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2021—2023年安徽省肉羊主产区羊口疮病毒感染情况调查及流行毒株B2L和F1L基因的遗传演化分析
1
作者 张留君 陈佳乐 +7 位作者 冯星 陈威振 邓亚飞 王波 左国林 贺绍君 辛洪雷 刘德义 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第7期697-703,共7页
目的为明确安徽省肉羊主产区羊口疮病毒(ORFV)感染情况及流行毒株的遗传演变特征。方法使用荧光定量PCR(qPCR)对2021—2023年从安徽省主要肉羊养殖地市采集的303份临床样本进行ORFV检测;采用常规PCR扩增阳性样本中ORFV的全长B2L和F1L基... 目的为明确安徽省肉羊主产区羊口疮病毒(ORFV)感染情况及流行毒株的遗传演变特征。方法使用荧光定量PCR(qPCR)对2021—2023年从安徽省主要肉羊养殖地市采集的303份临床样本进行ORFV检测;采用常规PCR扩增阳性样本中ORFV的全长B2L和F1L基因,并通过测序后进行遗传演化分析。结果qPCR检测显示,本次临床样本ORFV总阳性率为48.8%(148/303)。序列多重比对分析显示,本次56株样本毒株B2L基因间DNA和氨基酸序列相似性分别为96.7%~100.0%和97.4%~100.0%。同时,本次56株样本毒株F1L基因间DNA和氨基酸序列相似性分别为95.1%~100.0%和95.0%~100.0%。根据B2L基因DNA序列构建的遗传进化树结果显示,山羊源样本毒株FY-TYA与甘肃人源参考毒株Gansu位于同一小分支,而山羊源样本毒株FY-XQC与国内疫苗参考毒株China Vaccine和国内山羊源参考毒株OV-HLJ-04位于同一小分支。同时,根据F1L基因DNA序列构建的遗传进化树显示,山羊源样本毒株FY-XQA和FY-XQC均与新疆绵羊源参考毒株Xinjiang位于同一小分支。结论安徽省主要肉羊养殖地区ORFV感染较为普遍,且当前流行毒株B2L和F1L基因DNA及氨基酸序列均存在不同程度的遗传变异,其中F1L基因变异程度较大。此外,部分山羊源样本毒株与人源、疫苗及绵羊源参考毒株亲缘关系较近。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 b2l基因 F1L基因 遗传演化分析
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羊口疮病毒的F1L和B2L基因研究现状
2
作者 杨毅 阿安拉木 朵红 《动物医学进展》 北大核心 2025年第10期115-118,共4页
羊传染性脓疱(CE)是由羊传染性脓疱病毒(CEV)或学名羊口疮病毒(ORFV)引起的一种急性接触性人兽共患病。其基因组长约140 kb,编码130多个基因,其中,F1L和B2L基因保守程度高,蛋白免疫原性较好。论文介绍了F1L和B2L基因的研究现状,以期为O... 羊传染性脓疱(CE)是由羊传染性脓疱病毒(CEV)或学名羊口疮病毒(ORFV)引起的一种急性接触性人兽共患病。其基因组长约140 kb,编码130多个基因,其中,F1L和B2L基因保守程度高,蛋白免疫原性较好。论文介绍了F1L和B2L基因的研究现状,以期为ORFV的检测和新型疫苗的研制提供新的思路。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱病毒 F1L基因 b2l基因
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马头山羊羊口疮病毒的分离鉴定及其B2L基因的特征分析
3
作者 向敏 刘辰晖 +6 位作者 余婕 周源 胡修忠 夏永春 王定发 夏瑜 程蕾 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第11期32-39,共8页
为确定湖北省某马头山羊养殖场发生的疑似羊口疮(Orf)的病原及其分子生物学特征。本试验利用牛睾丸细胞对马头山羊唇部痂皮病料进行病毒分离培养,通过细胞病变观察、病毒滴度测定、PCR扩增和测序等方法对分离毒株进行了鉴定。并采用MegA... 为确定湖北省某马头山羊养殖场发生的疑似羊口疮(Orf)的病原及其分子生物学特征。本试验利用牛睾丸细胞对马头山羊唇部痂皮病料进行病毒分离培养,通过细胞病变观察、病毒滴度测定、PCR扩增和测序等方法对分离毒株进行了鉴定。并采用MegAlign、MEGA 7.0、DNAMAN和Bioedit等软件分析了分离毒株和China Vaccine毒株B2L基因的核苷酸序列相似性,并预测了蛋白二级结构和疏水性。结果显示,接种病料上清液的牛睾丸细胞盲传5代后出现细胞病变,经PCR扩增的分离毒株B2L基因大小为1137 bp;所分离羊口疮病毒(ORFV)病毒滴度可达105.5TCID50/mL;分离毒株与AH1404、FJ-YX和GX-BH毒株B2L基因同源性为99.3%;与China Vaccine毒株同源性为89.5%。分离毒株与China Vaccine毒株B2L基因序列分析显示处在不同分支,两者存在8个位点突变(aa11、aa80、aa101、aa123、aa126、aa294、aa327和aa333);B2L蛋白为稳定的疏水性蛋白;分离毒株和China Vaccine毒株的蛋白二级结构存在差异。结果表明,该养殖场ORFV的B2L基因出现变异,有关部门应当加强对ORFV流行情况的监测。 展开更多
