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细胞自噬基因Atg6在涡虫中枢神经系统再生中的功能研究 被引量:1
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作者 马克学 李睿 +4 位作者 郭芳莹 宋鸽鸽 吴萌 陈广文 刘德增 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期792-801,I0001,共11页
细胞自噬基因Atg6在细胞自噬过程中发挥重要作用,其功能缺陷影响神经发生。涡虫是研究中枢神经系统(central nervous system,CNS)再生的良好模型,其头部切除后1周就能再生出一个新的头部。因此,研究Atg6基因在涡虫CNS再生中的作用对探... 细胞自噬基因Atg6在细胞自噬过程中发挥重要作用,其功能缺陷影响神经发生。涡虫是研究中枢神经系统(central nervous system,CNS)再生的良好模型,其头部切除后1周就能再生出一个新的头部。因此,研究Atg6基因在涡虫CNS再生中的作用对探究自噬调控神经发生具有重要意义。本研究首次报道了日本三角涡虫(Dugesia japonica)Atg6基因(DjAtg6)的分子特征,并利用RNAi技术研究了其在涡虫CNS再生中作用。结果显示:DjAtg6 cDNA全长1366 bp,编码423个氨基酸。DjATG6含有ATG6/Beclin 1蛋白家族的Coil-Coil结构域和β折叠α螺旋自噬功能结构域。涡虫沿咽前咽后切割后,DjAtg6表达量显著增加,其转录本主要在新再生的脑神经节表达。RNAi-DjAtg6引起涡虫头部再生迟缓、脑神经结构偏小,并下调神经相关基因的表达。此外,本研究还发现,RNAi-DjAtg6不影响涡虫干细胞的增殖,但下调细胞迁移相关基因mmp1和mmp2的表达,且干扰mmp1和mmp2的表达影响涡虫头再生。因此,本研究结果表明,DjAtg6在涡虫CNS再生的组织重构中发挥重要作用,干扰DjAtg6影响涡虫CNS再生可能与细胞迁移有关,其详细的分子机制尚需进行深入研究。 展开更多
关键词 涡虫 细胞自噬 atg6 再生 RNA干扰
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小麦自噬标志分子ATG6的原核表达及其抗血清制备
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作者 刘刚 吴洪波 王冬梅 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期1-5,共5页
克隆小麦(Triticum aestivum L.)品种‘洛夫林10’(L10)中的ATG6(动物同源物为Beclin1)基因,并构建该基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白,经纯化后制备其兔抗血清。结果表明:从小麦品种L10中克隆获得1个ATG6的片段,长为13... 克隆小麦(Triticum aestivum L.)品种‘洛夫林10’(L10)中的ATG6(动物同源物为Beclin1)基因,并构建该基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白,经纯化后制备其兔抗血清。结果表明:从小麦品种L10中克隆获得1个ATG6的片段,长为1326 bp,利用所构建的大肠杆菌表达载体,经IPTG诱导,实现了对ATG6片段在原核系统的特异性表达。经蛋白纯化后,制备了其兔抗血清并通过Western blot鉴定了其特异性。ATG6抗体制备的成功,为小麦中ATG6基因和自噬功能的研究提供了研究基础。 展开更多
关键词 atg6 免疫印迹 抗血清 融合蛋白 原核表达
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弓形虫ATG6基因敲除虫株的构建及其生长特性鉴定 被引量:1
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作者 李昭然 曹世诺 +2 位作者 王铭 陈运通 贾洪林 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期886-890,896,共6页
酵母ATG6蛋白是磷脂酰基醇-3激酶(PI3K)复合物Ⅰ的组成成分,在自噬起始阶段促进自噬小体的形成。为研究弓形虫ATG6同源蛋白(Tg ATG6)生物学功能,本研究首先构建进化树对Tg ATG6基因进行同源性分析,并通过构建稳定表达红色荧光的(ATG6-m ... 酵母ATG6蛋白是磷脂酰基醇-3激酶(PI3K)复合物Ⅰ的组成成分,在自噬起始阶段促进自噬小体的形成。为研究弓形虫ATG6同源蛋白(Tg ATG6)生物学功能,本研究首先构建进化树对Tg ATG6基因进行同源性分析,并通过构建稳定表达红色荧光的(ATG6-m Cherry)虫株,以检测Tg ATG6的亚细胞定位情况。通过CRISPR/Cas9技术制备Tg ATG6基因缺失虫株,采用流式细胞术对该虫株的生长特性进行检测。实验结果显示,Tg ATG6基因在进化关系上与植物来源的ATG6同源关系较近。Tg ATG6在虫体内呈弥散分布,经16 h饥饿诱导后,该蛋白在弓形虫体内发生聚集。经序列分析显示,成功获得了两种Tg ATG6基因缺失虫株(ΔTg ATG6-1和ΔTg ATG6-2)。在ΔTg ATG6-2虫株中,Tg ATG6基因开放阅读框的593~612位点之间插入了226 bp外源序列,而在ΔTg ATG6-2中,不能够有效扩增靶序列,表明两种突变虫株的Tg ATG6基因均被有效插入失活。此外,该基因的缺失可能影响了虫株侵入宿主细胞的能力。Tg ATG6基因缺失株的成功制备为进一步研究Tg ATG6蛋白功能奠定了基础。 展开更多
