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活血消癥益气方对转化生长因子β1诱导的AML12细胞凋亡的影响及其机制研究 被引量:1
1
作者 吴伟斌 张贵锋 +2 位作者 李力强 吴晓玲 杨坚 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1276-1283,共8页
目的研究活血消癥益气方对体外转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的小鼠肝实质细胞AML12凋亡的影响及其可能的机制。方法利用TGF-β1(5 ng·mL^(-1))诱导AML12细胞建立凋亡模型(诱导24 h)及氧化应激模型(诱导4 h),设置空白对照组、模型... 目的研究活血消癥益气方对体外转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的小鼠肝实质细胞AML12凋亡的影响及其可能的机制。方法利用TGF-β1(5 ng·mL^(-1))诱导AML12细胞建立凋亡模型(诱导24 h)及氧化应激模型(诱导4 h),设置空白对照组、模型对照组、不同剂量活血消癥益气方(0.1、0.2、0.5 g·L^(-1))组。采用CCK-8法检测药物对细胞活力的影响,Hoechst 33342法及Annexin V-FITC法检测药物对凋亡的影响,DCFH-DA法检测药物对细胞内活性氧含量的影响,蛋白印迹法检测药物对Bcl-2、Bax、Caspase-3及Nrf2蛋白表达量的影响。结果与空白对照组比较,凋亡模型对照组细胞活力下降,凋亡细胞占比及出现核固缩细胞比例等明显增加(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2明显下调,同时Bax及Capase-3等凋亡蛋白明显上调(P<0.05);且氧化应激模型对照组细胞内活性氧含量明显升高(P<0.05),细胞内Nrf2表达增加但核转位减少(P<0.05)。与凋亡模型组比较,活血消癥益气方各剂量组可明显恢复细胞活力,减少凋亡细胞占比及核固缩细胞比例(P<0.05);同时上调Bcl-2表达,下调Bax及Capase-3的表达(P<0.05)。与氧化应激模型组比较,活血消癥益气方各剂量组可明显减少细胞内活性氧的含量(P<0.05),增加Nrf2蛋白的表达及促进其核转位(P<0.05)。结论活血消癥益气方可逆转TGF-β1诱导的肝细胞凋亡,其机制可能与调控线粒体凋亡途径及Nrf2通路功能有关。 展开更多
关键词 活血消癥益气方 转化生长因子β1(TGF-β1) 肝实质细胞aml12 凋亡 氧化应激
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姜半夏配方颗粒与饮片煎剂对小鼠AML12肝细胞毒性的比较研究 被引量:4
2
作者 韩月丹 毛培江 +5 位作者 业康 金捷 黄晶晶 栾会玲 金祖汉 王志安 《浙江中医杂志》 2020年第11期834-835,共2页
目的:比较相同生药量浓度下姜半夏配方颗粒与饮片煎剂对小鼠AML12肝细胞毒性的差异。方法:以不同浓度姜半夏配方颗粒与同批次原料饮片煎剂作用于小鼠AML12肝细胞,MTT法检测细胞活性;Hoechest33258荧光染色法检测细胞核形态并半定量统计... 目的:比较相同生药量浓度下姜半夏配方颗粒与饮片煎剂对小鼠AML12肝细胞毒性的差异。方法:以不同浓度姜半夏配方颗粒与同批次原料饮片煎剂作用于小鼠AML12肝细胞,MTT法检测细胞活性;Hoechest33258荧光染色法检测细胞核形态并半定量统计分析,比较两者毒性差异。结果:小鼠AML12肝细胞在姜半夏饮片煎剂的干预下,较配方颗粒组有显著性差异;Hoechst33258荧光染色下可见细胞核固缩碎裂等,相同浓度下饮片煎剂组荧光强度强于配方颗粒组(P<0.05)。结论:姜半夏配方颗粒与其饮片煎剂均对AML12肝细胞有一定的毒性,且在相同浓度下,姜半夏配方颗粒对细胞的毒性较其饮片煎剂小。 展开更多
关键词 姜半夏 配方颗粒 饮片煎剂 毒性 aml12 肝细胞 小鼠
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亚砷酸钠对小鼠肝细胞AML12损伤的作用机制 被引量:2
3
作者 赵哲仪 王正蓉 +3 位作者 方兴艳 王甜 罗昭逊 谢婷婷 《贵州医科大学学报》 CAS 2022年第1期1-6,共6页
目的探讨亚砷酸钠(NaAsO_(2))对小鼠肝细胞AML12损伤作用的机制。方法取对数生长期的小鼠正常肝细胞AML12,设置6个NaAsO_(2)浓度[0(对照)、10、15、20、25及30μmol/L]组,分别用相应浓度的NaAsO_(2)处理AML12细胞24 h;采用化学比色法和... 目的探讨亚砷酸钠(NaAsO_(2))对小鼠肝细胞AML12损伤作用的机制。方法取对数生长期的小鼠正常肝细胞AML12,设置6个NaAsO_(2)浓度[0(对照)、10、15、20、25及30μmol/L]组,分别用相应浓度的NaAsO_(2)处理AML12细胞24 h;采用化学比色法和油红O染色法检测各组AML12细胞内丙二醛(MDA)和脂质含量水平,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法分别检测各组小鼠AML12细胞内法尼醇X受体(FXR)、小异二聚体伴侣(SHP)mRNA和FXR、SHP、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达。结果与对照组相比,10-30 μmol/L NaAsO_(2)组小鼠AML细胞内MDA含量升高、但FXR和SHP mRNA及FXR蛋白相对表达量下降(P<0.05),2-33 pmol/L NaAsO_(2)组小鼠AML细胞内脂滴含量增加(P<0.05),20-30 μmol/L NaAsO_(2)组小鼠AML细胞内SHP蛋白相对表达量降低(P<0.05),25-30 μmol/L NaAsO_(2)组小鼠AML细胞内BAX蛋白相对表达量增高(P<0.05)。结论NaAsO_(2)可致小鼠肝细胞AML12损伤,其机制可能与FXR-SHP信号通路的失调有关。 展开更多
关键词 细胞凋亡 亚砷酸钠 小鼠肝细胞aml12 氧化应激 脂肪变性 法尼醇X受体 小异二聚体伴侣
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虾青素保护AFB1诱导AML12细胞损伤的最适浓度筛选 被引量:1