关键词 羊口疮病毒(ORFV) 分离鉴定 遗传演化分析 b2l基因
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羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒构建及其在MDBK细胞中的表达 被引量：17
4
作者 刘嫒 冯将 +3 位作者 鲜思美 刘宗胜 李鹏飞 罗代兵 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1124-1128,共5页
目的为构建羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒,同时验证其在MDBK细胞中的表达。方法本试验以pVAX1为真核表达载体,在前期构建的克隆质粒pMD18-T-B2L和pMD18-T-F1L基础上,构建真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L,对其分别进行双酶切和... 目的为构建羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒,同时验证其在MDBK细胞中的表达。方法本试验以pVAX1为真核表达载体,在前期构建的克隆质粒pMD18-T-B2L和pMD18-T-F1L基础上,构建真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L,对其分别进行双酶切和测序鉴定,将鉴定正确的真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L转染至MDBK细胞,采用RT-PCR和间接免疫荧光试验(IFA)检测目的基因表达。结果双酶切鉴定和序列测定表明真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L构建成功,RT-PCR和IFA同时验证目的基因在MDBK细胞浆中能瞬时表达。结论本试验构建成功的真核表达质粒为下一步羊口疮病毒核酸疫苗研究奠定基础。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 F1L基因 b2l基因 真核表达
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羊口疮病毒B2L蛋白二级结构及其细胞表位的预测 被引量：10
5
作者 王光祥 尚佑军 +3 位作者 吕占禄 田宏 张克山 刘湘涛 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1133-1138,共6页
采用网络平台的SOPMA服务器和DNAStar软件预测羊口疮病毒(ORFV)B2L蛋白的二级结构;综合利用DNAStar软件、二级结构预测及ABCpred方案预测羊口疮病毒B2L蛋白的B细胞表位;分别采用人工神经网络法(ANNA)和在线程序预测羊口疮病毒B2L蛋白的... 采用网络平台的SOPMA服务器和DNAStar软件预测羊口疮病毒(ORFV)B2L蛋白的二级结构;综合利用DNAStar软件、二级结构预测及ABCpred方案预测羊口疮病毒B2L蛋白的B细胞表位;分别采用人工神经网络法(ANNA)和在线程序预测羊口疮病毒B2L蛋白的细胞毒性T细胞和辅助T细胞的抗原表位。结果显示,羊口疮病毒B2L蛋白的整个结构中α-螺旋区域和无规则卷曲区域出现得较多,其中α-螺旋占30.42%,β-片层占24.34%,β-转角占5.56%,无规则卷曲占39.68%;有6个优势B细胞表位,3个细胞毒性T细胞表位和2个辅助T细胞表位。本研究为ORFV诊断方法的建立、单克隆抗体的制备及表位疫苗的研制提供了理论依据。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 b2l基因 二级结构 B细胞表位 T细胞表位 预测
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口疮病毒AH-GY13株的分离鉴定及B2L基因的原核表达 被引量：9
6
