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ATG7、Beclin1在HBV相关肝细胞癌患者血清中的表达及临床意义
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作者 蒋建强 王红雷 陈艳军 《实用癌症杂志》 2025年第10期1567-1572,共6页
目的 探讨ATG7、Beclin1在HBV相关肝细胞癌患者血清中的表达及临床意义。方法 筛选HBV相关肝细胞癌患者72例作为病例组及同期收治的HBV相关良性肝病患者30例作为良性组,选取体检健康的志愿者30名作为对照组,采用ELISA法检测3组血清ATG7... 目的 探讨ATG7、Beclin1在HBV相关肝细胞癌患者血清中的表达及临床意义。方法 筛选HBV相关肝细胞癌患者72例作为病例组及同期收治的HBV相关良性肝病患者30例作为良性组,选取体检健康的志愿者30名作为对照组,采用ELISA法检测3组血清ATG7、Beclin1,单因素及多因素分析HBV相关肝细胞癌发生因素,Pearson相关性分析血清ATG7、Beclin1与HBV-DNA载量的关系,ROC曲线分析血清ATG7、Beclin1表达对HBV相关肝细胞癌的诊断价值。结果 3组血清ATG7、Beclin1水平差异有统计学意义(P<0.05),其中病例组血清ATG7、Beclin1水平低于良性组、对照组(P<0.05),良性组血清ATG7、Beclin1水平低于对照组(P<0.05)。病例组HBV-DNA载量高于良性组(P<0.05);病例组不同分期患者血清ATG7、Beclin1、HBV-DNA载量差异有统计学意义(P<0.05),其中Ⅳ期患者血清ATG7、Beclin1水平最低,HBV-DNA载量最高,其次为Ⅲ期、Ⅱ期,Ⅰ期血清ATG7、Beclin1水平最高,HBV-DNA载量最低。Pearson相关性分析显示,血清ATG7、Beclin1均与HBV-DNA载量呈负相关(γ=-0.459,P<0.001;γ=-0.432,P<0.001)。病例组中有糖尿病史、饮酒史、ATG7表达≤4.02 ng/ml、Beclin1表达≤2.05 ng/ml、HBV-DNA载量>144×10^(5)拷贝/ml的患者占比均高于良性组(P<0.05),2组性别、年龄差异无统计学意义(P>0.05);多因素分析结果显示糖尿病、饮酒、ATG7表达≤4.02 ng/ml、Beclin1表达≤2.05 ng/ml、HBV-DNA载量>144×10^(5)拷贝/ml均为发生HBV相关肝细胞癌的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示:与单一指标比较,血清ATG7、Beclin1联合诊断效能更高,AUC为0.803,灵敏度为0.972,特异度为0.567,P<0.001。结论 ATG7和Beclin1在HBV相关肝细胞癌患者血清中的低表达与疾病进展和HBV-DNA载量呈负相关,可作为潜在的生物标志物,为HBV相关肝细胞癌的早期诊断和预后评估提供新的思路,且联合检测血清ATG7和Beclin1能够提高对HBV相关肝细胞癌的诊断效能。 展开更多
关键词 肝细胞癌 乙型肝炎病毒 atg7 BECLIN1
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CRISPR/Cas9技术敲除细胞自噬相关因子(ATG7)对肝癌HepG2细胞功能的调控作用
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作者 关爱伟 邓诚思 +5 位作者 李宇恒 赵金仪 付梦迪 梁潇月 关奕 曹流 《解剖科学进展》 2025年第2期233-236,共4页
目的 利用CRISPR/Cas9技术,构建靶向细胞自噬相关因子7(ATG7)的基因编辑质粒,建立ATG7稳定敲除的人肝癌HepG2细胞株,检测ATG7的调控作用。方法 利用http://crispr.mit.edu sgRNA在线设计工具设计靶向人ATG7的sgRNA序列,构建puro-Cas9-AT... 目的 利用CRISPR/Cas9技术,构建靶向细胞自噬相关因子7(ATG7)的基因编辑质粒,建立ATG7稳定敲除的人肝癌HepG2细胞株,检测ATG7的调控作用。方法 利用http://crispr.mit.edu sgRNA在线设计工具设计靶向人ATG7的sgRNA序列,构建puro-Cas9-ATG7-sgRNA质粒并测序验证;构建的重组质粒通过转染的方式转入HepG2细胞;嘌呤霉素筛选获得ATG7稳定敲除的HepG2细胞株;Western印迹检测ATG7,自噬相关因子P62和LC3B的蛋白表达水平;CCK8实验检测细胞活性;免疫荧光技术分析DNA损伤标志物53BP1。结果 经测序验证,成功构建了靶向人ATG7的puro-Cas9-sgRNA质粒;经单克隆筛选,成功获得ATG7完全敲除的HepG2细胞株;ATG7缺失引起的自噬障碍导致DNA损伤加剧。结论 HepG2细胞中ATG7的缺失导致细胞自噬功能障碍,加剧了DNA损伤,同时促进HepG2细胞增殖,进而促进肿瘤的发生发展。 展开更多
关键词 atg7 细胞自噬 DNA损伤 癌症
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MiR-106a targets ATG7 to inhibit autophagy and angiogenesis after myocardial infarction 被引量:4
3
