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O型、A型及Asia-1型口蹄疫病毒多重RT-PCR检测方法的建立 被引量:2
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作者 张彦婷 吴楠 +3 位作者 刘玉梅 王晓清 刘国民 陈超英 《畜牧与饲料科学》 2016年第12期9-11,共3页
根据口蹄疫病毒VP1基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计4条特异性引物,通过对退火温度等反应条件进行优化,建立能够同时扩增出O型、A型、Asia-1型口蹄疫病毒的多重RT-PCR检测方法。结果表明,建立的方法最低可以检测出约含1 pg/μL... 根据口蹄疫病毒VP1基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计4条特异性引物,通过对退火温度等反应条件进行优化,建立能够同时扩增出O型、A型、Asia-1型口蹄疫病毒的多重RT-PCR检测方法。结果表明,建立的方法最低可以检测出约含1 pg/μL的病毒样品;该方法对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒等其他相关病毒的检测结果均为阴性,特异性良好。建立的方法能够对口蹄疫O型、A型、Asia-1型病毒准确定型,可广泛用于口蹄疫病毒3个血清型的快速检测和分子流行病学调查。 展开更多
关键词 口蹄疫O型病毒 口蹄疫A型病毒 口蹄疫asia-1型病毒 多重RT-PCR
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豚鼠动物模型评价牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗效力的研究 被引量:1
2
作者 赵俊 李少英 +3 位作者 路伟 王钦富 赵炳武 武华 《畜牧与兽医》 北大核心 2011年第9期7-12,12,共6页
以豚鼠为试验动物模型,探索一种应用豚鼠替代牛进行牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗效力检验的方法。豚鼠和牛同步对6批牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗进行PD50效力检验,其中2批进行重复性试验。豚鼠分别在免疫后7、14、21和28天采血检测Asia-1型... 以豚鼠为试验动物模型,探索一种应用豚鼠替代牛进行牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗效力检验的方法。豚鼠和牛同步对6批牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗进行PD50效力检验,其中2批进行重复性试验。豚鼠分别在免疫后7、14、21和28天采血检测Asia-1型的中和抗体水平。统计学分析显示,测定的豚鼠PD50和牛PD50之间具有极显著的相关性(R=0.846,P<0.01);经回归分析,建立了应用豚鼠测定的PD50预测牛口蹄疫Asia-1型灭活疫苗效力的线性回归模型(y=1.625x-0.704;x表示豚鼠PD50结果;y表示牛PD50结果)。F检验(F=15.058,P=0.008)和t检验(t=3.880,P=0.008)证明该线性方程成立。豚鼠的Asia-1型抗体水平随免疫剂量的增加而升高,攻毒时的抗体水平与攻毒后的保护力存在正相关关系。本研究初步证明,在未来的效力检验中豚鼠可作为试验动物替代牛进行口蹄疫Asia-1型灭活疫苗效力检验。 展开更多
关键词 口蹄疫灭活疫苗 asia-1 效力试验 豚鼠
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共存中的竞争:中美俄“C5+1”机制间关系 被引量:1
3
作者 周明 林宇晴 《国际展望》 北大核心 2025年第4期71-95,164,共26页
