BBL转入LB5000(鼠伤寒沙门氏菌)进行甲基化,利用修饰后重组质粒转化终宿主菌SL3261,抗生素筛选后挑取单个菌落扩增进行抽提质粒和PCR鉴定,SL3261疫苗菌与HepG2细胞体外共培养,荧光显微镜和RT-PCR分别检测GFP(绿荧光蛋白)的表达和4-1BBL基因的转录。结果:导入pIRES2-EGFP-4-1BBL质粒的SL3261经抽提质粒电泳后获得了同原转化质粒相同大小的目的条带,质粒PCR获得了约930bp的条带,200个HepG2细胞感染SL3261为201±46CFU、SL3261-pIRES2-EGFP为163±37,而SL3261-pIRES2-EGFP-4-1BBL为158±32,含质粒SL3261在体外感染HepG2细胞的能力同原细菌基本相同(P>0.05)。感染含质粒SL3261的HepG2细胞观察到GFP表达,感染含重组质粒SL3261的HepG2细胞经RT-PCR检测到约930bp的目的条带。结论:成功构建了能携带大鼠4-1BBL基因真核表达质粒的SL3261疫苗菌。 展开更多
关键词 4-1bbl基因 减毒沙门氏菌 DNA疫苗
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4-1BBL-B7-H3基因对免疫重建重症联合免疫缺陷荷瘤鼠的抑瘤作用 被引量：3
16
作者 邬腊梅 杨宏宇 +1 位作者 罗娟 苏铭扬 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期190-195,共6页
目的通过建立人免疫重建重症联合免疫缺陷(SCID)荷瘤鼠嵌合模型来探讨4-1BBL-B7-H3基因在非特异性抗肿瘤免疫中的作用。方法将40只SCID鼠随机分为5组,A组(对照组)行免疫重建加注射Tca8113细胞;B组(Ad4-1BBL-B7-H3组)行免疫重建加注射含... 目的通过建立人免疫重建重症联合免疫缺陷(SCID)荷瘤鼠嵌合模型来探讨4-1BBL-B7-H3基因在非特异性抗肿瘤免疫中的作用。方法将40只SCID鼠随机分为5组,A组(对照组)行免疫重建加注射Tca8113细胞;B组(Ad4-1BBL-B7-H3组)行免疫重建加注射含有人4-1BBL-B7-H3基因腺病毒转染的Tca8113细胞;C组(空载组)行免疫重建加注射含有空载体腺病毒转染的Tca8113细胞;D组(非免疫重建组)不给予小鼠免疫重建,注射Tca8113细胞;E组(非肿瘤组)行免疫重建加注射PBS。每周定期测量肿瘤体积;酶联免疫吸附法检测人IgG蛋白含量;流式细胞仪检测外周血中人CD3+、CD56+淋巴细胞比例;免疫组织化学法观察自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)和Toll样受体2(TLR2)在肿瘤中的表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测4-1BBL-B7-H3 mRNA的表达,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测主要组织相容性复合体1类相关分子(M1C)A、B及TLR2的表达。结果 1)B组小鼠肿瘤体积最小(P<0.05);2)A、B、C、E组小鼠外周血中检测到人IgG、CD3+、CD56+淋巴细胞,B组淋巴细胞比例高于A、C和E组(P<0.05);3)B组NKG2D和TLR2的表达较其余各组明显增强;4)人4-1BBL-B7-H3基因在B组小鼠肿瘤中稳定表达;5)B组M1CA、M1CB和TLR2的表达高于A、C、D组(P<0.05)。结论 4-1BBL-B7-H3基因在肿瘤组织中的高表达能成功诱导人CD3+、CD56+细胞增殖,直接或间接活化TLR2,上调NKG2D及其配体M1CA、M1CB的表达,从而产生有效的抗肿瘤免疫应答。 展开更多
关键词 4-1bbl—B7-H3基因 重症联合免疫缺陷鼠 口腔鳞癌细胞株 抗肿瘤免疫
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重组大鼠4-1BBL对树突状细胞免疫学功能的影响 被引量：2
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作者 叶建新 陈卫昌 +1 位作者 张学光 张光波 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期764-766,770,共4页
目的:探讨大鼠4-1BBL对骨髓来源的树突状细胞(DC)表面分子及免疫功能的影响。方法:构建真核表达质粒pIRES2-EGFP-4-1BBL并利用脂质体介导转染HepG2细胞,G418筛选出阳性克隆,RT-PCR和荧光显微镜分别检测4-1BBL基因转录和EGFP的表达;流式... 目的:探讨大鼠4-1BBL对骨髓来源的树突状细胞(DC)表面分子及免疫功能的影响。方法:构建真核表达质粒pIRES2-EGFP-4-1BBL并利用脂质体介导转染HepG2细胞,G418筛选出阳性克隆,RT-PCR和荧光显微镜分别检测4-1BBL基因转录和EGFP的表达;流式细胞术(FCM)检测不同HepG2细胞与DC共培养2 d后表面CD80及MHC-Ⅱ的表达,ELISA测定共培养上清中IL-6和IL-12的含量。结果:成功构建pIRES2-EGFP-4-1BBL重组表达载体并在HepG2细胞中获得稳定表达,重组大鼠4-1BBL能促进骨髓来源DC表面MHC-Ⅱ、CD80分子表达和分泌IL-6、IL-12(P<0.05)。结论:重组大鼠4-1BBL具有促进骨髓来源DC成熟的功能。 展开更多
关键词 大鼠4-1bbl 树突状细胞 免疫功能
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重组腺病毒介导hPSMA和4-1BBL基因转染小鼠树突状细胞的变化及临床意义 被引量：3