作者 Guofeng Bai Jinghao Yang +11 位作者 Weili Liao Xiaofeng Zhou Yingting He Nian Li Liuhong Zhang Yifei Wang Xiaoli Dong Hao Zhang Jinchun Pan Liangxue Lai Xiaolong Yuan Xilong Wang 《Animal Models and Experimental Medicine》 CAS CSCD 2024年第4期408-418,共11页
Background:Myocardial infarction(MI)is an acute condition in which the heart mus-cle dies due to the lack of blood supply.Previous research has suggested that au-tophagy and angiogenesis play vital roles in the preven... Background:Myocardial infarction(MI)is an acute condition in which the heart mus-cle dies due to the lack of blood supply.Previous research has suggested that au-tophagy and angiogenesis play vital roles in the prevention of heart failure after MI,and miR-106a is considered to be an important regulatory factor in MI.But the specific mechanism remains unknown.In this study,using cultured venous endothelial cells and a rat model of MI,we aimed to identify the potential target genes of miR-106a and discover the mechanisms of inhibiting autophagy and angiogenesis.Methods:We first explored the biological functions of miR-106a on autophagy and angiogenesis on endothelial cells.Then we identified ATG7,which was the down-stream target gene of miR-106a.The expression of miR-106a and ATG7 was investi-gated in the rat model of MI.Results:We found that miR-106a inhibits the proliferation,cell cycle,autophagy and angiogenesis,but promoted the apoptosis of vein endothelial cells.Moreover,ATG7 was identified as the target of miR-106a,and ATG7 rescued the inhibition of autophagy and angiogenesis by miR-106a.The expression of miR-106a in the rat model of MI was decreased but the expression of ATG7 was increased in the infarction areas.Conclusion:Our results indicate that miR-106a may inhibit autophagy and angiogenesis by targeting ATG7.This mechanism may be a potential therapeutic treatment for MI. 展开更多
关键词 ANGIOGENESIS atg7 AUTOPHAGY miR-106a MIRNAS myocardial infarction
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自噬相关蛋白ATG7在乳腺癌中的表达及其临床病理意义
4
作者 曲燕 石亭亭 +6 位作者 王娟如 罗军 王志皓 罗文武 郭欠影 赵敏 吴正升 《临床与实验病理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第9期917-922,共6页
目的 探讨ATG7(autophagy-related 7, ATG7)在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌发生、发展的影响。方法 采用免疫组化法检测乳腺癌组织中ATG7蛋白的表达,并分析其表达与乳腺癌临床病理特征的关系。使用shRNA干扰乳腺癌细胞MCF-7中ATG7的表达... 目的 探讨ATG7(autophagy-related 7, ATG7)在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌发生、发展的影响。方法 采用免疫组化法检测乳腺癌组织中ATG7蛋白的表达,并分析其表达与乳腺癌临床病理特征的关系。使用shRNA干扰乳腺癌细胞MCF-7中ATG7的表达。应用嘌呤霉素筛选稳转细胞系,并运用Western blot法检测转染效率。CCK-8和克隆形成实验检测敲低ATG7对细胞增殖能力的影响。裸鼠皮下成瘤实验检测敲低ATG7对体内成瘤能力的影响。结果 免疫组化结果显示ATG7主要定位于乳腺癌细胞质,且其表达与肿瘤大小和Ki67显著相关(P<0.05)。ATG7-shRNA可显著干扰乳腺癌细胞MCF-7中ATG7的表达。CCK-8和克隆形成实验结果显示,与对照组相比,敲低ATG7可促进乳腺癌细胞增殖能力。裸鼠皮下成瘤实验结果显示,与对照组相比,敲低ATG7后小鼠成瘤能力明显升高。结论 ATG7表达可能抑制乳腺癌的增殖能力,可作为乳腺癌治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 自噬 atg7 增殖
