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ATG16基因缺陷Vero细胞系的建立及其抗小反刍兽疫病毒功能分析
1
作者 赵庆露 陈红梅 +5 位作者 韦定呈 朱学亮 王炫杰 胡占颖 李瑞哲 张瑞 《中国畜牧兽医》 北大核心 2026年第4期2112-2120,共9页
【目的】利用CRISPR/Cas9技术构建自噬相关基因ATG16敲除的Vero细胞,并探究ATG16基因敲除对小反刍兽疫病毒(PPRV)复制的影响,为深入了解ATG16在抗病毒天然免疫中的作用机制及开发新的PPRV防控策略提供基因资源和理论依据。【方法】使用... 【目的】利用CRISPR/Cas9技术构建自噬相关基因ATG16敲除的Vero细胞,并探究ATG16基因敲除对小反刍兽疫病毒(PPRV)复制的影响,为深入了解ATG16在抗病毒天然免疫中的作用机制及开发新的PPRV防控策略提供基因资源和理论依据。【方法】使用在线工具(红棉系统)设计ATG16基因gRNAs。将gRNA克隆到CRISPR-U~(TM)表达载体,构建ATG16基因敲除载体。采用电转法将ATG16基因敲除载体转入Vero细胞。使用5μg/mL嘌呤霉素筛选阳性克隆。通过靶位点扩增及测序验证筛选出成功敲除ATG16基因的阳性克隆。通过Western blotting检测基因敲除细胞中ATG16的表达情况。利用半数组织培养感染剂量(TCID_(50))、实时荧光定量PCR及Western blotting检测ATG16基因敲除后PPRV复制的变化情况。利用Western blotting检测敲除ATG16基因对细胞自噬的影响。【结果】PCR结果显示,筛选的阳性克隆靶位点无扩增片段。测序结果显示,靶标区域被删除61 bp,表明成功构建ATG16基因敲除的Vero细胞株。Western blotting结果表明,与野生型Vero细胞相比,敲除细胞中没有ATG16蛋白表达。Western blotting、TCID_(50)和实时荧光定量PCR结果显示,与野生型Vero细胞相比,ATG16基因敲除细胞中PPRV N基因相对表达水平显著下调(P<0.05),PPRV N蛋白表达被抑制,PPRV滴度显著降低(P<0.05)。Western blotting结果显示,PPRV感染ATG16敲除细胞不能诱导微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ(LC3-Ⅱ)的形成。【结论】本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了ATG16基因敲除的Vero细胞,并发现敲除ATG16基因可抑制PPRV在Vero细胞中复制和诱导细胞自噬的能力,为深入探索ATG16调控PPRV复制的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 atg16基因 小反刍兽疫病毒(PPRV) VERO细胞 病毒复制 自噬
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民用飞机5G ATG空地通信系统设计与实现
2
作者 郝春生 付昕 +1 位作者 唐泽娴 姚夏阳 《民用飞机设计与研究》 2026年第1期63-75,共13页
ATG(air to ground)技术缘起于3G通信技术。随着5G技术的发展,中国的5G ATG技术日渐成熟。5G ATG即基于5G网络的空地通信系统。为验证5G ATG技术,通过功能危险性评估(function hazard assessment,FHA)对5G ATG功能进行功能危害度评估,... ATG(air to ground)技术缘起于3G通信技术。随着5G技术的发展,中国的5G ATG技术日渐成熟。5G ATG即基于5G网络的空地通信系统。为验证5G ATG技术,通过功能危险性评估(function hazard assessment,FHA)对5G ATG功能进行功能危害度评估,并对设备加改装的安全性和网络安保影响进行深入分析,分析结果表明,ATG功能和设备加改装相关影响“可接受”,可以实施设备加改装。随后在某90座级单通道飞机上进行相关改装,通过试飞试验对5G ATG技术进行验证。试飞期间,对起飞、降落以及巡航阶段的站间切换三个符合实际运行场景的试验点进行测试,并对测试结果进行详细分析,验证了5G ATG空地通信系统的自动判断逻辑的有效性,对巡航阶段的性能(延时、丢包率以及上下行速率)进行测试,结果表明能够满足设计指标。 展开更多
关键词 5G atg 功能危害性评估 飞行测试 自动判断逻辑
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基于miR-30a/ATG5轴探讨lncRNA MIAT在慢性阻塞性肺疾病大鼠气道重塑中的作用
3
作者 亚克亚江·吐尔逊 阿尔孜古力·艾尔肯 阿曼古丽 《中国医药导报》 2026年第8期64-69,77,共7页
目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)心肌梗死相关转录本(MIAT)调控miR-30a/ATG5轴对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道重塑的机制。方法2月龄SPF级Wistar大鼠48只按照随机数字表法将其分为对照组、模型组、si-NC组、si-MIAT组、si-MIAT+miR-N... 目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)心肌梗死相关转录本(MIAT)调控miR-30a/ATG5轴对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道重塑的机制。方法2月龄SPF级Wistar大鼠48只按照随机数字表法将其分为对照组、模型组、si-NC组、si-MIAT组、si-MIAT+miR-NC组及si-MIAT+miR-inhibitor组,每组8只。除对照组外,其他各组构建COPD模型。造模成功后,si-NC组尾静脉注射si-NC慢病毒,si-MIAT组尾静脉注射si-MIAT慢病毒,siMIAT+miR-NC组尾静脉同时注射si-MIAT慢病毒和miR-NC慢病毒,si-MIAT+miR-inhibitor组尾静脉同时注射si-MIAT慢病毒和miR-30a inhibitor慢病毒,对照组及模型组尾静脉注射生理盐水,剂量为1 mg/kg,1次/d,连续2周。