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作者 沈昊 翁小东 +1 位作者 刘修恒 匡幼林 《临床泌尿外科杂志》 北大核心 2010年第3期230-234,共5页
目的:研究hPSMA和4-1BBL基因转染小鼠树突状细胞(DC)后的变化及其在前列腺癌方面的临床意义。方法:以含hPSMA和4-1BBL基因的重组腺病毒载体转染C57BL/6j小鼠骨髓来源的DC,将培养的DC分为阳性组(Ad/hPSMA-IRES-m4-1BBL组)、阴性对照组(Ad... 目的:研究hPSMA和4-1BBL基因转染小鼠树突状细胞(DC)后的变化及其在前列腺癌方面的临床意义。方法:以含hPSMA和4-1BBL基因的重组腺病毒载体转染C57BL/6j小鼠骨髓来源的DC,将培养的DC分为阳性组(Ad/hPSMA-IRES-m4-1BBL组)、阴性对照组(Ad5LacZ组)和未转染组,分别加入重组腺病毒、空载质粒腺病毒和生理盐水后,采用流式细胞仪测定腺病毒的转染效率;用相差显微镜、扫描电镜和透视电镜观察DC的形态学变化;用流式细胞仪分析表型变化;用Western blot检测DC hPSMA蛋白的表达。结果:经体外诱导培养后获得的树突状细胞在相差显微镜、透视电镜和扫描电镜下均观察到具有典型形态的成熟DC;流式细胞仪检测腺病毒转染效率为70%,Ad/hPSMA-IRES-m4-1BBL组DC细胞表面MHC-Ⅱ、CD80、CD86较其余两组无明显差异(P>0.05),但4-1BBL有明显提高(P<0.05);Western blot检测DC蛋白表达出PSMA。结论:本实验中获得的DC具有成熟DC的典型特征,DC表面的4-1BBL表达率明显上调,表达出PSMA蛋白。本研究将为DC应用于前列腺癌的生物治疗奠定基础。 展开更多
关键词 树突状细胞 hPSMA基因 4-1bbl基因 变化
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4-1BBL分子在人恶性血液病细胞系的表达 被引量：2
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作者 仇红霞 居颂光 +2 位作者 居颂文 吴静妮 张学光 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1001-1004,共4页
目的:研究共刺激分子4-1BBL分子在人恶性血液病细胞系的表达及其生物学意义。方法:流式细胞仪检测4-1BBL分子在不同的人恶性血液病细胞系的表达;用可介导4-1BBL逆向信号的鼠抗人4-1BBL单抗(mAb1F1)作用于8个不同的人恶性血液病细胞系,... 目的:研究共刺激分子4-1BBL分子在人恶性血液病细胞系的表达及其生物学意义。方法:流式细胞仪检测4-1BBL分子在不同的人恶性血液病细胞系的表达;用可介导4-1BBL逆向信号的鼠抗人4-1BBL单抗(mAb1F1)作用于8个不同的人恶性血液病细胞系,细胞计数法和3H-TdR掺入法评价细胞系的体外生长和增殖。结果:FACS结果显示4-1BBL分子在人恶性血液病细胞系上有不同程度的表达,其中髓性白血病细胞系U937、HL60及B淋巴瘤细胞系Raji、Daudi上呈现较高水平的表达。细胞计数和3H-TdR掺入实验结果表明mAb1F1对髓性白血病细胞系U937和HL60,具有较强的促增殖效应。结论:共刺激分子4-1BBL分子在髓性白血病细胞系和B淋巴瘤细胞系上表达率较高;4-1BBL分子可通过介导逆向信号促进髓性白血病细胞系U937和HL60的生长和增殖。 展开更多
关键词 4-1bbl 逆向信号 人恶性血液病细胞系
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小鼠髓系树突状细胞4-1BB及4-1BBL表达调节 被引量：2
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作者 张烽 马倩茹 +3 位作者 席泓 周桓 张学光 顾宗江 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期183-186,共4页
探讨小鼠髓系树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDC)共刺激分子4-1BB及其配体4-1BBL表达的变化。将促DC成熟活化因子CD40L-CHO、TNF-α、LPS和IFN-γ,免疫负性调节因子IL-10以及各成熟活化因子与IL-10联合加入BMDC中,观... 探讨小鼠髓系树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDC)共刺激分子4-1BB及其配体4-1BBL表达的变化。将促DC成熟活化因子CD40L-CHO、TNF-α、LPS和IFN-γ,免疫负性调节因子IL-10以及各成熟活化因子与IL-10联合加入BMDC中,观察BMDC上4-1BB及4-1BBL表达的变化。结果显示,加入成熟活化因子的各组BMDC上4-1BB及4-1BBL表达与对照组相比有显著上调(P<0.05)。而IL-10组与对照组相比两者的表达显著下调(P<0.05),且各成熟活化因子与IL-10联合应用与单用IL-10组相比,BMDC上4-1BB和4-1BBL表达上调,有显著性差异(P<0.05)。提示成熟活化因子不仅能上调BMDC上4-1BB和4-1BBL的表达并且能有效拮抗mIL-10对BMDC上4-1BB和4-1BBL表达的下调作用。 展开更多
关键词 树突状细胞 4-1BB 4-1bbl
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