4
作者 任欣慧 姚强 +4 位作者 黄庆年 朱彦彬 王琳 张月莹 陈志宝 《黑龙江八一农垦大学学报》 2022年第2期88-93,共6页
研究虾青素在黄曲霉毒素B1(AFB1)刺激下对AML12细胞损伤的保护作用。培养AML12细胞后,加入0、5、10、15、20、40μmol·L^(-1)的AFB1进行6、12、18、24 h培养,CCK-8法检测AFB1致细胞损伤情况。加入0、20、50、100、150、200μmol... 研究虾青素在黄曲霉毒素B1(AFB1)刺激下对AML12细胞损伤的保护作用。培养AML12细胞后,加入0、5、10、15、20、40μmol·L^(-1)的AFB1进行6、12、18、24 h培养,CCK-8法检测AFB1致细胞损伤情况。加入0、20、50、100、150、200μmol·L^(-1)的虾青素筛选安全浓度范围。加入0、20、50、100、150、200μmol·L^(-1)的虾青素预保护AML12细胞3、6、9、12 h,加入AFB1诱导AML12细胞损伤,CCK-8法筛选最适药物浓度及时间。结果发现,AFB1浓度5、10、15、20、40μmol·L^(-1)作用24 h后,对细胞造成明显损伤(P<0.05);虾青素浓度在150μmol·L^(-1)内时对细胞无明显损伤;最终筛选出虾青素浓度梯度20、50、100μmol·L^(-1)预保护3 h,AFB120μmol·L^(-1)作用24 h为最适条件。 展开更多
关键词 虾青素 AFB1 aml12细胞 CCK-8
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Rab32对小鼠肝细胞系AML12细胞内脂质代谢的影响
5
作者 周围 马莉 +1 位作者 万瑛 李福祥 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期954-958,共5页
目的探讨调控Rab32蛋白表达对小鼠AML12细胞内脂质代谢的影响。方法常规培养AML12细胞,通过转染FCD-EYFP-Rab32慢病毒表达载体构建Rab32过表达细胞系(过表达组),利用CRISPR/Cas9基因敲除技术构建Rab32敲除细胞系(敲除组),正常细胞设为... 目的探讨调控Rab32蛋白表达对小鼠AML12细胞内脂质代谢的影响。方法常规培养AML12细胞,通过转染FCD-EYFP-Rab32慢病毒表达载体构建Rab32过表达细胞系(过表达组),利用CRISPR/Cas9基因敲除技术构建Rab32敲除细胞系(敲除组),正常细胞设为对照组。Western blot检测各组细胞中Rab32蛋白表达水平;尼罗红染色后,激光共聚焦显微镜观测各组细胞内的脂滴数量和面积;定量试剂盒检测各组细胞内甘油三酯及总胆固醇水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果与对照组比较,过表达组AML12细胞中Rab32蛋白表达水平显著上调,而Rab32敲除组细胞中Rab32蛋白表达水平显著下调(P<0.01);过表达组AML12细胞内脂滴数量[过表达组vs对照组:(21.91±14.32)vs(33.89±17.31),P<0.01]及面积[过表达组vs对照组:(16.82±14.37)μm^2vs(22.27±14.10)μm^2,P<0.01]显著减少,每毫克蛋白甘油三酯[过表达组vs对照组:(104.03±12.28)nmol vs(130.94±4.21)nmol,P<0.01]及胆固醇水平[过表达组vs对照组:(46.92±1.26)μg vs(81.11±0.65)μg,P<0.01]显著降低;而Rab32敲除组细胞内脂滴数量[(58.23±42.28)]及面积[(53.31±36.33)μm^2]较对照组显著增加(P<0.01),其每毫克蛋白甘油三酯[(159.03±8.85)nmol]及胆固醇水平[(93.38±3.33)μg]显著增高(P<0.01)。3组细胞凋亡水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论Rab32促进小鼠肝细胞AML12胞内脂质代谢。 展开更多
关键词 非酒精性脂肪肝 aml12细胞 Rab32 脂代谢
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过表达AT2R对LPS诱导的AML12细胞炎症反应的影响
6
作者 许昌勇 张世浩 魏伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第10期1712-1718,共7页
目的探究过表达血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠肝细胞(AML12细胞)炎症反应的影响。方法以乳鼠组织器官为样本,通过PCR扩增出含有EcoRⅠ和HindⅢ双酶切位点的AT2R目的基因片段,通过酶切、连接得到最终产物,挑选出的... 目的探究过表达血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠肝细胞(AML12细胞)炎症反应的影响。方法以乳鼠组织器官为样本,通过PCR扩增出含有EcoRⅠ和HindⅢ双酶切位点的AT2R目的基因片段,通过酶切、连接得到最终产物,挑选出的阳性克隆经测序鉴定;将pCMV-Flag-N-AT2R质粒转染至HEK 293T细胞,24 h后采用Western blot法检测Flag蛋白的表达;通过Western blot和激光共聚焦显微镜观察AML12细胞上的AT2R表达;对AML12细胞进行不同的处理,分为对照组、LPS处理组、pCMV-Flag-N-AT2R组和pCMV-Flag-N-AT2R+LPS组,通过CCK-8检测细胞活力;Western blot检测PCNA蛋白,观察细胞增殖;qPCR检测细胞炎性因子水平;Western blot检测细胞核中转录因子NF-кB(p65)表达水平。结果EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定以及测序结果表明pCMV-Flag-N-AT2R质粒构建成功,Western blot法的检测结果表明AT2R蛋白成功表达;激光共聚焦观察到AML12细胞上有AT2R受体,AT2R重组质粒可以在AML12上表达;与对照组比较,LPS处理的AML12细胞中细胞的活力和增殖能力减弱,而白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平升高,核转录因子NF-кB(p65)表达水平升高;与LPS组比较,pCMV-Flag-N-AT2R和LPS联合处理的AML12细胞中细胞的活力和增殖能力增强,而IL-6和TNF-α水平降低,核转录因子NF-кB(p65)表达水平降低。结论成功构建了AT2R过表达质粒,并在AML12细胞上成功表达,且AT2R可以抑制LPS诱导的AML12细胞的炎症反应。 展开更多
