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柔嫩艾美耳球虫AMA1的原核表达及其免疫保护效果评价
1
作者 刘永宁 单乙戈 +5 位作者 潘晨帆 刘倩琳 李翌琳 段思彰 安健 张建军 《华北农学报》 北大核心 2025年第1期232-238,共7页
为探究柔嫩艾美耳球虫顶膜抗原-1(AMA1)对感染柔嫩艾美耳球虫雏鸡的免疫保护效果,将AMA1基因扩增产物连接到表达载体pET-32a(+)上构建重组质粒pET-32a(+)-AMA1,并转入大肠杆菌BL21(DE3)来表达重组蛋白。将108只雏鸡随机分为6组,每组3个... 为探究柔嫩艾美耳球虫顶膜抗原-1(AMA1)对感染柔嫩艾美耳球虫雏鸡的免疫保护效果,将AMA1基因扩增产物连接到表达载体pET-32a(+)上构建重组质粒pET-32a(+)-AMA1,并转入大肠杆菌BL21(DE3)来表达重组蛋白。将108只雏鸡随机分为6组,每组3个重复,每个重复6羽,包括不免疫不攻虫组(阴性组)、不免疫攻虫组(阳性组)、弗氏佐剂对照组及12.5,25.0,50.0μg rEtAMA1免疫组,分别于14,21日龄肌肉注射不同浓度的重组蛋白,28日龄口服感染5×10^(4)个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,35日龄处死试验鸡,以体增质量、盲肠病变评分、卵囊产量、免疫器官指数、细胞因子及抗体水平来评价重组AMA1蛋白的免疫保护效果。结果显示,各组间的平均增质量差异不显著;25.0μg及50.0μg rEtAMA1组的盲肠病变计分较阳性组分别显著降低了53%和41%;12.5,25.0,50.0μg rEtAMA1组的克粪便卵囊数量(OPG)分别较阳性组显著减少16%,27%,54%;50.0μg rEtAMA1组的法氏囊指数较阳性组显著提高27%;25.0,50.0μg rEtAMA1组的胸腺指数均显著高于阳性组,分别增加了25%,22%;各组的脾脏指数无显著差异;在二免后7 d, 12.5μg和25.0μg rEtAMA1组的细胞因子IL-2和IFN-γ含量均显著高于阴性组,50.0μg rEtAMA1组血清总IgG含量较阴性组显著增加47%,且二免后含量明显高于首免后。综上,重组AMA1蛋白能够减轻盲肠病变,减少球虫卵囊产量和促进免疫器官发育,提高血清细胞因子和抗体水平,对感染柔嫩艾美耳球虫雏鸡具有一定的免疫保护效果。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 AMA1 原核表达 免疫效果
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AMA、抗LC-1抗体联合IL-17检测对自身免疫性肝炎的诊断价值
2
作者 詹有芳 蒋秀娣 +1 位作者 徐正 王鹏 《肝脏》 2025年第8期1111-1114,共4页
目的评估抗线粒体抗体(AMA)、抗肝细胞溶质抗原-1抗体(抗LC-1抗体)与白细胞介素-17(IL-17)联合检测对自身免疫性肝炎(AIH)的诊断价值。方法纳入2023年1月至2024年1月间上海中医药大学附属曙光医院健康体检者50名为健康组,AIH患者50例为... 目的评估抗线粒体抗体(AMA)、抗肝细胞溶质抗原-1抗体(抗LC-1抗体)与白细胞介素-17(IL-17)联合检测对自身免疫性肝炎(AIH)的诊断价值。方法纳入2023年1月至2024年1月间上海中医药大学附属曙光医院健康体检者50名为健康组,AIH患者50例为AIH组,病毒性肝炎患者50例为肝炎组。比较3组的肝功能、IL-17、AMA、抗LC-1抗体的阳性检出率,以及AMA各核型的检出率。以受试者工作特征曲线下面积(AUC)评估AMA、抗LC-抗体1、IL-17单独检测和三者联合检测的诊断效能。结果AIH组的IL-17、DBil、TBil、ALT、ALP、AST、GGT水平均高于健康组,而白球比低于健康组,差异有统计学意义(P<0.05)。AIH组与肝炎组的TBil、DBil、AST、ALT、ALP、GGT水平、白球比差异无统计学意义(P>0.05)。AIH组的IL-17水平为(29.1±3.5)pg/mL,肝炎组为(18.3±3.1)pg/mL,健康组为(13.5±2.1)pg/mL,差异有统计学意义(t=12.25、11.64,P<0.05)。AIH组的AMA、抗LC-1抗体及相关抗体联合检测阳性检出率高于健康组与肝炎组,且差异有统计学意义(P<0.05)。AMA诊断AIH的AUC为0.774,95%CI为0.690~0.857;抗LC-1抗体诊断的AUC为0.57,95%CI为0.505~0.635;IL-17诊断的AUC为0.83,95%CI为0.737~0.924;3项指标联合检测时,AUC为0.958,95%CI为0.917~0.998。结论AMA、抗LC-1抗体联合IL-17检测对AIH的临床诊断价值较高。 展开更多