使用小动物肺呼吸功能测定仪测定大鼠肺功能指标[用力肺活量(FVC)、用力呼气量(FEV)、动态肺顺应性(Cdyn)和气道阻力(RI)];qRT-PCR检测肺组织lncRNA MIAT和miR-30a表达;Western blot法检测肺组织ATG5蛋白表达;HE染色观察肺组织病理情况同时计算气管平滑肌厚度;酶联免疫吸附试验法检测肺泡灌洗液白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和基质蛋白酶9(MMP-9)水平;采用乙酰甲胆碱(Mch)激发试验检测气道反应性。结果与对照组比较,模型组FVC、FEV、Cdyn降低,RI及吸入6.25、12.50、25.00 g/L Mch时增强呼气间歇(Penh)值升高(P<0.01)。与si-NC组比较,si-MIAT组FVC、FEV、Cdyn降低,RI及吸入6.25、12.50、25.00 g/L Mch时Penh值升高(P<0.01)。与si-MIAT+miR-NC组比较,si-MIAT+miR-inhibitor组FVC、FEV、Cdyn升高,RI及吸入6.25、12.50、25.00 g/L Mch时Penh值降低(P<0.01)。模型组lncRNA MIAT及ATG5蛋白表达升高,miR-30a表达降低(P<0.01)。与si-NC组比较,si-MIAT组lncRNA MIAT及ATG5蛋白表达降低,miR-30a表达升高(P<0.01)。与si-MIAT+miR-NC组比较,si-MIAT+miR-inhibitor组lncRNA MIAT及ATG5蛋白表达升高,miR-30a降低(P<0.01)。对照组肺组织小气管黏膜上皮无破损,无炎症细胞浸润,管腔没有渗出物;模型组和siMIAT+miR-inhibitor组肺组织肺泡腔内有炎症细胞浸润,以巨噬细胞为主;si-MIAT组炎症细胞浸润减少。与对照组比较,模型组气管平滑肌厚度及IL-6、MMP-9和TNF-α水平增加(P<0.01)。与si-NC组比较,si-MIAT组气管平滑肌厚度及IL-6、MMP-9和TNF-α水平降低(P<0.01)。与si-MIAT+miR-NC组比较,si-MIAT+miRinhibitor组气管平滑肌厚度及IL-6、MMP-9和TNF-α水平增加(P<0.01)。结论lncRNA MIAT可通过调控miR-30a/ATG5轴功能,进而影响COPD气道重塑的发生。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 气道重塑 长链非编码RNA 心肌梗死相关转录本 miR-30a atg5
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低危与高危型HPV感染患者宫颈KRT17和ATG12的表达及对病情进展的影响
4
作者 郭艳蒲 牛会坤 许静 《河北医学》 2026年第1期137-144,共8页
目的:分析低危型、高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染患者宫颈局部组织角蛋白17(KRT17)、自噬相关蛋白-12(ATG12)表达及对病情进展的影响。方法:选取2020年12月至2022年12月期间确诊宫颈低度鳞状上皮内病变(LSIL)患者203例,低危型HPV感染83例... 目的:分析低危型、高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染患者宫颈局部组织角蛋白17(KRT17)、自噬相关蛋白-12(ATG12)表达及对病情进展的影响。方法:选取2020年12月至2022年12月期间确诊宫颈低度鳞状上皮内病变(LSIL)患者203例,低危型HPV感染83例,高危型HPV感染120例。所有病例随访2年,根据2年内病情进展情况分为进展组、未进展组。于初次确诊时采集宫颈刷取组织标本,采用实时荧光定量PCR法检测KRT17 mRNA与ATG12 mRNA表达。比较低危型、高危型HPV感染患者KRT17 mRNA、ATG12 mRNA水平,采用点二列相关性分析KRT17 mRNA、ATG12 mRNA水平与HPV感染类型的相关性;比较进展组与未进展组临床资料、KRT17 mRNA、ATG12 mRNA水平,采用多因素非条件Logistic回归分析不同HPV状态下LSIL患者病情进展的影响因素;采用logistic(OR)分析高危HPV感染患者中KRT17 mRNA、ATG12 mRNA对LSIL病情进展的影响是否存在相加交互作用及其统计学作用类型;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析KRT17 mRNA、ATG12 mRNA及联合预测LSIL病情进展的效能。结果:高危型HPV感染组KRT17 mRNA表达量显著高于低危型组(1.35±0.42 vs 0.61±0.20,t=-20.666,P<0.001),ATG12 mRNA表达量显著降低(0.48±0.12 vs 0.80±0.24,t=11.911,P<0.001);点二列相关性分析显示,KRT17 mRNA与HPV感染类型呈正相关(r=0.862,P<0.001),ATG12 mRNA与HPV感染类型呈负相关(r=-0.799,P<0.001);进展组性伴侣人数>1人患者占比、经常服用避孕药患者占比、高危型HPV感染患者占比,KRT17 mRNA、ATG12 mRNA分别为15.38%、23.08%、97.44%、(1.35±0.30)、(0.33±0.11),与未进展组的3.05%、4.27%、27.44%、(0.98±0.31)、(0.68±0.22)比较差异有统计学意义(t/χ^(2)=9.580、12.870、61.008、6.740、-9.640,P=0.008、<0.001、<0.001、<0.001、<0.001);多因素非条件Logistic回归分析显示,校正了性伴侣人数、经常服用避孕药后,KRT17 mRNA、ATG12 mRNA是全部LSIL患者病情进展的独立相关影响因素,两者每升高1个单位,可分别将LSIL患者病情进展的风险提高1.404、0.517倍(P<0.05);按照HPV感染分型分层后,KRT17 mRNA、ATG12 mRNA仍是高危HPV感染LSIL患者病情进展的独立相关影响因素(P<0.05),但在低危型HPV感染患者中,KRT17 mRNA、ATG12 mRNA与LSIL患者病情进展无关(P>0.05);交互作用分析显示,校正了性伴侣人数、经常服用避孕药后,S=1.874,RERI=1.594,AP=0.361,提示KRT17 mRNA、ATG12 mRNA对病情进展的影响具有统计学上的相加协同交互作用;ROC分析显示,联合的AUC显著大于KRT17 mRNA、ATG12 mRNA(P<0.05)。结论:KRT17高表达与ATG12低表达协同促进高危型HPV感染LSIL的病情进展,联合检测二者可作为有效的风险预警工具,为LSIL的精准管理和干预提供新依据。 展开更多
