为建立花生致敏蛋白Ara h 2双抗夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,本研究基于所制备的抗体,采用双抗体夹心检测模式,以Ara h 2鼠源单克隆抗体作为捕获抗体、兔源多克隆抗体作为检测抗体,并通过棋盘法优化抗体工作浓度,对该方法的灵...为建立花生致敏蛋白Ara h 2双抗夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,本研究基于所制备的抗体,采用双抗体夹心检测模式,以Ara h 2鼠源单克隆抗体作为捕获抗体、兔源多克隆抗体作为检测抗体,并通过棋盘法优化抗体工作浓度,对该方法的灵敏度、准确度、精密度和特异性进行鉴定。结果表明,建立的双抗夹心ELISA检测方法对Ara h 2的检出限为5.04 ng·mL^(-1),线性范围为15.63~1 000 ng·mL^(-1),添加回收率为80.12%~96.03%,批内和批间变异系数均小于10%,且特异性良好、与其他常见食物过敏原无交叉反应。本研究可为致敏蛋白Ara h 2检测提供一种快速高效的方法。展开更多
旨在为预防花生过敏提供新的思路和方法,考察了不同烘烤温度、烘烤时间和样品量(平铺于4 cm×4 cm锡箔纸)对Ara h 3抗原性的影响,利用正交试验得到Ara h 3抗原性增强程度最高的烘烤处理条件,并采用双缩脲法、紫外光谱、傅里叶变换...旨在为预防花生过敏提供新的思路和方法,考察了不同烘烤温度、烘烤时间和样品量(平铺于4 cm×4 cm锡箔纸)对Ara h 3抗原性的影响,利用正交试验得到Ara h 3抗原性增强程度最高的烘烤处理条件,并采用双缩脲法、紫外光谱、傅里叶变换红外光谱和荧光光谱探究烘烤对Ara h 3溶解度、游离巯基含量、二级结构和疏水性的影响。结果表明:烘烤后Ara h 3抗原性增强,且随烘烤温度升高和烘烤时间延长Ara h 3的抗原性呈先增强后减弱的趋势,样品量在70~90 mg时抗原性相差不大;在烘烤温度140℃、烘烤时间20 min,样品量80 mg时,抗原性增强程度最高,达到34.12%;烘烤后Ara h 3溶解度和游离巯基含量显著降低,蛋白质发生解折叠,无规卷曲含量增加,蛋白质分子趋于无序状态,同时,蛋白质部分肽链舒展,疏水基团暴露,外源荧光强度增强。综上,烘烤处理可以改变Ara h 3的结构,使其抗原表位暴露或者产生新的抗原表位,显著增强Ara h 3的抗原性。花生加工过程中应规避致使花生抗原性增强的烘烤条件,以降低花生致敏性。展开更多
花生过敏蛋白Ara h 3广泛存在于各类花生制品中,少量摄入即可引发过敏反应,严重威胁花生过敏患者的健康。精准地识别Ara h 3便于开展后续免疫学检测,因此,制备高纯度、高特异性的抗体显得尤为重要。以花生脱脂粉为原料,通过HiTrap Q HP...花生过敏蛋白Ara h 3广泛存在于各类花生制品中,少量摄入即可引发过敏反应,严重威胁花生过敏患者的健康。精准地识别Ara h 3便于开展后续免疫学检测,因此,制备高纯度、高特异性的抗体显得尤为重要。以花生脱脂粉为原料,通过HiTrap Q HP阴离子交换层析柱和HiLoad Superdex 200 pg制备级分子筛层析柱,制备高纯度的花生致敏蛋白Ara h 3,将其与CNBr-activated SepharoseTM 4B进行偶联,利用不同洗脱液对血清样品中的非特异性及特异性物质进行分离,制备高纯度、高特异性的抗Ara h 3多克隆抗体。结果表明:Gly-HCl洗脱的蛋白质量浓度为0.6 mg/mL;SDS-PAGE分析显示,多克隆抗体中的非特异性物质已被有效去除;免疫印迹和ELISA试验证明,纯化后的抗体仍具有较高的特异性,其效价达到1∶51200。上述结果表明抗体成功纯化,为花生过敏原Ara h 3的检测研究奠定了基础。展开更多
Ara h 2是花生主要过敏原之一,为开发食物中Ara h 2过敏原成分的快速检测方法,减少因误食导致花生过敏事件的发生,该研究采用鼠源单克隆抗体作为捕获抗体、兔源多克隆抗体作为检测抗体,通过棋盘法优化抗体工作浓度,建立了一种检测花生...Ara h 2是花生主要过敏原之一,为开发食物中Ara h 2过敏原成分的快速检测方法,减少因误食导致花生过敏事件的发生,该研究采用鼠源单克隆抗体作为捕获抗体、兔源多克隆抗体作为检测抗体,通过棋盘法优化抗体工作浓度,建立了一种检测花生过敏原Ara h 2的间接双抗夹心化学发光酶免疫分析法,并对该方法的灵敏度、准确度、精密度和特异性进行评价。该方法的检出限为1.085 ng/mL,线性范围为3.12~200 ng/mL,添加回收率为78.30%~94.39%,批内和批间变异系数均小于10%,且特异性良好,与其他常见食物过敏原无交叉反应。该方法与相同抗体所建立的间接双抗夹心酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)方法相比,在灵敏度上表现出一定优势。该研究开发的化学发光酶免疫分析法可对花生食品生产过程中和消费前的Ara h 2过敏原成分检测提供可靠的技术支持。展开更多
This year marks the 20th anniversary of the China-Arab States Cooperation Forum(CASCF),and the tenth Ministerial Meeting of the CASCF was held in Beijing at the end of May,ushering in another highlight for China-Arab ...This year marks the 20th anniversary of the China-Arab States Cooperation Forum(CASCF),and the tenth Ministerial Meeting of the CASCF was held in Beijing at the end of May,ushering in another highlight for China-Arab cooperation.展开更多
