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拟南芥AtCpNifS克隆及其原核表达 被引量：2
1
作者 李亚男 冯霞 +1 位作者 杜玉潇 陈大清 《湖北农业科学》 北大核心 2010年第1期1-4,共4页
从哥伦比亚生态型拟南芥(Arabidopsis thaliana ecotype Columbia)中克隆了AtCpNifS的完整CDS序列。通过测序和序列比对分析,确认了克隆序列的完整性和正确性。在此基础上,构建了该基因的原核表达载体(BL21-pET28-AtCpNifS),并从该质粒... 从哥伦比亚生态型拟南芥(Arabidopsis thaliana ecotype Columbia)中克隆了AtCpNifS的完整CDS序列。通过测序和序列比对分析,确认了克隆序列的完整性和正确性。在此基础上,构建了该基因的原核表达载体(BL21-pET28-AtCpNifS),并从该质粒中成功分离了表达蛋白(AtCpNifS)。 展开更多
关键词 拟南芥 atcpnifs 基因克隆 原核表达
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转AtCpNifS基因油菜构建及其对硒酸钠胁迫的响应
2
作者 高志鹏 冯霞 +2 位作者 杜玉箫 李亚男 陈大清 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第8期1742-1749,共8页
【目的】研究AtCpNifS基因的作用机制,为培育富硒油菜品种提供实验参考。【方法】运用农杆菌转化法,将拟南芥中的AtCpNifS基因克隆并经过酶切连接形成重组转化子转化到油菜植株中,通过PCR检测以及GUS组织化学染色进行表达验证。并采用... 【目的】研究AtCpNifS基因的作用机制,为培育富硒油菜品种提供实验参考。【方法】运用农杆菌转化法,将拟南芥中的AtCpNifS基因克隆并经过酶切连接形成重组转化子转化到油菜植株中,通过PCR检测以及GUS组织化学染色进行表达验证。并采用硒酸钠对转基因油菜和非转基因油菜进行胁迫处理,比较转基因油菜和非转基因油菜叶片的谷胱甘肽过氧化物酶活性以及对AtCpNifS基因的表达进行半定量分析。【结果】通过检测引物进行PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳检测,转基因植株的扩增结果与阳性对照扩增结果一致,阴性对照扩增结果呈阴性,说明转基因油菜植株构建成功。GUS组织化学染色处理下,仅在转基因植株中观察到蓝色的GUS表达位点,证明AtCpNifS基因成功转化蜀杂9号油菜植株并表达。在不同处理时间不同浓度硒酸钠的处理下,转基因油菜叶片的谷胱甘肽过氧化物酶活力随着硒酸钠浓度的增加而升高,随着处理时间增加而升高,且均比同期处理的非转基因油菜植株的酶活力高。转基因油菜叶片在用20 mg/L硒酸钠处理4周时有最大酶活力值380.18μmol/(g FW·min),同期处理的非转基因油菜酶活力值为329.93μmol/(g FW·min),显著低于转基因油菜植株。半定量RT-PCR分析显示:转基因植株在0~20 mg/L硒酸钠浓度范围内表达量呈上升趋势,转基因植株的相对表达量在没有硒酸钠处理时为0.755,20 mg/L的硒酸钠处理时为1.545,增加了2.05倍。【结论】成功构建转AtCpNifS基因蜀杂9号油菜,在硒酸钠胁迫下其谷胱甘肽过氧化物酶活性显著增强,AtCpNifS基因表达量也随硒酸钠胁迫而上调。推测AtCpNifS基因在蜀杂9号油菜的硒耐受性提升中发挥作用。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 atcpnifs基因 转基因 谷胱甘肽过氧化物酶 半定量RT-PCR
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超表达AtCpNifS基因烟草的淹水适应性 被引量：2
3
作者 陈大清 刘悦聪 李亚男 《仲恺农业工程学院学报》 CAS 2013年第1期1-4,共4页
对超表达拟南芥半胱氨酸脱硫酶基因(Cysteine desulfurase gene of Arabidopsis,AtCpNifS)烟草(Nicotianatabacum Linn.)和野生型烟草进行了不同时间的淹水处理.结果表明,淹水处理的转基因和野生型烟草叶绿素质量比均减少,但转基因烟草... 对超表达拟南芥半胱氨酸脱硫酶基因(Cysteine desulfurase gene of Arabidopsis,AtCpNifS)烟草(Nicotianatabacum Linn.)和野生型烟草进行了不同时间的淹水处理.结果表明,淹水处理的转基因和野生型烟草叶绿素质量比均减少,但转基因烟草的减少量小于野生型.淹水10 d,转基因烟草的根系活力有一定程度上升,淹水20 d则下降;淹水后野生型烟草根系活力一直呈下降状态;另一方面,淹水后乙醇脱氢酶(Alcohol dehydrogen-ase,ADH)和过氧化物酶(Peroxidase,POD)的活性均明显增加,转基因烟草的增加量较野生型烟草大.尤其是在淹水胁迫下转基因烟草表现的ADH酶活性明显增强的效应提示:超表达AtCpNifS基因对改善厌氧代谢可能有一定作用,说明转基因烟草表现出一定的淹水耐受适应性. 展开更多
关键词 转基因烟草 拟南芥半胱氨酸脱硫酶基因(Cysteine desulfurase gene of Arabidopsis atcpnifs) 淹水胁迫 生理效应
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