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At2基因双T-DNA植物表达载体的构建 被引量：2
1
作者 王文玲 王贤磊 +2 位作者 熊丽曼 高兴旺 李冠 《北方园艺》 CAS 北大核心 2012年第12期107-112,共6页
以甜瓜品种‘MR-1’为试材,采用PCR技术,扩增出了At2基因并在两端添加BamHⅠ和SacⅠ酶切位点。结果表明:在NCBI上进行BLAST显示其氨基酸序列与GeneBank中已公布的At2基因的同源性为99%;经DNAMAN软件分析,核苷酸序列同源性为99.43%。将... 以甜瓜品种‘MR-1’为试材,采用PCR技术,扩增出了At2基因并在两端添加BamHⅠ和SacⅠ酶切位点。结果表明:在NCBI上进行BLAST显示其氨基酸序列与GeneBank中已公布的At2基因的同源性为99%;经DNAMAN软件分析,核苷酸序列同源性为99.43%。将其连接在中间表达载体G-pPTN133上,得到替换了GUS基因的中间载体A-pPTN133。A-pPTN133再经ScaⅠ酶切后,插入到经ScaⅠ酶切的pPTN133^-中,构建成双T-DNA植物表达载体At2-pPTN133。经酶切和PCR鉴定证明了所构建载体的正确性。 展开更多
关键词 at2基因 双T-DNA 植物表达载体 无选择标记
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人工改造甜瓜钾离子通道基因ΔAT2/MIRK转拟南芥的生理特性分析
2
作者 赵丽娜 王黎敏 +3 位作者 高丽伟 莫霏 黄隆堂 张屹东 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2017年第3期83-89,共7页
K^+通道是介导植物K^+吸收转运的主要途径之一。甜瓜K^+通道MIRK对外源Na^+敏感,生物信息学分析其敏感位点可能位于孔区外(即S5-P-S6)。为了验证MIRK受Na^+抑制位点,本研究将拟南芥中不受Na^+抑制的同源K^+通道基因KAT2孔道区替换到MIR... K^+通道是介导植物K^+吸收转运的主要途径之一。甜瓜K^+通道MIRK对外源Na^+敏感,生物信息学分析其敏感位点可能位于孔区外(即S5-P-S6)。为了验证MIRK受Na^+抑制位点,本研究将拟南芥中不受Na^+抑制的同源K^+通道基因KAT2孔道区替换到MIRK序列上,生成人工改造甜瓜K^+通道基因ΔAT2/MIRK。电生理实验结果显示ΔAT2/MIRK仍保持了MIRK介导K^+的属性,但其内向电流则不受外源Na^+的抑制。将MIRK和ΔAT2/MIRK分别转化到拟南芥K^+通道KAT1突变体kat1中,抗性筛选和PCR检测结果表明成功获得p35S::MIRK-kat1和p35S::ΔAT2/MIRK-kat1转基因植株。分别用50、100mmol/L的NaCl溶液处理转基因拟南芥和kat1突变体,发现MIRK及ΔAT2/MIRK在kat1中的过表达可以介导K^+内流,并参与植株对盐胁迫的响应。 展开更多
关键词 甜瓜 人工改造基因△at2/MIRK Na+抑制 拟南芥突变体kat1 生理功能
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新疆哈密瓜AT2基因的克隆及初步功能验证 被引量：1
3
作者 张生翾 李思怡 +1 位作者 王旭辉 李冠 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2018年第15期4853-4862,共10页
本研究利用RT-PCR技术从抗霜霉病哈密瓜(Cucumis melo L.)品种MR-1中克隆到AT2基因,其整编码区为1 229 bp,编码401个氨基酸,同源比对结果为99%,将其编码的丝氨酸乙醛酸转氨酶蛋白序列与多种物种进行系统进化树分析,结果显示,甜瓜与黄瓜... 本研究利用RT-PCR技术从抗霜霉病哈密瓜(Cucumis melo L.)品种MR-1中克隆到AT2基因,其整编码区为1 229 bp,编码401个氨基酸,同源比对结果为99%,将其编码的丝氨酸乙醛酸转氨酶蛋白序列与多种物种进行系统进化树分析,结果显示,甜瓜与黄瓜SGT蛋白同源性较高,遗传距离最近,推测在同属中该蛋白进化相对保守。在线分析表明SGT蛋白不含信号肽及跨膜区,即该蛋白为非跨膜蛋白。RT-PCR分析表明AT2基因随着植株生长时期不同表达量不同,开花期表达量最高,幼苗期至开花期表达量呈上升趋势;且不同组织中,叶片表达量显著高于茎、根。构建了p CAMBIA2300-AT2植物表达载体,运用农杆菌介导法转化烟草,抗性筛选获得7株阳性转基因烟草;经q RT-PCR检测,AT2基因在不同株系转基因烟草T0代中表达量均高于野生型。通过对转基因烟草进行抗病性鉴定,转基因烟草对靶斑病、赤星病的抗性高于野生型烟草。本研究表明,过表达AT2基因能够提高烟草对部分真菌性病害的抗性。 展开更多
关键词 at2基因 丝氨酸乙醛酸氨基转移酶 哈密瓜 抗性
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血管紧张素Ⅱ2型受体基因缺失是否影响肾脏发育?
4
作者 李文歌 陈香美 +3 位作者 张颖 叶一舟 于力方 师锁柱 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第2期230-233,共4页
血管紧张素Ⅱ２型受体基因缺失是否影响肾脏发育？李文歌陈香美张颖叶一舟于力方师锁柱（解放军总医院肾科，解放军肾病中心和重点实验室，北京１００８５３）ＤｏｅｓｔｈｅＧｅｎｅＤｅｌｅｔｉｏｎｏｆＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡＴｙ... 血管紧张素Ⅱ２型受体基因缺失是否影响肾脏发育？李文歌陈香美张颖叶一舟于力方师锁柱（解放军总医院肾科，解放军肾病中心和重点实验室，北京１００８５３）ＤｏｅｓｔｈｅＧｅｎｅＤｅｌｅｔｉｏｎｏｆＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡＴｙｐｅ２ＲｅｃｅｐｔｏｒＡｆｅｃｔｔ... 展开更多
关键词 受体 血管紧张素 基因缺失 肾脏发育
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一种快速筛选转抗霜霉病基因甜瓜种子的方法研究
5
作者 宁雪飞 韩小路 +2 位作者 王贤磊 高兴旺 李冠 《北方园艺》 CAS 北大核心 2014年第1期102-105,共4页
以用花粉管通道技术转入抗霜霉病基因At2的甜瓜T1代转基因种子为试材,采用组培技术得到膨大的外植体,利用PCR技术对组培得到的外植体进行检测,以期尽快筛选出阳性植株。结果表明:在甜瓜外植体培养过程中,筛选到的种子最佳灭菌条件为72... 以用花粉管通道技术转入抗霜霉病基因At2的甜瓜T1代转基因种子为试材,采用组培技术得到膨大的外植体,利用PCR技术对组培得到的外植体进行检测,以期尽快筛选出阳性植株。结果表明:在甜瓜外植体培养过程中,筛选到的种子最佳灭菌条件为72℃、干灭4h,抑菌效果最好的培养基组分是MS无机盐+B5维生素+2mg/L 6-BA+7g/L琼脂+500mg/L头孢噻肟钠+1.1g/L甲基托布津;对1 100个转抗霜霉病基因At2的T1代种子外植体进行PCR检测,阳性率为4.5‰。 展开更多
关键词 甜瓜 霜霉病 at2基因 转基因植株筛选
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