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Identification and genetic characterization of Contracaecum sp.(Nematoda:Anisakidae)from China
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作者 Qingxun ZHANG Meng MENG +9 位作者 Chengmei HUANG Shengyong FENG Jie LIU Yan TANG Yu FAN Guohui YUAN Shuyi HAN Jing LUO Baohua ZHAO Hongxuan HE 《Integrative Zoology》 SCIE CSCD 2021年第6期929-938,共10页
Contracaecum species are economically important fish-borne larval nematodes with zoonotic significance.In June 2019,more than 100 piscivorous birds died in their habitats close to the Wild Duck Lake,located in Yanqing... Contracaecum species are economically important fish-borne larval nematodes with zoonotic significance.In June 2019,more than 100 piscivorous birds died in their habitats close to the Wild Duck Lake,located in Yanqing,northwest of Beijing,China.Post-mortem examination of Black Night Herons(Nycticorax)revealed the presence of numerous anisakid nematodes in the proventriculus.Recovered nematodes were identified as Contracaecum sp.based on morphological description.Phylogenetic analysis of the mitochondrial(mt)genome and the ITS gene showed that sequences of Contracaecum sp.Beijing isolates were grouped into a new individual cluster.Furthermore,the parasite was successfully isolated from fresh dead birds,feces of piscivorous birds,and fish and prevalence ranged from 8.0%to 81.8%.Consequently,our study demonstrated Contracaecum sp.infections in different sources from China,which might constitute a threat to wildlife,aquaculture,and public health. 展开更多
关键词 anisakid EPIDEMIOLOGY MORPHOLOGY phylogenetic analysis
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荧光定量PCR检测异尖线虫类病原体 被引量:10
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作者 张少雷 王何兰 +3 位作者 刘江 倪芳 徐世三 罗大民 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期194-199,共6页