近年来,中美俄“C5+1”机制在中亚地区形成了共存中竞争的局面。三国间“无声的协调”、中亚国家对区域身份的认可以及机制和政策的扩散,共同促成了三国“C5+1”机制在中亚地区的共存,但中美俄在中亚地区的机制竞争也日益凸显。梳理并... 近年来,中美俄“C5+1”机制在中亚地区形成了共存中竞争的局面。三国间“无声的协调”、中亚国家对区域身份的认可以及机制和政策的扩散,共同促成了三国“C5+1”机制在中亚地区的共存,但中美俄在中亚地区的机制竞争也日益凸显。梳理并比较中美俄创建“C5+1”机制的战略目标后发现,三国“C5+1”机制在中亚的竞争,在侧重领域、比较优势和投入力度方面均存在差异。相较中国聚焦于打造“和合”关系,美国侧重于权力竞争,俄罗斯注重恢复主导地位。中美俄三国分别通过雄厚经济实力和规范性理念、软实力、历史文化联系等方式吸引中亚国家参与机制建设,但在机制建设的投入上不尽相同。在中美俄战略博弈加剧的背景下,三国“C5+1”机制虽呈现出竞争力度加剧、竞争领域扩大、竞争层级上升的趋势,但也存在机制合作的空间。未来,中美俄围绕中亚区域政治、经济、安全秩序的竞争仍将持续。 展开更多
关键词 “C5+1”机制 中亚地区 竞争性共存 中国—中亚命运共同体
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中亚自主性视角下大国C5+1机制在中亚的扩散研究
4
作者 李亮 曾向红 《兰州大学学报(社会科学版)》 北大核心 2025年第5期69-86,共18页
以域外大国为一方、以中亚五国为另一方的C5+1合作机制自2015年以来在中亚不断扩散,成为各大国参与中亚事务的标配,并在2025年呈现爆发式增长。这将中亚本已存在的国际机制重叠和大国博弈格局推至更加复杂的阶段,而中亚国家基于战略自... 以域外大国为一方、以中亚五国为另一方的C5+1合作机制自2015年以来在中亚不断扩散,成为各大国参与中亚事务的标配,并在2025年呈现爆发式增长。这将中亚本已存在的国际机制重叠和大国博弈格局推至更加复杂的阶段,而中亚国家基于战略自主的应对逻辑则日渐清晰,并成为影响大国制度博弈、塑造地区秩序演变的关键变量。笔者选取美国、俄罗斯与中国的C5+1机制为案例,考察它们的扩散动因、核心差异及竞合互动,并剖析中亚自主性在其中发挥影响的方式。各国建制既是为了应对大国博弈升温、追求在中亚的全域化利益,也是顺应中亚自主意识觉醒与一体化重启的结果。而各机制间既在战略目标和建设成效上存在深刻差异,也面临着中亚国家基于战略自主对不同机制采取的不同应对。当前,各机制已围绕成员、议程和规范展开整体激烈竞争,但中亚国家实施的自主性管控,既维持了竞争态势的可控,还推动了机制间的战略对接与议题式合作。中亚自主性持续增加及C5+1机制蓬勃发展之间良性互动,有望推动中亚从大国主导的博弈型地区治理秩序向中亚引领的合作型秩序演进。 展开更多
关键词 C5+1机制 中国—中亚机制 大国博弈 中国周边外交 中国中亚命运共同体
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中亚“C5+1”多边合作机制的类型与前景研究
5
作者 周明 林宇晴 《俄罗斯研究》 2025年第4期93-134,共42页
近年来,中亚地区“C5+1”多边合作机制盛行。然而,对于各国在“C5+1”机制互动过程中形成的合作结构及中亚各国的不同态度,既有研究尚存在一定不足。通过引入“偏正式”、“维系式”、“共生式”概念,本文尝试对“C5+1”合作的深层特点... 近年来,中亚地区“C5+1”多边合作机制盛行。然而,对于各国在“C5+1”机制互动过程中形成的合作结构及中亚各国的不同态度,既有研究尚存在一定不足。通过引入“偏正式”、“维系式”、“共生式”概念,本文尝试对“C5+1”合作的深层特点与中亚国家在合作中的能动性形成新的认知。通过互动,美国、俄罗斯、中国等在中亚地区形成了不同类型的“C5+1”多边合作机制。美国偏正式“C5+1”机制基于实力差异,强调“正”位的主导性和谐;俄罗斯维系式“C5+1”机制凭借相互依赖和霸权克制强化既有联系;中国共生式“C5+1”机制中,各主体的平等参与促进了和谐共生。乌克兰危机以来,中亚各国对不同类型“C5+1”机制的态度不一。当前,大国博弈的激烈程度、大国的全球治理理念以及是否关注中亚国家诉求等因素影响了三种“C5+1”机制类型的发展。如何有效优化“偏正式”、“维系式”、“共生式”合作结构,已成为亟待深入探讨的议题。 展开更多
关键词 “C5+1”机制 中国与中亚 俄罗斯与中亚 美国与中亚
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亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒双拷贝VP1基因的串联表达及其免疫原性 被引量:6
6
作者 张克山 向敏 +2 位作者 吴斌 王勤刚 陈焕春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期383-387,共5页