关键词 血管紧张素Ⅱ2型受体 白细胞介素-6 肿瘤坏死因子-α 脂多糖 aml12 质粒构建
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亚砷酸钠对小鼠肝细胞AML12氧化应激、凋亡及MST1、MST2蛋白表达的影响
7
作者 赵哲仪 王正蓉 +3 位作者 方兴艳 王甜 罗昭逊 谢婷婷 《贵州医科大学学报》 CAS 2022年第1期7-12,共6页
目的探讨亚砷酸钠(NaAsO_(2))对小鼠肝细胞AML12氧化应激、凋亡及哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)、MST2蛋白表达的影响。方法取对数生长期的小鼠正常肝细胞AML12,分为对照组(不含NaAsO_(2))及实验组(10、15、20、25及30μmol/L NaAsO_(2... 目的探讨亚砷酸钠(NaAsO_(2))对小鼠肝细胞AML12氧化应激、凋亡及哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)、MST2蛋白表达的影响。方法取对数生长期的小鼠正常肝细胞AML12,分为对照组(不含NaAsO_(2))及实验组(10、15、20、25及30μmol/L NaAsO_(2)处理24 h),采用荧光探针染色法和化学比色法分别检测各组小鼠AML12细胞内活性氧(ROS)含量和超氧化物歧化(SOD)活性水平,采用Western blot检测各组小鼠AML12细胞的MST1、MST2、磷酸化MST1/2(p-MST1/2)及半胱氨酸蛋白酶3剪接体(c-caspase 3)蛋白相对表达量。结果与对照组相比,随着NaAsO_(2)浓度的增加,各实验组小鼠AML12细胞内ROS含量逐渐升高(P<0.05),SOD活性逐渐降低(P<0.05);与对照组相比,各实验组小鼠AML12细胞内p-MST1/2蛋白相对表达量升高(P<0.05),20-30μmol/L NaAsO_(2)组小鼠AML12细胞内为MST1蛋白相对表达量降低、c-caspase 3蛋白相对表达量升高(P<0.05),15-30μmol/L NaAsO_(2)组小鼠AML12细胞内MST1蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论NaAsO_(2)可促进小鼠肝细胞AML12发生氧化应激、凋亡及p-MST1/2、MST1、MST2蛋白表达异常。 展开更多
关键词 细胞凋亡 亚砷酸钠 肝细胞aml12 氧化应激 哺乳动物不育系20样激酶1 哺乳动物不育系20样激酶2
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桂籽提取物对LPS诱导的AML12细胞的保护作用及机制研究
8
作者 黄婷 要辉 +6 位作者 张雨晨 吴宇培 王琢文 王洁琼 杨洪飞 葛婷婷 闵清 《湖北科技学院学报(医学版)》 2023年第5期369-373,共5页
目的研究桂籽提取物(OFSN)正丁醇部位对脂多糖(LPS)诱导的小鼠正常肝细胞(AML12)的保护作用及其机制。方法体外培养AML12,CCK-8法测定不同浓度与时间下OFSN对AML12活性的影响,不同浓度的OFSN及Aspirin干预后对LPS诱导AML12活性的影响,... 目的研究桂籽提取物(OFSN)正丁醇部位对脂多糖(LPS)诱导的小鼠正常肝细胞(AML12)的保护作用及其机制。方法体外培养AML12,CCK-8法测定不同浓度与时间下OFSN对AML12活性的影响,不同浓度的OFSN及Aspirin干预后对LPS诱导AML12活性的影响,筛选出合适的OFSN给药浓度及时间。将细胞分为Control组、LPS组(1μg/mL)、Asipirin组(900μg/mL)、OFSN低、中、高剂量组(100、200、400μg/mL)。利用荧光探针试剂盒检测活性氧(ROS)生成,Western blot法检测各组细胞TLR4/NF-κB p65信号通路蛋白的表达。结果与Control组相比,经LPS诱导后的细胞存活率下降,TLR4/NF-κB p65通路蛋白表达增加,细胞内ROS生成增加。与LPS组相比,经过OFSN及Aspirin干预后细胞活力升高(P<0.01),且在一定的浓度范围内呈现剂量依赖性;Aspirin组与OFSN中、高剂量组细胞中TLR4、NF-κB p65蛋白的表达水平显著性降低(P<0.05,P<0.01),ROS的产生显著减少(P<0.01),OFSN低剂量组无显著变化。结论OFSN对LPS诱导的AML12损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与下调TLR4/NF-κB p65信号通路蛋白表达,减少ROS的生成,同时减少COX-2的表达,从而减少炎症小体NLRP3及炎症因子IL-6的释放相关。 展开更多
关键词 桂籽提取物 脂多糖 aml12 ROS TLR4/NF-κB p65
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CTCF调控小鼠AML12肝细胞系脂质代谢功能与基因表达
9
作者 陈怀煌 左武 卞迁 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1069-1082,共14页