关键词 高危型人乳头瘤病毒 KRT17 mRNA atg12 mRNA 宫颈低度鳞状上皮内病变
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罗氏沼虾ATG5的鉴定及其抗菌免疫功能 被引量：1
5
作者 刘洋 赵飞 +9 位作者 文菁 王玲 廖永众 邓玉婷 谭爱萍 巩华 赖迎迢 黄志斌 邵蓬 王飞飞 《广东海洋大学学报》 北大核心 2025年第1期1-11,共11页
【目的】研究罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)中自噬相关基因(ATG)的免疫功能及其在抗菌免疫中的分子调节机制。【方法】从罗氏沼虾中克隆并鉴定罗氏沼虾自噬相关基因5(MrATG5),使用生物信息学方法分析MrATG5的结构特征和理化性质... 【目的】研究罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)中自噬相关基因(ATG)的免疫功能及其在抗菌免疫中的分子调节机制。【方法】从罗氏沼虾中克隆并鉴定罗氏沼虾自噬相关基因5(MrATG5),使用生物信息学方法分析MrATG5的结构特征和理化性质,采用荧光定量PCR检测MrATG5在罗氏沼虾健康组织以及受到嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)和脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)免疫刺激后在肝胰腺和鳃组织中的表达量,利用免疫细胞化学方法检测MrATG5蛋白在HEK 293T细胞中的亚细胞定位,通过RNA干扰技术、细菌结合和抑菌活性实验分析MrATG5的免疫功能。【结果】生物信息学分析显示,MrATG5开放阅读框(ORF)为807 bp,预测编码268个氨基酸,预测蛋白分子质量为31.04 ku,等电点为5.68,含有一个典型的自噬蛋白5(Autophagy protein 5,APG5)结构域。序列同源性分析及构建的系统进化树显示,MrATG5与日本沼虾(Macrobrachium nipponense)ATG5同源性最高,相似性为97.76%,MrATG5与甲壳类动物聚为一支,说明ATG5蛋白在甲壳类动物中进化相对保守。qRT-PCR结果显示,MrATG5在罗氏沼虾各组织中广泛表达,在肝胰腺中表达量最高(P<0.05)。MrATG5主要分布在HEK 293T细胞的细胞质中。经嗜水气单胞菌和LPS免疫刺激后,MrATG5在肝胰腺和鳃组织中的表达量均显著升高(P<0.05),表明MrATG5在罗氏沼虾抗菌免疫中发挥重要作用。经RNA干扰及嗜水气单胞菌刺激后,MrATG5可通过调控自噬参与罗氏沼虾抗菌免疫。细菌结合和抑菌活性实验发现,MrATG5原核重组表达活性蛋白可与嗜水气单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和海豚链球菌(Streptococcus iniae)产生结合反应,并可抑制嗜水气单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌的生长。【结论】MrATG5可通过调控自噬和抑制病原菌增殖提升罗氏沼虾的抗菌免疫力。 展开更多
关键词 罗氏沼虾 自噬相关基因5(atg5) 嗜水气单胞菌 原核表达 抗菌免疫
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乳腺癌患者中miR-181a与ATG5表达的临床意义及其对MCF-7细胞系自噬的调控作用 被引量：1
6
作者 刘婷婷 张志生 +1 位作者 刘进宇 孔令霞 《西部医学》 2025年第1期33-38,共6页
目的探讨miR-181a与ATG5在乳腺癌患者中的表达情况,深入研究其对MCF-7乳腺癌细胞系自噬的调控作用,以揭示其在乳腺癌发展中的临床意义和潜在机制。方法选取2021年6月—2022年9月本院收治的120例乳腺癌患者作为疾病组,以及55名健康体检... 目的探讨miR-181a与ATG5在乳腺癌患者中的表达情况,深入研究其对MCF-7乳腺癌细胞系自噬的调控作用,以揭示其在乳腺癌发展中的临床意义和潜在机制。方法选取2021年6月—2022年9月本院收治的120例乳腺癌患者作为疾病组,以及55名健康体检者作为正常对照组。使用qPCR检测血清和组织中miR-181a和ATG5的表达。CCK-8检测了MCF-7细胞增殖能力的变化,Western blot检测MCF-7细胞自噬和凋亡相关蛋白的表达。流式细胞术检测MCF-7细胞各组凋亡率。结果乳腺癌患者血清和组织中miR-181a的表达显著增加,而ATG5表达显著降低(P<0.01)。miR-181a的表达与乳腺癌的淋巴结转移、TNM分期和肿瘤分化程度密切相关(P<0.01)。抑制miR-181a表达可以显著降低MCF-7细胞的增殖能力,促进自噬相关蛋白ATG5、LC3B和Beclin-1的表达,促进凋亡BAX/BCL-2蛋白比值的表达。结论miR-181a的上调与乳腺癌的临床特征相关,可能作为潜在的标志物用于病情评估。此外miR-181a可能通过调节自噬和凋亡来影响乳腺癌细胞的增殖和存活,有望为乳腺癌的诊断和治疗提供新的研究方向和临床应用前景。 展开更多
关键词 乳腺癌 atg5 自噬 凋亡 MiR-181a
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Wolbachia感染下松毛虫赤眼蜂Atg8基因表达特征
7