关键词 自身免疫性肝炎 AMA 抗LC-1抗体 IL-17 自身抗体
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猪等孢球虫顶膜抗原蛋白AMA1的生物信息学分析及原核表达
3
作者 叶欣 欧璇 +3 位作者 黄仪娟 陆肖 翁亚彪 林瑞庆 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期469-476,共8页
[目的]预测分析猪等孢球虫顶膜抗原蛋白AMA1的生物学特性、结构及功能,并构建AMA1基因的原核表达载体,表达、纯化AMA1蛋白。[方法]本研究从NCBI数据库中获得猪等孢球虫AMA1基因序列,使用相关生物信息学预测工具对AMA1基因编码的蛋白进... [目的]预测分析猪等孢球虫顶膜抗原蛋白AMA1的生物学特性、结构及功能,并构建AMA1基因的原核表达载体,表达、纯化AMA1蛋白。[方法]本研究从NCBI数据库中获得猪等孢球虫AMA1基因序列,使用相关生物信息学预测工具对AMA1基因编码的蛋白进行分析。构建原核表达载体pET23a-AMA1,并将其转入至大肠埃希菌表达菌株BL21 (DE3)中,对诱导时间、温度及IPTG浓度进行优化,确定最佳诱导表达条件。采用镍柱亲和层析法进行蛋白纯化,获得AMA1重组蛋白并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定分析。[结果]生物信息学预测显示,AMA1蛋白由317个氨基酸组成,蛋白分子式为C1 512H2 310N394O490S14,是不稳定的亲水性蛋白;其二级结构α螺旋占17.74%,β折叠占30.65%,转角占30.65%,无规则卷曲占20.96%;属于无信号肽的跨膜蛋白,具有5个B细胞抗原表位。成功构建pET23a-AMA1重组表达质粒,经诱导表达条件优化后,确定最佳诱导表达条件为0.2 mmol/L IPTG浓度下于28℃诱导12 h,主要以可溶性蛋白形式存在,蛋白相对分子质量约为25 800,纯化蛋白质量浓度为0.25 mg/mL。[结论]阐明了猪等孢球虫AMA1蛋白的结构特征,通过原核诱导表达获得了重组蛋白,为建立猪等孢球虫病的免疫学诊断方法奠定了基础,并为后续疫苗的研发提供了新的候选基因。 展开更多
关键词 猪等孢球虫 顶膜抗原 AMA1 原核表达 生物信息学
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卵形巴贝斯虫与中华泰勒虫双重PCR检测方法的建立
4
作者 田万年 迟雪 +1 位作者 袁世超 郭小雨 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期160-164,共5页
为建立一种能快速对卵形巴贝斯虫(Babesia ovata)和中华泰勒虫(Theileria sinensis)同时进行检测的双重PCR方法。根据GenBank已报道的卵形巴贝斯虫AMA1基因和中华泰勒虫MPSP基因设计合成了2对特异性引物,通过条件优化,建立了双重PCR检... 为建立一种能快速对卵形巴贝斯虫(Babesia ovata)和中华泰勒虫(Theileria sinensis)同时进行检测的双重PCR方法。根据GenBank已报道的卵形巴贝斯虫AMA1基因和中华泰勒虫MPSP基因设计合成了2对特异性引物,通过条件优化,建立了双重PCR检测方法。结果显示:双重PCR可特异扩增出卵形巴贝斯虫和中华泰勒虫目的条带,片段大小分别为500 bp和986 bp。该方法具有较好的特异性,对卵形巴贝斯虫和中华泰勒虫的最低检出浓度为16 fg/μL。对采集的90份牛血液样本进行双重PCR检测,卵形巴贝斯虫阳性率为30%(27/90),中华泰勒虫阳性率为16.67%(15/90),混合感染率为10%(9/90)。结果表明,双重PCR方法可用于卵形巴贝斯虫和中华泰勒虫的快速诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 双重PCR 卵形巴贝斯虫 中华泰勒虫 AMA1 MPSP