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miR-141-3p通过靶向调控ATG7影响顺铂耐药非小细胞肺癌细胞的转移活性 被引量:2
5
作者 袁跃西 罗化 +1 位作者 杨继承 傅满姣 《解剖科学进展》 CAS 2024年第5期503-506,共4页
目的探究miR-141-3p与ATG7对顺铂耐药非小细胞肺癌细胞转移活性的影响。方法将A549/DDP细胞分为miR NC组、miR-141-3p mimic组、si-NC组和si-ATG7组,实时荧光定量PCR实验和蛋白免疫印迹实验分析miR-141-3p和ATG7的表达水平;MTT实验分析A... 目的探究miR-141-3p与ATG7对顺铂耐药非小细胞肺癌细胞转移活性的影响。方法将A549/DDP细胞分为miR NC组、miR-141-3p mimic组、si-NC组和si-ATG7组,实时荧光定量PCR实验和蛋白免疫印迹实验分析miR-141-3p和ATG7的表达水平;MTT实验分析A549/DDP细胞的增殖活性;Transwell侵袭实验和划痕实验分析A549/DDP细胞的转移活性;流式细胞术分析A549/DDP细胞的凋亡率;荧光素酶报告基因实验分析A549/DDP细胞中miR-141-3p与ATG7的靶向关系。结果与A549细胞比较,A549/DDP细胞中的miR-141-3p表达水平降低,ATG7表达水平增加。与miR NC组比较,miR-141-3p mimic组A549/DDP细胞的增殖活性降低、侵袭和迁移能力降低、凋亡率增加(P<0.05)。与si-NC组比较,si-ATG7组A549/DDP细胞的增殖活性降低、侵袭和迁移能力降低、凋亡率增加(P<0.05)。荧光素酶报告基因实验证实,miR-141-3p与ATG7存在靶向关系。结论miR-141-3p通过靶向调控ATG7的表达抑制顺铂耐药非小细胞肺癌细胞的转移活性。 展开更多
关键词 miR-141-3p atg7 顺铂 耐药 非小细胞肺癌
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益气化瘀清热方对阿霉素诱导损伤肾足细胞ATG7、LC3表达的影响
6
作者 李冰 翟文生 +3 位作者 杨濛 何改丽 高旭光 李广 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期937-941,共5页
目的:观察益气化瘀清热方对阿霉素(ADR)诱导损伤肾足细胞自噬的影响。方法:制备益气化瘀清热方含药血清,采用ADR(0.2μg/mL)诱导构建肾足细胞损伤模型,分为空白组、模型组(ADR组)、模型加含药血清组(ADR+Z组)、模型加空白血清组(ADR+K组... 目的:观察益气化瘀清热方对阿霉素(ADR)诱导损伤肾足细胞自噬的影响。方法:制备益气化瘀清热方含药血清,采用ADR(0.2μg/mL)诱导构建肾足细胞损伤模型,分为空白组、模型组(ADR组)、模型加含药血清组(ADR+Z组)、模型加空白血清组(ADR+K组)。采用免疫荧光染色及Western Blot检测各组足细胞ATG7、LC3Ⅱ/Ⅰ表达,透射电镜观察足细胞内自噬体的形成以及足细胞线粒体的形态变化。结果:与空白组比较,ADR组与ADR+Z组LC3Ⅱ/Ⅰ、ATG7蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01),与ADR组比较,ADR+Z组LC3Ⅱ/Ⅰ、ATG7蛋白表达显著增高(P<0.01,P<0.05)。与空白组比较,ADR组有部分足细胞足突融合、脱落,肿胀变形的线粒体数量增多,细胞中自噬体数量增加。与ADR组比较,ADR+Z组足细胞足突数量增多,受损的线粒体数量明显减少,线粒体自噬体数量增多,溶酶体较多。结论:ADR损伤后,足细胞自噬水平反应性增强,线粒体损伤明显,益气化瘀清热方可上调ATG7、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达,增强ADR诱导足细胞线粒体自噬活动减轻足细胞损伤。 展开更多
关键词 益气化瘀清热方 局灶节段性肾小球硬化 线粒体损伤 自噬 阿霉素 自噬相关蛋白7 微管相关蛋白1轻链3 足细胞
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敲除ATG5、ATG7基因对RPMI-8226细胞铁死亡敏感性的影响
7
作者 姜晶晶 陈翀 +4 位作者 年丽 刘洋 马金 王聪月 李振宇 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1444-1449,共6页