目的·明确CCCTC结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)对肝细胞脂质代谢的调控作用,并探究CTCF调控肝细胞基因表达的作用机制。方法·通过慢病毒将稳定表达Ctcf shRNA的DNA序列整合到小鼠永生化的AML12肝细胞系中,实现对Ctcf的... 目的·明确CCCTC结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)对肝细胞脂质代谢的调控作用,并探究CTCF调控肝细胞基因表达的作用机制。方法·通过慢病毒将稳定表达Ctcf shRNA的DNA序列整合到小鼠永生化的AML12肝细胞系中,实现对Ctcf的稳定敲低。通过反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)验证Ctcf的敲低效率。碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色测定细胞周期,使用CCK-8法绘制细胞生长曲线,检测Ctcf敲低对细胞生长的影响。油红O染色标记细胞内脂质,检测CTCF对AML12细胞脂质代谢和脂滴累积的影响。使用CUT&Tag测序技术分析Ctcf敲低后CTCF在全基因组的结合变化。结合RNA测序(RNA-seq)的转录组数据分析CTCF结合变化后的转录组变化,使用基因本体论(GO)、京都基因和基因组数据库(KEGG)富集分析及基因集富集分析(GSEA)揭示Ctcf敲低对AML12肝细胞基因的表达影响,并探究差异基因与CTCF结合变化间的关联。结果·RT-qPCR结果表明Ctcf在mRNA水平敲低了63.4%,Western blotting验证了CTCF在蛋白表达层面降低了57.7%(均P<0.05)。生长曲线及周期实验确定了Ctcf敲低后细胞增殖阻滞于G1/G0期。并且AML12细胞在Ctcf敲低后自发出现细胞内脂质蓄积(P<0.05)。CTCF在全基因组的结合呈现出显著变化,大多数CTCF结合差异区域表现出CTCF结合减少,但仍有部分区域CTCF结合增加。转录组数据显示Ctcf敲低导致1344个基因出现显著的表达变化,在上调基因中富集出与脂滴堆积相关的脂质代谢通路。CTCF结合上调峰关联的差异基因富集在脂质转运与脂质定位相关通路,而CTCF结合下调峰关联的差异基因主要富集在DNA损伤修复、细胞凋亡、细胞周期等生物学过程,但CTCF在基因组的结合变化并不足以导致邻近基因的表达上调或下调。结论·CTCF通过调控脂质代谢相关基因的表达影响肝细胞的代谢功能,然而CTCF在基因组上的结合变化与邻近基因的表达缺乏显著的相关性,可能主要通过远端调控的方式对基因表达产生影响。 展开更多
关键词 CCCTC结合因子(CTCF) aml12细胞系 脂质代谢 转录调控
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SETD4对脂多糖诱导的AML12细胞IL-6转录的调控作用
10
作者 孙江 李月 +6 位作者 牛世贤 黄梦怡 钟玙沄 赵舒祺 罗海华 姜勇 刘靖华 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期282-287,共6页
目的探讨SETD4(SET-domain containing protein 4)对脂多糖(LPS)诱导的AML12(小鼠肝脏细胞系)细胞IL-6的转录调控作用。方法构建SETD4表达质粒和IL-6启动子荧光素酶报告基因质粒,共转染小鼠肝脏细胞系AML12,使用双荧光素酶报告基... 目的探讨SETD4(SET-domain containing protein 4)对脂多糖(LPS)诱导的AML12(小鼠肝脏细胞系)细胞IL-6的转录调控作用。方法构建SETD4表达质粒和IL-6启动子荧光素酶报告基因质粒,共转染小鼠肝脏细胞系AML12,使用双荧光素酶报告基因技术检测LPS刺激后IL-6启动子荧光素酶活性;单独转染SETD4表达质粒上调AML12细胞SETD4表达,检测LPS刺激后IL-6 mRNA水平变化。结果双酶切鉴定及核酸测序证实重组质粒pcDNA3.0/HA-SETD4、pGL3.0/IL-6 promoter的构建成功。pcDNA3.0/HA-SETD4与pGL3.0/IL-6 promoter共转染AML12细胞,LPS刺激后SETD4对IL-6启动子荧光素酶活性没有影响;上调SETD4表达后,可以促进LPS诱导的IL-6 mRNA转录。结论成功构建SETD4真核表达质粒和IL-6启动子荧光素酶报告基因质粒;SETD4对LPS诱导的AML12细胞IL-6的转录发挥正调控作用。 展开更多
关键词 SETD4 LPS aml12 IL-6转录 荧光素酶报告基因
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甘青青兰多糖提取工艺优化及其对ConA诱导肝细胞损伤的保护作用
11
作者 孙雪婷 郭敏 +3 位作者 程标标 周珂雯 王艳霞 李晓东 《中成药》 北大核心 2025年第12期3915-3922,共8页
目的 优化甘青青兰多糖提取工艺,并评价其对刀豆蛋白A(ConA)诱导肝细胞损伤的保护作用。方法 在单因素试验基础上,以NaOH溶液体积分数、提取时间、提取温度、液料比为影响因素,总糖含量为评价指标,响应面法优化提取工艺。CCK-8法检测多... 目的 优化甘青青兰多糖提取工艺,并评价其对刀豆蛋白A(ConA)诱导肝细胞损伤的保护作用。方法 在单因素试验基础上,以NaOH溶液体积分数、提取时间、提取温度、液料比为影响因素,总糖含量为评价指标,响应面法优化提取工艺。CCK-8法检测多糖对AML12细胞活性的影响,Hoechst染色检测细胞凋亡,JC-1染色评估线粒体膜电位,检测细胞上清液LDH、AST、ALT水平。结果 最佳条件为NaOH溶液体积分数5.52%,提取时间2 h,提取温度73℃,液料比14∶1,总糖含量为32.95%。与对照组比较,1、0.5、0.25 mg/mL多糖组细胞存活率升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,1、0.5、0.25 mg/mL多糖组LDH、AST、ALT水平降低(P<0.05,P<0.01)。多糖干预后,凋亡细胞数减少,线粒体膜电位改善。结论 该方法稳定可靠,可提取对ConA诱导肝细胞损伤有较强保护作用的甘青青兰多糖。 展开更多
关键词 甘青青兰 多糖 提取工艺 响应面法 刀豆蛋白A(ConA) aml12细胞 肝细胞损伤
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二乙基二硫代氨基甲酸通过Insr/Akt通路改善代谢相关脂肪性肝炎体内和体外实验研究
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作者 齐一菲 于庆红 +5 位作者 白世锦 刘琳 范旭 王萍 丛敏 刘天会 《实用肝脏病杂志》 2025年第4期501-504,共4页
