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2021—2022年河南省良凤花种鸡禽白血病病毒感染状况和流行特征
1
作者 王汝都 邓祖丽颖 +4 位作者 乔宏兴 张菡 边传周 罗俊 彭志锋 《河南农业科学》 北大核心 2025年第2期138-144,共7页
采用ELISA方法对2021—2022年采自河南省6个市(漯河、驻马店、南阳、新乡、安阳、商丘市)良凤花种鸡的1 342份精液、1 611份泄殖腔拭子、8 187份种蛋和284份胎粪进行ALV-p27(禽白血病病毒-p27)抗原检测,512份母鸡血清进行ALV-A/B和ALV-... 采用ELISA方法对2021—2022年采自河南省6个市(漯河、驻马店、南阳、新乡、安阳、商丘市)良凤花种鸡的1 342份精液、1 611份泄殖腔拭子、8 187份种蛋和284份胎粪进行ALV-p27(禽白血病病毒-p27)抗原检测,512份母鸡血清进行ALV-A/B和ALV-J亚群抗体检测,利用DF-1细胞从雏鸡胎粪中分离ALV,采用PCR扩增分离毒株的gp85基因,并将基因序列与ALV-J亚群不同毒株进行比对和遗传进化分析,为河南省良凤花种鸡禽白血病的防控与净化提供数据支撑。结果表明,精液、泄殖腔拭子、种蛋、胎粪样品中ALV-p27抗原阳性率分别为13.11%(176/1 342)、7.70%(124/1 611)、2.39%(196/8 187)、2.81%(8/284);母鸡血清样品中ALV-A/B和ALV-J抗体阳性率分别为16.60%(85/512)和15.23%(78/512);而且,河南省6个市良凤花种鸡群ALV阳性率差别不大,其中,安阳市最高(4.90%,82/1 675),商丘市最低(3.56%,64/1 798),这表明河南省不同市良凤花种鸡群均有外源性ALV的感染。母鸡泄殖腔拭子、同期所产种蛋、相应雏鸡胎粪的ALV-p27抗原阳性率分别是4.00%(4/100)、1.08%(1/92)、1.15%(1/87),提示雏鸡感染ALV是由垂直传播和水平传播共同造成的,根据种蛋ALV感染情况评估种鸡群中ALV的垂直传播更客观。分离到1株ALV-J毒株HN2022,与参考毒株HLJ09MDJ-1、HuB09-1、SX090912J、CAUHM01和HPRS103在同一进化分支。ALV-J亚群不同毒株gp85基因核苷酸序列同源性和编码氨基酸序列同源性分别为92.7%~97.8%和88.6%~91.8%。gp85基因编码氨基酸序列同源性比对结果显示,分离毒株gp85基因编码氨基酸的变异主要发生在序列高频率变异区Hr 1和Hr 2。综上,试验结果不仅表明河南省良凤花种鸡群中ALV感染比较普遍,而且丰富了ALV遗传变异特性数据,为后续该病毒的研究和该品种鸡禽白血病的净化提供了数据支撑。 展开更多
关键词 良凤花种鸡 禽白血病病毒 P27抗原 病毒分离 流行现状
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陕西省avian-like H1N1猪流感病毒的遗传进化分析 被引量：1
2
作者 任娟娟 王晶钰 +5 位作者 刘红彦 刘万华 武宁 邱渊皓 唐攀 江跃德 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第18期3901-3913,共13页
【目的】监测陕西省猪流感的流行与传播情况,为猪流感研究提供参考。【方法】从生猪养殖场和屠宰场表观健康猪中随机采取猪鼻/气管拭子样本,经SPF鸡胚分离,对HA阳性样本进行猪流感病毒RT-PCR鉴定。测定分离株全基因序列,通过MEGA4构建... 【目的】监测陕西省猪流感的流行与传播情况,为猪流感研究提供参考。【方法】从生猪养殖场和屠宰场表观健康猪中随机采取猪鼻/气管拭子样本,经SPF鸡胚分离,对HA阳性样本进行猪流感病毒RT-PCR鉴定。测定分离株全基因序列,通过MEGA4构建基因进化树,并进行遗传变异分析。【结果】从500份样本中分离鉴定出6株H1N1流感病毒,病毒分离率为1.2%。获得6个核苷酸相似性为98.3%—99.1%的分离株全基因序列。遗传进化分析表明6个分离株都位于avain-like H1N1猪流感病毒谱系,与中国江苏,辽宁,山东和香港等地H1N1猪流感病毒株同源性达97%—99%。6个分离株的8个基因片段均在蛋白受体结合位点、潜在糖基化位点等处发生核苷酸变异,这将会影响猪流感病毒的抗原特性、宿主适应性和致病力。【结论】首次从西北地区表观健康猪中分离到H1N1猪流感病毒,并获得6个分离株的全基因序列。遗传进化分析表明,6个分离株为avain-like H1N1猪流感病毒,且多处氨基酸位点发生变异。 展开更多