目的:探讨ATG5、ATG7基因对诱导多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226细胞发生铁死亡的敏感性的影响。方法:用CRISPR/Cas9技术敲除RPMI-8226细胞株中自噬关键基因ATG5和ATG7;Western blot法鉴定基因敲除细胞并检测自噬相关蛋白P62、LC3B的表达变... 目的:探讨ATG5、ATG7基因对诱导多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226细胞发生铁死亡的敏感性的影响。方法:用CRISPR/Cas9技术敲除RPMI-8226细胞株中自噬关键基因ATG5和ATG7;Western blot法鉴定基因敲除细胞并检测自噬相关蛋白P62、LC3B的表达变化;流式细胞术检测基因敲除细胞对RSL3敏感性的变化;检测基因敲除细胞内亚铁离子含量和活性氧水平。结果:Western blot检测结果证实RPMI-8226细胞中ATG5、ATG7基因被成功敲除。流式细胞术检测结果显示,RPMI-8226细胞存活率与不同浓度RSL3呈剂量依赖关系(r=-0.969);用10μmol/L的RSL3诱导对照组和基因敲除组细胞发生铁死亡,48 h后基因敲除组细胞存活率显著高于对照组(均P<0.001)。ATG5、ATG7基因敲除后细胞内Fe^(2+)的含量较对照组明显下降(均P<0.01),活性氧水平亦明显下降(均P<0.001)。结论:敲除ATG5、ATG7基因可以抑制多发性骨髓瘤细胞发生铁死亡,LAP途径可能参与其调控。 展开更多
关键词 铁死亡 ATG5 atg7 LC3相关吞噬作用 活性氧
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COPD合并肺性脑病患者脑脊液β-GBA、Atg7、p62水平变化及意义 被引量:6
8
作者 周媛媛 曾凡军 +3 位作者 熊晓琦 阮玉姝 万晓蓉 宋新宇 《山东医药》 CAS 北大核心 2015年第4期78-79,共2页
目的观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并肺性脑病患者脑脊液中神经元自噬相关标志物β-葡糖脑苷酶(β-GBA)、Atg7、p62水平变化,并探讨其临床意义。方法选择COPD合并肺性脑病者50例(观察组)及单纯COPD患者50例(对照组),采集患者脑脊液,ELIS... 目的观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并肺性脑病患者脑脊液中神经元自噬相关标志物β-葡糖脑苷酶(β-GBA)、Atg7、p62水平变化,并探讨其临床意义。方法选择COPD合并肺性脑病者50例(观察组)及单纯COPD患者50例(对照组),采集患者脑脊液,ELISA法检测脑脊液中的β-GBA、Atg7,Western blot法检测p62蛋白。结果观察组脑脊液β-GBA为(34.6±6.8)pg/m L、Atg7为(12.4±3.2)pg/m L、p62为0.35±0.05,对照组分别为(15.5±3.6)pg/m L、(2.8±0.6)pg/m L、0.23±0.03,P均<0.05。结论 COPD合并肺性脑病患者脑脊液β-GBA、Atg7、p62蛋白水平升高,神经元自噬在肺性脑病的发生、发展中起重要作用。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 肺性脑病 神经元自噬 β-葡糖脑苷酶 atg7 P62
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miR-17在动脉粥样硬化中下调ATG7蛋白水平抑制巨噬细胞的自噬功能 被引量:4
9
作者 林庚海 阮发晖 +2 位作者 陈劲松 庄金龙 范伟伟 《医学研究杂志》 2018年第1期62-65,164,共5页
目的在动脉粥样硬化患者的血液中检测自噬相关miRNA的水平变化,探究差异miRNA是否参与巨噬细胞的自噬过程,并影响巨噬细胞的凋亡及炎症表达。方法在动脉粥样硬化患者的血液中,用荧光定量PCR的方法检测miRNA的水平。在转染miR-17后,通过... 目的在动脉粥样硬化患者的血液中检测自噬相关miRNA的水平变化,探究差异miRNA是否参与巨噬细胞的自噬过程,并影响巨噬细胞的凋亡及炎症表达。方法在动脉粥样硬化患者的血液中,用荧光定量PCR的方法检测miRNA的水平。在转染miR-17后,通过蛋白质免疫印迹的方法检测巨噬细胞中ATG7蛋白以及自噬标志物LC3Ⅱ表达。同时,使用MTT实验检测转染miR-17后双氧水诱导巨噬细胞凋亡的改变,通过荧光定量PCR检测炎性因子水平探究转染miR-17后巨噬细胞的炎症表达。结果在动脉粥样硬化患者的血液中,miR-17的水平特异升高。而转染miR-17后,巨噬细胞中miR-17靶向蛋白ATG7和自噬标志物LC3Ⅱ表达下降。miR-17在巨噬细胞中的升高同时促进了双氧水诱导的细胞凋亡,并增强了TNF-α等炎性因子的表达。结论 miR-17水平在动脉粥样硬化患者的血液中特异升高,并在巨噬细胞通过靶向ATG7介导细胞自噬水平降低,进而增强巨噬细胞的炎症表达并促进其凋亡。 展开更多
关键词 miR^17 自噬 atg7蛋白 巨噬细胞 动脉粥样硬化
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自噬基因ATG7、ATG12在成人急性淋巴细胞白血病骨髓单个核细胞中的表达及意义 被引量:6
10
作者 杨秀丽 唐庆华 于洋 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2019年第2期239-242,共4页