作者 董晴 马跃 +4 位作者 胡杰 周金成 车午男 董辉 张欢欢 《植物保护》 北大核心 2025年第2期202-207,224,共7页
细胞内共生菌Wolbachia可诱导卵寄生蜂赤眼蜂发生孤雌产雌生殖现象。细胞自噬是细胞维持自身稳态和抵御病原物的重要机制,是影响Wolbachia感染和增殖的重要因子。其中,ATG8/LC-3蛋白是细胞自噬的重要指示蛋白。本研究克隆了松毛虫赤眼蜂... 细胞内共生菌Wolbachia可诱导卵寄生蜂赤眼蜂发生孤雌产雌生殖现象。细胞自噬是细胞维持自身稳态和抵御病原物的重要机制,是影响Wolbachia感染和增殖的重要因子。其中,ATG8/LC-3蛋白是细胞自噬的重要指示蛋白。本研究克隆了松毛虫赤眼蜂Trichogramma dendrolimi细胞自噬关键基因TdeAtg8,该基因编码的TdeATG8蛋白包含130个氨基酸,具有ATG8蛋白家族保守结构域,相对分子质量为15.25 kD,理论等电点为9.432。检测不同发育阶段松毛虫赤眼蜂Wolbachia感染品系和未感染品系的TdeAtg8转录水平发现,与未感染品系相比,感染品系的TdeAtg8转录水平在蛹期和成虫期显著上调,在预蛹期显著下调;两种品系的TdeAtg8转录水平在卵期和幼虫期无显著差异。研究结果将为进一步揭示Wolbachia与宿主细胞自噬反应的相互作用机理奠定基础。 展开更多
关键词 WOLBACHIA 细胞自噬 松毛虫赤眼蜂 生物防治 atg8
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敲除ATG5基因Vero-SN细胞系的建立
8
作者 刘迪一 陈炳春 +4 位作者 杨雪 王会宝 殷相平 任善会 窦永喜 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第12期1599-1607,共9页
为探讨病毒如何利用宿主细胞自噬机制进行复制和传播提供研究模型,本研究利用CRISPR/Cas9系统构建ATG5基因敲除细胞系。首先针对非洲绿猴肾细胞(Vero)的ATG5基因设计靶向sgRNA序列,并将其连接到慢病毒载体中,包装得到重组慢病毒,用其感... 为探讨病毒如何利用宿主细胞自噬机制进行复制和传播提供研究模型,本研究利用CRISPR/Cas9系统构建ATG5基因敲除细胞系。首先针对非洲绿猴肾细胞(Vero)的ATG5基因设计靶向sgRNA序列,并将其连接到慢病毒载体中,包装得到重组慢病毒,用其感染Vero-SN细胞,经过筛选得到ATG5基因敲除的亚克隆细胞系。利用TCID_(50)和Western-blot技术检测小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)分别在Vero-SN细胞和ATG5基因敲除细胞系中的复制能力。结果表明,本研究成功建立了VeroSN-ATG5KO细胞系,且抑制细胞自噬不利于病毒复制。该基因敲除细胞系的建立为后续探究病毒与自噬蛋白的相互作用及分子机制提供了试验材料。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 Vero-SN细胞系 atg5基因 自噬 基因敲除
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大黄鱼(Larimichthys crocea)自噬相关基因ATG1的序列特征及低温胁迫下的组织表达差异
9
作者 王琳 李伟业 +4 位作者 殷小龙 徐羡 王新安 马爱军 赵亭亭 《海洋与湖沼》 北大核心 2025年第4期976-988,共13页
为探究自噬相关基因(autophagy-related gene,ATG)ATG1在大黄鱼(Larimichthys crocea)低温胁迫下不同组织的响应特征,对获得的大黄鱼ATG1基因序列进行生物特征分析,并采用qRT-PCR方法测定大黄鱼[(55.97±11.86)g]在不同温度梯度变化... 为探究自噬相关基因(autophagy-related gene,ATG)ATG1在大黄鱼(Larimichthys crocea)低温胁迫下不同组织的响应特征,对获得的大黄鱼ATG1基因序列进行生物特征分析,并采用qRT-PCR方法测定大黄鱼[(55.97±11.86)g]在不同温度梯度变化(18、16、14、12、10、8℃)处理下的脑(B)、鳃(G)、头肾(HK)、肾脏(K)、心脏(H)、脾脏(SP)、肝脏(L)、肠(I)、肌肉(M)、皮肤(SK)10个组织的表达水平。结果显示:(1)大黄鱼ATG1基因的CDS序列全长2715 bp,编码904个氨基酸,该基因编码的蛋白相对分子量为99.43 kDa,预测等电点(pI)为8.47;大黄鱼ATG1蛋白亚细胞定位显示可能是细胞核蛋白;信号肽预测显示,无信号肽和跨膜结构;潜在互作蛋白有BECN1、ATG13、repto、mTOR、mlst18、ATG101、st18、ATG14、ATG2a、ATG2B 10种;蛋白序列同源性比对显示大黄鱼ATG1蛋白在进化中具有高度的保守性;系统进化树分析显示,大黄鱼ATG1与条纹狼鲈ATG1亲缘关系最近。(2)ATG1基因在大黄鱼遭受低温胁迫时组织响应呈现差异化,并且随着低温胁迫的增加组织响应呈现时序性。低温胁迫时,随着温度下降,机体代谢成本提高,大黄鱼通过启动自噬过程可能以肝脏-肌肉-肝脏-心脏的顺序调控能量代谢,为细胞提供燃料,维持能量稳态;以脾脏-头肾(肠)-头肾(脾脏)-皮肤的顺序调控免疫系统,降低氧化应激和提高免疫防御能力,这两条途径相互协作共同发挥作用抵抗低温损伤。研究将为探究自噬机制在大黄鱼逆境胁迫中的积极作用提供理论参考,并为大黄鱼耐低温优良性状选育提供基础数据。 展开更多
关键词 大黄鱼 低温胁迫 自噬相关基因atg1 序列特征 组织表达
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左金丸水提取液提高ATG4B含量促进自噬抑制三阴性乳腺癌进展
10
作者 朱会宇 刘雅琳 +3 位作者 王思嘉 刘馨慧 黄华 管翼飞 《北京工业大学学报》 北大核心 2025年第8期995-1003,共9页