The year 2024 marks the 40th anniversary of the establishment of diplomatic relations between China and the United Arab Emirates.The first performance of the National Ballet of China in the United Arab Emirates not on...The year 2024 marks the 40th anniversary of the establishment of diplomatic relations between China and the United Arab Emirates.The first performance of the National Ballet of China in the United Arab Emirates not only conveys sincere friendship to local people,but also strengthens the bond for cultural and artistic exchanges between the two peoples.展开更多
为高效分离纯化花生过敏原Ara h 6,通过脱脂、蛋白浸提、阴离子交换层析分离得到目的蛋白,并用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/MS)及免疫印迹技术(Western blotting)对其...为高效分离纯化花生过敏原Ara h 6,通过脱脂、蛋白浸提、阴离子交换层析分离得到目的蛋白,并用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/MS)及免疫印迹技术(Western blotting)对其进行鉴定。结果表明,该蛋白为花生过敏原Ara h 6,其分子质量约为15kD,纯度大于95%,得率为22.5%。该方法简单、高效,可为花生过敏的进一步研究提供实验材料。展开更多
目的:构建经序列重组的Ara h 2表达载体,表达并纯化该蛋白,鉴定其低致敏原性。方法:根据已鉴定的Ara h 2 IgE抗原表位,利用基因工程技术将Ara h 2基因进行合理的组合,并将其序列进行合成,再将合成后的基因连入原核表达载体pET-32a(+)上...目的:构建经序列重组的Ara h 2表达载体,表达并纯化该蛋白,鉴定其低致敏原性。方法:根据已鉴定的Ara h 2 IgE抗原表位,利用基因工程技术将Ara h 2基因进行合理的组合,并将其序列进行合成,再将合成后的基因连入原核表达载体pET-32a(+)上,然后转入Origami宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白;Western blotting和ELISA鉴定该重组蛋白的低致敏原性。结果:测序结果表明合成后的序列成功转入原核表达载体pET-32a(+)上。重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符。Western blotting和ELISA结果均表明通过基因工程改造的Ara h 2蛋白(S-Ara h 2)与重组的Ara h 2(R-Ara h 2)蛋白相比,结合花生过敏病人混合血清中IgE显著降低。结论:成功构建了经序列重组的Ara h 2表达载体,该基因表达的重组蛋白具有良好的低致敏原性,这将会为花生过敏患者的脱敏治疗提供了新的安全疫苗基础。展开更多
从花生种子中分离纯化花生过敏原Ara h 2,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、圆二色谱(CD)、ANS荧光探针及紫外可见(UV-Vis)光谱等方法,系统研究热加工对Ara h 2抗原性和结构的影响。结果表明:Ara h 2蛋白经55或70℃处理后其抗原性略有升高,...从花生种子中分离纯化花生过敏原Ara h 2,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、圆二色谱(CD)、ANS荧光探针及紫外可见(UV-Vis)光谱等方法,系统研究热加工对Ara h 2抗原性和结构的影响。结果表明:Ara h 2蛋白经55或70℃处理后其抗原性略有升高,经85,100或115℃处理后,其抗原性显著降低,且随着温度和时间的增加其抗原性均不断降低。CD色谱分析表明,Ara h 2经热处理后其二级结构发生变化;ANS荧光探针光谱显示,不同的热处理均导致Ara h 2表面疏水性增加。紫外光谱显示,不同温度对Ara h 2处理30 min后(除55℃外),其紫外吸收值均升高。Ara h 2经100℃处理不同时间后,其紫外吸收值均有增加。由此推断,花生过敏原Ara h 2的构象改变导致了其抗原性的降低。展开更多