关键词 avain-like H1N1猪流感病毒 分离鉴定 遗传进化
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我国近10年鸡白血病流行病学报道与研究分析 被引量：41
3
作者 王洪进 张青禅 +4 位作者 赵冬敏 柴家前 常维山 崔治中 郭慧君 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期292-296,共5页
鸡白血病是由多种亚型鸡白血病病毒引起的一种肿瘤性传染病,可引起感染鸡免疫抑制和多组织器官发育迟缓、萎缩以及肿瘤等,造成较严重的经济损失。自1999年至2009年,该病在我国近80%的省市均有病例报道,其中山东、北京等地报道病例最多;... 鸡白血病是由多种亚型鸡白血病病毒引起的一种肿瘤性传染病,可引起感染鸡免疫抑制和多组织器官发育迟缓、萎缩以及肿瘤等,造成较严重的经济损失。自1999年至2009年,该病在我国近80%的省市均有病例报道,其中山东、北京等地报道病例最多;该病近10年持续发展,呈现上升趋势,且有前期肉鸡感染病例为主到近几年的蛋鸡发病或肉蛋鸡同时发病为主的发展趋势,同时对我国一些地方鸡造成严重威胁。在这些感染鸡群中,报道的以J亚型ALV感染为主,但A、B亚型在我国鸡群中的蔓延值得关注。对我国分离30余株的J亚群ALV分析表明,肉鸡上分离的ALV变异较小,而蛋鸡上变异较大。人工感染试验表明,ALV感染后除在一些鸡体内产生具有中和作用的抗体外,而相当部分鸡不产生抗体或产生不具有中和作用的抗体;同时,其他免疫抑制病毒与ALV共感染可进一步降低抗体的产生,加重组织病理学变化。ALV在感染鸡只的多种组织器官上比较检测表明,肾、肝、脾及蛋清、鸡胚均可以得到较高的检出率。目前,使用核酸探针、RFLP及细胞培养病毒分离方法成为临床上鉴别ALV亚型的常用方法,其中细胞培养病毒分离、基因测序技术是最为有效的鉴别方法。这些研究将为我国认知鸡白血病、防制鸡白血病奠定良好的基础。 展开更多
关键词 鸡白血病 流行病学 病毒变异 临床防制
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神经氨酸酶茎部氨基酸缺失对H5N1亚型禽流感病毒生物学特性的影响 被引量：14
4
作者 王曲直 龙进学 +2 位作者 胡顺林 吴艳涛 刘秀梵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期542-546,共5页
近年来H5N1亚型禽流感病毒（AIV）神经氨酸酶（NA）茎部15—20个氨基酸的自发缺失时有报道，突变对于AIV生物学特性的影响还没有得到系统研究。应用反向遗传操作技术，拯救获得5株具有不同NA茎部长度的H5N1／PR8重组AIV。重组病毒的内... 近年来H5N1亚型禽流感病毒（AIV）神经氨酸酶（NA）茎部15—20个氨基酸的自发缺失时有报道，突变对于AIV生物学特性的影响还没有得到系统研究。应用反向遗传操作技术，拯救获得5株具有不同NA茎部长度的H5N1／PR8重组AIV。重组病毒的内部基因和血凝素（HA）基因来源相同，NA基因来源不同，并在NA茎部进行20个氨基酸的删除或添加突变。通过研究其生物学特性发现，5株重组病毒在SPF鸡胚中繁殖良好，其EID50、MDT和平均病毒滴度相似；NA茎部长短影响病毒的解凝能力，长茎病毒红细胞解脱能力比短茎病毒强；NA茎部15或20个氨基酸删除突变提高了重组病毒在MDCK细胞上的繁殖能力，短茎病毒释放出的病毒粒子数量是长茎病毒的10。100倍，释放时间提前6．10h，短茎病毒在MDCK细胞上形成的空斑也明显比长茎病毒的空斑大。实验结果揭示了AIVNA茎部氨基酸缺失突变的生物学意义，NA茎部15或20个氨基酸删除突变增强了AIV的细胞适应性，可能与现阶段H5N1亚型AIV宿主范围进一步扩大有关。利用反向遗传技术成功拯救了5株H5N1／PR8重组流感病毒，为流感病毒基因功能研究和重组疫苗研究建立了技术平台。通过对AIVNA茎部氨基酸的删除突变提高了病毒在MDCK细胞上的繁殖产量，为流感病毒细胞苗的生产提供了新的思路。 展开更多
关键词 H5N1亚型禽流感病毒 神经氨酸酶茎部 氨基酸删除突变 反向遗传操作技术