关键词 敲除 atg6 自噬 弓形虫
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家蚕自噬相关蛋白BmATG6的多克隆抗体制备及呋虫胺胁迫下的表达 被引量:1
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作者 许诗亮 郝志华 +4 位作者 马焕艳 李颖慧 荆文辉 徐豫松 王华兵 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期45-50,共6页
自噬是生物体内维持细胞环境稳定的重要机制,在生物体面临外界刺激时会被诱导以进行适应性反应。对家蚕自噬相关蛋白BmATG6进行基因克隆,制备多克隆抗体,分析呋虫胺暴露后BmN细胞与家蚕5龄第3天幼虫BmATG6的表达变化。氨基酸序列比对表... 自噬是生物体内维持细胞环境稳定的重要机制,在生物体面临外界刺激时会被诱导以进行适应性反应。对家蚕自噬相关蛋白BmATG6进行基因克隆,制备多克隆抗体,分析呋虫胺暴露后BmN细胞与家蚕5龄第3天幼虫BmATG6的表达变化。氨基酸序列比对表明BmATG6与鳞翅目昆虫的ATG6/Beclin 1相似度较高。原核表达并纯化了BmATG6抗原蛋白,随后接种新西兰白兔,获得效价1∶64 000的多克隆抗体,Western blot在家蚕中肠样品中检测到大小约为50 kD的条带。呋虫胺处理2 h后BmN细胞中的BmATG6蛋白表述显著上调;呋虫胺处理24 h后,家蚕5龄第3天幼虫中肠和脂肪体中的BmATG6蛋白表达上调。结果表明,呋虫胺显著诱导BmN细胞和家蚕组织中的BmATG6表达上调。研究结果为解析新烟碱杀虫剂对非靶标生物的毒性机制和研究家蚕自噬调控机制提供了理论基础。 展开更多
关键词 家蚕 自噬 atg6/Beclin 1 多克隆抗体 呋虫胺
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凡纳滨对虾ATG6基因克隆及其在WSSV感染中的表达 被引量:1
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作者 褚吉兴 孟凡娟 +2 位作者 张广成 耿绪云 王丽燕 《安徽农业科学》 CAS 2018年第12期107-111,共5页
[目的]克隆获得凡纳滨对虾自噬相关基因Lv ATG6 cDNA全长,揭示其组织表达特征及其在白斑综合症病毒(WSSV)感染后的表达变化。[方法]利用PCR方法克隆Lv ATG6,半定量PCR方法检测Lv ATG6在对虾10种组织中的表达情况及WSSV侵染后Lv ATG6在... [目的]克隆获得凡纳滨对虾自噬相关基因Lv ATG6 cDNA全长,揭示其组织表达特征及其在白斑综合症病毒(WSSV)感染后的表达变化。[方法]利用PCR方法克隆Lv ATG6,半定量PCR方法检测Lv ATG6在对虾10种组织中的表达情况及WSSV侵染后Lv ATG6在对虾鳃和肝胰脏2种组织中的基因表达变化。[结果]克隆获得Lv ATG6 cDNA全长1 275 bp,编码424个氨基酸,预测蛋白分子量大小为51.5 k D;Lv ATG6基因在凡纳滨对虾10种组织中均有表达,无组织表达特异性;Lv ATG6在病毒感染不同时间的对虾鳃和肝胰脏组织中均出现明显的表达变化。[结论]凡纳滨对虾Lv ATG6及参与的细胞自噬可能在WSSV病毒感染增殖过程中发挥了重要作用,该研究为深入揭示凡纳滨对虾细胞自噬与WSSV病毒作用关系奠定了基础。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 自噬 atg6 白斑综合症病毒
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血清C肽、自噬关键分子酵母Atg6同系物、纤维胶凝蛋白3在2型糖尿病肾病患者中的表达变化及其预测价值研究 被引量:12
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作者 何阶德 梁航 +2 位作者 黄朦 邓洪浩 刘红玉 《陕西医学杂志》 CAS 2024年第3期327-330,共4页