作者 宫晓华 殷冬冬 +8 位作者 王瑞 唐井玉 周晓雅 梅楠 张雪梅 兰梦蝶 陈鹏 王勇 王桂军 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期185-191,共7页
为确定安徽地区某山羊场发生的疑似口疮（orf）的病原,经过临床诊断、PCR检测以及HeLa细胞培养等途径,确定其为口疮病毒（ORFV）,并命名为AH-GY13株。根据GenBank中公布的口疮病毒B2L囊膜蛋白基因序列,设计引物,用PCR方法扩增口疮病毒B2... 为确定安徽地区某山羊场发生的疑似口疮（orf）的病原,经过临床诊断、PCR检测以及HeLa细胞培养等途径,确定其为口疮病毒（ORFV）,并命名为AH-GY13株。根据GenBank中公布的口疮病毒B2L囊膜蛋白基因序列,设计引物,用PCR方法扩增口疮病毒B2L基因,并将此基因序列及其推导的氨基酸序列与其他不同来源的ORFV分离株进行比较。结果显示,AH-GY13株与选取的10株毒株的核苷酸序列同源性在97.4%~99.3%之间,氨基酸同源性在97.9%~99.7%之间;进化树分析显示,此毒株与辽宁省分离株属于同一分支。将该基因定向插入到原核表达载体pET-32a（＋）中,构建原核表达载体pET-32a（＋）-B2L。转化BL21,经IPTG诱导,B2L基因获得表达,以包涵体的形式存在,通过优化诱导时间和IPTG的浓度,确定了表达B2L基因的最佳诱导条件：IPTG终浓度为1 mmol/L,37℃诱导4 h。Western-blot分析表明,表达产物具有良好的免疫活性。上述结果为进一步研究ORFV B2L囊膜蛋白的结构与功能奠定了基础。 展开更多
关键词 口疮病毒 分离鉴定 b2l基因 序列分析 原核表达 蛋白质免疫印迹
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羊口疮病毒B2L基因DNA疫苗载体的构建及其在BHK-21细胞中的表达 被引量：9
7
作者 张克山 刘永杰 +2 位作者 孔汉金 尚佑军 刘湘涛 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期951-954,共4页
目的为构建羊传染性脓疱病毒(ORFV)B2L基因真核表达质粒并验证B2L基因在BHK-21细胞中的表达及表达的稳定性。方法以ORFV主要免疫原性基因B2L为目标,以pVAX1为表达载体,构建重组真核表达质粒pVAX1-B2L,鉴定正确后转染仓鼠肾细胞(BHK-21)... 目的为构建羊传染性脓疱病毒(ORFV)B2L基因真核表达质粒并验证B2L基因在BHK-21细胞中的表达及表达的稳定性。方法以ORFV主要免疫原性基因B2L为目标,以pVAX1为表达载体,构建重组真核表达质粒pVAX1-B2L,鉴定正确后转染仓鼠肾细胞(BHK-21),通过间接免疫荧光试验(IFA)验证B2L基因表达。结果扩增出目的片段经序列测定和分析证明为ORFV B2L基因,经双酶切鉴定和序列测定分析证明了pVAX1-B2L质粒的正确性,IFA证实目的基因在BHK-21细胞中能够瞬时表达。结论为进一步研制基于羊口疮病毒B2L基因的DNA疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 b2l基因 真核表达 DNA疫苗
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羊IL-2基因和羊口疮病毒B2L基因真核表达重组质粒联合免疫小鼠的效果评价 被引量：8
8
作者 鲜思美 李鹏飞 +5 位作者 冯将 刘嫒 李婷 包细明 张益 张素辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期663-667,共5页
为评价羊白介素2(IL-2)基因和羊口疮病毒(OrfV)B2L基因真核表达重组质粒联合接种小鼠的免疫效果,本研究将pVAX1-B2L、pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2及空载体pVAX1和PBS对照组通过肌肉注射的方式免疫KM小鼠,并采用ELISA方法和MTT方法检测免疫小... 为评价羊白介素2(IL-2)基因和羊口疮病毒(OrfV)B2L基因真核表达重组质粒联合接种小鼠的免疫效果,本研究将pVAX1-B2L、pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2及空载体pVAX1和PBS对照组通过肌肉注射的方式免疫KM小鼠,并采用ELISA方法和MTT方法检测免疫小鼠的体液和细胞免疫反应。结果表明,pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2联合免疫组小鼠血清抗体效价和IL-2水平均显著高于pVAX1-B2L免疫组,与pVAX1和PBS对照组相比差异极显著(p<0.01)。而且pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2免疫组的脾淋巴细胞增殖水平高于pVAX1-B2L免疫组、空载体pVAX1组和PBS对照组(p<0.01)。因此,pVAX1-B2L+pVAX1-IL-2联合免疫KM小鼠可以诱导特异性体液免疫和细胞免疫,并且IL-2具有免疫佐剂的作用,为进一步将其用于Orf的防制奠定了基础。 展开更多