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禽大肠杆菌O_(18)、O_(78)分离株免疫保护机理的研究 被引量：10
5
作者 高崧 彭大新 +7 位作者 文其乙 焦新安 甘军纪 吴艳涛 滕峰 刘文博 张如宽 刘秀梵 《扬州大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1999年第2期38-42,共5页
以禽病原性大肠杆菌Ｏ１８、Ｏ７８分离株制成超声波裂解铝佐剂灭活苗免疫１４日龄鸡，以相同或不同外膜蛋白（ＯＭＰ）型的Ｏ１８、Ｏ７８分离株攻毒．结果以Ｏ７８血清型内相同和不同ＯＭＰ型分离株间能获得最大保护，Ｏ１８血清型内... 以禽病原性大肠杆菌Ｏ１８、Ｏ７８分离株制成超声波裂解铝佐剂灭活苗免疫１４日龄鸡，以相同或不同外膜蛋白（ＯＭＰ）型的Ｏ１８、Ｏ７８分离株攻毒．结果以Ｏ７８血清型内相同和不同ＯＭＰ型分离株间能获得最大保护，Ｏ１８血清型内相同ＯＭＰ型分离株间获得最大保护，而不同ＯＭＰ型分离株间不能保护；两个血清型的分离株间不论ＯＭＰ型是否相同，均缺乏保护．以间接ＥＬＩＳＡ试验、间接血凝试验分别测定了试验鸡针对大肠杆菌ＯＭＰｓ和脂多糖（ＬＰＳ）的抗体：免疫组鸡血清的ＯＭＰ、ＬＰＳ抗体滴度明显高于攻毒对照组；免疫组存活鸡临攻毒前血清中的ＯＭＰ、ＬＰＳ抗体滴度恒高于死亡鸡，但除３个组外，多数组差异不显著；攻毒对照组这一关系不稳定．研究结果表明：禽大肠杆菌疫苗的免疫保护，主要与Ｏ血清型有关，部分与ＯＭＰ型有关；免疫保护性抗原含ＯＭＰｓ。 展开更多
关键词 鸡 大肠杆菌 免疫保护机理 外膜蛋白 抗体
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人参皂甙Rb1对禽流感疫苗的免疫佐剂作用 被引量：9
6
作者 呼显生 马玉敏 +2 位作者 马明颖 吴斌 姜成, 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2005年第12期79-81,共3页
用人参皂甙Rb1作佐剂,利用禽流感油苗作媒介,研究了人参皂甙Rb1对鸡的免疫增强效果。结果表明:人参皂甙Rb1对禽流感油乳剂灭活苗有较强的免疫增强作用,能够诱导雏鸡产生更高的抗禽流感抗体效价,疫苗的保护率提高,对鸡胸腺、脾的发育均... 用人参皂甙Rb1作佐剂,利用禽流感油苗作媒介,研究了人参皂甙Rb1对鸡的免疫增强效果。结果表明:人参皂甙Rb1对禽流感油乳剂灭活苗有较强的免疫增强作用,能够诱导雏鸡产生更高的抗禽流感抗体效价,疫苗的保护率提高,对鸡胸腺、脾的发育均有一定的促进作用;T淋巴细胞花环率提高10%以上。 展开更多
关键词 人参皂甙RB1 禽流感 油乳剂灭活疫苗 佐剂
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利用Rde/ET技术构建表达H5亚型禽流感病毒HA基因的重组火鸡疱疹病毒 被引量：10
7
作者 兰德松 石星明 +6 位作者 王云峰 刘长军 王玫 崔红玉 田国彬 李继松 童光志 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期78-84,共7页
【目的】本研究以火鸡疱疹病毒(HVT)BAC分子克隆为平台,构建表达禽流感HA基因的重组火鸡疱疹病毒,以开发新型病毒活载体疫苗。【方法】利用Red/ET重组技术,经过两步法重组:第一步,用两端带有50bp大小左、右同源臂a和b的选择标记基因rpsL... 【目的】本研究以火鸡疱疹病毒(HVT)BAC分子克隆为平台,构建表达禽流感HA基因的重组火鸡疱疹病毒,以开发新型病毒活载体疫苗。【方法】利用Red/ET重组技术,经过两步法重组:第一步,用两端带有50bp大小左、右同源臂a和b的选择标记基因rpsL-neo表达盒替换HVT基因组US2区;第二步,用两端带有同样的50 bp左、右同源臂a和b的HA基因表达盒替换选择标记基因rpsL-neo表达盒。在含有氯霉素和链霉素双抗性的平板上筛选阳性克隆,经卡那霉素抗性反向筛选和PCR进一步鉴定,鉴定正确的克隆命名为pHVT-HA。提取并纯化pHVT-HA DNA,转染原代鸡胚成纤维细胞(CEF),以完成重组病毒的拯救。【结果】命名为pHVT-HA3的BAC克隆转染CEF后第4天,出现病毒噬斑,噬斑形态与野生型HVT相似,获得拯救的重组病毒,命名为rHVT-HA3,将重组病毒rHVT-HA3在CEF上连续传代培养,经PCR和间接免疫荧光检测表明,重组病毒在连续传代过程中仍能稳定表达HA蛋白。【结论】本研究以HVT BAC为平台,利用Red/ET重组技术,构建了表达禽流感A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)毒株的血凝素(HA)基因的重组火鸡疱疹病毒,为新型禽流感重组活载体疫苗开发奠定基础。 展开更多