口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因含有T细胞和B细胞表位,是口蹄疫病毒的主要免疫原性基因。作者将亚洲Ⅰ型FMDV VP1基因首尾串联构建双拷贝的VP1基因(2VP1),实现双拷贝VP1基因的原核表达,表达的重组蛋白(GST2VP1)经Sephadex-G200分子筛层析纯化... 口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因含有T细胞和B细胞表位,是口蹄疫病毒的主要免疫原性基因。作者将亚洲Ⅰ型FMDV VP1基因首尾串联构建双拷贝的VP1基因(2VP1),实现双拷贝VP1基因的原核表达,表达的重组蛋白(GST2VP1)经Sephadex-G200分子筛层析纯化后,Western blot证实其有反应原性,动物试验表明重组蛋白在加强免疫后能够产生和灭活疫苗相当的ELISA抗体和中和抗体;本试验结果为亚洲Ⅰ型FMDV免疫原性研究及GST2VP1蛋白的进一步应用奠定了基础。 展开更多
关键词 亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒 2VP1 串联表达 免疫原性
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Asia 1型FMDV感染BHK-21细胞差异蛋白质点2-DE分析 被引量:4
7
作者 刘永杰 张克山 +5 位作者 尚佑军 郭建宏 郑海学 田宏 卢国栋 刘湘涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期145-149,共5页
为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)感染BHK-21细胞后蛋白质组的变化及差异,将FMDV接种于培养的单层BHK-21细胞,同时设未接毒的BHK-21细胞作对照组。待细胞病变后分别提取2组细胞总蛋白借助2-DE技术及PDQuest8.0软件进行细胞蛋白质组二维... 为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)感染BHK-21细胞后蛋白质组的变化及差异,将FMDV接种于培养的单层BHK-21细胞,同时设未接毒的BHK-21细胞作对照组。待细胞病变后分别提取2组细胞总蛋白借助2-DE技术及PDQuest8.0软件进行细胞蛋白质组二维电泳图谱差异性分析。结果显示感染组有1 457个可见蛋白质点,而对照组可见的蛋白质点为1 427个。感染组蛋白点的表达量与对照组相比,二者具有统计学差异(P<0.05)的蛋白质点472个,其中表达上调251个点,表达下调221个点,新合成蛋白点30个。结果表明FMDV感染BHK-21细胞后引起了细胞蛋白质组表达模式的改变,这种变化是病毒与细胞相互作用的结果。本研究首次利用蛋白质组学技术研究Asia 1型FMDV感染BHK-21细胞后蛋白质组学差异,有助于深入研究Asia 1型FMDV和BHK-21细胞相互作用的分子机制。 展开更多
关键词 Asia1型FMDV BHK-21细胞 感染 差异蛋白质组
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Asia 1型口蹄疫病毒VP1基因的表达鉴定及其多抗制备 被引量:3
8
作者 朱远茂 任宪刚 +5 位作者 史鸿飞 高欲燃 于作 冯军科 相文华 薛飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期285-288,共4页
本研究旨在表达口蹄疫病毒(FMDV)的VP1全基因并制备特异性的多克隆抗体。利用PCR方法扩增Asia 1 IND 49197株VP1全基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,在大肠杆菌BL21中进行表达。SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为31.6ku,以包... 本研究旨在表达口蹄疫病毒(FMDV)的VP1全基因并制备特异性的多克隆抗体。利用PCR方法扩增Asia 1 IND 49197株VP1全基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,在大肠杆菌BL21中进行表达。SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为31.6ku,以包涵体的形式存在。通过Ni-NTA Purification System纯化后进行western blot和间接ELISA分析,结果显示重组蛋白能够被FMD阳性血清识别,具有良好的反应性。将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,ELISA测定抗体效价为1∶20480,病毒中和试验测定抗体效价为1∶64。本研究所表达的VP1蛋白可用于开发检测Asia1口蹄疫抗体的诊断试剂,所制备的多克隆抗体为进一步研究VP1的结构、功能以及抗原表位的鉴定提供了条件。 展开更多