为研究中药左金丸水提取液对乳腺癌进展的影响,选用正常乳腺上皮细胞(MCF10A)、乳腺癌细胞(MCF7)、三阴性乳腺癌细胞(MB231)进行体外细胞实验研究。通过肿瘤细胞表型分析,证实左金丸对三阴性乳腺癌发展有显著抑制作用,可显著抑制其增殖... 为研究中药左金丸水提取液对乳腺癌进展的影响,选用正常乳腺上皮细胞(MCF10A)、乳腺癌细胞(MCF7)、三阴性乳腺癌细胞(MB231)进行体外细胞实验研究。通过肿瘤细胞表型分析,证实左金丸对三阴性乳腺癌发展有显著抑制作用,可显著抑制其增殖能力、迁移能力、侵袭能力及克隆形成能力。同时,其对正常乳腺细胞无显著性影响。进一步通过蛋白筛选分析,发现左金丸可显著性提高MB231 ATG4B蛋白水平,并显著性促进细胞自噬进程。通过药物诱导体外实验,确认了激活自噬进程可显著抑制MB231的肿瘤表型。此外,采用CRISPR/Cas9技术建立ATG4B敲除的MB231细胞株,将左金丸水提取液暴露该模型细胞后,发现左金丸对三阴性乳腺癌的抑制作用及对胞内自噬的调控能力均显著性减弱。结果表明:ATG4B蛋白是左金丸在三阴性乳腺癌MB231中的高特异性靶点,左金丸水提取液可显著提高ATG4B的表达,进而促进细胞自噬进程,抑制三阴性乳腺癌进展。 展开更多
关键词 左金丸 三阴性乳腺癌 atg4B 自噬 肿瘤 侵袭
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ATG5通过调控自噬流对抗人肝母细胞瘤HepG2细胞的营养应激
11
作者 赵莲 向冬云 +2 位作者 吴惠仪 孙昊 邓敬桓 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第13期1454-1462,共9页
目的探究营养缺乏对人肝母细胞瘤HepG2细胞自噬流的影响及ATG5介导的对抗营养应激的自噬依赖性分子途径。方法将慢病毒转染到HepG2细胞,敲降ATG5基因的表达,通过Western blot和qRT-PCR双向验证转染情况,使用HBSS盐缓冲液饥饿诱导处于对... 目的探究营养缺乏对人肝母细胞瘤HepG2细胞自噬流的影响及ATG5介导的对抗营养应激的自噬依赖性分子途径。方法将慢病毒转染到HepG2细胞,敲降ATG5基因的表达,通过Western blot和qRT-PCR双向验证转染情况,使用HBSS盐缓冲液饥饿诱导处于对数生长的人肝癌细胞HepG2细胞0、1、2、3、4、5、6、7 h后,采用单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)荧光染色法检测细胞内自噬小体的形成;运用Western blot分析微管相关蛋白1A/1B-轻链3(microtubule-associated protein 1A/1B-light chain 3,LC3)、自噬受体蛋白(sequestosome 1,P62)、自噬相关基因5(autophagy-related gene 5,ATG5)和营养应激通路(AMPK/mTOR通路)的表达变化;用CCK-8检测细胞的增殖活性。结果与常规培养比较,饥饿处理HepG2细胞后,胞内MDC荧光颗粒数显著增加,饥饿6 h达峰值(P<0.0001),LC3B-Ⅱ、ATG5蛋白表达上升(P<0.05),P62蛋白表达下降(P<0.05),AMPK/mTOR通路随着饥饿时间增加逐渐被激活,自噬流强度增大;饥饿处理敲降ATG5的HepG2细胞,ATG5的表达降低(P<0.05),LC3B-Ⅱ与P62的变化无显著差异,自噬流强度受抑制,细胞增殖活性降低(P<0.0001)。结论人肝母细胞瘤HepG2细胞可以通过诱导ATG5表达调控自噬流对抗营养应激。 展开更多
关键词 肝母细胞瘤 营养应激 自噬流 atg5
原文传递
ATG7、Beclin1在HBV相关肝细胞癌患者血清中的表达及临床意义
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作者 蒋建强 王红雷 陈艳军 《实用癌症杂志》 2025年第10期1567-1572,共6页
目的 探讨ATG7、Beclin1在HBV相关肝细胞癌患者血清中的表达及临床意义。方法 筛选HBV相关肝细胞癌患者72例作为病例组及同期收治的HBV相关良性肝病患者30例作为良性组,选取体检健康的志愿者30名作为对照组,采用ELISA法检测3组血清ATG7... 目的 探讨ATG7、Beclin1在HBV相关肝细胞癌患者血清中的表达及临床意义。方法 筛选HBV相关肝细胞癌患者72例作为病例组及同期收治的HBV相关良性肝病患者30例作为良性组,选取体检健康的志愿者30名作为对照组,采用ELISA法检测3组血清ATG7、Beclin1,单因素及多因素分析HBV相关肝细胞癌发生因素,Pearson相关性分析血清ATG7、Beclin1与HBV-DNA载量的关系,ROC曲线分析血清ATG7、Beclin1表达对HBV相关肝细胞癌的诊断价值。结果 3组血清ATG7、Beclin1水平差异有统计学意义(P<0.05),其中病例组血清ATG7、Beclin1水平低于良性组、对照组(P<0.05),良性组血清ATG7、Beclin1水平低于对照组(P<0.05)。病例组HBV-DNA载量高于良性组(P<0.05);病例组不同分期患者血清ATG7、Beclin1、HBV-DNA载量差异有统计学意义(P<0.05),其中Ⅳ期患者血清ATG7、Beclin1水平最低,HBV-DNA载量最高,其次为Ⅲ期、Ⅱ期,Ⅰ期血清ATG7、Beclin1水平最高,HBV-DNA载量最低。Pearson相关性分析显示,血清ATG7、Beclin1均与HBV-DNA载量呈负相关(γ=-0.459,P<0.001;γ=-0.432,P<0.001)。病例组中有糖尿病史、饮酒史、ATG7表达≤4.02 ng/ml、Beclin1表达≤2.05 ng/ml、HBV-DNA载量>144×10^(5)拷贝/ml的患者占比均高于良性组(P<0.05),2组性别、年龄差异无统计学意义(P>0.05);多因素分析结果显示糖尿病、饮酒、ATG7表达≤4.02 ng/ml、Beclin1表达≤2.05 ng/ml、HBV-DNA载量>144×10^(5)拷贝/ml均为发生HBV相关肝细胞癌的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示:与单一指标比较,血清ATG7、Beclin1联合诊断效能更高,AUC为0.803,灵敏度为0.972,特异度为0.567,P<0.001。结论 ATG7和Beclin1在HBV相关肝细胞癌患者血清中的低表达与疾病进展和HBV-DNA载量呈负相关,可作为潜在的生物标志物,为HBV相关肝细胞癌的早期诊断和预后评估提供新的思路,且联合检测血清ATG7和Beclin1能够提高对HBV相关肝细胞癌的诊断效能。 展开更多