关键词 火鸡疱疹病毒 细菌人工染色体 Red/ET克隆 禽流感病毒 HA基因
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中国禽流感流行株的分离鉴定 被引量：131
8
作者 唐秀英 田国斌 +2 位作者 赵传删 周金法 于康震 《中国畜禽传染病》 CSCD 1998年第1期1-5,共5页
分别从广东、四川、新疆等地禽流感（ＡＩ）血检阳性、发病率高、产蛋率下降的鸡群中采集１８６份病料，先后分离到６株Ａ型流感病毒。这些分离株可在鸡胚中传代，可凝集鸡红细胞，血凝价达１６０～１２８０倍。不被新城疫、减蛋综合症... 分别从广东、四川、新疆等地禽流感（ＡＩ）血检阳性、发病率高、产蛋率下降的鸡群中采集１８６份病料，先后分离到６株Ａ型流感病毒。这些分离株可在鸡胚中传代，可凝集鸡红细胞，血凝价达１６０～１２８０倍。不被新城疫、减蛋综合症、败血支原体阳性血清所抑制。用这些分离毒株制成琼脂扩散（ＡＧＰ）抗原与禽流感标准阳性血清可出现白色沉淀线。分别将分离毒株与ＡＩ标准分型血清Ｈ１～Ｈ１４、Ｎ１～Ｎ９进行ＨＩ、ＮＩ试验，结果川和川农株均为Ｈ４Ｎ６，西昌１和２株及Ｓｈ株均为Ｈ９Ｎ２，新疆石河子（石）株为Ｈ１４Ｎ５。分离株分别做脑内接种致病指数（ＩＣＰＩ）、静脉接种致病指数（ＩＶＰＩ）测定，结果所有分离株ＩＣＰＩ介于０２４～１４８之间，ＩＶＰＩ介于０１５～０５６之间．通过电镜观察，可见直径为８０～１２０ｎｍ球状或杆状典型的禽流感病毒．经联机检索，从新疆石河子ＡＩ阳性鸡场产蛋下降的鸡群中分离出的Ｈ１４Ｎ５株为国内外首次从鸡中分离出的Ｈ１４亚型禽流感病毒。将某单位送检的禽流感鹅体分离株（Ｇ１株和Ｇ２株）做了血清型和毒力测定，试验结果认定，Ｇ１和Ｇ２株均为Ａ型禽流感病毒Ｈ５Ｎ１亚型，Ｇ１、Ｇ２株对鸡均达到高致病力毒株标准。 展开更多
关键词 禽流感 病毒分离 亚型鉴定
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新型人感染H7N9型禽流感病毒研究进展 被引量：15
9
作者 陈雅 朱进 冯振卿 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2016年第7期759-763,共5页
人感染新型H7N9型禽流感自2013年确诊以来全国蔓延,表现出极高的致病率及致死率,引发了极大的关注。该病由新型H7N9型禽流感病毒引起,该病毒基因突变率高,一旦发生对人类呼吸道上皮受体的适应性突变,极易导致暴发性大流行。文中从H7N9... 人感染新型H7N9型禽流感自2013年确诊以来全国蔓延,表现出极高的致病率及致死率,引发了极大的关注。该病由新型H7N9型禽流感病毒引起,该病毒基因突变率高,一旦发生对人类呼吸道上皮受体的适应性突变,极易导致暴发性大流行。文中从H7N9型禽流感的流行病学特征、病原学特征、感染患者的特征、检测措施及防治策略等方面对目前的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 H7N9禽流感病毒 基因突变 流行病学 临床特征 治疗 疫苗
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2株鸭源H3N2亚型流感病毒的分离鉴定和遗传进化分析 被引量：5
10
作者 赵国 钟蕾 +3 位作者 赵坤坤 鹿欣伦 彭大新 刘秀梵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1354-1358,共5页
2008年10月到2009年9月从扬州活禽市场采集家鸭泄殖腔拭子共1075份,并从中分离鉴定了24株H3亚型禽流感病毒,作者对其中的2株病毒进行了全基因测序和遗传演化分析,发现2株病毒均为H3N2低致病性禽流感病毒。分离病毒各基因遗传进化分析均... 2008年10月到2009年9月从扬州活禽市场采集家鸭泄殖腔拭子共1075份,并从中分离鉴定了24株H3亚型禽流感病毒,作者对其中的2株病毒进行了全基因测序和遗传演化分析,发现2株病毒均为H3N2低致病性禽流感病毒。分离病毒各基因遗传进化分析均与猪源分离株的亲缘关系相对较近,与人源分离株的亲缘关系较远;除HA基因外,其它所有的基因均发生了不同程度基因重组,各基因与不同亚型、不同地区、不同宿主分离的不同毒株发生了基因重排。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H3N2亚型 基因分析