目的:探讨血清C肽、自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1)、纤维胶凝蛋白3(Ficolin-3)在2型糖尿病肾病(DN)患者中的表达变化及其预测价值。方法:选取2型糖尿病(T2DM)患者135例,其中单纯T2DM患者73例(T2DM组),DN患者62例(DN组),并选取同... 目的:探讨血清C肽、自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1)、纤维胶凝蛋白3(Ficolin-3)在2型糖尿病肾病(DN)患者中的表达变化及其预测价值。方法:选取2型糖尿病(T2DM)患者135例,其中单纯T2DM患者73例(T2DM组),DN患者62例(DN组),并选取同期体检健康者60例为对照组。比较三组肾功能及血清C肽、Beclin1、Ficolin-3水平。分析肾功能与C肽、Beclin1、Ficolin-3的关系,以及血清C肽、Beclin1、Ficolin-3对DN的预测价值。结果:DN组Scr、BUN高于T2DM组和对照组,且T2DM组高于对照组(均P<0.05)。DN组eGFR低于T2DM组和对照组,且T2DM组低于对照组(均P<0.05)。DN组血清C肽水平高于T2DM组和对照组,且T2DM组高于对照组(均P<0.05)。DN组血清Beclin1、Ficolin-3水平低于T2DM组和对照组,且T2DM组低于对照组(均P<0.05)。血清C肽水平与Scr、BUN呈正相关,与eGFR呈负相关(均P<0.05)。血清Beclin1、Ficolin-3水平与Scr、BUN呈负相关,与eGFR呈正相关(均P<0.05)。血清C肽、Beclin1、Ficolin-3对DN均有一定的预测价值,三者联合的预测价值更高。结论:2型DN患者血清C肽水平升高,Beclin1、Ficolin-3水平降低,三者联合具有较高的预测价值。 展开更多
关键词 2型糖尿病肾病 血清C肽 自噬关键分子酵母atg6同系物 纤维胶凝蛋白3 肾功能 预测价值
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BmCaspase-8-like regulates autophagy by suppressing BmDREDD-mediated cleavage of BmATG6
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作者 Chang Sun Dongmei Wei +2 位作者 Yumeng Pan Xiaoyi Xiao Fei Wang 《Insect Science》 SCIE CAS CSCD 2023年第2期365-374,共10页
Autophagy plays an important role in tissue remodeling during insect development.The interplay between autophagy-related(ATG)proteins and caspases regulates the autophagic activity of ATGs,thereby modulating the proce... Autophagy plays an important role in tissue remodeling during insect development.The interplay between autophagy-related(ATG)proteins and caspases regulates the autophagic activity of ATGs,thereby modulating the process of autophagy.Our previous study characterized BmCaspase-8-like(BmCasp8L)as a caspase suppressor that inhibits apoptosis and immune signaling by suppressing the activation of death-related ced-3/Nedd2-like caspase(DREDD),a caspase-8 homolog in silkworm.In this study,we explored the regulatory role of BmCasp8L in autophagy.We found that the expression of Bmcasp8l increased from the late spinning stage to the pupa stage in the posterior silk gland(PSG),correlating with the expression patterns of Bmatg8 and Bmatg6.RNA interference-mediated downregulation of BmCasp8L expression significantly decreased starvation-induced autophagic influx as determined by the levels of BmATG8–phosphatidylethanolamine and the percentage of cells displaying punctate enhanced green fluorescent protein-BmATG8.Conversely,the overexpression of BmCasp8L significantly increased autophagic influx.We also found that BmCasp8L underwent autophagic degradation induced by starvation and that it was colocalized with BmATG8.Lastly,we demonstrated that BmDREDD attenuated autophagy and BmCasp8L suppressed BmDREDD-mediated cleavage of BmATG6.Taken together,our results demonstrated that BmCasp8L is a novel proautophagic molecule which suppresses BmDREDD-mediated cleavage of BmATG6 and is a target for autophagy. 展开更多
