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仙台病毒BB1株6个编码基因的克隆及表达 被引量:1
1
作者 张海凤 杨宇 +1 位作者 董小岩 吴小兵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期213-219,共7页
在仙台病毒BB1株全基因组序列测定的基础上,用反转录和PCR方法获得了核蛋白基因(N),磷蛋白基因(P),神经血凝素基因(HN),基质蛋白基因(M)、融合蛋白基因(F)和聚合酶蛋白基因(L)等6个编码基因全长克隆;测序结果表明,其序列与Genbank中登... 在仙台病毒BB1株全基因组序列测定的基础上,用反转录和PCR方法获得了核蛋白基因(N),磷蛋白基因(P),神经血凝素基因(HN),基质蛋白基因(M)、融合蛋白基因(F)和聚合酶蛋白基因(L)等6个编码基因全长克隆;测序结果表明,其序列与Genbank中登录的序列(DQ219803)完全一致。为了提供仙台病毒基因组载体拯救和包装所需的反式作用蛋白,将N、P、M、F、HN和L分别克隆到腺病毒穿梭表达载体pDC316上,将它们分别与腺病毒基因组质粒pBHGlox△E1,3Cre共转染HEK293细胞,获得了6种复制缺陷性重组腺病毒Ad5-N、Ad5-P、Ad5-M、Ad5-F、Ad5-HN和Ad5-L。酶切结果表明6种重组腺病毒穿梭质粒构建正确;用PCR方法证明所获得的6种重组腺病毒分别携带了上述6个编码基因;用重组腺病毒感染LLC-MK2细胞后用Western blotting和免疫荧光方法检测到了相应仙台病毒编码基因的表达。本研究为仙台病毒BB1株全长基因组的拼接和病毒载体包装系统组建打下了基础。 展开更多
关键词 副粘病毒科 仙台病毒 bb1 腺病毒载体
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流产布鲁氏菌1型Bb1-PCR检测方法的建立
2
作者 崔光亚 刘瑞 +3 位作者 邴啟政 曾巧英 田莉莉 范伟兴 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期725-729,共5页
根据GenBank中已登录序列,针对流产布鲁氏菌1型特异的保守序列设计了1对引物,通过对反应体系及条件的优化,建立了一种可以快速鉴别流产布鲁氏菌1型的Bb1-PCR方法,并验证了其特异性和敏感性。应用该方法对牦牛流产胎盘组织的临床检样进... 根据GenBank中已登录序列,针对流产布鲁氏菌1型特异的保守序列设计了1对引物,通过对反应体系及条件的优化,建立了一种可以快速鉴别流产布鲁氏菌1型的Bb1-PCR方法,并验证了其特异性和敏感性。应用该方法对牦牛流产胎盘组织的临床检样进行诊断,验证其临床适用性和准确性。结果显示,Bb1-PCR(25μL)的最佳扩增条件为:退火温度68.5℃,引物浓度15pmol/μL,Premix Taq12.5μL,35次循环。在该条件下,仅流产布鲁氏菌1型标准菌株(B.abortus 2308)扩增出784bp的目的条带,而马耳他布鲁氏菌,绵羊附睾种布鲁氏菌,猪种布鲁氏菌,犬种布鲁氏菌,沙林鼠种布鲁氏菌,流产布鲁氏菌2~6、9型,大肠杆菌O157:H7和耶尔森菌O:91均无条带出现。敏感性为1CFU/mL。用建立的Bb1-PCR方法能直接从流产胎盘检样中检测流产布鲁氏菌1型,其诊断结果和细菌学表型鉴定结果完全一致。本研究建立的Bb1-PCR方法能够准确检测流产布鲁氏菌1型,其高度特异、敏感、可靠、稳定,适用于布鲁氏菌病的流行病学快速诊断。 展开更多
关键词 布鲁氏菌病 流产布鲁氏菌1型 bb1-PCR方法
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叉车用6BB1型柴油机油泵油嘴的国产化
3
作者 唐国民 《叉车技术》 2003年第3期20-22,共3页
港口普遍使用的TCMFD50Z7,TCMFD60Z7,BJ-FD50,HF-FD60Z_TBJ,HF-FD60,ATF-FD60Z7等叉车都配用日本ISUZU6BB1(或6BB1LK)型柴油发动机。该发动机配用的油泵油嘴则是日本ZEXEL公司的产品。根据上海港务局统计资料显示,上海港共有叉车659台,... 港口普遍使用的TCMFD50Z7,TCMFD60Z7,BJ-FD50,HF-FD60Z_TBJ,HF-FD60,ATF-FD60Z7等叉车都配用日本ISUZU6BB1(或6BB1LK)型柴油发动机。该发动机配用的油泵油嘴则是日本ZEXEL公司的产品。根据上海港务局统计资料显示,上海港共有叉车659台,而采用6BB1型发动机的叉车就有6种129台,占叉车总数的19.6%。这批进口机械中,有的已引进多年,并分别多次进入修理期。 展开更多