目的 探讨二乙基二硫代氨基甲酸(DDC)通过调控Insr/Akt信号通路改善代谢相关脂肪性肝炎(MASH)的分子机制。方法 将C57BL/6小鼠随机分为对照组、MASH组和DDC干预组,每组6只。采用胆碱缺乏、L-氨基酸替代蛋白(CDAA)饲料喂养建立MASH模型... 目的 探讨二乙基二硫代氨基甲酸(DDC)通过调控Insr/Akt信号通路改善代谢相关脂肪性肝炎(MASH)的分子机制。方法 将C57BL/6小鼠随机分为对照组、MASH组和DDC干预组,每组6只。采用胆碱缺乏、L-氨基酸替代蛋白(CDAA)饲料喂养建立MASH模型或在造模同时给予DDC灌胃干预。采用RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测肝组织胰岛素受体(Insr)和促凋亡分子Bax表达。采用棕榈酸(PA)诱导建立小鼠AML12细胞脂毒性模型,同时给予DDC干预。采用蛋白免疫印迹法检测AML12细胞Insr、Akt、pAkt、Bcl2和Bax蛋白表达。结果 MASH组小鼠肝组织Insr基因水平为(0.38±0.13),较对照组显著降低[(1.03±0.27),P<0.05];MASH组小鼠肝组织Insr蛋白表达水平为(0.61±0.11),较对照组显著降低[(1.68±0.58),P<0.05],而DDC干预组小鼠肝组织Insr蛋白表达水平为(1.03±0.11),较MASH组显著升高(P<0.05);MASH组小鼠肝组织Bax蛋白表达水平为(1.14±0.39),较对照组显著增强[(0.47±0.26),P<0.05],而DDC干预组小鼠肝组织Bax蛋白表达水平为(0.66±0.19),较MASH组显著降低(P<0.05);PA组AML12细胞Insr蛋白表达水平为(0.38±0.13),较对照组显著降低[(0.74±0.21),P<0.05],而DDC干预组AML12细胞Insr蛋白表达水平为(0.71±0.20),较PA组显著升高(P<0.05);PA组AML12细胞pAkt与Akt蛋白表达水平比值为(0.28±0.07),较对照组显著降低[(0.69±0.06),P<0.05];25μM或50μM DDC干预组AML12细胞pAkt与Akt蛋白表达水平比值分别为(0.85±0.02)和(0.97±0.04),较PA组显著升高(P<0.05);PA组AML12细胞Bcl2与Bax蛋白表达水平比值为(1.28±0.29),较对照组显著降低[(1.74±0.10),P<0.05],而DDC干预组AML12细胞Bcl2与Bax蛋白表达水平比值为(2.30±0.78),比PA组显著升高(P<0.05)。结论 CDAA饮食诱导的MASH小鼠肝组织Insr/Akt通路被抑制,细胞凋亡增加。DDC可能通过上调MASH小鼠肝组织Insr/Akt信号通路,抑制肝细胞凋亡,进而改善MASH。 展开更多
关键词 代谢相关脂肪性肝炎 二乙基二硫代氨基甲酸 胰岛素受体 aml12细胞 小鼠
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利福平通过NRF2/NQO1通路对小鼠肝细胞造成氧化损伤
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作者 李亚奇 郑志坚 +3 位作者 张美诗 符王洋 孟春燕 钱庆增 《海南医科大学学报》 北大核心 2025年第4期248-253,共6页
目的:探究利福平(Rifampicin,RFP)调节NRF2/NQO1通路对小鼠肝细胞AML12造成的影响。方法:培养正常的小鼠肝细胞系AML12。采用不同浓度的利福平对细胞进行染毒,CCK8法检测细胞活力,根据结果选取适用于本研究的染毒浓度(50、100、200μmol... 目的:探究利福平(Rifampicin,RFP)调节NRF2/NQO1通路对小鼠肝细胞AML12造成的影响。方法:培养正常的小鼠肝细胞系AML12。采用不同浓度的利福平对细胞进行染毒,CCK8法检测细胞活力,根据结果选取适用于本研究的染毒浓度(50、100、200μmol/L)。采用微孔板法检测AML12细胞内过氧化氢酶(Catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活力以及丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量;采用流式细胞仪检测细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)含量以及通过检测JC-1荧光探针分析线粒体内膜电位变化;采用qRT-PCR方法测定NQO1、SOD、NRF2基因的mRNA表达水平,Western Blot法检测NRF2、NQO1的蛋白表达水平。结果:随着利福平染毒浓度的升高,AML12细胞活力也随之减少。与对照组相比,利福平染毒处理组中AML12细胞的MDA含量、CAT活力、ROS水平均升高,且随着染毒浓度的增加线粒体膜电位也随之升高,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,SOD活性以及NQO1、SOD、NRF2三个基因的mRNA表达水平随利福平染毒浓度上升有所降低,且差异具有统计学意义(P<0.05)。NQO1、NRF2的蛋白表达水平随利福平染毒浓度上升降低。结论:利福平可能通过NRF2/NQO1通路调节ROS对小鼠肝细胞AML12造成氧化损伤,且具有浓度依赖性。 展开更多
关键词 利福平 aml12细胞 氧化损伤
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Identification of phenolanine in rape bee pollen and its protective effect and mechanism on alcoholic liver injury
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作者 Cheng Lü Mingjuan Xu +5 位作者 Xinbiao Yang Yanlun Feng Yun Zhu Qun Lu Chengming Wang Rui Liu 《Food Science and Human Wellness》 2025年第2期484-496,共13页