关键词 atg6 ATG8 AUTOPHAGY Bombyx mori Caspase-8-like DREDD
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基于PI3K/Beclin1信号通路探讨隔药饼灸改善慢性疲劳综合征大鼠认知功能的作用机制 被引量:5
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作者 翟春涛 侯亚薇 +2 位作者 史林娟 王一晓 田岳凤 《中国实验方剂学杂志》 北大核心 2025年第13期149-158,共10页
目的:基于磷脂酰肌醇3-激酶/自噬关键分子酵母Atg6同系物1(PI3K/Beclin1)信号通路探讨经方逍遥散为药饼进行施灸改善慢性疲劳综合征(CFS)大鼠认知功能的相关机制。方法:随机将50只6~8周龄SPF级SD大鼠分为空白组、模型组、假药饼灸组、... 目的:基于磷脂酰肌醇3-激酶/自噬关键分子酵母Atg6同系物1(PI3K/Beclin1)信号通路探讨经方逍遥散为药饼进行施灸改善慢性疲劳综合征(CFS)大鼠认知功能的相关机制。方法:随机将50只6~8周龄SPF级SD大鼠分为空白组、模型组、假药饼灸组、中药灌胃组、隔药饼灸组,每组10只。空白组以外的其他各组均采用慢性束缚与力竭游泳的复合方法进行持续21 d的造模,造模后进行行为学检测,隔药饼灸组与假药饼灸组对“神阙”“关元”“足三里”“期门”穴进行干预,中药灌胃组给予逍遥散悬浊液灌胃干预,连续干预10 d后对其行为学进行检测,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)对每组大鼠血清、海马组织白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、尿素氮(BUN)、丙二醛(MDA)水平测定,采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠海马组织形态学变化;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠海马组织PI3K、Beclin1 mRNA与蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组Morris水迷宫中实验穿越平台次数明显减少、目标象限停留时间明显缩短,第1、2、3、4天平均逃避潜伏期显著延长(P<0.01);新物体识别实验中探索时间识别指数及探索次数识别指数显著下降(P<0.01);血清、海马组织IL-4、IL-10水平显著降低,BUN、MDA水平显著升高(P<0.01),PI3K、Beclin1 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01)。经治疗后,与模型组比较,各治疗组穿越平台次数增加,目标象限停留时间延长,第1、2、3、4天平均逃避潜伏期明显缩短(P<0.05,P<0.01);血清、海马组织IL-4、IL-10水平明显升高,BUN、MDA水平明显降低(P<0.05,P<0.01),PI3K、Beclin1 mRNA及蛋白表达均有明显上升(P<0.05,P<0.01)。与假药饼灸组比较,隔药饼灸组及中药灌胃组大鼠穿越平台次数明显增加,目标象限停留时间明显延长(P<0.05),海马组织IL-4水平明显升高,MDA水平明显降低,PI3K、Beclin1 mRNA及蛋白相对表达量明显上调(P<0.05,P<0.01);中药灌胃组血清MDA、BUN水平明显降低;隔药饼灸组第2天、第3天平均逃避潜伏期明显缩短(P<0.05,P<0.01),血清IL-4水平上调,血清MDA水平下降,海马组织BUN水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。与中药灌胃组比较,隔药饼灸组血清IL-4水平明显升高,Beclin1 mRNA表达明显升高(P<0.05),PI3K、Beclin1蛋白相对表达量明显上调(P<0.05,P<0.01)。结论:隔药饼灸能够有效改善CFS大鼠的疲劳状态与记忆功能,减轻机体炎性反应及氧化应激,减轻海马神经元自噬,其机制可能与调节PI3K/Beclin1信号通路有关。 展开更多
关键词 隔药饼灸 慢性疲劳综合征 氧化应激 磷脂酰肌醇3-激酶/自噬关键分子酵母atg6同系物1信号通路 逍遥散
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芪玉三龙汤调节Beclin1,Atg5,LC3B表达以抑制肺癌肿瘤生长机制 被引量:21
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作者 程建超 童佳兵 +5 位作者 朱洁 张星星 高雅婷 陈杨 李泽庚 郑莉莉 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期29-35,共7页