关键词 叉车 6bb1 柴油机 油泵油嘴 国产化
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外周血CD4^(+)CD28^(null)T细胞、OX40、4-1BB变化与糖尿病患者动脉粥样硬化进展的关联性研究
4
作者 鲍灵珠 冯晓萍 +1 位作者 高祖华 虞朝黎 《全科医学临床与教育》 2025年第10期875-878,共4页
目的研究外周血CD4^(+)CD28^(null)T细胞、肿瘤坏死因子受体超家族成员4(OX40)、4-1BB变化与糖尿病患者动脉粥样硬化(AS)进展的关联性。方法选取2型糖尿病(T2DM)患者120例,根据是否合并AS分为DM-AS组和DM组,比较两组外周血CD4^(+)CD28^(... 目的研究外周血CD4^(+)CD28^(null)T细胞、肿瘤坏死因子受体超家族成员4(OX40)、4-1BB变化与糖尿病患者动脉粥样硬化(AS)进展的关联性。方法选取2型糖尿病(T2DM)患者120例,根据是否合并AS分为DM-AS组和DM组,比较两组外周血CD4^(+)CD28^(null)T细胞亚群比率及OX40、4-1BB阳性比率变化,并根据颈动脉狭窄程度分为轻度AS组(狭窄≤50%)、中度AS组(狭窄51%~69%)及重度AS组(狭窄≥70%),分析CD4^(+)CD28^(null)T细胞、OX40、4-1BB变化与AS进展的关联性。结果120例患者中,DM-AS组有76例,占63.33%;与DM组相比,DM-AS组的DM病程、收缩压、餐后2 h血糖(2 h PG)、糖化血红蛋白、载脂蛋白B、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及CD4^(+)CD28^(null)T细胞亚群比率、OX40阳性比率、4-1BB阳性比率较高,载脂蛋白A1水平较低,差异均有统计学意义(t分别=2.57、2.49、2.78、2.19、3.12、2.94、4.31、5.97、16.91、11.47、-2.52,P均<0.05);CD4^(+)CD28^(null)T细胞、OX40、4-1BB联合诊断DM-AS的曲线下面积(AUC)为0.96。DM-AS组76例中,其中轻度AS组37例、中度AS组29例、重度AS组10例。AS程度与CD4^(+)CD28^(null)T细胞亚群比率及OX40、4-1BB阳性比率均呈正相关(r分别=0.24、0.48、0.38,P均<0.05)。结论DM-AS患者的外周血CD4^(+)CD28^(null)T细胞亚群比率及OX40、4-1BB阳性比率均明显升高,对DM-AS具有诊断价值,与AS进展呈正相关。 展开更多
关键词 糖尿病 动脉粥样硬化 CD4^(+)CD28^(null)T细胞 OX40 4-1BB
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HPLC法测定进口西洋参中人参皂苷Rb1、Re、Rg1的含量 被引量:9
5
作者 王旭 邬国庆 张小茜 《中国实验方剂学杂志》 CAS 2004年第6期27-29,共3页
目的 :修订进口西洋参质量标准。方法 :采用HPLC法 ,用C1 8柱为固定相 ,以乙腈 水 (30∶70 )和乙腈 0 0 5 %磷酸溶液(99∶4 0 0 )为流动相 ,柱温 4 0℃ ,检测波长 2 0 3nm。分别测定人参皂苷Rb1、Re和Rg1的含量。结果 :人参皂苷Rb1在... 目的 :修订进口西洋参质量标准。方法 :采用HPLC法 ,用C1 8柱为固定相 ,以乙腈 水 (30∶70 )和乙腈 0 0 5 %磷酸溶液(99∶4 0 0 )为流动相 ,柱温 4 0℃ ,检测波长 2 0 3nm。分别测定人参皂苷Rb1、Re和Rg1的含量。结果 :人参皂苷Rb1在 1 6 4 7~8 2 35 μg(r=0 9995 )、人参皂苷Rg1在 0 16 5 3~ 1 983μg(r=0 9998)、人参皂苷Re在 1 12 6~ 9 0 0 8μg(r =0 9999)范围内呈良好线性关系。加样回收率人参皂苷Rb1为 10 0 2 % (RSD为 3 2 6 % ) ,人参皂苷Rg1为 97 6 1% (RSD为 1 2 3% ) ,人参皂苷Re为10 0 4 % (RSD为 1 2 1% )。结论 :该含量测定方法简便准确 ,重复性好 。 展开更多