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两株H6N8亚型禽流感病毒分离株的分离与鉴定 被引量：5
11
作者 张曦 崔鹏飞 +5 位作者 朱占松 谭丹 李文辉 关立峥 邓国华 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期177-180,共4页
为了解禽流感病毒(AIV)在我国华南地区的流行情况,我们对活禽市场中分离得到的两株鸭源H6N8亚型AIV[A/duck/Fujian/S2191/2011(H6N8)(FJ/191/11)和A/duck/Guizhou/S4035/2011(H6N8)(GZ/035/11)]进行全基因序列测定,并进行其对SPF鸡和BAL... 为了解禽流感病毒(AIV)在我国华南地区的流行情况,我们对活禽市场中分离得到的两株鸭源H6N8亚型AIV[A/duck/Fujian/S2191/2011(H6N8)(FJ/191/11)和A/duck/Guizhou/S4035/2011(H6N8)(GZ/035/11)]进行全基因序列测定,并进行其对SPF鸡和BALB/c小鼠的致病性试验。序列分析显示:HA裂解位点基序为339PQIETR↓GLFG348,为低致病性AIV特征。内部基因分别源于两个国内流行的H6亚型病毒家系(ST339-like和HuN573-like)。序列分析表明FJ/191/11和GZ/035/11为H6亚型病毒与其他亚型AIV的N8NA基因发生重组,呈现明显的异源性。两分离株的感染性试验显示,它们对鸡和小鼠均呈低致病性;而且不能在鸡体内有效复制;对小鼠的感染性实验结果显示,小鼠肺脏和鼻甲病毒分离结果为阳性,其他脏器病毒滴定结果为阴性。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H6N8亚型 抗原分析 致病性
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膨化菜籽对肉鸡生产性能及部分血液生化指标的影响 被引量：10
12
作者 严念东 郭万正 +1 位作者 张巍 李绍章 《饲料工业》 北大核心 2012年第17期32-34,共3页
试验选用160只21日龄的艾维茵肉鸡,随机分为5组,每组4个重复(栏),每栏8只鸡,在玉米-豆粕型日粮中添加不同水平膨化菜籽(2.0%、6.0%、10%和14%)。试验结果表明:(1)整个生长期膨化菜籽组与对照组相比,平均日增重、日采食量均有显著提高(P&... 试验选用160只21日龄的艾维茵肉鸡,随机分为5组,每组4个重复(栏),每栏8只鸡,在玉米-豆粕型日粮中添加不同水平膨化菜籽(2.0%、6.0%、10%和14%)。试验结果表明:(1)整个生长期膨化菜籽组与对照组相比,平均日增重、日采食量均有显著提高(P<0.05),料重比显著降低(P<0.05),添加6.0%膨化菜籽组对肉鸡促生长效果最好;(2)膨化菜籽组与对照组相比,对肉鸡血清中白蛋白、尿素氮、碱性磷酸酶、总胆固醇和甘油三酯等生化指标没有显著性影响(P>0.05)。 展开更多
关键词 膨化菜籽 血液生化指标 生长性能 艾维茵肉鸡
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鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定 被引量：10
13
作者 杨帆 李淑梅 +1 位作者 汤波 刘平 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第8期3226-3227,3249,共3页