关键词 ASIA I口蹄疫病毒 VP1基因 多克隆抗体
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Asia1型口蹄疫病毒多表位基因的原核表达及ELISA检测方法的建立 被引量:3
9
作者 鲁会军 金宁一 +5 位作者 郑敏 韩松 霍晓伟 田明尧 李霄 金扩世 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期45-49,共5页
根据国内流行的Asia 1型口蹄疫病毒的基因组特性,合成了Asia 1型口蹄疫病毒2个流行毒株VP1基因的5个抗原表位,并将其克隆到pMD18-T载体上,再按设计的酶切位点连接,构建出Asia 1型口蹄疫病毒VP1双拷贝基因片段(VP1 Asia)。然后,将VP1 Asi... 根据国内流行的Asia 1型口蹄疫病毒的基因组特性,合成了Asia 1型口蹄疫病毒2个流行毒株VP1基因的5个抗原表位,并将其克隆到pMD18-T载体上,再按设计的酶切位点连接,构建出Asia 1型口蹄疫病毒VP1双拷贝基因片段(VP1 Asia)。然后,将VP1 Asia基因连接到原核表达载体pET-28a(+)上,构建了重组表达质粒pET-28a-VP1 Asia,接着将其转入BL21菌中进行原核表达。以纯化的表达蛋白作为抗原检测了牛Asia 1型口蹄疫病毒阳性血清。结果显示,VP1 Asia基因在大肠杆菌中获得了高效表达,以纯化的VP1Asia蛋白作为抗原建立了检测Asia 1型口蹄疫病毒抗体的ELISA方法。以建立的ELISA方法和标准Asia 1型口蹄疫液相阻断ELISA试剂盒对30份临床样品进行了检测,两种检测方法的阳性率分别为90.0%(27/30)和93.3%(28/30),符合率为89.7%(26/29)。本研究为组装Asia 1型口蹄疫病毒抗体ELISA诊断试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫 亚洲1 多表位基因 酶联免疫吸附试验
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利用Asia1型口蹄疫病毒VP1蛋白的单克隆抗体建立单抗竞争ELISA方法 被引量:4
10
作者 林彤 邵军军 +4 位作者 丛国正 独军政 高闪电 常惠芸 谢庆阁 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第23期11025-11026,11036,共3页
应用纯化的Asia1型口蹄疫病毒VP1蛋白作为抗原,采用过碘酸钠法标记纯化的单抗,建立了单抗竞争ELISA,检测10份阳性猪口蹄疫血清及200多份阴性血清,试验结果与样品的背景相一致。敏感性试验和重复试验结果表明,该方法具有稳定和敏感等特性... 应用纯化的Asia1型口蹄疫病毒VP1蛋白作为抗原,采用过碘酸钠法标记纯化的单抗,建立了单抗竞争ELISA,检测10份阳性猪口蹄疫血清及200多份阴性血清,试验结果与样品的背景相一致。敏感性试验和重复试验结果表明,该方法具有稳定和敏感等特性,适合Asia1型猪口蹄疫病毒抗体的监测。 展开更多
关键词 Asia1型FMDV VP1单抗 竞争ELISA
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新疆MEAM1烟粉虱隐种对吡虫啉的抗性遗传力分析及交互抗性测定 被引量:10
11
作者 李国志 曹骞 +2 位作者 段晓东 张鑫 马德英 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期59-64,共6页