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AMA254汞分析仪测定颗粒物中痕量总汞的研究 被引量：7
5
作者 何灿 高良敏 +3 位作者 汪桂林 程学丰 张明旭 Wei-Ping Pan 《中国环境监测》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期26-29,共4页
采用AMA254汞分析仪测定大气颗粒物和煤中的痕量总汞，建立了直接测定颗粒物中痕量总汞的分析方法。测定结果表明，在汞绝对含量为0～35ng范围内线性良好，测定大气颗粒物和煤中的痕量总汞的检出限分别为0．06ng／m^3和0．02ng／g，标... 采用AMA254汞分析仪测定大气颗粒物和煤中的痕量总汞，建立了直接测定颗粒物中痕量总汞的分析方法。测定结果表明，在汞绝对含量为0～35ng范围内线性良好，测定大气颗粒物和煤中的痕量总汞的检出限分别为0．06ng／m^3和0．02ng／g，标准样品测定的RSD≤0．78％，加标回收率为92％～108％。该方法具有无需消解直接进样测定、极其简便、省时等特点，适合多种固体样品中痕量汞的测定。 展开更多
关键词 汞 AMA254 大气颗粒物 煤
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柔嫩艾美耳球虫AMA1基因DNA疫苗的免疫保护效果 被引量：9
6
作者 王晔 赵其平 +6 位作者 朱顺海 董辉 姜连连 薛璞 舒凡帆 黄兵 韩红玉 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第6期1-9,共9页
本研究旨在评价表达柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)顶膜抗原1(Apical membrane antigen 1,Et AMA1)基因的DNA疫苗对雏鸡柔嫩艾美耳球虫人工感染的免疫保护效果。将Et AMA1基因和鸡IFN-γ基因插入真核表达载体p CAGGS中,分别构建了真... 本研究旨在评价表达柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)顶膜抗原1(Apical membrane antigen 1,Et AMA1)基因的DNA疫苗对雏鸡柔嫩艾美耳球虫人工感染的免疫保护效果。将Et AMA1基因和鸡IFN-γ基因插入真核表达载体p CAGGS中,分别构建了真核表达重组质粒p CAGGS-Et AMA1和p CAGGS-Et AMA1-IFN-γ。将重组质粒p CAGGS-Et AMA1转染进293T细胞中,经间接免疫荧光和Western blot实验鉴定,观察其在体外表达情况。将p CAGGS-Et AMA1和p CAGGS-Et AMA1-IFN-γ于7日龄和14日龄腿部肌肉注射免疫雏鸡,21日龄人工感染1×10^4个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊,第29日龄时处死试验鸡,以平均增重、卵囊产量和病变记分来评价重组质粒的免疫保护效果。结果显示,p CAGGS-Et AMA1转染的293T细胞出现明显的红色荧光;两种真核表达重组质粒免疫组鸡的平均增重与未攻虫组的平均增重差异不显著,不具有统计学意义,而未免疫攻虫组则与未攻虫组在增重方面差异具有显著统计学意义;免疫组鸡相较于未免疫攻虫组在病变记分方面显著下降;免疫组的卵囊减少率分别为67.43%和72.89%;p CAGGSEt AMA1-IFN-γ组在增重、盲肠病变记分和卵囊减少率方面都优于p CAGGS-Et AMA1组,但差异不具有统计学意义。表明构建的2种重组质粒对雏鸡柔嫩艾美耳球虫感染有一定的免疫保护效果。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 AMA1基因 真核表达 免疫保护效果
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新孢子虫与弓形虫交叉抗原AMA1基因重组腺病毒的构建及免疫应答分析 被引量：6
7
作者 李航 姜利建 +5 位作者 刘晋宇 兰岚 凌芳芳 石甜甜 张贺洋 贾立军 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第12期3336-3342,共7页