[目的]为研究传染性支气管炎(IBV)的流行变异及其防治奠定基础。[方法]从辉县某大型养鸡场疑似IBV的发病鸡群中采集病料,进行病毒分离和鉴定,并对分离病毒的M基因进行RT!PCR扩增。[结果]从鸡病料中分离到1株IBV,命名为IBV!HN05。经浓度1... [目的]为研究传染性支气管炎(IBV)的流行变异及其防治奠定基础。[方法]从辉县某大型养鸡场疑似IBV的发病鸡群中采集病料,进行病毒分离和鉴定,并对分离病毒的M基因进行RT!PCR扩增。[结果]从鸡病料中分离到1株IBV,命名为IBV!HN05。经浓度1%胰酶、卵磷脂酶C和10%乙醚处理后,该病毒尿囊液可以凝集鸡、绵羊、人、小鼠和兔的红细胞,而未处理的病毒尿囊液则无此凝集活性。该分离株IBV-HN05和标准毒株IBVM41对NDVLaSota都有抑制作用。该病毒对9日龄鸡胚的致病变率达100%。通过鸡胚矮小试验和动物回归试验,发现该分离株能引起鸡胚和病鸡典型的临床症状和病理变化。PCR扩增结果进一步证实了该分离株为IBV病毒。[结论]该研究为SARS病毒的研究提供了动物模型。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 分离 鉴定
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禽流感病毒A型和H5亚型RT-PCR检测试剂盒研究 被引量：5
14
作者 孙明 李纯铃 +4 位作者 赵铁柱 王传彬 陈西钊 田克恭 王宏伟 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2005年第1期3-6,共4页
目的　检测和鉴定A型、H5亚型禽流感病毒 (AIV) ,研发一种高效实用的检测手段。方法　根据Ming ShiuhLee报道的文献设计、合成引物 ,采用反转录和PCR一步法对A型、H5亚型禽流感病毒cDNA进行扩增和电泳鉴定 ,组装成禽流感病毒RT PCR试剂... 目的　检测和鉴定A型、H5亚型禽流感病毒 (AIV) ,研发一种高效实用的检测手段。方法　根据Ming ShiuhLee报道的文献设计、合成引物 ,采用反转录和PCR一步法对A型、H5亚型禽流感病毒cDNA进行扩增和电泳鉴定 ,组装成禽流感病毒RT PCR试剂盒 ,对H1～ 15亚型AIV参考株、38份AIV国内分离株进行检测试验。结果　建立了A型、H5亚型禽流感病毒RT PCR检测方法 ,并在此基础上组装试剂盒 ,用A型试剂盒检测时 ,全部AIV毒株均为阳性 ,能检测 1 10 2 4血凝单位禽流感病毒 ;用H5亚型试剂盒检测时 ,仅有H5亚型AIV参考株和 19株H5亚型AIV分离株呈阳性 ,其余H1～H4、H6～H15参考株和H7、H9分离株以及 1株H5分株均为阴性 ,能检测1 6 4血凝单位禽流感病毒。 2种试剂盒对实验感染鸡病料检出率均为 10 0 %。结论　研制的AIVA型、H5亚型RT PCR试剂盒具有特异性强、敏感性高、稳定性和重复性好的特点。 展开更多
关键词 禽流感病毒 A型 H5亚型 RT—PCR检测 试剂盒 禽流感
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禽多杀性巴氏杆菌PtfA重组亚单位疫苗免疫效果的检测 被引量：4
15
作者 宫强 孔梁宇 +3 位作者 牛明福 秦翠丽 侯颖 孙晓菲 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期567-570,共4页
为评价禽多杀性巴氏杆菌(P.multocida)PtfA重组蛋白(rPtfA)的免疫效果,本研究通过PCR扩增禽P.multocida的ptfA基因,将其克隆于pET-32a载体中并在大肠杆菌中表达。表达的rPtfA纯化后制备油乳剂亚单位疫苗,经3次免疫20只4周龄雏鸡,并设弱... 为评价禽多杀性巴氏杆菌(P.multocida)PtfA重组蛋白(rPtfA)的免疫效果,本研究通过PCR扩增禽P.multocida的ptfA基因,将其克隆于pET-32a载体中并在大肠杆菌中表达。表达的rPtfA纯化后制备油乳剂亚单位疫苗,经3次免疫20只4周龄雏鸡,并设弱毒活疫苗组和PBS对照组。免疫后定期采血检测免疫鸡体液和细胞免疫水平,并进行攻毒试验评价rPtfA保护效率。结果显示动物免疫后,rPtfA免疫组和弱毒活疫苗免疫组血清抗体水平持续上升,与PBS对照组相比差异极显著(p<0.01),并且弱毒活疫苗组血清抗体水平高于rPtfA免疫组。淋巴细胞增殖和IFN-γ分泌试验的结果也表明,rPtfA组和弱毒活疫苗组的SI值及分泌的IFN-γ水平均极显著高于对照组(p<0.01),并且弱毒活疫苗组稍高于rPtfA组。攻毒后rPtfA组和弱毒活疫苗组的保护率分别为40%和70%,表明rPtfA亚单位疫苗虽然可为免疫鸡提供一定的保护,但效果不及弱毒活疫苗,仍需采取措施进一步增强其免疫保护效果。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 ptfA基因 重组亚单位疫苗 免疫效果