目的:克隆花生主要过敏原Ara h 8基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫活性。方法:提取花生总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆花生Ara h 8基因;将反转录的基因连入pMD19-T Simple Vector,提质粒酶切鉴定并测序。将测序正确的片段连入原核表...目的:克隆花生主要过敏原Ara h 8基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫活性。方法:提取花生总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆花生Ara h 8基因;将反转录的基因连入pMD19-T Simple Vector,提质粒酶切鉴定并测序。将测序正确的片段连入原核表达载体pET-32a(+)上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白Ara h 8;Western blot检测该重组蛋白的免疫原性。结果:测序结果表明克隆的花生Ara h 8基因片段全长为474 bp,编码157个氨基酸,与GenBank中蛋白序列100%相同。重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符。Western blot结果表明该蛋白与花生过敏病人混合血清中IgE结合,具有免疫原性。结论:成功克隆并表达纯化了花生过敏原Ara h 8,该基因表达的重组蛋白具有良好的免疫原性。展开更多
文摘为建立花生致敏蛋白Ara h 2双抗夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,本研究基于所制备的抗体,采用双抗体夹心检测模式,以Ara h 2鼠源单克隆抗体作为捕获抗体、兔源多克隆抗体作为检测抗体,并通过棋盘法优化抗体工作浓度,对该方法的灵敏度、准确度、精密度和特异性进行鉴定。结果表明,建立的双抗夹心ELISA检测方法对Ara h 2的检出限为5.04 ng·mL^(-1),线性范围为15.63~1 000 ng·mL^(-1),添加回收率为80.12%~96.03%,批内和批间变异系数均小于10%,且特异性良好、与其他常见食物过敏原无交叉反应。本研究可为致敏蛋白Ara h 2检测提供一种快速高效的方法。
文摘旨在为预防花生过敏提供新的思路和方法,考察了不同烘烤温度、烘烤时间和样品量(平铺于4 cm×4 cm锡箔纸)对Ara h 3抗原性的影响,利用正交试验得到Ara h 3抗原性增强程度最高的烘烤处理条件,并采用双缩脲法、紫外光谱、傅里叶变换红外光谱和荧光光谱探究烘烤对Ara h 3溶解度、游离巯基含量、二级结构和疏水性的影响。结果表明:烘烤后Ara h 3抗原性增强,且随烘烤温度升高和烘烤时间延长Ara h 3的抗原性呈先增强后减弱的趋势,样品量在70~90 mg时抗原性相差不大;在烘烤温度140℃、烘烤时间20 min,样品量80 mg时,抗原性增强程度最高,达到34.12%;烘烤后Ara h 3溶解度和游离巯基含量显著降低,蛋白质发生解折叠,无规卷曲含量增加,蛋白质分子趋于无序状态,同时,蛋白质部分肽链舒展,疏水基团暴露,外源荧光强度增强。综上,烘烤处理可以改变Ara h 3的结构,使其抗原表位暴露或者产生新的抗原表位,显著增强Ara h 3的抗原性。花生加工过程中应规避致使花生抗原性增强的烘烤条件,以降低花生致敏性。
文摘花生过敏蛋白Ara h 3广泛存在于各类花生制品中,少量摄入即可引发过敏反应,严重威胁花生过敏患者的健康。精准地识别Ara h 3便于开展后续免疫学检测,因此,制备高纯度、高特异性的抗体显得尤为重要。以花生脱脂粉为原料,通过HiTrap Q HP阴离子交换层析柱和HiLoad Superdex 200 pg制备级分子筛层析柱,制备高纯度的花生致敏蛋白Ara h 3,将其与CNBr-activated SepharoseTM 4B进行偶联,利用不同洗脱液对血清样品中的非特异性及特异性物质进行分离,制备高纯度、高特异性的抗Ara h 3多克隆抗体。结果表明:Gly-HCl洗脱的蛋白质量浓度为0.6 mg/mL;SDS-PAGE分析显示,多克隆抗体中的非特异性物质已被有效去除;免疫印迹和ELISA试验证明,纯化后的抗体仍具有较高的特异性,其效价达到1∶51200。上述结果表明抗体成功纯化,为花生过敏原Ara h 3的检测研究奠定了基础。
文摘Ara h 2是花生主要过敏原之一,为开发食物中Ara h 2过敏原成分的快速检测方法,减少因误食导致花生过敏事件的发生,该研究采用鼠源单克隆抗体作为捕获抗体、兔源多克隆抗体作为检测抗体,通过棋盘法优化抗体工作浓度,建立了一种检测花生过敏原Ara h 2的间接双抗夹心化学发光酶免疫分析法,并对该方法的灵敏度、准确度、精密度和特异性进行评价。该方法的检出限为1.085 ng/mL,线性范围为3.12~200 ng/mL,添加回收率为78.30%~94.39%,批内和批间变异系数均小于10%,且特异性良好,与其他常见食物过敏原无交叉反应。该方法与相同抗体所建立的间接双抗夹心酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)方法相比,在灵敏度上表现出一定优势。该研究开发的化学发光酶免疫分析法可对花生食品生产过程中和消费前的Ara h 2过敏原成分检测提供可靠的技术支持。
文摘This year marks the 20th anniversary of the China-Arab States Cooperation Forum(CASCF),and the tenth Ministerial Meeting of the CASCF was held in Beijing at the end of May,ushering in another highlight for China-Arab cooperation.