采用Tabashnik的域性状指标分析了新疆MEAM1(Middle-East-Asia-Minor l)烟粉虱隐种对吡虫啉的抗性现实遗传力(h2)和不同致死率下的抗性发展速率,同时测定了抗性种群对不同类型杀虫剂的交互抗性。结果表明,在30%~50%较低的选择压力下,新... 采用Tabashnik的域性状指标分析了新疆MEAM1(Middle-East-Asia-Minor l)烟粉虱隐种对吡虫啉的抗性现实遗传力(h2)和不同致死率下的抗性发展速率,同时测定了抗性种群对不同类型杀虫剂的交互抗性。结果表明,在30%~50%较低的选择压力下,新疆MEAM1烟粉虱隐种连续汰选8代后,对吡虫啉的抗性上升28.01倍,抗性现实遗传力h2为0.429 7。假设田间种群现实遗传力为实验室筛选估算值的1/2,即h2=0.214 9,对新疆MEAM1烟粉虱隐种对吡虫啉的抗性发展速率估算结果表明:在药剂选择压力为50%~60%下,若使其对吡虫啉的抗性增长10倍,则需要生长10~8代;而在药剂选择压力为70%~90%下,若使其抗性增长10倍,则仅需要生长6~4代。表明新疆MEAM1烟粉虱隐种对吡虫啉产生抗性的风险很大。交互抗性测定结果显示:抗性种群对同类型的杀虫剂吡虫清和噻虫嗪分别产生了10.78倍和4.75倍的中等至低水平交互抗性;对多杀菌素、毒死蜱、吡丙醚和高效氯氰菊酯的敏感性有所降低;对阿维菌素、氟啶虫胺腈和乙基多杀菌素等杀虫剂则无交互抗性。 展开更多
关键词 烟粉虱 新疆MEAM1隐种 吡虫啉 抗性 遗传力分析 交互抗性
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云南边境Asia1型口蹄疫监测及病毒vp1基因序列比较 被引量:2
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作者 张文东 胡媛媛 +7 位作者 宋建领 赵焕云 吕粤 岳亮 张应国 李作生 范泉水 张富强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期93-99,共7页
口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的主要侵袭偶蹄动物的一种急性热性高度接触性传染病。口蹄疫病毒存在7个不同血清型,病毒VP1蛋白抗原性差异是病毒血清型划分依据,而其编码基因核苷酸序列差异是同型病毒Topotype型或基因型划分依据。采用RT-PC... 口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的主要侵袭偶蹄动物的一种急性热性高度接触性传染病。口蹄疫病毒存在7个不同血清型,病毒VP1蛋白抗原性差异是病毒血清型划分依据,而其编码基因核苷酸序列差异是同型病毒Topotype型或基因型划分依据。采用RT-PCR及O/A/C/Asia1多重RT-PCR技术,对2006年期间自云南边境地区采集境外流动动物组织样品120份,进行口蹄疫病原监测,检出Asia1型口蹄疫病毒阳性样品7份。对阳性样品中病毒vp1基因全序列进行扩增、纯化后,克隆至pMD18-T载体测序,并与已知代表性毒株进行比对及系统发育分析。结果发现:云南边境Aisa1型口蹄疫病毒阳性样品vp1基因核苷酸序列同源性介于83.4%~99.5%,不同分离毒株以15%序列差异作为分型标准,存在1个新拓朴型或基因型Ⅴ,且与已知的4个拓朴型或基因型不同。系统发育分析确定了1个新的遗传谱系Ⅶ。部分VP1蛋白表位关键性氨基酸位点存在变异。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 Asia1 监测 测序
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口蹄疫病毒VP1蛋白病毒样颗粒表达系统的构建 被引量:3
13
作者 窦小龙 任晓冰 +3 位作者 魏婕 苗书魁 冉多良 马文戈 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第3期11-14,共4页