关键词 进口西洋参 HPLC 人参皂苷bb1、Re、Rg1
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Copula-EGARCH模型及投资组合的时变风险价值估计 被引量:2
6
作者 李述山 《山东科技大学学报(自然科学版)》 CAS 2010年第5期97-101,共5页
采用EGARCH模型对资产组合中的每一资产建模,资产的联合分布采用条件Copula构建,应用常相关模式建立了Copula-EGARCH模型;采用Monte Carlo法估计资产组合时变风险价值;讨论了模型的检验问题,给出了相关的检验方法。以上证综指与深证成... 采用EGARCH模型对资产组合中的每一资产建模,资产的联合分布采用条件Copula构建,应用常相关模式建立了Copula-EGARCH模型;采用Monte Carlo法估计资产组合时变风险价值;讨论了模型的检验问题,给出了相关的检验方法。以上证综指与深证成指数据为样本,选用广义误差分布拟合误差分布并选取BB1Copula进行实证分析,实证结果表明所建模型是合理有效的,所估计时变风险价值具有良好的估计精度。 展开更多
关键词 Copula-EGARCH模型 时变风险价值 蒙特卡洛法 bb1连接函数
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协同刺激分子4-1BB和CD28对人外周血不同T细胞亚群的激活作用 被引量:6
7
作者 吴俊英 钱峰 +2 位作者 吕合作 王伟 李柏青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期533-536,共4页
目的 :探讨 4 1BB/ 4 1BBL协同刺激信号在CD4 + 和CD8+ T细胞活化、增殖中的作用 ,并与CD2 8/B7信号作比较。方法 :用抗CD3单抗 (mAb)刺激人外周血单个核细胞 (PBMC)。用阻断型抗 4 1BBLmAb和抗CD80mAb ,分别阻断 4 1BB/ 4 1BBL和C... 目的 :探讨 4 1BB/ 4 1BBL协同刺激信号在CD4 + 和CD8+ T细胞活化、增殖中的作用 ,并与CD2 8/B7信号作比较。方法 :用抗CD3单抗 (mAb)刺激人外周血单个核细胞 (PBMC)。用阻断型抗 4 1BBLmAb和抗CD80mAb ,分别阻断 4 1BB/ 4 1BBL和CD2 8/B7 1协同刺激信号。利用流式细胞术 (FCM)检测CD4 + T细胞、CD8+ T细胞的增殖率、CD8/CD4T细胞的比值变化和细胞分泌IFN γ的情况。结果 :用抗 4 1BBLmAb和抗CD80mAb阻断相应的协同刺激途径后 ,CD4 + 和CD8+ T细胞的增殖和细胞分泌IFN γ的水平均明显下降。培养 8d,抗CD3mAb单独刺激组CD8/CD4T细胞的比值为 1.98± 0 .0 6 ;抗 4 1BBLmAb阻断组CD8/CD4T细胞的比值下降为 0 .96±0 .0 3;而在抗CD80mAb阻断组 ,其比值上升为 2 .6 9± 0 .16。结论 :4 1BB分子可在CD4 + T细胞和CD8+ T细胞的活化、增殖中提供协同刺激信号。 4 1BB分子所介导的协同刺激信号 ,在CD8+ T细胞活化及增殖中发挥了更为重要的作用 ;而CD2 8分子所介导的协同刺激信号则更有利于CD4 + 展开更多
关键词 4-1BB CD28 增殖 活化
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人NK细胞体外高效扩增的实验研究 被引量:10
8
作者 黄庆生 李琦 +2 位作者 黄勇 商澎 张明杰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1167-1169,1173,共4页