目的:探讨自噬基因ATG7、ATG12在成人急性淋巴细胞白血病(ALL)骨髓单个核细胞中的表达及意义。方法:收集2015年1-12月在我院确诊的成人ALL患者骨髓标本80例,将其分为初治组42例,缓解组25例,难治复发组13例,选取同期非肿瘤性疾病患者骨... 目的:探讨自噬基因ATG7、ATG12在成人急性淋巴细胞白血病(ALL)骨髓单个核细胞中的表达及意义。方法:收集2015年1-12月在我院确诊的成人ALL患者骨髓标本80例,将其分为初治组42例,缓解组25例,难治复发组13例,选取同期非肿瘤性疾病患者骨髓标本30例作为对照组,应用淋巴细胞分离液分离出骨髓单个核细胞,经单丹磺酰尸染色后使用流式细胞仪检测细胞自噬率,使用RT-PCR技术检测自噬基因ATG7和ATG12mRNA的表达水平。结果:流式细胞仪检测结果显示,初治组、难治复发组的自噬率显著高于对照组的自噬率(P<0. 05),缓解组的自噬率与对照组相比无显著性差异(P>0. 05),难治复发组的自噬率显著高于缓解组(P<0. 05)。RT-PCR检测结果显示,初治组、难治复发组的ATG7 mRNA和ATG12 mRNA的相对表达量显著高于对照组(P<0. 05),缓解组的ATG7 mRNA和ATG12 mRNA的相对表达量与对照组相比无显著性差异(P>0. 05),难治复发组的ATG7 mRNA和ATG12 mRNA的相对表达量显著高于缓解组(P<0. 05)。结论:成人ALL骨髓单个核细胞的自噬活性增强,自噬基因ATG7、ATG12 mRNA表达上调,提示自噬基因ATG7、ATG12激活诱导的自噬活性增强可能与成人ALL的发生、发展和复发有关。 展开更多
关键词 急性淋巴细胞白血病 成人 骨髓单个核细胞 atg7 ATG12
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ATG7在卵巢癌组织中的表达及对卵巢癌细胞增殖影响及相关机制研究 被引量:1
11
作者 王亮亮 王丽华 +1 位作者 马珊珊 刘静 《妇儿健康导刊》 2022年第8期20-22,26,F0003,共5页
目的研究卵巢肿瘤中自噬相关基因7(ATG7)的表达情况,并分析ATG7对卵巢癌细胞SKOV3增殖的影响及相关机制。方法收集2022年2月至4月蚌埠医学院第一附属医院肿瘤妇科手术切除卵巢癌组织及癌旁正常组织15例,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测卵... 目的研究卵巢肿瘤中自噬相关基因7(ATG7)的表达情况,并分析ATG7对卵巢癌细胞SKOV3增殖的影响及相关机制。方法收集2022年2月至4月蚌埠医学院第一附属医院肿瘤妇科手术切除卵巢癌组织及癌旁正常组织15例,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测卵巢癌及癌旁正常组织中ATG7表达差异,siRNA转染卵巢癌细胞SKOV3,敲低ATG7表达量,Western blot验证转染效率。通过克隆形成实验检测SKOV3细胞增殖变化。采用Western blot检测磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)相关信号通路的蛋白表达变化。结果与癌旁正常组织相比,卵巢癌组织中ATG7蛋白表达增高(P<0.05),敲低SKOV3细胞ATG7表达量,细胞增殖能力降低(P<0.05),且敲低后的p-PI3K和p-AKT蛋白表达量下调(P<0.05)。结论ATG7蛋白表达在卵巢癌中明显升高,且可能通过PI3K/AKT信号通路影响卵巢癌细胞SKOV3增殖。 展开更多
关键词 atg7 卵巢癌 增殖 PI3K/AKT信号通路
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miR-17-5p靶向自噬相关蛋白ATG7调控巨噬细胞抗结核分枝杆菌感染作用的研究 被引量:10
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作者 洪丹彤 张帆 +5 位作者 王淑娥 王红霞 刘昆梅 徐广贤 霍正浩 郭乐 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1-8,共8页
目的:通过研究miR-17-5p对自噬相关基因ATG7的靶向调控机制和对细胞自噬的作用,探究miR-17-5p在结核分枝杆菌介导的自噬途径中的作用及其机制。方法:生物信息学分析得到miR17-5p的靶基因ATG7,通过成功构建载体ATG7野生型(pMirGLO-ATG7-3... 目的:通过研究miR-17-5p对自噬相关基因ATG7的靶向调控机制和对细胞自噬的作用,探究miR-17-5p在结核分枝杆菌介导的自噬途径中的作用及其机制。方法:生物信息学分析得到miR17-5p的靶基因ATG7,通过成功构建载体ATG7野生型(pMirGLO-ATG7-3'UTR-WT)和突变型,利用双萤光素酶报告系统、Western blot验证miR-17-5p和ATG7的靶向关系,同时构建结核分枝杆菌(H37Ra)感染的人源性THP-1巨噬细胞模型,将做不同处理的细胞分为三组:miR-17-5p mimics、miR-17-5p inhibitor、miR-17-5p nc。通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测H37Ra感染对miR-17-5p表达量的影响,并且进一步通过Western blot、免疫荧光观察检测LC3蛋白的表达量和自噬小体的数量。结果: MTB感染能够引起miR-17-5p的下调,随着感染复数的增加有明显的降低。而生物信息学预测结果显示miR-17-5p与ATG7具有靶向性,双萤光素酶报告实验、Western blot验证miR-17-5p能够和ATG7靶向结合,并对其进行负调控。进一步通过Western blot、免疫荧光观察发现miR-17-5p mimics组LC3Ⅱ的表达下调,自噬小体表达降低,而miR-17-5p inhibitor组相反。其中对H37Ra感染组与未感染组之间比较,ATG7和LC3Ⅱ蛋白表达明显增强。结论: miR-17-5p直接靶向结合ATG7 3'UTR抑制自噬,在巨噬细胞抗MTB过程中发挥作用。 展开更多
关键词 自噬 结核分支杆菌 miR-17-5p atg7
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糖尿病肾病患者血清Beclin1、ATG7与蛋白尿相关性研究 被引量:14
