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基于AncBE4max系统精准编辑绵羊成纤维细胞FGF18基因
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作者 蒙亚琦 王嵩 +7 位作者 杨鹏 于航 姚旭东 郭延华 唐红 张译元 王立民 周平 《生物技术通报》 北大核心 2025年第10期313-320,共8页
【目的】成纤维细胞生长因子18(FGF18)作为毛囊周期的关键调控分子,对毛发生长、毛囊发育具有核心调控作用,而在绵羊等家畜中,其调控羊毛生长的功能与分子机制尚未明晰。基于此,建立一种精准的绵羊成纤维细胞生长因子18(FGF18)单碱基突... 【目的】成纤维细胞生长因子18(FGF18)作为毛囊周期的关键调控分子,对毛发生长、毛囊发育具有核心调控作用,而在绵羊等家畜中,其调控羊毛生长的功能与分子机制尚未明晰。基于此,建立一种精准的绵羊成纤维细胞生长因子18(FGF18)单碱基突变系统,利用单碱基编辑系统对绵羊FGF18基因进行定点编辑,探索该技术在农牧业基因改良中的应用潜力,为未来提高羊毛产量提供理论依据。【方法】根据绵羊成纤维细胞FGF18基因的第3、4外显子序列设计并合成了3个单导向RNA(single guide,sgRNA)及其互补链,将退火连接形成的sgRNA分别克隆至pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin表达质粒中。通过电转染方式,将含有特异性sgRNA的U6表达质粒与AncBE4max质粒共转染至绵羊成纤维细胞,转染72 h后对细胞进行测序验证。【结果】PCR扩增的FGF18基因片段经T-A克隆后,测序结果表明在FGF18基因的第3、第4外显子内成功引入了终止密码子。通过筛选和鉴定,成功获得了2个可有效定点编辑绵羊成纤维细胞FGF18基因的sgRNA(sg1和sg3),其编辑效率分别为13.8%和36.4%。【结论】建立的基于AncBE4max系统的绵羊成纤维细胞FGF18基因单碱基编辑系统,可实现外显子区域终止密码子的精准引入,并筛选出sgRNA-sg1和sgRNA-sg3两个有效编辑靶点。 展开更多
关键词 ancbe4max 成纤维细胞生长因子18 基因编辑 单碱基编辑 绵羊成纤维细胞
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