目的:建立人NK细胞体外大量扩增的方法。方法:采用基因工程方法,在K562细胞上同时表达IL-15、IL-18、4-1BBL3种基因,构建特定的K562工程细胞作为刺激细胞。IL-15、IL-18基因分别与一段特殊的跨膜蛋白基因融合,4-1BBL直接跨膜表达,使这3... 目的:建立人NK细胞体外大量扩增的方法。方法:采用基因工程方法,在K562细胞上同时表达IL-15、IL-18、4-1BBL3种基因,构建特定的K562工程细胞作为刺激细胞。IL-15、IL-18基因分别与一段特殊的跨膜蛋白基因融合,4-1BBL直接跨膜表达,使这3种蛋白在K562细胞中表达后锚定于细胞膜表面。其次,以照射致死的该K562工程细胞作为刺激细胞,以人外周血单个核细胞(PBMC)为扩增培养对象,通过与IL-2的共刺激作用,使NK细胞在体外培养条件下得到大量的扩增。结果:经过21d的刺激培养后,CD56+CD3-细胞数量扩增了(520±75)倍。CD56+CD3-细胞的纯度从培养前占PBMC的7%±4%到扩增后占总细胞比例的93%±3%。PBMC中的T细胞基本上没有得到扩增,扩增后的细胞中CD3+细胞只占2%±1.2%。扩增的细胞具备了NK细胞的基本特征和生物学特性,除了CD56+CD3-外,还对扩增的NK细胞上NKG2D、NKp46、NKp44、NKp30、CD94、CD158b、CD158a、NKB1、NKAT2等标记进行了验证。细胞毒实验表明,在效应细胞∶靶细胞为5∶1时,扩增的NK细胞的杀伤率达到了95%±4%。结论:建立的NK细胞体外扩增方法,达到了较高的扩增水平,且扩增的细胞活性较好。本方法以PBMC为原始材料,能够实现NK细胞体外的大规模制备,这将为抗病毒与抗肿瘤的NK细胞免疫治疗奠定基础。 展开更多
关键词 扩增 自然杀伤细胞 白细胞介素15 白细胞介素18 4-1BB配体
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激发型4-1BB单抗联合凋亡肿瘤细胞负载的树突状细胞在恶性肿瘤免疫治疗中的作用 被引量:4
9
作者 李敏 陈成 +6 位作者 古涛 周桓 张烽 朱一蓓 於葛华 张学光 顾宗江 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期640-644,649,共6页
目的:研究激发型4-1BB单抗(2A)联合凋亡肿瘤细胞负载的DC(AP-DC)疫苗在小鼠B细胞淋巴瘤免疫治疗中的作用。方法:凋亡小鼠B细胞淋巴瘤细胞A20负载的DC用来制备AP-DC。A20荷瘤小鼠分别被注射AP-DC、2A单抗或二者联合。观察肿瘤生长情况及... 目的:研究激发型4-1BB单抗(2A)联合凋亡肿瘤细胞负载的DC(AP-DC)疫苗在小鼠B细胞淋巴瘤免疫治疗中的作用。方法:凋亡小鼠B细胞淋巴瘤细胞A20负载的DC用来制备AP-DC。A20荷瘤小鼠分别被注射AP-DC、2A单抗或二者联合。观察肿瘤生长情况及小鼠生存期。流式细胞术检测免疫治疗后荷瘤鼠脾脏T细胞的表型和胞浆内细胞因子;3H-TdR掺入试验检测T细胞体外增殖能力;ELISA法检测荷瘤鼠血清和脾脏T细胞培养上清中IL-2、IFN-γ和IL-10含量。结果:应用激发型4-1BB单抗2A或AP-DC疫苗对荷瘤小鼠开展免疫治疗,可抑制肿瘤生长,延长荷瘤鼠生存期,获得12.5%或25%的肿瘤完全缓解率。但二者联合应用,治疗效果更好,可获得62.5%的肿瘤完全缓解率,并且荷瘤鼠可长期生存。联合治疗后荷瘤鼠脾脏T细胞体外增殖更为显著,CD4+IFN-γ+T细胞的比例也明显增加。IL-2和IFN-γ的分泌水平在联合治疗荷瘤鼠的血清和脾脏T细胞的培养上清中升高更明显,而IL-10的分泌则降低。结论:激发型4-1BB单抗和AP-DC在肿瘤免疫治疗中有协同作用。 展开更多
关键词 树突状细胞 4-1BB分子 肿瘤免疫治疗
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4-1BBL分子在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义 被引量:3
10
作者 牟永告 谢海涛 +7 位作者 彭辉 王振宁 魏大年 张湘衡 赛克 邓星海 张冠华 陈忠平 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期2342-2346,共5页
目的:探讨共刺激分子4-1BBL(CD137L)在胶质瘤组织中的表达及其临床意义。方法:免疫组化方法检测4-1BBL在82例脑胶质瘤组织中的表达,并分析其与病理分级、患者年龄、性别及生存时间的关系。结果:正常3例脑组织标本未见4-1BBL表达。82例... 目的:探讨共刺激分子4-1BBL(CD137L)在胶质瘤组织中的表达及其临床意义。方法:免疫组化方法检测4-1BBL在82例脑胶质瘤组织中的表达,并分析其与病理分级、患者年龄、性别及生存时间的关系。结果:正常3例脑组织标本未见4-1BBL表达。82例胶质瘤标本31例4-1BBL阳性,阳性表达率为37.8%。统计学提示组织标本中4-1BBL表达与病理级别无明显相关性,与年龄有关(P<0.05),4-1BBL阳性患者生存期更长(P<0.05)。结论:4-1BBL在部分胶质瘤组织中有表达,其表达对判断胶质瘤患者的预后有一定的参考价值。 展开更多