目的运用荧光定量PCR法检测异尖线虫类病原体。方法于鱼类内脏中检获6种异尖线虫类幼虫:抹香鲸异尖线虫、简单异尖线虫、内弯对盲囊线虫、带鱼针蛔线虫、灰海鳗对盲囊线虫和台湾海峡鱼类中一优势种对盲囊线虫。提取各虫体DNA,PCR扩增IT... 目的运用荧光定量PCR法检测异尖线虫类病原体。方法于鱼类内脏中检获6种异尖线虫类幼虫:抹香鲸异尖线虫、简单异尖线虫、内弯对盲囊线虫、带鱼针蛔线虫、灰海鳗对盲囊线虫和台湾海峡鱼类中一优势种对盲囊线虫。提取各虫体DNA,PCR扩增ITS-2序列,测序并进行数据库比对。依据测序结果设计特异引物,常规PCR检验引物特异性。将ITS-2序列扩增产物回收、纯化后经T克隆转入大肠埃希菌DH5α,提取重组质粒,鉴定后作为标准品模板建立荧光定量PCR标准曲线,并做敏感性和重复性试验。结果构建的荧光定量PCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数均在0.998以上。重复性实验中,6种虫体对应的变异系数(cv)最小值为0.18%,最大值为2.80%,试验间平均cv最小值为0.55%,最大值为1.94%,无非特异性扩增,溶解曲线的特异性和重复性良好。灵敏度实验中,可检出的最低模板浓度为1×102拷贝/μl,比常规PCR灵敏度高100倍。结论初步建立了SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测异尖线虫类病原体的方法 。 展开更多
关键词 异尖线虫病 异尖线虫 ITS-2序列 荧光定量PCR SYBRGreenⅠ
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进境海鱼异尖线虫幼虫感染情况调查 被引量:14
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作者 葛卜峰 陶建平 李建 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第7期130-133,共4页
对来自15个国家和地区的78批次、31种、共255尾海鱼进行了异尖线虫幼虫的检验,100尾海鱼检出异尖线虫幼虫感染,总感染率为39.2%(100/255)。16种海鱼检出异尖线虫幼虫,占所检鱼种的51.6%(16/31)。共检获异尖线虫幼虫1 554条,平均感染强度... 对来自15个国家和地区的78批次、31种、共255尾海鱼进行了异尖线虫幼虫的检验,100尾海鱼检出异尖线虫幼虫感染,总感染率为39.2%(100/255)。16种海鱼检出异尖线虫幼虫,占所检鱼种的51.6%(16/31)。共检获异尖线虫幼虫1 554条,平均感染强度为15.5条/尾。在体重≤100 g的海鱼中感染率最高,在体重为300 g^400 g的海鱼中感染强度最大。检出部位主要是胃及胃盲囊表面、肠、肠盲囊及肠系膜。来自越南、新加坡、韩国的海鱼检出率较高,超过50%,来自秘鲁等7个国家的海鱼中未检出异尖线虫幼虫。 展开更多
关键词 异尖线虫幼虫 感染率 调查 海鱼
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海产鱼类中异尖线虫酶消化检测技术的研究与应用 被引量:4
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作者 许旭 黄维义 +4 位作者 隋建新 林洪 鲜均章 励建荣 曹立民 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期105-110,共6页
以3种海鱼(牙鲆、狭鳕、鲱鱼)为样本,针对海产品中主要的致病性寄生虫-异尖线虫,开展了酶消化检测技术的研究。根据鱼肉消化前后干物质的质量变化设计了胃蛋白酶消化效率的计算方法,并按照鱼肉∶消化液=1∶10(g/mL)的反应比例,分别确定... 以3种海鱼(牙鲆、狭鳕、鲱鱼)为样本,针对海产品中主要的致病性寄生虫-异尖线虫,开展了酶消化检测技术的研究。根据鱼肉消化前后干物质的质量变化设计了胃蛋白酶消化效率的计算方法,并按照鱼肉∶消化液=1∶10(g/mL)的反应比例,分别确定了酶水解鱼肉的最佳条件为:初始pH值为1.1,温度为37℃,酶活力为8 U/mL左右;消化后所得的虫体采用多重PCR方法替代传统的形态学观察进行种属鉴定,从而初步建立了基于酶水解-多重PCR的异尖线虫的酶消化检测体系。实际样本检测表明,该技术可以较为准确、快速地用于海产鱼类中简单异尖线虫(Anisakis simplex)和伪地新线虫(Pseudoterranova decipiens)的确证性检测。 展开更多
关键词 异尖线虫 海产鱼类 检测 酶消化 多重PCR
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台湾海峡异尖线虫病病原线虫幼虫的rDNA序列分析 被引量:1
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作者 张少雷 徐世三 罗大民 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期660-664,共5页