为构建新孢子虫和弓形虫AMA1基因重组腺病毒,并分析其免疫原性,本试验根据新孢子虫和弓形虫AMA1基因序列的开放阅读框,设计新孢子虫和弓形虫交叉抗原AMA1基因通用引物,构建重组克隆质粒pMD18T-NcAMA1、pMD18T-TgAMA1及重组腺病毒穿梭质... 为构建新孢子虫和弓形虫AMA1基因重组腺病毒,并分析其免疫原性,本试验根据新孢子虫和弓形虫AMA1基因序列的开放阅读框,设计新孢子虫和弓形虫交叉抗原AMA1基因通用引物,构建重组克隆质粒pMD18T-NcAMA1、pMD18T-TgAMA1及重组腺病毒穿梭质粒ADV4-Nc/TgAMA1,将ADV4-Nc/TgAMA1和骨架质粒pacAd5线性化后共转染293T细胞,包装Ad5-Nc/TgAMA1重组腺病毒,测定病毒滴度后,收集病毒液接种BALB/c小鼠,间接ELISA检测小鼠血清IgG抗体水平。结果显示,Nc/TgAMA1在Ad5-Nc/TgAMA1重组腺病毒中获得表达,测定Ad5-Nc/TgAMA1重组腺病毒滴度为109 PFU/mL,接种BALB/c小鼠后,Ad5-Nc/TgAMA1接种组IgG抗体水平明显高于pVAX1-Nc/TgAMA1质粒组和PBS对照组。结果表明,构建的Ad5-Nc/TgAMA1重组腺病毒能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。本试验为新孢子虫和弓形虫交叉抗原AMA1基因重组腺病毒载体疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 新孢子虫 弓形虫 AMA1 基因 重组腺病毒 免疫应答
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镀金石英砂吸附-AMA 254测汞仪测定大气中痕量汞的研究 被引量：6
8
作者 汤庆合 王文华 黄丽华 《中国环境监测》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期8-11,共4页
采用镀金石英砂来富集大气中的气态总汞,AMA 254测汞仪测定。结果表明,不同采样时间下的单级吸附管的吸附效率均在90%以上,采样40min时的相对标准偏差为5%左右。与巯基棉吸附和吸收液吸收方法的对比显示,该方法具有吸收效果好、多次采... 采用镀金石英砂来富集大气中的气态总汞,AMA 254测汞仪测定。结果表明,不同采样时间下的单级吸附管的吸附效率均在90%以上,采样40min时的相对标准偏差为5%左右。与巯基棉吸附和吸收液吸收方法的对比显示,该方法具有吸收效果好、多次采样的精密度高、操作简便并且可以再生重复使用等优点。运用该法,对徐家汇等几个地点的大气总汞进行了测定。 展开更多
关键词 金砂 富集 大气汞 AMA 254
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原发性胆汁性肝硬化的中医症候特点及疗效分析 被引量：16
9
作者 史文丽 刘飞飞 +1 位作者 张晓锋 李建宇 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2014年第4期225-226,253,共3页
目的:探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)的中医证候特点与临床疗效。方法:首先对80例患者在诊断方面以中医四诊和西医检查予以确诊和辨证,统计分析这类患者的中医证候学特点。并按数字表法随机将其分为治疗组40例,对照组40例,对照组患者口服... 目的:探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)的中医证候特点与临床疗效。方法:首先对80例患者在诊断方面以中医四诊和西医检查予以确诊和辨证,统计分析这类患者的中医证候学特点。并按数字表法随机将其分为治疗组40例,对照组40例,对照组患者口服熊去氧胆酸胶囊(UDCA)治疗,治疗组患者在对照组治疗基础上加服豨莶二黄汤,观察两组患者治疗12周、24周中医症候、肝功能变化情况。结果:最常见的症状依次为:倦怠乏力、胁肋疼痛、口干咽燥、两目干涩、皮肤瘙痒、食少纳呆、便秘或粘滞、脘腹胀满等;体征依次为:面色晦暗、肝掌、蜘蛛痣、唇及肢端紫绀、胁下积块等。中医证型分析显示:以肝肾阴虚、湿热瘀阻最为常见,其次是肝郁脾虚证,脾胃气虚、脾肾阳虚证出现最少;并且同一患者可有几个证型重叠,以肝肾阴虚证与湿热瘀阻证重叠最为常见。中药豨莶二黄汤能够改善患者的临床症状、体征及肝功能,临床疗效优于对照组。结论:PBC的中医证候特点主要为本虚标实。本是正气虚弱,以肝肾阴虚为主;标实以热湿瘀毒胶结,阻塞肝络为特点。中药豨莶二黄汤在改善患者临床症状、肝功能方面优于单用UDCA,且远期疗效好。 展开更多