关键词 4-1BB配体 神经胶质瘤 预后
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共刺激分子4-1BB在强直性脊柱炎外周血淋巴细胞上的表达及其临床意义 被引量:2
11
作者 张榕 郭韵 +2 位作者 吴春玲 赵丽娟 肖卫国 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期598-600,共3页
目的探讨强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞共刺激分子4-1BB的表达及其临床意义。方法应用流式细胞术检测30例强直性脊柱炎患者及20例正常对照者淋巴细胞活化前后4-1BB蛋白的表达。结果强直性脊柱炎患者淋巴细胞活化前后4-1BB的表达明显... 目的探讨强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞共刺激分子4-1BB的表达及其临床意义。方法应用流式细胞术检测30例强直性脊柱炎患者及20例正常对照者淋巴细胞活化前后4-1BB蛋白的表达。结果强直性脊柱炎患者淋巴细胞活化前后4-1BB的表达明显高于正常对照组(P<0.01),而且其表达的4-1BB水平与免疫球蛋白IgA呈正相关关系。结论强直性脊柱炎患者淋巴细胞存在异常的4-1BB表达,这可能是导致强直性脊柱炎患者淋巴细胞活化和免疫反应发生的原因之一。 展开更多
关键词 强直性脊柱炎 淋巴细胞 4-1BB蛋白
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4-1BB/4-1BBL共刺激信号在过敏性哮喘中的作用及机制 被引量:5
12
作者 艾香艳 时国朝 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期184-187,共4页
关键词 4-1BB/4-1BBL 过敏性哮喘 共刺激信号 免疫学发病机制 粘液高分泌 TH2细胞 细胞因子 IL-13
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4-1BB/4-1BBL在自身免疫性心肌炎小鼠心肌中的表达及意义 被引量:1
13
作者 郭海鹏 唐其柱 +3 位作者 姜明 沈涤非 严玲 邓伟 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2008年第5期563-567,I0001,共6页
目的:探讨4-1BB/4-1BBL在实验性自身免疫性心肌炎(EAM)小鼠心肌组织中的表达及意义。方法:将提纯的猪心肌肌球蛋白和完全弗氏佐剂等体积混合成乳浊液在1 d、8 d免疫具有遗传易感性的BALB/c小鼠,建立EAM模型。对照组小鼠仅用完全弗氏佐... 目的:探讨4-1BB/4-1BBL在实验性自身免疫性心肌炎(EAM)小鼠心肌组织中的表达及意义。方法:将提纯的猪心肌肌球蛋白和完全弗氏佐剂等体积混合成乳浊液在1 d、8 d免疫具有遗传易感性的BALB/c小鼠,建立EAM模型。对照组小鼠仅用完全弗氏佐剂皮下注射。分别于初次免疫后21 d、80 d进行心肌炎症评分及血清cTnI测定,采用免疫荧光及RT-PCR技术检测4-1BB/4-1BBL在小鼠心肌组织中的表达。结果:在急性期21 d,模型组小鼠心肌组织见不同程度的急性炎性细胞浸润和心肌细胞变性坏死、cTnI水平高于对照组(P<0.05);80d模型组小鼠心肌组织炎症减弱伴有纤维化出现、cTnI较前期降低;免疫荧光见4-1BBL在模型组心肌中表达明显,在对照组小鼠心肌中少量表达(P<0.05);21 d模型组小鼠心肌组织中4-1BB/4-1BBL基因表达水平均高于对照组(P<0.01),80 d时表达仍然升高(P<0.01)。结论:4-1BB/4-1BBL在EAM小鼠心肌中的表达是上调的,4-1BB/4-1BBL通路参与了自身免疫性心肌炎的发生发展过程。 展开更多
关键词 心肌肌球蛋白 4-1BB/4-1BBL 心肌炎 自身免疫