关键词 OrfV b2l基因 IL-2 基因疫苗 联合免疫
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羊口疮病毒B2L基因DNA疫苗的构建及其诱导的免疫应答 被引量：10
9
作者 李鹏飞 冯将 +5 位作者 鲜思美 刘嫒 李婷 包细明 张益 张素辉 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期704-708,715,共6页
为研究所构建羊口疮病毒（OrfV）B2L基因DNA疫苗诱导小鼠的免疫应答效果，本研究对pMD18T-B2L质粒进行PCR扩增，克隆B2L片段至pVAX1载体中构建pVAX1-B2L重组质粒，进行酶切和测序鉴定；采用脂质体法将pVAX1-B21。真核表达质粒转染MDBK... 为研究所构建羊口疮病毒（OrfV）B2L基因DNA疫苗诱导小鼠的免疫应答效果，本研究对pMD18T-B2L质粒进行PCR扩增，克隆B2L片段至pVAX1载体中构建pVAX1-B2L重组质粒，进行酶切和测序鉴定；采用脂质体法将pVAX1-B21。真核表达质粒转染MDBK细胞，RTPCR和IFA法检测B2L基因在MDBK细胞中的转录和表达；将构建的DNA疫苗免疫KM系小鼠，采用间接ELISA、MTT和FACS法对其诱导的免疫应答进行研究。结果显示，成功构建pVAX1-B2L真核表达质粒，并在MDBK细胞中表达；免疫小鼠后，DNA疫苗能诱导小鼠产生Orfv特异性抗体；脾淋巴细胞增殖、CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞亚群百分比和IL-2、IFN-γ、IL-4细胞因子均高于pVAX1组和PBS组。结果表明，本研究制备的DNA疫苗能够诱导小鼠产生较高水平的体液免疫和细胞免疫应答。 展开更多
关键词 羊口疮病毒(OrfV) b2l基因 DNA疫苗 体液免疫 细胞免疫
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羊口疮病毒B2L和VIR基因原核表达及抗原性鉴定 被引量：10
10
作者 李杰 李前瑞 +3 位作者 田婷婷 许君艳 姚运亮 陈德坤 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第3期1-6,共6页
为检测羊口疮病毒(Orf virus)B2L和VIR蛋白的抗原性,通过PCR方法扩增出羊口疮病毒B2L和VIR基因,与原核表达载体pET-32a连接,将重组质粒转化到BL21(DE3)感受态中,对其进行BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和测序验证。对鉴定为阳性的菌液进行诱... 为检测羊口疮病毒(Orf virus)B2L和VIR蛋白的抗原性,通过PCR方法扩增出羊口疮病毒B2L和VIR基因,与原核表达载体pET-32a连接,将重组质粒转化到BL21(DE3)感受态中,对其进行BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和测序验证。对鉴定为阳性的菌液进行诱导表达,并进行SDS-PAGE分析。用灭活的羊口疮病毒免疫家兔,制备多克隆抗体,Western blot、ELISA鉴定B2L和VIR蛋白的抗原性。结果显示B2L、VIR蛋白均能与兔抗羊口疮病毒抗血清结合,证明B2L、VIR蛋白具有与羊口疮病毒共同的B细胞表位。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 b2l基因 VIR基因 原核表达 抗原性
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羊传染性脓疱病毒松原分离株的分离鉴定及B2L基因的克隆与序列分析 被引量：8
11
作者 赵魁 贺文琦 +4 位作者 宋德光 孟伶俐 陈克研 张学慧 高丰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1162-1166,共5页