关键词 原发性胆汁性肝硬化 抗线粒体抗体(AMA) 豨莶二黄汤 治疗应用
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弓形虫酵母双杂交cDNA文库构建及与AMA1羧基端相互作用蛋白的筛选 被引量：3
10
作者 程子英 高洋 +3 位作者 王铭 郑君 贾洪林 赵权 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期201-204,共4页
为筛选弓形虫AMA1基因羧基端(AMA1c)在弓形虫中的相互作用分子,本研究采用MatchmakerTM Gold酵母双杂交系统,构建了弓形虫RH株酵母双杂交cDNA文库,文库滴度达到4.26×107cfu/mL。以构建的pGBKT7-AMA1c诱饵质粒,使用PEG/LiAc法转化... 为筛选弓形虫AMA1基因羧基端(AMA1c)在弓形虫中的相互作用分子,本研究采用MatchmakerTM Gold酵母双杂交系统,构建了弓形虫RH株酵母双杂交cDNA文库,文库滴度达到4.26×107cfu/mL。以构建的pGBKT7-AMA1c诱饵质粒,使用PEG/LiAc法转化酵母菌株Y2H,利用表型筛选法检测AMA1c的自激活作用并进行酵母双杂交筛选,得到阳性克隆,根据序列比对分析结果,进一步进行共转化验证。结果表明,诱饵蛋白在酵母双杂交系统中具有无毒性和自激活作用,而且通过酵母双杂交筛选共得到13个与AMA1c蛋白相互作用的虫体蛋白。本研究结果为进一步研究AMA1c的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 弓形虫 AMA1羧基端 酵母双杂交 自激活
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籽粒苋AmA1基因的克隆、原核表达及植物表达载体构建 被引量：2
11
作者 许明 严其煌 +4 位作者 黄志伟 程祖锌 杨志坚 郑祥正 郑金贵 《分子植物育种》 CAS CSCD 2009年第4期793-800,共8页
本文采用RT-PCR方法,从籽粒苋(Amaranthus hypochondriacus)"千穗谷1号"的幼嫩种子克隆出AmA1基因的完整开放阅读框序列(ORF),其长度为915bp,编码305个氨基酸。经Blast同源性分析,结果表明该序列与GenBank登录的籽粒苋AmA1基... 本文采用RT-PCR方法,从籽粒苋(Amaranthus hypochondriacus)"千穗谷1号"的幼嫩种子克隆出AmA1基因的完整开放阅读框序列(ORF),其长度为915bp,编码305个氨基酸。经Blast同源性分析,结果表明该序列与GenBank登录的籽粒苋AmA1基因的核苷酸序列基本一致,只在起始密码子下游51bp处由G变成C,但不影响氨基酸的编码。将该基因插入原核表达载体pET28a(+),并转化到大肠杆菌BL21中,经过IPTG诱导,能正确表达出37kD的融合蛋白。同时构建了AmA1基因双T-DNA双标记植物表达载体PCDMAR-AmA1-dsRed2-hpt,该载体含有2个独立的T-DNA区,其中一个T-DNA区含有选择标记基因hpt和可视标记基因DsRed2(红色荧光蛋白基因),另一个T-DNA区含有由水稻胚乳特异性表达启动子pGt1驱动的AmA1基因,在AmA1基因的两侧连有两段正向重复的烟草Rb7MARs,以增强AmA1基因的表达。实验结果为下一步规模化培育稻米氨基酸组成平衡无选择标记的转基因水稻奠定了基础。 展开更多
关键词 籽粒苋 AmA1 基因克隆 原核表达 载体构建
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血清IgG4、CA19-9水平对IgG4相关性胆管炎的诊断及鉴别诊断价值 被引量：7
12
作者 谭立明 管晓琳 +13 位作者 吴思凡 郑葳 付慧颖 蒙仪妹 隆婷婷 王巧花 吴洋 曾婷婷 田永建 余建林 陈娟娟 李华 曹莉萍 徐慧 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期431-435,共5页