目的:研究芪玉三龙汤对肺癌小鼠皮下移植瘤生长及对自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1),自噬相关基因5(autophagy related genes,Atg5)及微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1light chain3,LC3B)表达的影响。方法:采用... 目的:研究芪玉三龙汤对肺癌小鼠皮下移植瘤生长及对自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1),自噬相关基因5(autophagy related genes,Atg5)及微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1light chain3,LC3B)表达的影响。方法:采用Lewis肺癌细胞(lewis lung cancer cell,LLC)构建肺癌移植瘤小鼠模型,造模成功后随机分为模型组、芪玉三龙汤组、顺铂组及联合组,每组18只移植瘤小鼠。模型组每日按照生理盐水20 mL·kg^-1灌胃;芪玉三龙汤组每日按照80.48 g·kg^-1灌胃;顺铂组在第1,3,5天腹腔注射顺铂溶液(DDP)0.4 mL;联合组每日按80.48 g·kg^-1灌胃给药,并分别在第1,3,5天腹腔注射顺铂溶液0.4 mL;连续治疗21 d剥离瘤组织,称取瘤重,计算抑瘤率。苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织形态学改变。免疫组化检测肿瘤组织中Beclin1,LC3B蛋白表达和定位。蛋白免疫印迹法(Western blot)测定Beclin1,Atg5,微管相关蛋白1轻链3-I(LC3B-Ⅰ)及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)蛋白表达,并计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织Beclin1,Atg5 mRNA转录水平。结果:芪玉三龙汤具有温和的移植瘤抑制作用,抑瘤率为31.2%;镜下观察芪玉三龙汤组肿瘤组织可见片状坏死的肿瘤细胞;免疫组化及Western blot实验表明,与模型组比较,芪玉三龙汤能够上调Beclin1,Atg5,LC3B蛋白的表达(P<0.01),并且能促进LC3B-Ⅰ转化为LC3B-Ⅱ;Real-time PCR结果表明,与模型组比较,芪玉三龙汤能够促进Beclin1,Atg5 mRNA的转录(P<0.01)。结论:芪玉三龙汤对肺肿瘤生长具有温和地抑制作用,其作用机制可能与上调自噬关键分子Beclin1,Atg5,LC3B表达,促进LC3B-Ⅰ向LC3B-Ⅱ转化有关。 展开更多
关键词 芪玉三龙汤 肺癌 自噬 自噬关键分子酵母atg6同系物(Beclin1) 自噬相关基因5(Atg5) 微管相关蛋白1轻链3(LC3B)
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芪玉三龙汤调节mTOR/Beclin1/LC3信号轴相关分子的表达诱导肺癌A549细胞自噬 被引量:26
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作者 高雅婷 王心恒 +4 位作者 王小乐 程建超 张星星 童佳兵 李泽庚 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期98-104,共7页
目的:从细胞水平探讨芪玉三龙汤干预肺癌A549细胞对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1)/微管相关蛋白1轻链3(LC3)信号轴关键分子表达的影响。方法:选择肺癌人A549细胞作为研究对象,采用细胞增殖检测试剂... 目的:从细胞水平探讨芪玉三龙汤干预肺癌A549细胞对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1)/微管相关蛋白1轻链3(LC3)信号轴关键分子表达的影响。方法:选择肺癌人A549细胞作为研究对象,采用细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)法检测芪玉三龙汤含药血清对A549细胞活性的影响;原位末端标记法(TUNEL),透射电镜(TEM)及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(WB)分别检测芪玉三龙汤对A549细胞凋亡、自噬体形成及自噬标记分子表达的影响。结果:芪玉三龙汤血清能以浓度依赖性的方式抑制细胞活性;与空白血清组比较,芪玉三龙汤血清组A549细胞的凋亡数量显著增多(P<0.01),自噬体形成增加;与空白血清组比较,芪玉三龙汤血清组A549细胞的mTOR mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01),Beclin1,自噬相关基因5(Atg5),自噬相关基因13(Atg13)mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。结论:芪玉三龙汤能够诱导肺癌A549细胞发生自噬,其具体作用机制可能与其下调mTOR的表达,上调Beclin1,Atg5,Atg13,LC3的表达,促进LC3Ⅰ转化为LC3Ⅱ有关。 展开更多
