目的探讨乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节蛋白1(HBV DNA polymerase trans activated protein 1,HBVDNAPTP1)在羧酸酯酶1(carboxylesterase 1,CES1)介导的单核细胞凋亡信号通路中的作用机制。方法利用Phyre2在线工具预测得到CES1三级结构...目的探讨乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节蛋白1(HBV DNA polymerase trans activated protein 1,HBVDNAPTP1)在羧酸酯酶1(carboxylesterase 1,CES1)介导的单核细胞凋亡信号通路中的作用机制。方法利用Phyre2在线工具预测得到CES1三级结构,分别用pCMV-Myc载体构建HBVDNAPTP1基因、pCMV-HA载体构建CES1基因及其截短体219-264aa和265-303aa的真核细胞表达质粒。分别转染细胞后通过免疫荧光和免疫共沉淀法确定HBVDNAPTP1和CES1互相作用的区段。后通过HBVDNAPTP1和CES1单独转染及共转染,检测其对细胞凋亡率的影响;同时在分离人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)上转染上述质粒,以确定CES1和HBVDNAPTP1对单核细胞形态的影响。利用qRT-PCR和Western blot检测不同质粒转染后下游Janus激酶-1(Janus kinase,JAK1)和信号传导及转录激活蛋白3(Signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的基因和蛋白的表达情况。结果HBVDNAPTP1与CES1有靶向关系,其中HBVDNAPTP1与CES1全长靶向结合效果最好,故后续实验以CES1全长序列为对象开展。CCK-8和PBMC电镜实验结果表明,与Control组和NC组相比,ov-HBVDNAPTP1组、ov-CES1组和ov-HBVDNAPTP1+ov-CES1组THP-1细胞的凋亡率均升高(P<0.001),细胞受损;与ov-HBVDNAPTP1组和ov-CES1组相比,ov-HBVDNAPTP1+ov-CES1组细胞凋亡率进一步升高(P<0.01),凋亡细胞、坏死细胞的数量增多。qRT-PCR和Western blot结果显示,HBVDNAPTP1和CES1均可以在转录水平和翻译水平上显著上调JAK1和STAT3的表达,且二者同时作用时上调趋势更加明显。结论本研究证实HBVDNAPTP1与CES1二者可协同抑制THP-1细胞增殖并诱导细胞损伤;还可协同上调JAK1/STAT3信号通路在转录和蛋白水平的表达来调控单核细胞凋亡。该发现为深入理解HBV感染相关免疫调控机制提供了新的理论依据。展开更多
Molecular modeling methods have been applied to the structural characterization of the interaction between chiral metal complexes [Co(phen)2dppz]3+ (where phen = 1, 10-phenanthroline, dppz = dipyrido[3,2-a: 2’, 3’-c...Molecular modeling methods have been applied to the structural characterization of the interaction between chiral metal complexes [Co(phen)2dppz]3+ (where phen = 1, 10-phenanthroline, dppz = dipyrido[3,2-a: 2’, 3’-c]phenazine) and the oligonucleotide (B-DNA fragment). The natures of two kinds of the binding modes, which are currently intense controversy, have been explored. Barton proposed that there is enantio-selective DMA binding by the octahedral complexes and intercalative access by these complexes from the major groove; but Norden suggested that both enantiomers bind extremely strongly to DNA from the minor groove without any noticeable enantio-selectivity. Our results support and extend structural models based upon Norden’s studies, and conflict with Barton’s model.展开更多
探讨妊娠合并乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染患者的血清25-羟维生素D[25-(OH)D]表达与乙型肝炎病毒-脱氧核糖核酸(HBV-DNA)载量和妊娠结局的关系,本研究选择2022年4月-2024年1月收治的141例妊娠合并HBV感染患者作为研究组,另...探讨妊娠合并乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染患者的血清25-羟维生素D[25-(OH)D]表达与乙型肝炎病毒-脱氧核糖核酸(HBV-DNA)载量和妊娠结局的关系,本研究选择2022年4月-2024年1月收治的141例妊娠合并HBV感染患者作为研究组,另同期选择100名健康体检孕妇为对照组。根据妊娠合并HBV感染患者的HBV-DNA病毒载量将141例患者分为阳性组(n=39)和阴性组(n=102);根据妊娠结局将其分为妊娠结局良好组和妊娠结局不良组。检测所有研究对象的血清25-(OH)D表达水平,并分析血清25-(OH)D表达水平与HBVDNA载量和妊娠结局的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清25-(OH)D表达水平对不良妊娠结局的诊断价值。结果发现,研究组患者血清25-(OH)D表达水平明显低于对照组(P<0.05);HBV-DNA病毒阳性组低于阴性组(P<0.05);不同妊娠结局患者HBV-DNA病毒载量、HBV感染孕周以及25-(OH)D水平存在显著差异(P<0.05);血清25-(OH)D表达水平降低与HBV-DNA病毒阳性和妊娠结局不良呈负相关(r=0.566、r=0.590,均P<0.001);当血清25-(OH)D水平≤20.31ng/ml时预测妊娠结局不良的AUC为0.862。妊娠合并HBV感染者血清25-(OH)D水平降低与HBV-DNA病毒阳性和妊娠结局不良密切相关。展开更多