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作者 贾艳燕 刘婷 +4 位作者 方敬爱 张紫媛 胡雅玲 刘宇翔 张晓东 《中国中西医结合肾病杂志》 2022年第3期228-230,共3页
目的:探讨糖尿病肾病(DKD)患者血清Beclin1、ATG7水平与蛋白尿的相关性。方法:收集2018年12月—2019年10月在本院门诊或住院部诊断为DKD共108例患者的临床资料,按ACR分为正常白蛋白尿组、微量白蛋白尿组和大量白蛋白尿组。纳入同期我院... 目的:探讨糖尿病肾病(DKD)患者血清Beclin1、ATG7水平与蛋白尿的相关性。方法:收集2018年12月—2019年10月在本院门诊或住院部诊断为DKD共108例患者的临床资料,按ACR分为正常白蛋白尿组、微量白蛋白尿组和大量白蛋白尿组。纳入同期我院体检健康者共30例为对照组。检测血清Beclin1、ATG7水平,用Pearson/Spearman相关分析Beclin1、ATG7与尿微量白蛋白、尿微量白蛋白/肌酐等指标的相关性。用多重线性逐步回归法分析Beclin1、ATG7的影响因素。结果:(1)与对照组相比,DKD三组患者血清Beclin1、ATG7水平均降低,其中大量白蛋白尿组最低(P<0.001)。(2)Beclin1与HDL-C、eGFR、Hb、Alb呈正相关(P<0.05),与糖尿病病程、HbAlc、PBG、TC、BUN、Scr、UA、UAlb、ACR、24 h UTP呈负相关(P<0.05)。ATG7与HDL-C、eGFR、Hb、Alb呈正相关(P<0.05),与糖尿病病程、FBG、HbAlc、PBG、TC、LDL-C、BUN、Scr、UA、UAlb、ACR、24 h UTP呈负相关(P<0.05)。(3)经多重线性逐步回归分析,Beclin1水平的重要预测指标为糖尿病病程、ACR、eGFR、HDL-C(P<0.01)。ATG7水平的预测指标为ACR、eGFR、HbAlc(P<0.05)。结论:本研究发现DKD患者血清中自噬相关蛋白Beclin1、ATG7水平降低,与蛋白尿程度存在相关性,对于明确自噬障碍与DKD进展可能具有一定的研究价值,其具体机制有待于进一步研究。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 蛋白尿 BECLIN1 atg7
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微小RNA-20a对宫颈癌细胞迁移、侵袭、增殖及ATG7表达的影响 被引量:5
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作者 段学英 杜二球 邰云燕 《临床肿瘤学杂志》 CAS 北大核心 2018年第4期310-315,共6页
目的探讨微小RNA-20a(miR-20a)对宫颈癌Si Ha细胞迁移、侵袭和增殖的影响及可能机制。方法采用Lipofectamine 2000脂质体法将miR-20a抑制剂和阴性对照载体分别转染Si Ha细胞株。采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测两组细胞中miR-20a的表达... 目的探讨微小RNA-20a(miR-20a)对宫颈癌Si Ha细胞迁移、侵袭和增殖的影响及可能机制。方法采用Lipofectamine 2000脂质体法将miR-20a抑制剂和阴性对照载体分别转染Si Ha细胞株。采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测两组细胞中miR-20a的表达以验证转染效果,细胞迁移实验、Transwell细胞侵袭实验及MTT法分别检测miR-20a的表达抑制对Si Ha细胞迁移、侵袭和增殖的影响;荧光素酶报告实验及Western blotting验证miR-20a对下游预测靶基因自噬相关蛋白7(ATG7)的调控作用。结果 QPCR检测结果显示,与阴性对照组比较,miR-20a抑制剂组Si Ha细胞中miR-20a的表达量显著降低(P<0.01),证明转染模型构建成功。细胞迁移实验显示,转染48 h后,阴性对照组细胞的划痕愈合率为(75.68±5.94)%,高于抑制剂组的(38.24±7.68)%(P<0.01)。Transwell细胞侵袭实验显示,转染48 h后,阴性对照组穿膜细胞数为(96.35±10.23)个,多于抑制剂组的(23.54±7.26)个(P<0.01)。MTT法检测显示,阴性对照组和抑制剂组细胞增殖能力的差异无统计学意义(P>0.05)。与阴性对照组相比,转染miR-20a模拟物+ATG7野生型3’UTR报告基因载体的细胞荧光素酶活性显著下降(P<0.01),而转染miR-20a模拟物+ATG7突变型3’UTR报告基因载体的细胞荧光素酶活性无显著变化(P>0.05);Western blotting检测显示,与阴性对照组比较,抑制剂组细胞ATG7蛋白表达量显著增加(P<0.01)。结论降低miR-20a的表达能显著抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力,但细胞增殖能力不受影响,这可能与miR-20a直接作用于其下游靶基因ATG7并调控其表达紧密相关。 展开更多
关键词 宫颈癌 微小RNA-20a(miR-20a) 迁移 侵袭 增殖 自噬相关蛋白7(atg7)
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基于miR-17-5p/ATG7介导自噬探讨苍附导痰汤对痰湿型多囊卵巢综合征不孕症的影响 被引量:18
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作者 于晓娜 连方 +1 位作者 相珊 于艺 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期5075-5080,共6页