关键词 芪玉三龙汤 A549细胞 细胞自噬 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) 自噬关键分子酵母atg6同系物(Beclin1) 微管相关蛋白1轻链3(LC3)
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当归拈痛汤对风湿热痹型佐剂性关节炎大鼠自噬蛋白LC3,Beclin1,p62表达的影响 被引量:20
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作者 陆麒瑾 李佳钰 +4 位作者 蔡义思 赵帆 林鸿鑫 刘刚 袁立霞 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期41-49,共9页
目的:研究当归拈痛汤对风湿热痹型佐剂性关节炎大鼠的防治作用及对自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3),自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1),p62表达的影响。方法:将6周龄SD雄性大鼠随机分为正常组,风湿热痹模型组,当归拈痛汤低、中、高... 目的:研究当归拈痛汤对风湿热痹型佐剂性关节炎大鼠的防治作用及对自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3),自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1),p62表达的影响。方法:将6周龄SD雄性大鼠随机分为正常组,风湿热痹模型组,当归拈痛汤低、中、高剂量组(5.67,11.34,22.68 g·kg^(-1)),甲氨蝶呤(MTX)组(1.35 mg·kg^(-1)),每组10只,通过对大鼠尾根部皮下注射灭活结核分支杆菌佐剂建立佐剂性关节炎大鼠模型,用人工气候箱进行风湿热痹证模型造模16 d,于免疫当天灌胃给药,持续28 d。进行大鼠一般情况观察及足趾肿胀度、关节炎指数(AI)检测,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠膝关节滑膜组织病理形态学改变,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠滑膜组织LC3,Beclin1,p62的mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)及免疫组化法分别检测大鼠滑膜组织LC3,Beclin1,p62的蛋白表达。结果:与正常组比较,风湿热痹模型组大鼠给药16,20,24,28 d时足趾肿胀度显著升高(P<0.01),AI显著升高(P<0.01),滑膜细胞增生显著,自噬蛋白LC3,Beclin1蛋白及mRNA表达显著上调(P<0.01),p62蛋白及mRNA表达显著下调(P<0.01);与风湿热痹模型组比较,各给药组大鼠足趾肿胀度减轻,滑膜增生情况有不同程度改善,LC3,Beclin1的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01),p62的mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),且当归拈痛汤中剂量组防治效果最佳。结论:当归拈痛汤对风湿热痹型佐剂性关节炎大鼠有明显的防治作用,且这种防治作用可能与调控滑膜组织中自噬相关因子LC3,Beclin1,p62的表达,抑制自噬有关。 展开更多
关键词 当归拈痛汤 风湿热痹 类风湿关节炎 微管相关蛋白1轻链3(LC3) 自噬关键分子酵母atg6同系物(Beclin1) P62 自噬
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基于mTOR/Beclin1/LC3信号轴探讨制萎扶胃丸对胃癌前病变大鼠胃窦组织自噬的影响 被引量:13
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作者 封壮壮 宋瑞平 +3 位作者 豆鹏程 陈心怡 左娇娇 舒劲 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2023年第4期361-370,共10页
目的:探讨制萎扶胃丸(ZWFW)对胃癌前病变(PLGC)大鼠胃窦组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1)/微管相关蛋白1轻链3(LC3)信号轴关键分子表达的影响。方法:SPF级SD大鼠随机分为正常组,模型组,叶酸组,ZWF... 目的:探讨制萎扶胃丸(ZWFW)对胃癌前病变(PLGC)大鼠胃窦组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1)/微管相关蛋白1轻链3(LC3)信号轴关键分子表达的影响。方法:SPF级SD大鼠随机分为正常组,模型组,叶酸组,ZWFW低、中、高剂量组,除正常组常规饲养外,模型组、叶酸组、ZWFW低、中、高剂量组,采用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)联合饥饱失常、乙醇灌胃、氨水自由饮用以及雷尼替丁饲料喂养五因素复合造模法建立PLGC大鼠模型后,分别用生理盐水、叶酸片水溶液(0.002 g/kg)、ZWFW低、中、高剂量水溶液(0.42,0.84,1.67 g/kg)予以治疗4周后剖腹取胃。