为制备Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)双层结构病毒样颗粒,选择牛病毒性腹泻病毒(BVDV)流行株BVDV JZ05-1核心蛋白p14的第169~270位氨基酸和 FMDV Asia 1/JS/CHA/05结构蛋白 VP1的第1~211位氨基酸,两者之间设计柔性肽连接,人工合成 ... 为制备Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)双层结构病毒样颗粒,选择牛病毒性腹泻病毒(BVDV)流行株BVDV JZ05-1核心蛋白p14的第169~270位氨基酸和 FMDV Asia 1/JS/CHA/05结构蛋白 VP1的第1~211位氨基酸,两者之间设计柔性肽连接,人工合成 p14-柔性肽-VP1融合蛋白编码序列,全基因长990 bp。合成基因与枯草芽胞杆菌表达载体 p7257-P43连接,构建成表达质粒 p7257-P43-P14-VP1。转化枯草芽胞杆菌 WB800,经筛选、鉴定,获得表达 p14-VP1融合蛋白的枯草芽胞杆菌。该重组表达菌在含有40μg/mL氯霉素的 LB中培养后,菌体超声破碎可检测到目的蛋白。Western blot 结果显示,该蛋白能特异性识别Asia 1型FMDV抗体,具有良好的反应原性。电镜观察显示,融合蛋白组装为直径约50 nm大小的病毒样颗粒(VLP)。 展开更多
关键词 ASIA1型口蹄疫病毒 病毒样颗粒 融合蛋白 枯草芽胞杆菌
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猪感染口蹄疫亚洲Ⅰ型病毒分离及其VP1基因的变异比较 被引量:2
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作者 罗昊 王红宁 +2 位作者 杨鑫 樊汶樵 刘立 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期440-443,共4页
对口蹄疫病毒的分子流行病学的研究通常是以VP1基因序列分析为依据的。本试验分离到1株猪源口蹄疫亚洲Ⅰ型毒株,对其主要抗原基因VP1进行了扩增和测序,并与国内外报道序列进行比对,发现与国内报道珠同源性在83.3%-86.4%之间,与国外报道... 对口蹄疫病毒的分子流行病学的研究通常是以VP1基因序列分析为依据的。本试验分离到1株猪源口蹄疫亚洲Ⅰ型毒株,对其主要抗原基因VP1进行了扩增和测序,并与国内外报道序列进行比对,发现与国内报道珠同源性在83.3%-86.4%之间,与国外报道株的同源性在81.4%-98.4%之间。比较发现本次分离株与国内外报道株的差异的较大,只有2株报道株与其同源性在90%以上。 展开更多
关键词 口蹄疫亚洲Ⅰ型 结构蛋白 二级结构 B细胞表位
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Asia1型口蹄疫病毒多表位基因的设计及其在毕赤酵母中的表达 被引量:1
15
作者 鲁会军 金宁一 +5 位作者 郑敏 韩松 霍晓伟 胡博 田明尧 金扩世 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期11-15,共5页
为制备Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)特异性诊断抗原,根据国内Asia 1型FMDV流行毒株的序列,合成了2个FMDV流行毒株VP1基因的5个抗原表位。采用InsightⅡ软件进行蛋白空间构象模拟,证实设计的多表位分子结构符合要求。将合成的多表位基因按... 为制备Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)特异性诊断抗原,根据国内Asia 1型FMDV流行毒株的序列,合成了2个FMDV流行毒株VP1基因的5个抗原表位。采用InsightⅡ软件进行蛋白空间构象模拟,证实设计的多表位分子结构符合要求。将合成的多表位基因按设计的酶切位点进行酶切连接,构建了Asia 1型FMDV VP1双拷贝基因重组质粒(pMD18-dVP1 Asia)。从该重组质粒获得dVP1 Asia基因,与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,构建了重组表达质粒pPIC9K-dVP1 Asia。用BglⅡ将重组表达质粒线性化后,转化GS115酵母菌。经筛选、鉴定,成功获得了表达FMDV多表位VP1蛋白的阳性重组酵母菌。该阳性重组酵母菌经甲醇诱导,在培养液上清中可检测到目的蛋白。Western-blot结果显示,该蛋白能特异识别Asia 1型FMDV抗体,且具有很好的反应原性。 展开更多
关键词 ASIA1型口蹄疫病毒 多表位基因 分子设计 毕赤酵母 表达
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共表达Asia1口蹄疫病毒P1-2A-3C基因和猪IL-18基因重组鸡痘病毒构建及表达 被引量:2
16
作者 鲁会军 霍晓伟 +3 位作者 任静强 常巧呈 金扩世 金宁一 《中国动物传染病学报》 CAS 2011年第6期30-35,共6页