利用原代犊牛睾丸细胞从临床上表现口疮症状的羔羊痂皮材料中分离获得1株病毒,对该株病毒进行病毒形态学、理化学、PCR检测与动物回归试验等系统鉴定后,证实该分离株为羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV),命名为ORFV-sy。利用PCR方法克... 利用原代犊牛睾丸细胞从临床上表现口疮症状的羔羊痂皮材料中分离获得1株病毒,对该株病毒进行病毒形态学、理化学、PCR检测与动物回归试验等系统鉴定后,证实该分离株为羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV),命名为ORFV-sy。利用PCR方法克隆出其B2L基因,并将该基因序列和推导的氨基酸序列与6个不同来源的ORFV毒株进行同源性和亲缘关系的比较分析。结果表明,各毒株间核苷酸和氨基酸的同源性分别为97.8%～99.5%和97.6%～99.5%;系统发育进化树结果表明,ORFV-sy毒株与印度分离绵羊株ORFV-Mukteswar67/04、ORFV-Izatnagar79/04的亲缘关系较近,表明不同地区分离毒株的B2L基因差异不大。 展开更多
关键词 ORFV—sy 分离鉴定 b2l基因 序列分析
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新疆羊口疮病毒分离鉴定及B2L基因分析与表达 被引量：6
12
作者 李瑞芳 李国华 +3 位作者 孟仁 乔军 张辉 陈创夫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期202-205,共4页
为研究新疆地区羊口疮(Orf)病毒(ORFV)的生物学特性及流行特征,本研究采集新疆地区疑似Orf的羔羊结痂病料,用MDBK传代细胞进行病毒分离培养及电镜观察,进行动物回归实验;对ORFV B2L基因进行PCR扩增,并构建B2L基因原核表达重组质粒pET-32... 为研究新疆地区羊口疮(Orf)病毒(ORFV)的生物学特性及流行特征,本研究采集新疆地区疑似Orf的羔羊结痂病料,用MDBK传代细胞进行病毒分离培养及电镜观察,进行动物回归实验;对ORFV B2L基因进行PCR扩增,并构建B2L基因原核表达重组质粒pET-32a-B2L,转化至大肠杆菌BL21。将表达产物进行SDS-PAGE及western blot检测,结果证明所获得的分离株ORFV-shz为ORFV,与India 67/04分离株的亲缘关系最近,其重组B2L蛋白大小为60 ku,并具有良好反应原性。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 b2l基因 原核表达 反应原性
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抗羊口疮病毒囊膜蛋白B2L小鼠多克隆抗体的制备和应用 被引量：9
13
作者 周祺 顾香雪 +8 位作者 许泽军 黄荣 黄军生 李浩然 李涛 周晓雅 苏观志 殷冬冬 王桂军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1036-1040,共5页
目的获取羊口疮病毒(ORFV)囊膜蛋白B2L并制备鼠抗B2L蛋白多克隆抗体。方法采用PCR扩增获得B2L基因,并将其分别克隆至原核表达载体p ET-32a和真核表达载体p3×FLAG-CMV-14。两个重组表达载体均经过鉴定,重组原核表达载体使用BL21大... 目的获取羊口疮病毒(ORFV)囊膜蛋白B2L并制备鼠抗B2L蛋白多克隆抗体。方法采用PCR扩增获得B2L基因,并将其分别克隆至原核表达载体p ET-32a和真核表达载体p3×FLAG-CMV-14。两个重组表达载体均经过鉴定,重组原核表达载体使用BL21大肠杆菌表达,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白。通过Tris-尿素溶液洗去非目的蛋白,Western blot法鉴定。将定量的纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗ORFV B2L多克隆抗体。将真核表达重组质粒p3×FLAG-B2L转染Vero细胞、BHK-21细胞,使用间接免疫荧光法(IFA)对抗B2L蛋白的多克隆抗体鉴定,并应用于免疫组织化学染色检测患病羊唇部组织ORFV的表达。结果 Western blot法确定了制备的B2L蛋白的特异性; IFA结果表明制备的小鼠抗B2L多克隆抗体有特异性和反应原性,免疫组织化学染色法结果表明该抗体可以检测出患病羊唇部组织的ORFV。结论成功制备了特异性的小鼠抗B2L多克隆抗体。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 b2l 多克隆抗体
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接触传染性脓疱皮炎病毒B2L基因的克隆和序列分析 被引量：4
14