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小鼠髓系树突状细胞4-1BB及4-1BBL表达调节 被引量:2
14
作者 张烽 马倩茹 +3 位作者 席泓 周桓 张学光 顾宗江 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期183-186,共4页
探讨小鼠髓系树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDC)共刺激分子4-1BB及其配体4-1BBL表达的变化。将促DC成熟活化因子CD40L-CHO、TNF-α、LPS和IFN-γ,免疫负性调节因子IL-10以及各成熟活化因子与IL-10联合加入BMDC中,观... 探讨小鼠髓系树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDC)共刺激分子4-1BB及其配体4-1BBL表达的变化。将促DC成熟活化因子CD40L-CHO、TNF-α、LPS和IFN-γ,免疫负性调节因子IL-10以及各成熟活化因子与IL-10联合加入BMDC中,观察BMDC上4-1BB及4-1BBL表达的变化。结果显示,加入成熟活化因子的各组BMDC上4-1BB及4-1BBL表达与对照组相比有显著上调(P<0.05)。而IL-10组与对照组相比两者的表达显著下调(P<0.05),且各成熟活化因子与IL-10联合应用与单用IL-10组相比,BMDC上4-1BB和4-1BBL表达上调,有显著性差异(P<0.05)。提示成熟活化因子不仅能上调BMDC上4-1BB和4-1BBL的表达并且能有效拮抗mIL-10对BMDC上4-1BB和4-1BBL表达的下调作用。 展开更多
关键词 树突状细胞 4-1BB 4-1BBL
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人4-1BB转基因细胞的构建及体外生物学功能的研究 被引量:2
15
作者 董秋明 张光波 +2 位作者 徐颖 陈永井 张学光 《苏州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2006年第1期48-52,共5页
目的构建人共刺激分子4-1BB转基因细胞并探讨4-1BB的体外生物学功能。方法利用RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞总RNA中克隆出人4-1BB基因,经双酶切装入逆转录病毒载体pGEZ-Term中,重组逆转录病毒载体4-1BB/pGEZ-Term与两个辅助病毒载体用... 目的构建人共刺激分子4-1BB转基因细胞并探讨4-1BB的体外生物学功能。方法利用RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞总RNA中克隆出人4-1BB基因,经双酶切装入逆转录病毒载体pGEZ-Term中,重组逆转录病毒载体4-1BB/pGEZ-Term与两个辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T,用含有完整病毒颗粒的293T细胞的培养上清感染重新铺板的293T细胞,加入Zeocin选择性培养基进行筛选。经RT-PCR、Western blot、流式细胞仪表型检测等方法鉴定转基因细胞;3H-TdR掺入法分析转基因细胞对T细胞的作用;DCs培养过程中,加入转基因细胞与激发型CD40单抗5C11,流式细胞仪分析DCs表面分子CD80、CD83和CD86的表达。结果成功构建了能稳定表达人4-1BB蛋白的转基因细胞4-1BB/293T,该转基因细胞与T细胞共培养可抑制其体外增殖,可协同5C11促进DCs的体外成熟,上调DCs表面分子CD80、CD83和CD86的表达。结论稳定表达4-1BB蛋白的转基因细胞株的建立为该基因功能的后续研究和单克隆抗体的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 4-1BB 基因转染 共刺激分子 T细胞 DCS
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4-1BB/4-1BBL在胃癌组织及其外周血中的表达及临床意义 被引量:3
16
作者 宋振川 李勇 +3 位作者 刘志一 范立侨 赵群 郭宸君 《实用癌症杂志》 2010年第4期337-339,共3页