为构建Asia1型口蹄疫重组鸡痘病毒疫苗,采集口蹄疫发病牛的水泡液及水泡皮,用RT-PCR法扩增出Asia 1型口蹄疫病毒的前体蛋白基因P1-2A片段和蛋白酶基因3C片段,分别克隆至pMD18-T载体上,通过酶切连接获得质粒pMD18-T-P1-2A-3C。再将P1-2A... 为构建Asia1型口蹄疫重组鸡痘病毒疫苗,采集口蹄疫发病牛的水泡液及水泡皮,用RT-PCR法扩增出Asia 1型口蹄疫病毒的前体蛋白基因P1-2A片段和蛋白酶基因3C片段,分别克隆至pMD18-T载体上,通过酶切连接获得质粒pMD18-T-P1-2A-3C。再将P1-2A-3C片段与pUTAL-IL18片段连接起来,构建鸡痘病毒中间转移质粒pUTAL-P1-2A-3C-IL18。通过脂质体转染法,将pUTAL-P1-2A-3C-IL18与鸡痘病毒282E4株共感染染鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblasts,CEF),通过BrdU三次加压筛选,筛选出重组鸡病毒株vUTAL-P1-2A-3C-IL18。经RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定,证明所筛选的1株重组鸡痘病毒在CEF中能正确表达P1-2A-3C基因。本研究为研制安全、高效的亚洲Ⅰ型FMD重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 Asia1口蹄疫病毒 鸡痘病毒载体 P1-2A基因 3C基因 IL-18基因 表达
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国内不同基因型Asia1型口蹄疫病毒RT-PCR检测方法的建立
17
作者 于长勇 金宁一 +11 位作者 王春凤 鲁会军 胡博 刘昊 张丹 牟伟锋 丛艳昭 谷长维 常巧呈 刘存霞 颜雯 叶明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第11期1132-1135,共4页
目的建立口蹄疫病毒(FMDV)Asia1型江苏/05谱系及新疆/03谱系毒株的二联RT-PCR检测方法。方法在比较大量国内外FMDV流行毒株序列的基础上,设计检测不同基因型Asia1型FMDV江苏/05谱系及新疆/03谱系毒株的二联PCR引物,优化单项和二联RT-PC... 目的建立口蹄疫病毒(FMDV)Asia1型江苏/05谱系及新疆/03谱系毒株的二联RT-PCR检测方法。方法在比较大量国内外FMDV流行毒株序列的基础上,设计检测不同基因型Asia1型FMDV江苏/05谱系及新疆/03谱系毒株的二联PCR引物,优化单项和二联RT-PCR反应条件,并进行特异性及相关病毒检测。结果优化的单项和二联RT-PCR特异性均良好,检测9份FMDV,病料的结果与其基因序列测定结果完全一致。结论已建立了FMDVAsia1型江苏/05谱系和新疆/03谱系毒株的二联RT-PCR检测方法,为FMDV的诊断、流行病学调查及疫苗应用奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 Asia1 江苏/05谱系 新疆/03谱系 RT-PCR
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Asia 1型口蹄疫病毒前导蛋白(L^(pro))亚细胞定位
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作者 刘永杰 张克山 +4 位作者 尚佑军 杨顺利 卢国栋 刘湘涛 吴润 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期687-691,共5页
为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)前导蛋白(Lpro)亚细胞定位,利用RT-PCR方法获得L基因,将其定向克隆入pEGFP-N1真核表达载体,经PCR扩增、酶切鉴定及序列测定分析,将鉴定为阳性重组表达质粒命名为pEGFP-L。利用脂质体介导法将pEGFP-L转染B... 为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)前导蛋白(Lpro)亚细胞定位,利用RT-PCR方法获得L基因,将其定向克隆入pEGFP-N1真核表达载体,经PCR扩增、酶切鉴定及序列测定分析,将鉴定为阳性重组表达质粒命名为pEGFP-L。利用脂质体介导法将pEGFP-L转染BHK-21细胞,用荧光显微镜观察和Western blotting方法检测目的基因的表达,经碘化丙啶(PI)染色后在激光共聚焦显微镜下观察Lpro的亚细胞定位。结果表明,成功构建重组表达质粒pEGFP-L;FMDV L基因在BHK-21细胞中得到表达;Western blotting证实表达的Lpro具有反应活性;激光共聚焦显微镜观察发现Lpro在BHK-21细胞中呈弥散性分布。 展开更多