目的:探讨血清IgG4、CA19-9及自身抗体对IgG4相关性胆管炎(IgG4-SC)的诊断及鉴别价值。方法:选取41例IgG4-SC患者、162例非IgG4-SC患者及40例健康对照血清样本,采用免疫比浊法和直接化学发光法检测IgG4和CA19-9水平、采用间接免疫荧光... 目的:探讨血清IgG4、CA19-9及自身抗体对IgG4相关性胆管炎(IgG4-SC)的诊断及鉴别价值。方法:选取41例IgG4-SC患者、162例非IgG4-SC患者及40例健康对照血清样本,采用免疫比浊法和直接化学发光法检测IgG4和CA19-9水平、采用间接免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)、抗平滑肌抗体(SMA)和抗线粒体抗体(AMA),并进行结果统计分析。结果:(1)IgG4-SC患者的ANA、ANCA、SMA和AMA阳性率分别为41.46%、7.32%、0和2.44%。其中,ANA阳性率与正常对照组、ANCA阳性率与原发性硬化性胆管炎(PSC)组、SMA和AMA阳性率与非IgG4-SC组均存在差异,且具有非常显著统计学意义(P<0.01)。(2)血清IgG4(n=36/41)和CA19-9(n=21/41)升高情况与正常对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01);其ROC曲线下面积(AUC)分别为0.979和0.646,P<0.05。结论:血清IgG4和CA19-9水平的高表达和自身抗体检测,对于IgG4-SC的鉴别诊断具有准确性和重要临床价值。 展开更多
关键词 IgG4相关性胆管炎 原发性硬化性胆管炎 胆管癌 胰腺癌 IGG4 CA19-9 抗核抗体(ANA) 抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA) 抗平滑肌抗体(SMA) 抗线粒体抗体(AMA)
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牛环形泰勒虫AMA1基因表达载体的构建及生物信息学分析 被引量：3
13
作者 樊新丽 郑会珍 +7 位作者 翟雪洁 范士龙 马英 陈宋琴 韦丽婷 刘一凡 巴音查汗 张杨 《动物医学进展》 北大核心 2021年第12期6-13,共8页
为构建牛环形泰勒虫AMA1(TaAMA1)截短基因原核、真核表达载体,对其编码的蛋白进行生物信息学分析,以牛环形泰勒虫阳性DNA为模板,在牛环形泰勒虫AMA1基因的开放性阅读框内设计特异性引物,采用PCR扩增AMA1基因,构建其原核表达质粒pET28a-A... 为构建牛环形泰勒虫AMA1(TaAMA1)截短基因原核、真核表达载体,对其编码的蛋白进行生物信息学分析,以牛环形泰勒虫阳性DNA为模板,在牛环形泰勒虫AMA1基因的开放性阅读框内设计特异性引物,采用PCR扩增AMA1基因,构建其原核表达质粒pET28a-AMA1及真核表达质粒pEGFP-AMA1。通过生物信息学在线软件分析TaAMA1基因的系统进化树及该蛋白的理化性质、磷酸化位点、亚细胞定位、抗原表位及二级结构,构建该重组蛋白系统发育进化树。结果显示,TaAMA1基因PCR扩增产物大小为828 bp,与预期片段一致,构建的重组质粒经双酶切鉴定表明目的基因插入正确,测序结果与GenBank已收录的牛环形泰勒虫AMA1基因序列(KX231677.1)同源性为99.72%,同源性及系统进化树分析发现与小泰勒虫氨基酸序列同源性最大为69.9%,生物信息学分析发现TaAMA1基因编码蛋白含276个氨基酸,分子式为C_(1331)H_(2134)N_(398)O_(413)S_(4),分子质量为30.448 ku,理论等电点为9.94,有38个磷酸化修饰位点,无跨膜区及信号肽,亚细胞定位预测位于细胞核的比例为87%;B细胞抗原表位分析发现该蛋白含有9个潜在抗原表位;TaAMA1蛋白的二级结构中α-螺旋、β-转角、延伸链和无规则卷曲和延伸链分别占23.91%、7.61%、49.64%和18.84%。成功构建重组原核表达质粒pET28a-AMA1及真核表达质粒pEGFP-AMA1并进行生物信息学分析,为牛环形泰勒虫AMA1蛋白生物学功能及入侵机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 牛 环形泰勒虫 AMA1基因 表达载体构建 生物信息学分析
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AMA软件及其应用简介 被引量：7
14
作者 李爽 陈隽 《数学教育学报》 CSSCI 北大核心 2016年第3期96-100,共5页