目的:基于miR-17-5p/ATG7介导自噬探讨苍附导痰汤对痰湿型多囊卵巢综合征(PCOS)不孕症患者的影响。方法:选取符合痰湿型PCOS诊断标准的不孕患者76例,随机分为试验组(苍附导痰汤+IVF)、观察组(安慰剂+IVF),各38例。另选取因男方因素行辅... 目的:基于miR-17-5p/ATG7介导自噬探讨苍附导痰汤对痰湿型多囊卵巢综合征(PCOS)不孕症患者的影响。方法:选取符合痰湿型PCOS诊断标准的不孕患者76例,随机分为试验组(苍附导痰汤+IVF)、观察组(安慰剂+IVF),各38例。另选取因男方因素行辅助生殖的患者38例为对照组(IVF)。3组患者皆采用拮抗剂方案进行控制性卵巢刺激,统计分析试验组和观察组患者治疗前后中医痰湿证候积分、体质量指数(BMI)变化,比较3组患者促性腺激素(Gn)使用天数、Gn用量、性激素水平、获卵数、2PN受精率、优质胚胎率等临床指标,采用qRT-PCR检测颗粒细胞中miR-17-5p及ATG7 mRNA表达水平,Western Blot检测ATG7蛋白水平。结果:试验组治疗后痰湿证候积分、BMI显著降低(P<0.05),治疗前后痰湿证候积分差值、BMI差值显著高于观察组(P<0.05);Gn用药天数试验组显著低于观察组(P<0.05),试验组和观察组均显著高于对照组(P<0.05);Gn用量试验组和观察组高于对照组(P<0.05);扳机日E2水平试验组高于观察组和对照组(P<0.05);获卵数对照组显著低于试验组和观察组(P<0.05);优质胚胎率试验组和对照组显著高于观察组(P<0.05);miR-17-5p相对表达量试验组和观察组均显著低于对照组(P<0.05),观察组显著低于试验组(P<0.05);ATG7 mRNA相对表达量试验组和观察组显著高于对照组(P<0.05);ATG7蛋白表达水平观察组显著高于试验组和对照组(P<0.05),试验组显著高于对照组(P<0.05)。结论:与单纯男子因素不孕女性相比,痰湿型PCOS患者颗粒细胞中miR-17-5p/ATG7表达存在差异,低表达的miR-17-5p可能通过上调ATG7的表达使颗粒细胞过度自噬,从而参与痰湿型PCOS的发生;苍附导痰汤可使miR-17-5p表达上调,ATG7表达下调,显著改善痰湿型PCOS不孕患者的临床症状,提高2PN受精率和优质胚胎率。 展开更多
关键词 多囊卵巢综合征 苍附导痰汤 miR-17-5p atg7 自噬
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人自噬相关蛋白ATG7的原核表达及纯化鉴定 被引量:1
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作者 晋帅 洪甜 +6 位作者 张珂 马永富 徐小洁 禇健 易绍琼 叶棋浓 刘阳 《生物技术通讯》 CAS 2016年第1期69-72,共4页
目的:原核表达并纯化自噬相关蛋白ATG7,初步鉴定其生物学活性。方法:利用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人ATG7基因的编码序列,插入载体p ET-28a(+)得到重组质粒,经Bam HⅠ和NotⅠ双酶切鉴定后转化大肠杆菌Rossate菌株进行小量诱导,纯化... 目的:原核表达并纯化自噬相关蛋白ATG7,初步鉴定其生物学活性。方法:利用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人ATG7基因的编码序列,插入载体p ET-28a(+)得到重组质粒,经Bam HⅠ和NotⅠ双酶切鉴定后转化大肠杆菌Rossate菌株进行小量诱导,纯化融合蛋白His-ATG7,通过Western印迹和SDS-PAGE检测融合蛋白的纯化效果。结果:用PCR技术从人乳腺文库中扩增得到约2031 bp的目的片段,插入载体p ET-28a(+)后构建出His-ATG7重组质粒,并经酶切鉴定及测序证实无误;转化大肠杆菌Rossate并进行小量诱导,纯化后SDS-PAGE检测显示获得相对分子质量约为78×103的融合蛋白。结论:纯化得到原核系统表达的His-ATG7融合蛋白,为后续研究ATG7在自噬中的作用机制奠定了实验基础。 展开更多
关键词 人自噬相关蛋白atg7 原核表达 纯化 自噬
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基于CRISPR/Cas9技术构建Atg7基因敲除的人脑微血管内皮细胞系 被引量:2
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作者 李雯卉 刘辉 +2 位作者 李泽烨 韦佳祎 陈誉华 《中国中西医结合儿科学》 2021年第4期286-291,共6页
目的利用CRISPR/Cas9技术构建Atg7基因敲除的人脑微血管内皮细胞,为Atg7在脑血管的发育和参与血脑屏障形态建成的机制以及脑血管相关疾病的研究提供体外细胞模型。方法针对人Atg7第1外显子区域设计2对引导RNA序列(sgRNA),通过慢病毒转... 目的利用CRISPR/Cas9技术构建Atg7基因敲除的人脑微血管内皮细胞,为Atg7在脑血管的发育和参与血脑屏障形态建成的机制以及脑血管相关疾病的研究提供体外细胞模型。方法针对人Atg7第1外显子区域设计2对引导RNA序列(sgRNA),通过慢病毒转染人脑微血管内皮细胞,嘌呤霉素和杀稻瘟菌素筛选成功转染细胞。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western blotting法检测敲除靶基因的mRNA和蛋白,显微镜下观察细胞形态变化。结果构建了靶向Atg7的CRISPR/Cas9质粒;通过实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和细胞免疫荧光染色检测,结果表明单克隆筛选获得了Atg7稳定敲除的人脑微血管内皮细胞系;光镜下观察未发现Atg7敲除后细胞形态出现明显改变。结论利用CRISPR/Cas9技术成功构建了Atg7基因稳定敲除的人脑微血管内皮细胞,将有利于脑血管的发育和血脑屏障形态建成的机制以及脑血管相关疾病的研究。 展开更多