目的探讨胃癌局部免疫与全身免疫状态。方法应用流式细胞术,测定胃癌患者癌组织及外周血中T淋巴细胞亚群、NK细胞水平,同时测定癌组织、癌周正常胃黏膜、淋巴结及外周血单个核细胞中4-1BB、4-1BBL含量。结果胃癌患者外周血中CD3+、CD4+... 目的探讨胃癌局部免疫与全身免疫状态。方法应用流式细胞术,测定胃癌患者癌组织及外周血中T淋巴细胞亚群、NK细胞水平,同时测定癌组织、癌周正常胃黏膜、淋巴结及外周血单个核细胞中4-1BB、4-1BBL含量。结果胃癌患者外周血中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值和NK细胞表达水平均显著高于胃癌组织(P<0.05),CD8+细胞计数反之(P<0.05)。4-1BB表达量由低到高的顺序为外周血单个核细胞、正常胃黏膜、淋巴结、癌组织、癌组织中单个核细胞;其中癌组织明显高于正常黏膜(P<0.05),有统计学意义;外周血单个核细胞中4-1BB表达量明显低于其他组织,有统计学意义(P<0.01)。癌组织中4-1BBL表达量低于正常黏膜,有统计学意义(P<0.05)。癌组织中4-1BB表达量与CD4+/CD8+比值、NK细胞表达水平呈负相关关系,4-1BBL与CD4+/CD8+比值、NK细胞表达水平呈正相关关系,有统计学意义(P<0.05)。结论胃癌组织内免疫力低下,处于免疫抑制状态,胃癌组织的低免疫状态与4-1BBL缺乏有关;4-1BB与胃癌患者局部和全身的免疫状态亦有密切关系。总之,胃癌组织中4-1BB/4-1BBL的表达失衡与胃癌的免疫逃逸、低免疫状态有关。 展开更多
关键词 胃癌 4-1BBL蛋白 4-1BB蛋白 免疫逃逸
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4-1BB体外刺激的T淋巴细胞抑制小鼠黑色素瘤的作用 被引量:2
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作者 田蓉 李巍 于继云 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第5期456-457,共2页
目的:探讨4-1BB体外刺激下小鼠T淋巴细胞的增殖情况及对小鼠黑色素瘤的抑瘤效果.方法:在IL-2+CD3+CD28基础上,增加4-1BB为刺激条件,体外培养经诱导的小鼠腹股沟淋巴结T细胞,MTT法检测其体外增殖率,并建立小鼠黑色素瘤实验模型,观察所诱... 目的:探讨4-1BB体外刺激下小鼠T淋巴细胞的增殖情况及对小鼠黑色素瘤的抑瘤效果.方法:在IL-2+CD3+CD28基础上,增加4-1BB为刺激条件,体外培养经诱导的小鼠腹股沟淋巴结T细胞,MTT法检测其体外增殖率,并建立小鼠黑色素瘤实验模型,观察所诱导T淋巴细胞的抑瘤效果.结果:增加4-1BB后,T淋巴细胞的增殖率明显增加[(1.15±0.08)%vs(0.57±0.06)%,P<0.01],将所诱导的T淋巴细胞注入小鼠模型,其肺转移灶数目明显减少[(93±16)vs(151±22),P<0.01],生存率提高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:4-1BB在体外可促进T淋巴细胞的增殖,并具有较强的抗黑色素瘤作用. 展开更多
关键词 4-1BB 黑色素瘤 小鼠
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急性动脉粥样硬化性脑梗死患者外周血单核细胞4-1BB配体表达水平的变化 被引量:2
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作者 刘广志 苗丹 高旭光 《临床神经病学杂志》 CAS 北大核心 2011年第1期8-10,共3页
目的研究急性动脉粥样硬化性脑梗死(AC I)患者外周血单核细胞(PBMC)4-1BB配体(4-1BBL)表达水平的变化。方法通过流式细胞术和酶联免疫吸附分析(ELISA)测定20例ACI患者PBMC4-1BBL的表达和血浆可溶性4-1BBL(s4-1BBL)的浓度,并与19例动脉... 目的研究急性动脉粥样硬化性脑梗死(AC I)患者外周血单核细胞(PBMC)4-1BB配体(4-1BBL)表达水平的变化。方法通过流式细胞术和酶联免疫吸附分析(ELISA)测定20例ACI患者PBMC4-1BBL的表达和血浆可溶性4-1BBL(s4-1BBL)的浓度,并与19例动脉粥样硬化患者及23名健康对照者进行比较,并对部分患者做了连续观察。