作者 郑增忍 李会荣 +6 位作者 龚振华 党岩 胡永浩 沈正达 刘俊辉 李葳 张彦明 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期236-239,共4页
参照文献和 Gen Bank发表的接触传染性脓疱皮炎病毒 (CPDV ) NZ- 2株的 Bam H / B片段的基因序列 ,设计并合成 1对引物 ,通过 PCR扩增出国内 CPDV疫苗株和 3个分离株的 B2 L 基因 ,目的片段长约 1.13kb。将目的片段克隆到 p MD18- T载... 参照文献和 Gen Bank发表的接触传染性脓疱皮炎病毒 (CPDV ) NZ- 2株的 Bam H / B片段的基因序列 ,设计并合成 1对引物 ,通过 PCR扩增出国内 CPDV疫苗株和 3个分离株的 B2 L 基因 ,目的片段长约 1.13kb。将目的片段克隆到 p MD18- T载体后进行序列测定 ,并用 DNAStar软件比较分析国内的 CPDV株与 NZ- 2株的核苷酸序列和推导的氨基酸序列的同源性。结果表明 ,国内疫苗株和 3株分离株的核苷酸序列同源性分别为 99.7%、96 .9%和 97.4 % ,与国外 NZ- 2株的同源性为 96 .1%。国内 CPDV株与 NZ- 2株的氨基酸序列同源性分别为 92 .0 %～ 96 .0 % ,表明CPDV Bam H / B2 L基因变异的幅度小。 展开更多
关键词 接触传染性脓疱皮炎病毒 b2l基因 克隆 序列分析 同源性
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羊口疮病毒湖北株B2L基因的克隆与遗传进化分析 被引量：5
15
作者 郭锐 田永祥 +5 位作者 周丹娜 段正赢 杨克礼 刘泽文 袁芳艳 刘威 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第2期37-39,共3页
为了分析羊口疮病毒湖北株(ORFV-HB-YX株)B2L基因遗传变化规律,参照Gen Bank公布的ORFV-B2L基因序列设计特异性引物,对ORFV-HB株B2L基因进行PCR扩增、克隆、测序以及遗传进化分析。结果显示,B2L基因PCR扩增产物大小为1 137 bp,编码379... 为了分析羊口疮病毒湖北株(ORFV-HB-YX株)B2L基因遗传变化规律,参照Gen Bank公布的ORFV-B2L基因序列设计特异性引物,对ORFV-HB株B2L基因进行PCR扩增、克隆、测序以及遗传进化分析。结果显示,B2L基因PCR扩增产物大小为1 137 bp,编码379个氨基酸,系统进化树显示HB-YX株与Gen Bank参考毒株的核苷酸序列同源性为97.0%~99.0%,与福建FJ-GS株同源性高达99%亲缘关系最近,属于同一分支。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 b2l基因 克隆 遗传进化分析
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羊口疮病毒QD/2015株B2L基因克隆及生物信息学分析 被引量：8
16
作者 李智 仲亮 +5 位作者 张静 刘春羽 范俊豪 王海峰 牛云雷 张七斤 《中国动物检疫》 CAS 2017年第3期91-96,共6页
为分析羊口疮病毒(ORFV/QD/2015株)B2L基因的分子特征,预测其编码蛋白的生物学功能,对其B2L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定,应用生物信息学相关软件及方法,对扩增所得的基因进行序列分析,并对其编码蛋白的二级结构、细胞抗原表位、三... 为分析羊口疮病毒(ORFV/QD/2015株)B2L基因的分子特征,预测其编码蛋白的生物学功能,对其B2L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定,应用生物信息学相关软件及方法,对扩增所得的基因进行序列分析,并对其编码蛋白的二级结构、细胞抗原表位、三级结构、跨膜结构域和信号肽等进行预测和分析。结果显示:ORFV/QD/2015株B2L基因序列长1 137 bp,编码379个氨基酸;该毒株与其他12株羊口疮病毒参考株的B2L基因核苷酸序列同源性为96.8%~99.7%,氨基酸序列同源性为96.8%~99.2%。系统进化分析显示,ORFV/QD/2015株与2015年分离到的ORFV/Shaan Xi/2015/China株亲缘关系最近;B2L基因编码蛋白二级结构以α-螺旋区域和β-折叠区域所占比例较大,预测此蛋白可能存在7个细胞优势抗原表位,无跨膜区域,无信号肽区域;三级结构呈弯曲状螺旋结构。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 b2l基因 生物信息学分析 蛋白结构预测