文摘目的探讨乙型肝炎病毒DNA聚合酶反式调节蛋白1(HBV DNA polymerase trans activated protein 1,HBVDNAPTP1)在羧酸酯酶1(carboxylesterase 1,CES1)介导的单核细胞凋亡信号通路中的作用机制。方法利用Phyre2在线工具预测得到CES1三级结构,分别用pCMV-Myc载体构建HBVDNAPTP1基因、pCMV-HA载体构建CES1基因及其截短体219-264aa和265-303aa的真核细胞表达质粒。分别转染细胞后通过免疫荧光和免疫共沉淀法确定HBVDNAPTP1和CES1互相作用的区段。后通过HBVDNAPTP1和CES1单独转染及共转染,检测其对细胞凋亡率的影响;同时在分离人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)上转染上述质粒,以确定CES1和HBVDNAPTP1对单核细胞形态的影响。利用qRT-PCR和Western blot检测不同质粒转染后下游Janus激酶-1(Janus kinase,JAK1)和信号传导及转录激活蛋白3(Signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的基因和蛋白的表达情况。结果HBVDNAPTP1与CES1有靶向关系,其中HBVDNAPTP1与CES1全长靶向结合效果最好,故后续实验以CES1全长序列为对象开展。CCK-8和PBMC电镜实验结果表明,与Control组和NC组相比,ov-HBVDNAPTP1组、ov-CES1组和ov-HBVDNAPTP1+ov-CES1组THP-1细胞的凋亡率均升高(P<0.001),细胞受损;与ov-HBVDNAPTP1组和ov-CES1组相比,ov-HBVDNAPTP1+ov-CES1组细胞凋亡率进一步升高(P<0.01),凋亡细胞、坏死细胞的数量增多。qRT-PCR和Western blot结果显示,HBVDNAPTP1和CES1均可以在转录水平和翻译水平上显著上调JAK1和STAT3的表达,且二者同时作用时上调趋势更加明显。结论本研究证实HBVDNAPTP1与CES1二者可协同抑制THP-1细胞增殖并诱导细胞损伤;还可协同上调JAK1/STAT3信号通路在转录和蛋白水平的表达来调控单核细胞凋亡。该发现为深入理解HBV感染相关免疫调控机制提供了新的理论依据。
文摘Molecular modeling methods have been applied to the structural characterization of the interaction between chiral metal complexes [Co(phen)2dppz]3+ (where phen = 1, 10-phenanthroline, dppz = dipyrido[3,2-a: 2’, 3’-c]phenazine) and the oligonucleotide (B-DNA fragment). The natures of two kinds of the binding modes, which are currently intense controversy, have been explored. Barton proposed that there is enantio-selective DMA binding by the octahedral complexes and intercalative access by these complexes from the major groove; but Norden suggested that both enantiomers bind extremely strongly to DNA from the minor groove without any noticeable enantio-selectivity. Our results support and extend structural models based upon Norden’s studies, and conflict with Barton’s model.
文摘探讨妊娠合并乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染患者的血清25-羟维生素D[25-(OH)D]表达与乙型肝炎病毒-脱氧核糖核酸(HBV-DNA)载量和妊娠结局的关系,本研究选择2022年4月-2024年1月收治的141例妊娠合并HBV感染患者作为研究组,另同期选择100名健康体检孕妇为对照组。根据妊娠合并HBV感染患者的HBV-DNA病毒载量将141例患者分为阳性组(n=39)和阴性组(n=102);根据妊娠结局将其分为妊娠结局良好组和妊娠结局不良组。检测所有研究对象的血清25-(OH)D表达水平,并分析血清25-(OH)D表达水平与HBVDNA载量和妊娠结局的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清25-(OH)D表达水平对不良妊娠结局的诊断价值。结果发现,研究组患者血清25-(OH)D表达水平明显低于对照组(P<0.05);HBV-DNA病毒阳性组低于阴性组(P<0.05);不同妊娠结局患者HBV-DNA病毒载量、HBV感染孕周以及25-(OH)D水平存在显著差异(P<0.05);血清25-(OH)D表达水平降低与HBV-DNA病毒阳性和妊娠结局不良呈负相关(r=0.566、r=0.590,均P<0.001);当血清25-(OH)D水平≤20.31ng/ml时预测妊娠结局不良的AUC为0.862。妊娠合并HBV感染者血清25-(OH)D水平降低与HBV-DNA病毒阳性和妊娠结局不良密切相关。