关键词 ASIA1型口蹄疫病毒 前导蛋白 亚细胞定位
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东亚中高纬Heinrich 1事件的表现特征:呼伦湖孢粉记录 被引量:2
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作者 张生瑞 肖举乐 +4 位作者 温锐林 范佳伟 黄云 李曼玥 许清海 《第四纪研究》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期905-915,共11页
Heinrich 1事件是发生于末次冰消期的极端气候突变事件之一,对全球大气环流和陆地生态格局产生了深刻影响.基于对东亚夏季风边缘区最北端呼伦湖 HL08 孔5. 75 m 以上沉积岩芯的 AMS 14C定年技术和 415~275 cm段140个样品的孢粉分析,重... Heinrich 1事件是发生于末次冰消期的极端气候突变事件之一,对全球大气环流和陆地生态格局产生了深刻影响.基于对东亚夏季风边缘区最北端呼伦湖 HL08 孔5. 75 m 以上沉积岩芯的 AMS 14C定年技术和 415~275 cm段140个样品的孢粉分析,重建了东亚中高纬地区呼伦湖21500~13000 cal. a B. P.高分辨率植被变化历史,在此基础上揭示了Heinrich 1事件期间呼伦湖区植被响应过程,明确了Heinrich 1事件在东亚中高纬地区的表现特征.结果显示:呼伦湖区Heinrich 1事件发生于16500~15400 cal. a B. P.,以剧烈降温和显著干旱化为表现特征;事件发生期间湖区周围山地发育亚高山草甸,森林植被稀疏;湖盆区域以藜科为主的荒漠草原显著扩张,区域植被盖度降低、生态环境明显恶化;同时,不同植被类型对Heinrich 1事件的响应存在明显差别,亚高山草甸和蒿属为主的典型草原较藜科为主的荒漠草原和桦属为主的落叶阔叶林响应更为快速、敏感. 展开更多
关键词 Heinrich 1事件 东亚中高纬 呼伦湖 孢粉 区域植被
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胶体金免疫层析试纸条快速定量检测Asia 1型口蹄疫病毒含量方法的建立 被引量:3
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作者 朱玉婵 林密 +2 位作者 孙燕燕 孙继国 蒋韬 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1302-1308,共7页
采用胶体金为标记物制备了快速定量检测Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)免疫层析试纸条,拟合检测曲线,用金标分析仪进行定量检测。应用实验室与田间的样品检测证实其有较好的敏感性和特异性。对Asia 1型FM—DV抗原定量检测可以在15 min内完成... 采用胶体金为标记物制备了快速定量检测Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)免疫层析试纸条,拟合检测曲线,用金标分析仪进行定量检测。应用实验室与田间的样品检测证实其有较好的敏感性和特异性。对Asia 1型FM—DV抗原定量检测可以在15 min内完成,灵敏度为0.78μg·mL^(-1),线性范围在0.78~7.84μg·mL^(-1);变异系数在0.2%~5%;回收率在91%~102%,证明定量检测、准确度高。结果表明,本研究建立的定量检测Asia 1型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析方法能简便、廉价、快速、灵敏、特异、准确地定量检测样品中的Asia 1型口蹄疫病毒。 展开更多
关键词 ASIA 1型口蹄疫病毒 胶体金 免疫层析试纸条 定量检测
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