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羊口疮病毒榆林株B2L和F1L串联基因在昆虫杆状病毒系统的表达 被引量：4
17
作者 冯平 李云章 +2 位作者 孙丰廷 屈雷 闫海龙 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第6期1-8,共8页
【目的】克隆分析羊口疮病毒(ORFV)榆林株(ORFV-Yulin)的F1L基因序列,通过昆虫杆状病毒表达B2L和F1L串联基因。【方法】采用PCR方法扩增ORFV-Yulin株F1L全长基因,测序后对其进行序列分析和遗传进化分析。扩增ORFV-Yulin株B2L融合基因(r ... 【目的】克隆分析羊口疮病毒(ORFV)榆林株(ORFV-Yulin)的F1L基因序列,通过昆虫杆状病毒表达B2L和F1L串联基因。【方法】采用PCR方法扩增ORFV-Yulin株F1L全长基因,测序后对其进行序列分析和遗传进化分析。扩增ORFV-Yulin株B2L融合基因(r B2L)和F1L融合基因(c F1L),利用碱基linker连接,通过重叠PCR方法扩增获得ORFV r B2L-linker-c F1L重组基因(r B2Lc F1L),将其与昆虫杆状病毒表达载体pBac5连接构建表达载体pBac-rB2LcF1L。将pBac-rB2LcF1L包装出杆状病毒,侵染sf9细胞,通过SDS-PAGE、Western-blotting以及质谱鉴定等方法验证目的基因r B2Lc F1L的表达。【结果】克隆获得了1 029bp的F1L全长基因,该基因高度保守,与FJ-MH2015株的序列相似性最高,核苷酸和氨基酸的相似性分别为99.0%和99.4%。系统进化分析表明,ORFV-Yulin株与XP(KU199840.1)、FJ-MH2015(KM675409.1)以及Shanxi(HQ221964.1)株同处于一个分支。PCR扩增获得了855bp的c F1L基因、1 180bp的r B2L基因及1 983bp的r B2Lc F1L基因,成功构建了pBacrB2LcF1L载体,并包装出相应的杆状病毒。B2L和F1L串联基因通过昆虫杆状病毒表达系统获得成功表达,表达产物的分子质量为80ku,且有部分重组蛋白能分泌到细胞培养基中。【结论】ORFV-Yulin株的B2L和F1L串联基因在昆虫杆状病毒系统表达成功。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 F1L基因 F1L+b2l串联表达 昆虫杆状病毒 基因表达
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口疮病毒B2L蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立 被引量：2
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作者 庞文静 张琪 +3 位作者 郭抗抗 何亚鹏 付明哲 许信刚 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期150-156,共7页
将口疮病毒(orf virus,ORFV)ORFV B2L蛋白基因克隆至原核表达载体p ET-28a(+)中进行重组B2L蛋白的诱导表达;对纯化复性后的B2L蛋白进行Western-blot鉴定;用复性后的B2L蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立检测血清ORFV抗体水平的间接ELI... 将口疮病毒(orf virus,ORFV)ORFV B2L蛋白基因克隆至原核表达载体p ET-28a(+)中进行重组B2L蛋白的诱导表达;对纯化复性后的B2L蛋白进行Western-blot鉴定;用复性后的B2L蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立检测血清ORFV抗体水平的间接ELISA,并进行特异性、灵敏性和重复性试验,最后对临床样品进行检测。结果,原核表达出42 ku的重组B2L蛋白。Western-blot结果表明,重组蛋白具有良好的特异性和抗原反应性。最佳优化反应条件为:抗原包被量每孔600 ng,血清以1∶200倍稀释作用1 h,酶标二抗以1∶5 000倍稀释作用30 min,TMB显色时间为10 min。在该优化条件下,D_(450)≥0.342为阳性,D_(450)<0.342为阴性;特异性试验表明,此间接ELISA对其他阳性血清的检测结果为阴性;对121份阳性血清进行检测,敏感性为99.2%;重复性试验表明,批内和批间D_(450)值的变异系数分别在1.81%~6.23%和1.70%~7.45%之间。本试验建立的体系对临床上676份山羊血清样品进行检测,阳性率为99.4%。上述结果表明,本研究建立的间接ELISA可用于ORFV抗体的检测。 展开更多