关键词 人脑微血管内皮细胞 atg7基因 CRISPR/Cas9技术 基因敲除
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Atg5和Atg7在自身免疫性疾病中的研究进展 被引量:3
18
作者 张丰 柴克霞 《现代临床医学》 2019年第6期455-457,469,共4页
目前已知自噬相关基因Atg5、Atg7编码蛋白直接参与自噬体的形成,而自噬参与多种自身免疫性疾病的发病过程.自噬在自身免疫性疾病中的研究引起人们的高度重视,本文就目前Atg5、Atg7在自身免疫性疾病,如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、贝... 目前已知自噬相关基因Atg5、Atg7编码蛋白直接参与自噬体的形成,而自噬参与多种自身免疫性疾病的发病过程.自噬在自身免疫性疾病中的研究引起人们的高度重视,本文就目前Atg5、Atg7在自身免疫性疾病,如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、贝赫切特综合征、多发性肌炎/皮肌炎、干燥综合征、强直性脊柱炎等疾病中的研究进展做一综述. 展开更多
关键词 自噬 自身免疫性疾病 Atg5 atg7
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沉默ATG5及ATG7可抑制顺铂介导的耐顺铂睾丸癌细胞的自噬和增殖 被引量:8
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作者 朱晨露 杜家如 +4 位作者 姚言雪 武丹丹 苑敏 干露 童旭辉 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期657-663,共7页
目的观察顺铂作用后,耐顺铂睾丸癌Ⅰ-10/DDP细胞自噬水平的变化;探讨沉默ATG5、ATG7对顺铂作用后的自噬及细胞增殖的影响。方法顺铂(15μmol/L,12 h)作用Ⅰ-10/DDP细胞后,免疫印迹法检测LC3、p62的表达水平;透射电子显微镜和mCherry-GFP... 目的观察顺铂作用后,耐顺铂睾丸癌Ⅰ-10/DDP细胞自噬水平的变化;探讨沉默ATG5、ATG7对顺铂作用后的自噬及细胞增殖的影响。方法顺铂(15μmol/L,12 h)作用Ⅰ-10/DDP细胞后,免疫印迹法检测LC3、p62的表达水平;透射电子显微镜和mCherry-GFP-LC3B双标法检测自噬水平。实验分为转染试剂对照组(Mork组)、阴性对照质粒组(NC组)、转染shRNA-ATG5质粒组(shRNA-ATG5组)、转染shRNA-ATG7质粒组(shRNA-ATG7组),免疫印迹法检测ATG5、ATG7的表达。顺铂(15μmol/L,12 h)作用转染组细胞后,免疫印迹法检测LC3、p62的表达;透射电子显微镜、mCherry-GFP-LC3B双标法检测自噬水平;MTT法检测细胞存活率;集落克隆实验检测细胞增殖情况。结果顺铂处理后,Ⅰ-10/DDP细胞中LC3Ⅱ的表达水平明显增加(P=0.001),p62的表达水平降低(P=0.01),自噬体数量增加。与NC组相比,shRNA-ATG5组、shRNA-ATG5组中ATG5、ATG7的表达量明显降低(P=0.005,P<0.001)。与单用顺铂组相比,shRNA-ATG5组与shRNA-ATG7组细胞用顺铂处理后LC3Ⅱ表达水平明显降低(P<0.001),p62的表达水平明显增加(P<0.001),自噬体数量减少、细胞存活率(P<0.001)及克隆形成能力均降低。结论沉默ATG5、ATG7后抑制顺铂介导的自噬,增强顺铂抑制细胞增殖的作用。 展开更多
关键词 顺铂 ATG5 atg7 自噬 耐顺铂睾丸癌细胞
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pGenesil-1-Atg7-shRNA真核表达载体的构建
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作者 魏传杰 肖双 +1 位作者 夏炎 龙鼎新 《实用预防医学》 CAS 2014年第4期385-387,共3页
目的利用RNA干扰技术,构建pGenesil-1质粒载体介导靶向自噬基因Atg7的shRNA真核表达载体。方法根据GenBank中Atg7基因的cDNA序列(NM-001136031),设计有小发卡结构的三条寡核苷酸序列,连接到空载体pGenesil-1中,转化到JM109菌株,选取阳... 目的利用RNA干扰技术,构建pGenesil-1质粒载体介导靶向自噬基因Atg7的shRNA真核表达载体。方法根据GenBank中Atg7基因的cDNA序列(NM-001136031),设计有小发卡结构的三条寡核苷酸序列,连接到空载体pGenesil-1中,转化到JM109菌株,选取阳性克隆,进行酶切鉴定和DNA测序分析。结果经双酶切结果显示合成的shRNA序列成功连接到pGenesil-1质粒载体中,DNA测序结果证实干扰序列和目的序列相同,重组载体pGenesil-1-Atg7-shRNA构建成功。结论成功构建干扰人Atg7基因的重组表达载体,为研究Atg7蛋白的生物学功能提供了研究基础。 展开更多
关键词 atg7 RNA干扰 pGenesil-1 自噬 载体构建
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