目的分析台湾海峡异尖线虫病潜在病原线虫的rDNA序列,为建立病原分子生物学鉴别提供依据。方法剖检台湾海峡常见鱼类的寄生线虫幼虫,镜检分类。提取虫体DNA、用通用引物对rDNA进行PCR扩增、克隆、双向测序及BLAST比对。结果获得6条来自... 目的分析台湾海峡异尖线虫病潜在病原线虫的rDNA序列,为建立病原分子生物学鉴别提供依据。方法剖检台湾海峡常见鱼类的寄生线虫幼虫,镜检分类。提取虫体DNA、用通用引物对rDNA进行PCR扩增、克隆、双向测序及BLAST比对。结果获得6条来自6种线虫幼虫的rDNA序列,其中的3种在GenBank数据库中没有发现匹配的序列;证实在台湾海峡分布的灰海鳗对盲囊线虫成虫和疑似其第三期幼虫实属同种;构建了基于ITS-2的序列间内部相似性程度关系树。结论异尖线虫病原幼虫所具有的分子生物学鉴别信息位点主要集中在ITS-2间隔区。 展开更多
关键词 异尖线虫病 异尖线虫 RDNA 序列分析
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基于多重实时荧光PCR技术快速检测海产品异尖线虫 被引量:5
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作者 黄姝玲 《广东海洋大学学报》 CAS 北大核心 2022年第6期122-129,共8页
【目的】构建简单异尖线虫(Anisakis simplex)、费氏宫脂线虫(Hysterothylacium fabri)、内弯宫脂线虫(Hysterothylacium aduncum)、拟地新线虫(Pseudoterranova decipiens)、典型异尖线虫(Anisakis typica)、带鱼针蛔线虫(Raphidascari... 【目的】构建简单异尖线虫(Anisakis simplex)、费氏宫脂线虫(Hysterothylacium fabri)、内弯宫脂线虫(Hysterothylacium aduncum)、拟地新线虫(Pseudoterranova decipiens)、典型异尖线虫(Anisakis typica)、带鱼针蛔线虫(Raphidascaris trichiuri)、厦门宫脂线虫(Hysterothylacium amoyense)和中华宫脂线虫(Hysterothylacium sinense)的快速检测方法,实现对以上8种异尖线虫的高通量检测及准确分型。【方法】采集8种异尖线虫核酸进行凝胶电泳,测序并进行序列对比,设计引物和TaqMan荧光探针;通过优化体系及退火温度,建立多重实时荧光PCR检测体系,并添加海产品核酸背景验证其特异性和灵敏度。【结果】建立了基于多重实时荧光PCR技术针对海产品中异尖线虫的快速检测鉴定方法,可在一个反应体系里同时检测鉴定4种异尖线虫,双通道反应体系可一次性检测鉴定8种异尖线虫。体系中,引物和探针的终浓度分别为0.60、0.20μmol/L,DNA灵敏度为103拷贝/mL;对带鱼(Trichiurus lepturus)、鳕鱼(Gadus)、舟山宫脂线虫(Hysterothylacium zhoushanensis)、棘颚口线虫(Gnathostoma spinigerum)均无荧光信号;针对等量混合的4种异尖线虫模拟样本均可检出,检出限为1.0%。【结论】建立的海产品异尖线虫多重实时荧光PCR快速检测方法操作简便、灵敏度高、特异性强、重复性好,可应用于日常食品检验和异尖线虫分型鉴别研究。 展开更多
关键词 异尖线虫 海产品 快速检测鉴定 多重实时荧光PCR
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进境太平洋鳕鱼寄生的异尖科线虫rDNA-ITS序列的PCR扩增及分析 被引量:2
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作者 李孝军 陈宇 +1 位作者 唐行忠 洪青林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第6期90-92,共3页
以日本进境的冻太平洋鳕鱼体内分离出的异尖科线虫为研究对象,采用寄生虫通用引物NC5和NC2扩增其核糖体DNA(rDNA)的内转录间隔区(ITS)序列,进行克隆、转化、测序和序列分析,并对样品进行分子鉴定。结果表明,扩增的异尖科线虫样品的ITS... 以日本进境的冻太平洋鳕鱼体内分离出的异尖科线虫为研究对象,采用寄生虫通用引物NC5和NC2扩增其核糖体DNA(rDNA)的内转录间隔区(ITS)序列,进行克隆、转化、测序和序列分析,并对样品进行分子鉴定。结果表明,扩增的异尖科线虫样品的ITS序列片段大小为906bp,包含部分的18S、28S及全部的ITS1(353bp)、5.8S(157bp)和ITS2(299bp)序列,ITS1和ITS2序列与GenBank登录的伪新地蛔线虫(Pseudoterranova decipiens)同源性均为在99.7%以上,与其他线虫的相似性较低。由ITS1和ITS2序列构建的系统进化树可知,从鳕鱼中分离到的线虫ITS1和ITS2均与伪新地蛔线虫处于同一分支。本研究结果为异尖科线虫种属的确定及进一步的分子生物学研究奠定基础。 展开更多
关键词 异尖科线虫 内转录间隔区 PCR技术 序列分析
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