关键词 肝细胞癌 乙型肝炎病毒 atg7 BECLIN1
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miR-130a-3p靶向ATG2B调控顺铂耐药小细胞肺癌自噬
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作者 米克日阿依·艾合买提 阿丽亚·奥斯曼 +1 位作者 刘俊远 帕提古力·阿尔西丁 《中国癌症防治杂志》 2025年第6期722-729,共8页
目的 探讨miR-130a-3p在小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)铂类耐药中的作用及其分子机制。方法 采用浓度递增法构建顺铂耐药SCLC细胞株(H446/EP),顺转法对SCLC细胞进行miR-130a-3p mimics干预。通过CCK-8法评估细胞增殖活力,流... 目的 探讨miR-130a-3p在小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)铂类耐药中的作用及其分子机制。方法 采用浓度递增法构建顺铂耐药SCLC细胞株(H446/EP),顺转法对SCLC细胞进行miR-130a-3p mimics干预。通过CCK-8法评估细胞增殖活力,流式细胞术分析细胞凋亡率和细胞周期分布。采用TargetScan、TarBase及miRWalk数据库进行生物信息学分析,预测miR-130a-3p与ATG2B的靶向关系。qRT-PCR检测miR-130a-3p及ATG2B mRNA的表达水平,Western blot检测ATG2B、LC3B、p62、Beclin1等自噬相关蛋白表达,免疫荧光定量法检测LC3B和p62蛋白的荧光强度,以评估细胞的自噬活性。结果 H446/EP耐药指数为6.465,且miR-130a-3p的表达显著低于敏感亲本株,恢复miR-130a-3p表达可有效抑制耐药细胞增殖、促进其凋亡(均P<0.05)。生物信息学预测显示ATG2B为miR-130a-3p的高置信度靶基因。过表达miR-130a-3p可抑制自噬基因ATG2B的表达,进而下调LC3B-II/LC3B-I比值和Beclin1水平(均P<0.05),同时上调p62水平(P<0.05)。结论 miR-130a-3p通过调控ATG2B表达,介导SCLC细胞对顺铂的耐药性,增强miR-130a-3p的表达或可为克服SCLC铂类耐药提供新策略。 展开更多
关键词 小细胞肺癌 miR-130a atg2B 顺铂 耐药
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α2-珠蛋白基因起始密码子ATG>GTG复合东南亚缺失突变导致Hb H病的研究
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作者 柳晓碧 肖璇 +1 位作者 朱恒莹 陈萍 《广西医科大学学报》 2025年第3期415-419,共5页
目的:探讨罕见α2-珠蛋白基因突变复合东南亚缺失型α-地中海贫血基因突变导致的血红蛋白H病(Hb H病)。方法:对2024年1~12月于广西医科大学第一附属医院筛查出的Hb H病疑似病例,使用荧光PCR熔解曲线分析(FCMA)法、跨越断裂点聚合酶链式... 目的:探讨罕见α2-珠蛋白基因突变复合东南亚缺失型α-地中海贫血基因突变导致的血红蛋白H病(Hb H病)。方法:对2024年1~12月于广西医科大学第一附属医院筛查出的Hb H病疑似病例,使用荧光PCR熔解曲线分析(FCMA)法、跨越断裂点聚合酶链式反应(Gap-PCR)法检测常见的非缺失型和缺失型α-地中海贫血基因突变类型,应用DNA测序法检测罕见基因突变类型。结果:在239例Hb H病病例研究样本中检测出2例基因型为--SEA/αATG>GTGα的罕见突变Hb H病病例。患者来自广西南宁,为同一家庭母女,母亲33岁,女儿6岁,均无黄疸、肝脾肿大和输血史,血常规分析显示:RBC 4.86~5.30×1012/L,Hb 91.0~92.0 g/L,MCV 60.64~72.40 f L,MCH 17.24~18.90 pg。血红蛋白分析:Hb H 20.5%~21.4%和Hb Bart’s 9.8%~10.0%。结论:在广西地区首次发现α2-珠蛋白基因起始密码子ATG>GTG突变复合东南亚缺失型α-地中海贫血导致Hb H病。临床有轻度贫血,血红蛋白分析存在Hb H和Hb Bart’s。该基因突变较为罕见,在常规地中海贫血基因检测中容易漏诊,需进行基因测序确诊。 展开更多
关键词 Α-地中海贫血 血红蛋白H病 α2-珠蛋白基因 起始密码子 atg>GTG突变
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基于通信感知与ATG技术的空域覆盖研究 被引量：1
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作者 刘毅 邱宝刚 《山东通信技术》 2025年第2期1-6,共6页
在全球经济数字化转型下,低空通感与ATG技术的结合为低空及高空提供了完整的网络覆盖方案。从低空通感部署、高空ATG航线覆盖、空域协同覆盖三个角度,分析了无线网络覆盖方案,介绍了项目应用情况。
关键词 通信感知 atg 5G-A
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补阳还五汤治疗糖尿病周围神经病变疗效观察及对ATG13甲基化水平、自噬相关蛋白表达的影响 被引量：1
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作者 潘菲 韩扬 +1 位作者 史佩玉 张灵建 《新中医》 2025年第14期20-24,共5页