Rape bee pollen has attracted increasing interests for its excellent protective effect against chemicalinduced liver injury owing to its abundant polyphenols.This study aims to analyze the types and contents of phenol... Rape bee pollen has attracted increasing interests for its excellent protective effect against chemicalinduced liver injury owing to its abundant polyphenols.This study aims to analyze the types and contents of phenolamides(seldom concerned)in rape bee pollen and their protective mechanism on alcoholic liver disease(ALD).Different from the previous finding that flavonoids are dominant polyphenols in bee pollen polyphenolic extract,our results demonstrated that there are only three flavonoids but 24 phenolamides in the as-prepared rape bee pollen phenolic extract(PPE).In addition,PPE was found to significantly improve the viability(from 54.9%to 84.1%,89.2%,and 94.0%)of alcohol-induced AML12 cells and alleviate alcoholinduced cell apoptosis(from 28.5%to 22.89%,22.0%,and 17.4%).To dissect the underlying mechanism for the protective effect of PPE against ALD,the molecular pathway was identified by RNA-Seq analysis.Transcriptome data revealed that PPE may protect against ALD by decreasing inflammation,cholesterol,and fatty acid synthesis(P<0.05).The National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism(NIAAA)model was used to further evaluate the hepatoprotective effect of PPE in vivo,and the results validated that PPE could alleviate liver injury and hepatic steatosis(from 22.7%to 11.5%and 10.9%)induced by alcohol.As the dominant polyphenols in PPE,phenolamides can be a class of valuable polyphenolic compounds in bee pollen with the potential to alleviate ALD. 展开更多
关键词 Rape bee pollen Phenolamide Alcoholic liver disease(ALD) aml12s National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism(NIAAA) TRANSCRIPTOME
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银杏叶提取物对二甲苯诱导肝损伤的影响
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作者 米红梅 张娜 王明慧 《中国药业》 2025年第6期40-45,共6页
目的探讨银杏叶提取物(GBE)对二甲苯(XY)诱导肝损伤的影响及其作用机制。方法动物实验取雄性KM小鼠,随机分为对照组[等体积生理盐水(NS)]、模型组(等体积NS)、GBE组(50μg/mL),采用吸入法复制二甲苯中毒急性肝损伤小鼠模型,建模成功后... 目的探讨银杏叶提取物(GBE)对二甲苯(XY)诱导肝损伤的影响及其作用机制。方法动物实验取雄性KM小鼠,随机分为对照组[等体积生理盐水(NS)]、模型组(等体积NS)、GBE组(50μg/mL),采用吸入法复制二甲苯中毒急性肝损伤小鼠模型,建模成功后腹腔注射给药或NS,每天1次,连续8周。细胞试验取AML 12细胞,设sh-NC+NS组(等体积NS)、sh-NC+GBE组(50μg/mL)、sh-KLF2+NS组(等体积NS)、sh-KLF2+GBE组(50μg/mL)。苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠肝脏组织病理形态。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)及白细胞介素6(IL-6)水平;流式细胞术检测活性氧(ROS)水平;Western blot法检测内皮型一氧化氮合酶/可溶性鸟苷酸环化酶(eNOS/sGC)通路相关蛋白;荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测Kruppel样转录因子2(KLF2)的表达水平。结果与模型组比较,GBE组小鼠肝组织中炎性细胞浸润以及细胞损伤情况减少;GBE组小鼠肝组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、ROS水平均显著降低(P<0.05),丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙二醛(MDA)水平显著降低,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)及KLF2 mRNA水平显著升高(P<0.05)。