文摘The year 2024 marks the 40th anniversary of the establishment of diplomatic relations between China and the United Arab Emirates.The first performance of the National Ballet of China in the United Arab Emirates not only conveys sincere friendship to local people,but also strengthens the bond for cultural and artistic exchanges between the two peoples.
文摘为高效分离纯化花生过敏原Ara h 6,通过脱脂、蛋白浸提、阴离子交换层析分离得到目的蛋白,并用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/MS)及免疫印迹技术(Western blotting)对其进行鉴定。结果表明,该蛋白为花生过敏原Ara h 6,其分子质量约为15kD,纯度大于95%,得率为22.5%。该方法简单、高效,可为花生过敏的进一步研究提供实验材料。
文摘目的:构建经序列重组的Ara h 2表达载体,表达并纯化该蛋白,鉴定其低致敏原性。方法:根据已鉴定的Ara h 2 IgE抗原表位,利用基因工程技术将Ara h 2基因进行合理的组合,并将其序列进行合成,再将合成后的基因连入原核表达载体pET-32a(+)上,然后转入Origami宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白;Western blotting和ELISA鉴定该重组蛋白的低致敏原性。结果:测序结果表明合成后的序列成功转入原核表达载体pET-32a(+)上。重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符。Western blotting和ELISA结果均表明通过基因工程改造的Ara h 2蛋白(S-Ara h 2)与重组的Ara h 2(R-Ara h 2)蛋白相比,结合花生过敏病人混合血清中IgE显著降低。结论:成功构建了经序列重组的Ara h 2表达载体,该基因表达的重组蛋白具有良好的低致敏原性,这将会为花生过敏患者的脱敏治疗提供了新的安全疫苗基础。
文摘从花生种子中分离纯化花生过敏原Ara h 2,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、圆二色谱(CD)、ANS荧光探针及紫外可见(UV-Vis)光谱等方法,系统研究热加工对Ara h 2抗原性和结构的影响。结果表明:Ara h 2蛋白经55或70℃处理后其抗原性略有升高,经85,100或115℃处理后,其抗原性显著降低,且随着温度和时间的增加其抗原性均不断降低。CD色谱分析表明,Ara h 2经热处理后其二级结构发生变化;ANS荧光探针光谱显示,不同的热处理均导致Ara h 2表面疏水性增加。紫外光谱显示,不同温度对Ara h 2处理30 min后(除55℃外),其紫外吸收值均升高。Ara h 2经100℃处理不同时间后,其紫外吸收值均有增加。由此推断,花生过敏原Ara h 2的构象改变导致了其抗原性的降低。
文摘目的:克隆花生主要过敏原Ara h 8基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫活性。方法:提取花生总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆花生Ara h 8基因;将反转录的基因连入pMD19-T Simple Vector,提质粒酶切鉴定并测序。将测序正确的片段连入原核表达载体pET-32a(+)上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白Ara h 8;Western blot检测该重组蛋白的免疫原性。结果:测序结果表明克隆的花生Ara h 8基因片段全长为474 bp,编码157个氨基酸,与GenBank中蛋白序列100%相同。重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符。Western blot结果表明该蛋白与花生过敏病人混合血清中IgE结合,具有免疫原性。结论:成功克隆并表达纯化了花生过敏原Ara h 8,该基因表达的重组蛋白具有良好的免疫原性。