目的:观察补阳还五汤治疗糖尿病周围神经病变(DPN)的临床疗效及对血清ATG13甲基化水平和外周血自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ、Beclin-1)表达的影响。方法:收集2022年6月—2024年5月杭州市临安区中医院内分泌科门诊或住院的DPN患者96例,按随机数... 目的:观察补阳还五汤治疗糖尿病周围神经病变(DPN)的临床疗效及对血清ATG13甲基化水平和外周血自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ、Beclin-1)表达的影响。方法:收集2022年6月—2024年5月杭州市临安区中医院内分泌科门诊或住院的DPN患者96例,按随机数字表法分为试验组和对照组各48例。对照组采用常规治疗,试验组在此基础上加用补阳还五汤治疗。比较2组临床疗效,以及治疗前后中医证候评分、运动神经传导速度(MCV)、感觉神经传导速度(SCV)、血清ATG13甲基化水平及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平。结果:治疗后,试验组总有效率为93.75%(45/48),对照组为75.00%(36/48),2组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,2组中医证候评分均较治疗前降低(P<0.05),且试验组评分低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组MCV、SCV水平均较治疗前升高(P<0.05),且试验组MCV、SCV水平高于对照组(P<0.05)。治疗后,2组ATG13DNA甲基化水平较治疗前降低,且试验组低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);2组Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达水平均较治疗前升高,且试验组高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:补阳还五汤联合常规西医治疗DPN能提高临床疗效,改善患者症状体征,有助于受损神经的修复,其机制可能与抑制ATG13甲基化,促进自噬有关。 展开更多
关键词 糖尿病周围神经病变 补阳还五汤 运动神经传导速度 感觉神经传导速度 atg13DNA甲基化 自噬蛋白
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5G ATG行业应用技术方案研究与交叉时隙干扰等关键问题分析
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作者 刘玮 宋静川 +3 位作者 夏田 石一涵 马骠 李天任 《电信科学》 北大核心 2025年第12期191-198,共8页
5G ATG(air to ground,地空通信)技术具有超远距离、超高空覆盖优势,可用于行业特殊场景。5G ATG系统由于构成复杂,应用场景特殊,多年来并未积累有效数据得以总结技术可行性。从这一痛点问题出发,首先设计行业应用技术方案,其次构建真... 5G ATG(air to ground,地空通信)技术具有超远距离、超高空覆盖优势,可用于行业特殊场景。5G ATG系统由于构成复杂,应用场景特殊,多年来并未积累有效数据得以总结技术可行性。从这一痛点问题出发,首先设计行业应用技术方案,其次构建真实测试验证环境,获得一手5G ATG系统性能数据并进行分析,最后以数据支撑地面通信、通感一体系统将对5G ATG系统造成交叉时隙干扰的程度,并发现了当前相控阵天线极化增益不平衡的产业问题。 展开更多
关键词 5G atg 远距离覆盖 交叉时隙干扰
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自噬相关基因ATG8在酵母细胞时序性寿命调控中的作用
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作者 杨晓迪 袁頔 +4 位作者 崔晓静 华伟 邓雁文 陈亚芹 崔红晶 《微生物学通报》 北大核心 2025年第1期363-372,共10页
【背景】自噬在调控细胞寿命和衰老过程中起着至关重要的作用,本课题组前期研究发现缺失自噬相关基因ATG8缩短酵母细胞复制性寿命,但有关其在寿命调控中的作用机制尚未明确。【目的】研究自噬相关基因ATG8在酵母细胞寿命调控中的作用及... 【背景】自噬在调控细胞寿命和衰老过程中起着至关重要的作用,本课题组前期研究发现缺失自噬相关基因ATG8缩短酵母细胞复制性寿命,但有关其在寿命调控中的作用机制尚未明确。【目的】研究自噬相关基因ATG8在酵母细胞寿命调控中的作用及可能机制。【方法】基于基因同源重组原理构建ATG8基因过表达酵母菌株(ATG8OE),检测ATG8基因缺失酵母菌株(atg8Δ)和ATG8 OE酵母菌株的时序性寿命(chronological lifespan,CLS),采用生长曲线仪检测各菌株的增殖速率,采用流式细胞仪检测各菌株的活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测各菌株的氧化应激相关基因转录水平,比色法检测各菌株的细胞凋亡关键酶胱天蛋白酶-3(Caspase-3)活性。【结果】缺失ATG8基因缩短酵母时序性寿命,减弱细胞增殖速率;细胞内ROS含量增多,氧化应激相关基因表达下调,Caspase-3酶活性升高;ATG8 OE菌株时序性寿命和细胞增殖能力无明显变化,活性氧含量下降,氧化应激相关基因表达上调,Caspase-3酶活性无明显变化。【结论】自噬相关基因ATG8在调控酵母细胞时序性寿命和氧化应激反应中具有一定作用。 展开更多
关键词 酿酒酵母 atg8 氧化应激 时序性寿命
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芪玉三龙汤调节Beclin1,Atg5,LC3B表达以抑制肺癌肿瘤生长机制 被引量：22
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作者 程建超 童佳兵 +5 位作者 朱洁 张星星 高雅婷 陈杨 李泽庚 郑莉莉 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期29-35,共7页