与sh-NC+NS组比较,sh-NC+GBE组细胞中KLF2 mRNA水平显著升高,ROS水平显著降低;sh-KLF2+NS组细胞中KLF2 mRNA水平显著降低,IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与sh-KLF2+NS组比较,sh-KLF2+GBE组细胞中KLF2 mRNA水平显著升高,IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平显著降低(P<0.05)。结论GBE可用于改善二甲苯诱导的急性肝损伤,其机制可能为通过调节KLF2/eNOS/sGC信号轴抑制肝组织中氧化应激因子及炎性因子的表达。 展开更多
关键词 银杏叶提取物 急性肝损伤 二甲苯 KLF2/eNOS/sGC信号通路 作用机制 小鼠 AML 12细胞
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金雀花碱在山豆根肝毒性中的作用 被引量:6
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作者 樊海艇 谷颖敏 +5 位作者 孙伟 耿悦 王莉萍 金若敏 张泽安 田雪松 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第15期176-181,共6页
目的:通过金雀花碱(CYT)体内和体外的肝毒性研究,探讨山豆根的肝毒性是否与CYT相关。方法:小鼠肝AML12细胞用于体外肝毒性研究,细胞增殖及细胞毒性检测(CCK-8)试剂盒检测细胞活性。分别加入终浓度为6,10,14 mmol·L(-1)的C... 目的:通过金雀花碱(CYT)体内和体外的肝毒性研究,探讨山豆根的肝毒性是否与CYT相关。方法:小鼠肝AML12细胞用于体外肝毒性研究,细胞增殖及细胞毒性检测(CCK-8)试剂盒检测细胞活性。分别加入终浓度为6,10,14 mmol·L(-1)的CYT,于加药后3,6,12,24 h,取细胞上清液,检测丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆红素(TBIL)及乳酸脱氢酶(LDH)水平。急性毒性实验,小鼠分别单次口服灌胃24.8,33.1,44.2,58.9,78.5 mg·kg(-1)CYT,设空白组。亚慢性毒性实验,小鼠随机分为3组,分别口服灌胃超纯水,11.2,14.0 mg·kg(-1)CYT,连续90 d。第91天小鼠麻醉后取血清检测ALT,AST,TBIL,LDH等生化指标,并做肝脏病理切片。结果:CYT的半抑制浓度(IC50)为15.17 mmol·L(-1)。14 mmol·L(-1)CYT自6 h起,ALT,AST释放逐渐增加,于12 h达到峰值(P〈0.05,P〈0.01),之后有下降趋势(P〈0.01);14 mmol·L(-1)CYT早在给药6 h,LDH释放就已经显著升高(P〈0.01),在12 h达到顶峰(P〈0.01),在24 h有下降趋势(P〈0.01);各浓度CYT在3,6,12,24 h时,较相应时间点空白组而言,TBIL释放均无显著性差异。在急性毒性实验,CYT的半数致死量(LD50)为48.16 mg·kg(-1),属于全球化学品统一分类和标签制度(GSH)第2级。在亚慢性毒性实验,与空白组相比,CYT组小鼠血清ALT及LDH水平无明显差异;虽然CYT 14.0 mg·kg(-1)组小鼠血清TBIL含量升高(P〈0.05),AST含量下降(P〈0.05),但是均在本实验室背景数据范围内,与空白组相比,肝组织病理学切片亦无明显差异,这一结果可能与CYT14.0 mg·kg(-1)组小鼠一半死亡,导致血液生化及肝脏病理标本量减少相关。结论:CYT属于GSH分类的经口急性毒性2级毒性物质,其在体外培养条件下具有肝细胞毒性,但是其在体内的肝毒性以及是否为山豆根肝毒性的毒性成分需要进一步研究。 展开更多
关键词 金雀花碱 肝毒性 小鼠 aml12肝细胞
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靶向沉默CaMKK-AMPK通路对NEFAs介导肝脂损伤的调控机制
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作者 王爽 任大禹 +6 位作者 张睿锴 杨威 张冰冰 董志昊 赵莹莹 麻芯茹 徐闯 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期322-326,共5页
为探究Ca^(2+)/钙调素依赖性蛋白激酶(CaMKK)-AMP依赖蛋白激酶(AMPK)对非酯化脂肪酸(NEFAs)介导的AML12细胞肝脂损伤的调控机制,本试验通过添加高浓度的NEFAs刺激AML12细胞,RNA靶向沉默CaMKK,检测不同分组细胞内AMPK及固醇调节原件结合... 为探究Ca^(2+)/钙调素依赖性蛋白激酶(CaMKK)-AMP依赖蛋白激酶(AMPK)对非酯化脂肪酸(NEFAs)介导的AML12细胞肝脂损伤的调控机制,本试验通过添加高浓度的NEFAs刺激AML12细胞,RNA靶向沉默CaMKK,检测不同分组细胞内AMPK及固醇调节原件结合蛋白(SREBP1)的蛋白表达水平以及利用流式细胞术检测活性氧(ROS)的产生水平,同时利用激光共聚焦检测细胞内脂滴变化情况。结果显示,siCaMKK+NEFAs组AMPK蛋白表达水平较空白对照组及NEFAs组均显著降低,而SREBP1蛋白表达水平、ROS水平及脂滴数量均显著高于其他各组。结果表明,CaMKK通过AMPK信号通路调控SREBP1及线粒体脂质氧化可调节NEFAs诱导的肝脂损伤过程。 展开更多
关键词 aml12 非酯化脂肪酸(NEFAs) CaMKK ROS 脂质沉积
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白藜芦醇对蛋氨酸胆碱缺乏培养基诱导肝细胞损伤的保护作用
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作者 王宇琦 纪桂元 +1 位作者 邓颖勋 蒋卓勤 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期41-46,共6页