采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠胃窦组织病理学变化,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)及免疫组化检测大鼠胃窦组织mTOR、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)的mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠胃窦组织胀大,胃壁变薄,胃黏膜色泽苍白,皱襞萎缩浅平,走行紊乱,可见结节及赘生物;HE染色示:与正常组比较,模型组胃黏膜腺体排列拥挤、紊乱,细胞形态不一,可见大量杯状细胞,细胞浆嗜碱性,细胞核大、深染、不规则,黏膜肌层浸润破坏;与模型组比较,ZWFW显著改善了胃黏膜腺体结构排列紊乱和细胞异型性等病理表现。与正常组比较,模型组大鼠胃窦组织m TOR mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05),Beclin1和LC3B mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,ZWFW中、高剂量组胃窦组织mTOR mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),ZWFW低剂量组胃窦组织Beclin1、LC3B蛋白表达升高(P<0.05),中、高剂量组胃窦组织Beclin1、LC3B mRNA和蛋白表达升高(P<0.05)。结论:ZWFW可显著改善PLGC模型大鼠胃黏膜异常组织病理学表现,其机制可能与下调mTOR表达,上调Beclin1、LC3B表达进而促进自噬相关。 展开更多
关键词 胃癌前病变 制萎扶胃丸 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) 自噬关键分子酵母atg6同系物(Beclin1) 微管相关蛋白1轻链3β(LC3B) 自噬
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益气活血法通过miR216b/Beclin1介导萎缩性胃炎癌前病变自噬的机制 被引量:6
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作者 赵唯含 周莹 +3 位作者 许雨晴 艾亚楠 文雯 穆恒 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期117-122,共6页
目的:通过观察益气活血法对萎缩性胃炎癌前病变(PLGC)模型小鼠微RNA216b(miR216b)/自噬关键分子酵母Atg6同系物1(Beclin1)信号通路的影响,探讨其干预PLGC的自噬作用机制。方法:将75只健康雄性SPF级昆明种小鼠随机分为空白组(12只)及造模... 目的:通过观察益气活血法对萎缩性胃炎癌前病变(PLGC)模型小鼠微RNA216b(miR216b)/自噬关键分子酵母Atg6同系物1(Beclin1)信号通路的影响,探讨其干预PLGC的自噬作用机制。方法:将75只健康雄性SPF级昆明种小鼠随机分为空白组(12只)及造模组(63只),造模组小鼠每日采用1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG)溶液(150 mg·L^(-1))自由饮用及灌胃,同时每日灌胃雷尼替丁溶液(0.03 g·kg^(-1)),造模12周。按照随机对照表将造模小鼠分为模型组、益气组(黄芪3.5 g·kg^(-1))、活血组(三七粉0.7 g·kg^(-1))、益气活血组(黄芪3.5 g·kg^(-1)+三七粉0.7 g·kg^(-1))及叶酸组(2 mg·kg^(-1))。予相应药物灌胃8周后取材,苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠胃黏膜病理改变,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胃组织微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组胃黏膜Beclin1及miR-216b的m RNA表达情况。结果:与空白组比较,病理学观察显示模型组胃黏膜固有腺体减少,出现萎缩伴肠上皮化生;与模型组比较,各治疗组均有改善,其中益气活血组改善最为明显。与空白组比较,模型组小鼠胃组织LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及Beclin1蛋白含量均明显降低(P<0.05)。与模型组比较,各治疗组胃组织LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及Beclin1蛋白含量均有升高(P<0.05,P<0.01),其中益气活血组升高最为明显。与空白组比较,模型组小鼠Beclin1 m NRA表达下降(P<0.05),miR216b m NRA表达上升(P<0.05)。与模型组比较,各治疗组小鼠Beclin1表达升高(P<0.05),miR216b表达下降(P<0.05),尤以益气活血组最为明显。结论:以黄芪、三七为代表的益气活血法治疗PLGC的作用机制可能为通过抑制miR216b的表达,激活Beclin1,从而促进自噬,发挥修复胃黏膜的作用。 展开更多