目的:研究芪玉三龙汤对肺癌小鼠皮下移植瘤生长及对自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1),自噬相关基因5(autophagy related genes,Atg5)及微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1light chain3,LC3B)表达的影响。方法:采用... 目的:研究芪玉三龙汤对肺癌小鼠皮下移植瘤生长及对自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1),自噬相关基因5(autophagy related genes,Atg5)及微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1light chain3,LC3B)表达的影响。方法:采用Lewis肺癌细胞(lewis lung cancer cell,LLC)构建肺癌移植瘤小鼠模型,造模成功后随机分为模型组、芪玉三龙汤组、顺铂组及联合组,每组18只移植瘤小鼠。模型组每日按照生理盐水20 mL·kg^-1灌胃;芪玉三龙汤组每日按照80.48 g·kg^-1灌胃;顺铂组在第1,3,5天腹腔注射顺铂溶液(DDP)0.4 mL;联合组每日按80.48 g·kg^-1灌胃给药,并分别在第1,3,5天腹腔注射顺铂溶液0.4 mL;连续治疗21 d剥离瘤组织,称取瘤重,计算抑瘤率。苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织形态学改变。免疫组化检测肿瘤组织中Beclin1,LC3B蛋白表达和定位。蛋白免疫印迹法(Western blot)测定Beclin1,Atg5,微管相关蛋白1轻链3-I(LC3B-Ⅰ)及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)蛋白表达,并计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织Beclin1,Atg5 mRNA转录水平。结果:芪玉三龙汤具有温和的移植瘤抑制作用,抑瘤率为31.2%;镜下观察芪玉三龙汤组肿瘤组织可见片状坏死的肿瘤细胞;免疫组化及Western blot实验表明,与模型组比较,芪玉三龙汤能够上调Beclin1,Atg5,LC3B蛋白的表达(P<0.01),并且能促进LC3B-Ⅰ转化为LC3B-Ⅱ;Real-time PCR结果表明,与模型组比较,芪玉三龙汤能够促进Beclin1,Atg5 mRNA的转录(P<0.01)。结论:芪玉三龙汤对肺肿瘤生长具有温和地抑制作用,其作用机制可能与上调自噬关键分子Beclin1,Atg5,LC3B表达,促进LC3B-Ⅰ向LC3B-Ⅱ转化有关。 展开更多
关键词 芪玉三龙汤 肺癌 自噬 自噬关键分子酵母atg6同系物(Beclin1) 自噬相关基因5(atg5) 微管相关蛋白1轻链3(LC3B)
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rno-miR-30b-5p调控Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达在实验性自身免疫性葡萄膜炎中的作用 被引量：2
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作者 刘滨 孙园园 +4 位作者 殷学伟 唐凯 王慧 毕宏生 郭大东 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2018年第4期301-305,共5页
目的探讨rno-miR-30b-5p对Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达的调控作用及其在实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)中的表达变化。方法 双荧光素酶检测mo-miR-30b-5p对Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达的调控... 目的探讨rno-miR-30b-5p对Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达的调控作用及其在实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)中的表达变化。方法 双荧光素酶检测mo-miR-30b-5p对Atg5、Atg12和Becn1自噬基因表达的调控作用。Lewis大鼠随机分为正常对照组和EAU组,每组各6只,EAU组诱导EAU模型,两组大鼠每天用Genesis-A眼底相机观察眼底情况。免疫后12 d,取眼球观察睫状体、视网膜的病理学表现;分离大鼠的脾脏和淋巴结,实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测rno-miR-30b-5p、Atg5、Atg12和Becn1 mRNA的表达情况;ELISA方法检测Atg5、Atg12和Becn1蛋白的表达水平。结果双荧光素酶检测结果证实Atg5、Atg12和Becn1为rno-miR-30b-5p调控的靶基因。免疫后12 d,EAU组大鼠眼底血管严重肿胀,病理学检测可见睫状体、视网膜内大量炎性细胞浸润。Q-PCR检测结果示,与正常对照组相比,免疫后12 d EAU组大鼠脾脏和淋巴结中rno-miR-30b-5p mRNA水平分别为0.46±0.01和0.29±0.17,均呈下调表达(均为P<0.01);Atg5、Atg12和Becn1 mRNA水平均呈上调表达,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。ELISA检测结果示,EAU组大鼠脾脏和淋巴结中Atg5、Atg12和Becn1蛋白表达水平均明显高于正常对照组大鼠(均为P<0.05)。结论 rno-miR-30b-5p可调控Atg5、Atg12和Becn1的表达。在EAU大鼠脾脏和淋巴结中,rno-miR-30b-5p的下调表达使Atg5、Atg12和Becn1基因和蛋白的表达水平均明显升高,从而影响葡萄膜炎的发展进程。 展开更多
关键词 rno-miR-30b-5p atg5 atg12 Becn1 葡萄膜炎
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