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H9N2亚型禽流感病毒疫苗候选株的构建 被引量：4
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作者 王增 冯华朋 +5 位作者 朱鹏阳 邬丽 曾显营 邓国华 施建忠 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期571-573,共3页
为研制H9N2亚型禽流感病毒疫苗,本研究以具有良好抗原性的代表病毒株A/chicken/Hunan/S933/2008(H9N2)(HuN33)为HA和NA基因的供体,以A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)的6个内部基因为骨架,利用反向遗传操作技术,救获了一株重组H9N2亚型禽... 为研制H9N2亚型禽流感病毒疫苗,本研究以具有良好抗原性的代表病毒株A/chicken/Hunan/S933/2008(H9N2)(HuN33)为HA和NA基因的供体,以A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8)的6个内部基因为骨架,利用反向遗传操作技术,救获了一株重组H9N2亚型禽流感病毒疫苗候选株Re-9。该疫苗候选株既具有很好的抗原性又具有较高的鸡胚增殖特性,从而为有效防控H9N2亚型禽流感的流行提供了技术储备。 展开更多
关键词 H9N2 禽流感病毒 反向遗传 疫苗候选株
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荧光定量RT-PCR方法检测感染小鼠不同组织中的H5N1禽流感病毒 被引量：5
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作者 侯小强 高玉伟 +2 位作者 夏咸柱 王承宇 杨松涛 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期820-823,共4页
目的测定H5N1禽流感病毒感染小鼠各脏器组织中的病毒核酸含量,了解病毒复制与疾病进程的关系,为H5N1禽流感病毒致病机理与防治研究提供技术支持。方法利用建立的荧光定量RT-PCR法对H5N1禽流感病毒感染BALB/c小鼠的不同脏器组织中病毒核... 目的测定H5N1禽流感病毒感染小鼠各脏器组织中的病毒核酸含量,了解病毒复制与疾病进程的关系,为H5N1禽流感病毒致病机理与防治研究提供技术支持。方法利用建立的荧光定量RT-PCR法对H5N1禽流感病毒感染BALB/c小鼠的不同脏器组织中病毒核酸进行定量检测,观察H5N1禽流感病毒在不同组织中的复制情况。结果利用荧光定量RT-PCR法可从H5N1禽流感病毒感染小鼠后第3d的肺脏、脑、脾脏、肾脏和肝脏组织中检测到不同含量的病毒核酸;而在感染后4d的肺脏、脑和脾脏等组织中的病毒核酸含量开始下降;在感染后第6d,H5N1禽流感病毒核酸在肺脏和脑组织中大量存在外,其余组织中均有少量病毒核酸。结论H5N1流感病毒感染小鼠肺脏和脑组织中病毒核酸含量较高,说明病毒主要在小鼠的肺脏和脑组织中复制。由于荧光定量RT-PCR法可对感染小鼠不同脏器组织中的病毒核酸进行准确定量,可为H5N1禽流感病毒所致疾病的早期诊断、流行病学和致病机理研究提供技术支持。 展开更多
关键词 H5N1禽流感病毒 病毒复制 荧光定量RT-PCR
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禽脑脊髓炎病毒YL株的分离鉴定 被引量：5
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作者 郝华芳 张淑霞 +5 位作者 杨涛 杨增岐 王兴龙 杜恩岐 党如意 王晶钰 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第2期24-26,29,共4页