结果与正常对照组CD14+单核细胞上4-1BBL的阳性细胞率和平均荧光强度(MFI)[(4.6±2.4)%,(4.1±2.7)]和血浆s4-1BBL(75 pg/ml)比较,ACI组[(7.9±4.1)%,(7.0±4.0),133.2 pg/ml]显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05),与动脉粥样硬化组阳性细胞率[(6.3±5.0)%]和MFI(5.2±2.3)和血浆s4-1BBL(84 pg/ml)比较差异均无统计学意义;在ACI恢复期4-1BBL的阳性细胞率和MFI分别为(7.6±5.4)%和(5.6±2.1),血浆s4-1BBL水平为113.2 pg/ml,与急性期相比呈下降趋势,但差异无统计学意义。结论 ACI患者4-1BBL的表达上调是ACI发病早期即被诱导产生的一个异常免疫应答,在动脉粥样硬化所致缺血性脑卒中的发病过程中可能发挥着重要的作用。 展开更多
关键词 急性脑梗死 4-1BB配体 外周血 动脉粥样硬化
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小鼠髓系树突状细胞上4-1BB分子的功能性表达 被引量:2
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作者 李敏 陈成 +7 位作者 张烽 古涛 朱一蓓 於葛华 马泓冰 戴俊 张学光 顾宗江 《苏州大学学报(医学版)》 CAS 2004年第6期791-793,共3页
目的 探讨小鼠髓系DC(CD8α-)中4-1BB的功能性表达。方法 采用免疫荧光标记和流式细胞仪检测DC上4-1BB分子的表达,用酶联免疫方法检测DC分泌的IL-2和IL-12。结果 小鼠髓系DC前体细胞中已有4-1BB分子表达,且随着DC的分化发育和成熟,其表... 目的 探讨小鼠髓系DC(CD8α-)中4-1BB的功能性表达。方法 采用免疫荧光标记和流式细胞仪检测DC上4-1BB分子的表达,用酶联免疫方法检测DC分泌的IL-2和IL-12。结果 小鼠髓系DC前体细胞中已有4-1BB分子表达,且随着DC的分化发育和成熟,其表达上调。激发型抗4-1BB分子的抗体2A刺激的DC分泌IL-2和IL-12能力增强,而2A抗体联合TNF-α刺激的DC分泌IL-2和IL-12的量明显高于两者单独刺激组(P<0.05)。结论 小鼠髓系DC表达的4-1BB具有功能性。 展开更多
关键词 树突状细胞 4-1BB
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类风湿关节炎患者CD4^+T细胞亚群4-1BB和CD28分子的表达及临床意义 被引量:1
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作者 赵进良 王勤 +3 位作者 张学光 沈静霞 刘奇 汤俊明 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1179-1180,共2页
目的探讨类风湿性关节炎(RA)患者CD4+T细胞4-1BB和CD28的表达及其与疾病的关系。方法根据DAS积分将RA组分为活动期组和稳定期组,用多色荧光流式细胞技术检测CD28、4-1BB在RA组和正常对照组外周血T细胞上的表达。结果与对照组比较,RA组CD... 目的探讨类风湿性关节炎(RA)患者CD4+T细胞4-1BB和CD28的表达及其与疾病的关系。方法根据DAS积分将RA组分为活动期组和稳定期组,用多色荧光流式细胞技术检测CD28、4-1BB在RA组和正常对照组外周血T细胞上的表达。结果与对照组比较,RA组CD4+T细胞增高,CD8+T细胞降低,CD4+CD28-T细胞频数增高(P<0.05)。RA组4-1BB在CD4+T细胞和CD4+CD28-T细胞上的表达明显高于对照组(P<0.05)。活动期组CD4+CD28-T细胞频数和4-1BB在CD4+T细胞上的表达高于稳定期组(P<0.05)。结论共刺激分子CD28在RA患者自身免疫性T细胞中表达减少,而4-1BB表达相应增高,这可能与此类自身免疫反应细胞组织损伤活性增强。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 4-1BB CD28
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