关键词 益气活血法 萎缩性胃炎癌前病变 微RNA216b(miR216b) 自噬关键分子酵母atg6同系物1(Beclin1) 黄芪 三七
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细胞自噬相关蛋白在大鼠脾脏撞击伤后12小时内脾组织中的表达 被引量:1
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作者 欧阳骏骏 牛玉林 《中国临床研究》 CAS 2019年第1期18-22,共5页
目的观察自噬基因相关蛋白在大鼠脾脏撞击伤后12 h内脾组织内的表达情况。方法选用清洁级健康SD大鼠20只,随机分为正常对照组(A组)、创伤后2 h组(B组)、创伤后8 h组(C组)、创伤后12 h组(D组),每组5只。B、C、D组利用生物撞击机建立脾脏... 目的观察自噬基因相关蛋白在大鼠脾脏撞击伤后12 h内脾组织内的表达情况。方法选用清洁级健康SD大鼠20只,随机分为正常对照组(A组)、创伤后2 h组(B组)、创伤后8 h组(C组)、创伤后12 h组(D组),每组5只。B、C、D组利用生物撞击机建立脾脏撞击伤模型,A组只麻醉不撞击,麻醉后立即处死取出脾脏,B、C、D组分别于撞击后相应时间取出脾脏,评估脾脏出现损伤的程度。创伤脾组织标本进行HE染色,显微镜下观察受损脾组织的特征。大体标本观察造模是否成功。采用免疫组织化学法及Western blot法检测各组脾组织酵母自噬相关基因Atg6的同源物(Beclin1)、酵母自噬相关基因Atg8的同源物微管相关蛋白1轻链蛋白3(LC3)蛋白的表达。结果 (1)脾撞击伤模型均造模成功。同一撞击力度下不同受伤时间模型组大鼠脾脏裂伤长度和深度基本一致(P均> 0. 05)。(2) HE染色显示模型组脾组织符合脾破裂征象。(3)免疫组织化学法及Western blot法检测显示,模型大鼠随创伤后时间推移(2 h组→8 h组→12 h组),其脾组织Beclin1、LC3Ⅱ蛋白相对表达量递升(P均<0. 05),且模型大鼠各时间组均高于对照组(P均<0. 05)。结论脾脏撞击伤可导致脾组织自噬水平的上升;脾脏撞击伤后12 h内脾组织自噬相关蛋白水平随时间的推移,表达逐渐升高。 展开更多
关键词 脾脏撞击伤 自噬 酵母自噬相关基因atg6的同源物 酵母自噬相关基因Atg8的同源物微管相关蛋白1轻链蛋白3
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自噬及凋亡因子在慢性氟中毒大鼠肝脏中表达 被引量:4
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作者 徐淋 于燕妮 +2 位作者 陈荣 邓超男 向程窈 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1168-1171,共4页
目的探讨自噬相关因子LC3A、Beclin-1及凋亡因子Bcl-2、Bax在慢性氟中毒大鼠肝脏中的表达意义。方法将36只健康SD大鼠按体重随机分为对照组、低氟组、高氟组,分别用含氟量<1 mg/L的自来水和含氟5、50 mg/L的含氟水饲养6个月,观察氟... 目的探讨自噬相关因子LC3A、Beclin-1及凋亡因子Bcl-2、Bax在慢性氟中毒大鼠肝脏中的表达意义。方法将36只健康SD大鼠按体重随机分为对照组、低氟组、高氟组,分别用含氟量<1 mg/L的自来水和含氟5、50 mg/L的含氟水饲养6个月,观察氟斑牙形成情况;测定尿氟、骨氟含量以及大鼠肝功能;苏木素-伊红染色观察肝脏病理形态学改变;免疫组织化学法检测大鼠肝组织中微管相关蛋白轻链3A(LC3A)、哺乳动物ATG6同源蛋白(Beclin-1)及B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白细胞基因伴随蛋白x(Bax)的蛋白表达水平。结果与对照组比较,低、高氟组大鼠尿氟含量分别为[(2.18±0.14)、(2.40±0.19)mg/L]、骨氟含量分别为[(237.42±18.48)、(248.00±14.72)mg/kg]均明显升高(P<0.05);染氟组大鼠肝脏肝细胞索排列紊乱,肝细胞肿大,部分肝细胞胞质透亮,呈空泡样改变;与对照组比较,染氟组大鼠血清中谷丙转氨酶活性及谷草转氨酶活性明显升高(P<0.05);低、高氟组大鼠肝脏LC3A[(35.35±2.71)、(44.10±6.72)]、Beclin-1[(57.56±12.1)、(74.76±18.67)]及Bax[(51.1±9.23)、(62.32±10.3)]蛋白表达明显高于对照组,Bcl-2蛋白表达分别为[(55.18±8.36)、(39.05±6.91)]明显低于对照组(P<0.05)。结论过量氟可激活大鼠肝组织中自噬和凋亡因子,自噬和凋亡可能共同参与慢性氟中毒所致肝脏损伤的发病过程。 展开更多
关键词 微管相关蛋白轻链3(LC3A)、哺乳动物atg6同源蛋白(Beclin-1) B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白细胞基因伴随蛋白x(Bax) 氟中毒 肝脏
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