为弄清陕西杨凌某鸡场种鸡产蛋量突然下降,种蛋孵化率降低,死雏、弱雏增多的原因,通过采集发病鸡脑组织进行SPF鸡胚连续传代、琼脂扩散试验（AGP）、人工感染试验、VP1基因的克隆及序列分析等对病原进行鉴定.结果显示,分离毒YL株与AEV... 为弄清陕西杨凌某鸡场种鸡产蛋量突然下降,种蛋孵化率降低,死雏、弱雏增多的原因,通过采集发病鸡脑组织进行SPF鸡胚连续传代、琼脂扩散试验（AGP）、人工感染试验、VP1基因的克隆及序列分析等对病原进行鉴定.结果显示,分离毒YL株与AEV标准阳性血清之间出现特异的沉淀线;在人工感染试验中可见雏鸡有震颤、共济失调等症状,剖检大脑有轻微的水肿和软化;成功克隆出AEV YL株的VP1基因,全长810 bp,编码270个氨基酸残基;与AEV参考毒株VP1基因核苷酸同源性92.0％～99.8％,氨基酸同源性为89.3％～99.3％;进化树分析表明,YL株与1143株、L2Z株和SX株亲缘关系较近,与VR株、HB株、SD株和NH937株亲缘关系较远.结果表明,分离毒株为禽脑脊髓炎病毒,与AEV已知毒株在进化方面存在一定程度的差异. 展开更多
关键词 禽脑脊髓炎病毒(AEV) 分离鉴定 VP1基因 序列分析
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2013-2017年浙江省绍兴市27例人感染H7N9禽流感病例流行特征分析 被引量：4
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作者 马岩 王吉玲 +4 位作者 张冬艳 马珊珊 李伟 马会来 傅利军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期254-257,共4页
目的分析浙江省绍兴市2013-2017年人感染H7N9禽流感病例流行病学特征。方法收集2013-2017年绍兴市确诊的人感染H7N9禽流感病例临床特征和流行病学资料进行分析。结果 2013-2017年绍兴市共报告27例人感染H7N9禽流感确诊病例,88.89%的病... 目的分析浙江省绍兴市2013-2017年人感染H7N9禽流感病例流行病学特征。方法收集2013-2017年绍兴市确诊的人感染H7N9禽流感病例临床特征和流行病学资料进行分析。结果 2013-2017年绍兴市共报告27例人感染H7N9禽流感确诊病例,88.89%的病例发生在冬春季,70.37%的病例患有慢性基础性疾病,74.07%的病例首发症状以发热为主。74.07%的病例有活禽市场暴露史,病例可疑暴露农贸市场外环境标本H7阳性率(16.45%)高于非农贸市场(3.51%),差异有统计学意义(χ~2=23.240,P<0.001)。结论绍兴地区人感染H7N9禽流感具有明显的季节性,男性、50岁以上人群、农民和基础性疾病患者是感染的高危人群。病例暴露于H7阳性率高的农贸市场可能是导致发病的主要原因。 展开更多
关键词 人感染H7N9禽流感 流行病学特征 活禽市场
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鹅禽流感免疫程序研究 被引量：5
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作者 杨峻 邵华斌 +6 位作者 艾地云 王红琳 罗青平 张蓉蓉 罗玲 廖永洪 温国元 《湖北农业科学》 北大核心 2008年第4期449-451,共3页
为了科学制定鹅的禽流感疫苗免疫程序,进行了5方面的试验。结果表明,雏鹅首免后3周可测定出AI-HI抗体,4周达到高峰,AI-HI抗体为4.8log2,6周开始下降。产蛋鹅免疫后4周抗体达到高峰9～11 log2,直到8个月抗体水平仍然维持在7～9 log2。1... 为了科学制定鹅的禽流感疫苗免疫程序,进行了5方面的试验。结果表明,雏鹅首免后3周可测定出AI-HI抗体,4周达到高峰,AI-HI抗体为4.8log2,6周开始下降。产蛋鹅免疫后4周抗体达到高峰9～11 log2,直到8个月抗体水平仍然维持在7～9 log2。1日龄雏鹅母源抗体AI-HI价为9.3log2,28日龄降至4 log2以下。试验所用的3个厂家的疫苗首次免疫雏鹅的抗体水平上升无明显差异,二次免疫抗体水平上升有明显差异。二次免疫的免疫鹅体内抗体消长情况测定结果表明,以每只1.5mL的免疫效果最好,免疫持续期可达8个月。 展开更多
关键词 鹅 禽流感 灭活疫苗 H5亚型 免疫程序
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