目的研究白藜芦醇对蛋氨酸胆碱缺乏(methionine-choline-deficient,MCD)培养基诱导的小鼠正常肝细胞(alpha monse liver 12,AML12)损伤的保护作用。方法体外培养小鼠正常肝细胞AML12,建立蛋氨酸胆碱缺乏培养基诱导的肝细胞损伤模型,用... 目的研究白藜芦醇对蛋氨酸胆碱缺乏(methionine-choline-deficient,MCD)培养基诱导的小鼠正常肝细胞(alpha monse liver 12,AML12)损伤的保护作用。方法体外培养小鼠正常肝细胞AML12,建立蛋氨酸胆碱缺乏培养基诱导的肝细胞损伤模型,用不同浓度白藜芦醇(25、50、100μmol/L)进行干预24h,检测细胞的增值活性,以及细胞培养基上清液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱基酶(LDH)活性和细胞中丙二醛(MDA)水平、甘油三酯(TG)含量,检测细胞中炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平及其m RNA水平,并检测微管相关蛋白1轻链3(MAP1-LC3)蛋白的表达。结果与MCD损伤组相比,各白藜芦醇干预组细胞活力明显增强,白藜芦醇可以显著抑制MCD导致的肝细胞ALT,AST,LDH的释放,降低肝细胞内MDA水平和TG含量,降低炎性细胞因子水平,上调MAP1-LC3的表达。结论白藜芦醇对MCD诱导的的小鼠肝AML12细胞损伤有明显的保护作用,自噬可能在其中起到一定的作用。 展开更多
关键词 蛋氨酸胆碱缺乏 白藜芦醇 非酒精性脂肪肝 aml12细胞 自噬
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雷公藤内酯三醇通过Nrf2/Keap1信号通路抑制氧化应激和炎症减轻雷公藤甲素诱导的肝损伤 被引量:8
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作者 郑碧丹 王晓婉 +4 位作者 王思玉 杨祎琦 王凯 徐鹏 刘博 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期509-519,共11页
目的基于Nrf2/Keap1信号通路探讨雷公藤内酯三醇对雷公藤甲素诱导小鼠肝损伤模型的肝脏氧化应激和炎症的影响。方法将SPF级Balb/c雄性小鼠随机分空白对照组、雷公藤甲素组及雷公藤甲素+雷公藤内酯三醇组。雷公藤内酯三醇(28 mg·kg^... 目的基于Nrf2/Keap1信号通路探讨雷公藤内酯三醇对雷公藤甲素诱导小鼠肝损伤模型的肝脏氧化应激和炎症的影响。方法将SPF级Balb/c雄性小鼠随机分空白对照组、雷公藤甲素组及雷公藤甲素+雷公藤内酯三醇组。雷公藤内酯三醇(28 mg·kg^(-1))灌胃预处理7 d,最后1次灌胃后,单次腹腔注射雷公藤甲素(1 mg·kg^(-1))复制小鼠肝损伤模型。检测小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平并使用苏木素-伊红(HE)综合评估小鼠的肝损伤程度;试剂盒检测小鼠肝脏中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)含量,观察肝脏氧化应激状态;采用ELISA试剂盒检测小鼠肝脏中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)的水平,评估炎症反应;Western Blot法检测肝脏组织中细胞核因子-红细胞相关因子2(Nrf2)、KELCH样ECH关联蛋白1(KELCH-like ECH-associated protein 1,Keap1)、血红素氧合酶(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)的蛋白表达水平。细胞实验中,给予雷公藤内酯三醇(200μg·mL^(-1))及雷公藤甲素(80 ng·mL^(-1))干预小鼠正常肝细胞(alpha mouse liver 12,AML12)24 h,观察相关指标变化。CCK-8法确定雷公藤甲素的模型复制条件和雷公藤内酯三醇的给药浓度并观察AML12细胞的形态变化。ELISA及化学试剂盒检测AML12细胞中IL-10、IL-6、ROS、GSH、MDA和SOD的水平;Western Blot法检测AML12细胞核Nrf2、细胞Keap1、HO-1、NQO1的蛋白表达水平。最后,使用AutoDock Vina软件对雷公藤内酯三醇及雷公藤甲素与Keap1进行分子对接观察药物靶点。结果与雷公藤甲素组比较,雷公藤甲素+雷公藤内酯三醇组小鼠血清ALT、AST水平均明显降低(均P<0.01);肝脏病理损伤明显改善;IL-6水平明显降低(P<0.01),IL-10水平明显升高(P<0.01);ROS(P<0.05)、MDA(P<0.01)水平明显降低,GSH(P<0.05)、SOD(P<0.01)水平明显升高;小鼠肝脏组织中细胞核Nrf2、HO-1、NQO1水平均明显升高(均P<0.01)。在细胞水平上,确定雷公藤甲素复制AML12细胞损伤模型的浓度为80 ng·mL^(-1),雷公藤内酯三醇给药浓度为200μg·mL^(-1);与雷公藤甲素组比较,雷公藤内酯三醇(100~400μg·mL^(-1))明显提高了AML12细胞的活力(P<0.05,P<0.01),明显改善了AML12细胞的形态,AML12细胞IL-6水平明显降低(P<0.01),IL-10水平明显升高(P<0.05),ROS(P<0.01)、MDA(P<0.05)水平明显降低,GSH(P<0.05)、SOD(P<0.01)水平明显升高,AML12细胞中细胞核Nrf2(P<0.01)、HO-1(P<0.05)、NQO1(P<0.05)水平明显升高。雷公藤内酯三醇和雷公藤甲素与Keap1结合能相当,最小结合能分别为-9.7 kJ·mol-1和-9.4 kJ·mol-1。结论雷公藤内酯三醇可以在一定程度通过抑制氧化应激和炎症反应改善雷公藤甲素诱导的肝脏损伤,其作用机制与激活Nrf2/Keap1信号通路有关。 展开更多
关键词 雷公藤内酯三醇 雷公藤甲素 肝损伤 Nrf2/Keap1信号通路 氧化应激 炎症 小鼠 小鼠正常肝细胞(aml12)
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