关键词 山羊 绵羊 口疮病毒 b2l蛋白 原核表达 间接ELISA
原文传递
羊口疮病毒新疆野毒株SHZ1 B2L和F1L基因的克隆及遗传进化分析 被引量：4
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作者 杨海波 贺志昊 +5 位作者 刘昱成 彭叶龙 王国超 孟庆玲 乔军 陈创夫 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2013年第3期323-327,共5页
为了研究羊口疮病毒(ORFv)新疆野毒株的遗传进化情况,参照GenBank公布的ORFv B2L和F1L基因序列,设计特异性引物,对ORFv SHZ1新疆野毒株B2L和F1L基因进行PCR扩增,克隆、测序后进行遗传进化分析。结果表明:新疆野毒株SHZ1与GenBank公布的... 为了研究羊口疮病毒(ORFv)新疆野毒株的遗传进化情况,参照GenBank公布的ORFv B2L和F1L基因序列,设计特异性引物,对ORFv SHZ1新疆野毒株B2L和F1L基因进行PCR扩增,克隆、测序后进行遗传进化分析。结果表明:新疆野毒株SHZ1与GenBank公布的不同地域的17个流行株相比,B2L基因核苷酸同源性为97.28%～98.86%,推导氨基酸同源性为88.65%～90.50%;F1L基因核苷酸同源性为94.56%～97.07%,推导氨基酸同源性为93.82%～95.88%。基于B2L基因的遗传进化树分析发现,SHZ1株B2L基因与我国现用疫苗株B2L基因亲缘关系较近;而基于F1L基因的遗传进化树显示,SHZ1株与意大利分离株的亲缘关系最近。本研究提示ORFv SHZ1株可能是国外流行株与疫苗株重组后产生的一个变异株。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 新疆野毒株SHZ1 b2l基因 F1L基因 遗传进化分析
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羊口疮病毒B2L、F1L基因融合真核表达质粒诱导小鼠的免疫应答及IL-2对其作用影响的研究 被引量：3
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作者 鲜思美 张友 +7 位作者 李婷 杨倩 饶体宇 吴伯梅 包涛涛 闵德省 包细明 张益 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期168-174,共7页
为评价羊口疮病毒(OrfV)B2L、F1L基因融合真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L免疫小鼠诱导的体液和细胞免疫应答及IL-2对其免疫作用的影响。本研究将构建的pVAX1-B2L-F1L真核质粒转染MDBK细胞后,采用RT-PCR和间接免疫荧光试验(IFA)检测B2L-F1L... 为评价羊口疮病毒(OrfV)B2L、F1L基因融合真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L免疫小鼠诱导的体液和细胞免疫应答及IL-2对其免疫作用的影响。本研究将构建的pVAX1-B2L-F1L真核质粒转染MDBK细胞后,采用RT-PCR和间接免疫荧光试验(IFA)检测B2L-F1L融合基因在MDBK细胞中的表达;将pVAX1-B2L-F1L、pVAX1-B2L-F1L+pVAX1-IL-2、pVAX1空载体、生理盐水对照组KM系小鼠通过后腿肌肉注射的方式免疫,采用ELISA方法检测免疫小鼠血清中OrfV特异性抗体以及Th1型(IL-2、IFN-γ)、Th2型(IL-4、IL-6)细胞因子;MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖反应。结果显示,pVAX1-B2L-F1L重组质粒能够在MDBK细胞中表达;pVAX1-B2L-F1L+pVAX1-IL-2联合免疫组小鼠血清抗体及IL-2和IFN-γ水平均显著高于pVAX1-B2L-F1L组;该联合免疫组小鼠血清IL-4、IL-6细胞因子水平与pVAX1-B2L-F1L组相比差异不显著(p>0.05);该联合免疫组小鼠的脾淋巴细胞增殖水平高于pVAX1-B2L-F1L组(p<0.05)。由此表明,pVAX1-B2L-F1L能够诱导小鼠产生OrfV特异性体液免疫和细胞免疫应答,联合pVAX1-IL-2诱导的免疫反应以细胞免疫应答为主,且能够促进Th1型细胞因子的分泌。本研究为OrfV基因工程疫苗的研制提供了参考依据。 展开更多
关键词 OrfV b2l基因 F1L基因 IL-2 融合表达 免疫应答
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