AMA（Activate Mind and Attention）软件,由台湾国立交通大学陈明璋教授及其团队研发.是一个以降低数位落差为出发点,以Power Point为平台,外挂增益集所发展的一个媒体设计及展演环境.在中国大陆,AMA软件作为一个新兴技术,在几何／代... AMA（Activate Mind and Attention）软件,由台湾国立交通大学陈明璋教授及其团队研发.是一个以降低数位落差为出发点,以Power Point为平台,外挂增益集所发展的一个媒体设计及展演环境.在中国大陆,AMA软件作为一个新兴技术,在几何／代数／概率统计等方面可以辅助教师促进学生对数学知识的理解. 展开更多
关键词 AMA软件 数学教学 PPT
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犬新孢子虫AMA1基因重组真核表达质粒的构建及其在Vero细胞中的表达 被引量：1
15
作者 郭焕平 贾立军 +2 位作者 薛书江 钱年超 张守发 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期718-722,共5页
为构建犬新孢子虫AMA1基因的重组真核表达质粒,了解其在Vero细胞中的表达情况,采用RT-PCR方法扩增牛源犬新孢子虫吉林株AMA1全长基因,构建了重组真核表达质粒pVAX1-NcAMA1;利用脂质体介导转染法将该重组质粒转染至Vero细胞,应用间接免... 为构建犬新孢子虫AMA1基因的重组真核表达质粒,了解其在Vero细胞中的表达情况,采用RT-PCR方法扩增牛源犬新孢子虫吉林株AMA1全长基因,构建了重组真核表达质粒pVAX1-NcAMA1;利用脂质体介导转染法将该重组质粒转染至Vero细胞,应用间接免疫荧光方法(IFA)和Western-blot技术检测AMA1基因在Vero细胞中的表达情况。结果显示,扩增的牛源犬新孢子虫吉林株AMA1基因的长度为1 695bp,与GenBank中相应基因序列(AB265823.1)的同源性为99.9%。成功构建了重组真核表达质粒pVAX1-NcAMA1,IFA检测发现AMA1基因在Vero细胞中获得了瞬时表达,表达产物经Western-blot鉴定,其分子质量约为68ku,且具有较好的反应原性。本试验为新孢子虫病核酸疫苗的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 犬新孢子虫 AMA1基因 真核表达
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抗线粒体抗体测定对诊断原发性胆汁性肝硬化的临床意义 被引量：4
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作者 谭立明 董叶 +4 位作者 吕娇凤 刘宁 李华 秦和昌 叶如美 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第7期924-926,共3页
目的:探讨抗线粒体抗体(AMA)测定对原发性胆汁性肝硬化(PBC)的临床意义.方法:41例PBC及51例非原发性胆汁性肝硬化(自身免疫性肝炎9例,乙型肝炎21例,丙型肝炎11例,戊型肝炎10例)患者,采用间接免疫荧光法检测抗线粒体抗体,并对结果进行回... 目的:探讨抗线粒体抗体(AMA)测定对原发性胆汁性肝硬化(PBC)的临床意义.方法:41例PBC及51例非原发性胆汁性肝硬化(自身免疫性肝炎9例,乙型肝炎21例,丙型肝炎11例,戊型肝炎10例)患者,采用间接免疫荧光法检测抗线粒体抗体,并对结果进行回顾性分析.结果:原发性胆汁性肝硬化阳性率90.24%(37/41),自身免疫性肝炎阳性率44.44%(4/9),乙型肝炎阳性率23.81%(5/21),丙型肝炎阳性率27.27%(3/11),戊型肝炎阳性率80%(8/10),40例对照组3例阳性.PBC、戊型肝炎与正常组血清AMA检测比较有非常显著性差异(P<0.01);AIH与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05);乙型肝炎组、丙型肝炎组与正常对照组比较无显著性差异;乙型肝炎组、丙型肝炎组分别与戊型肝炎组比较均有显著性差异(P<0.01、P<0.05):乙型肝炎组与丙型肝炎组比较无显著性差异.PBC组与非PBC组血清AMA的阳性率分别为90.24%和39.22%,两组比较有非常显著性差异(P<0.01).结论:血清抗AMA抗体检测对诊断原发性胆汁性肝硬化患者有着重要临床意义. 展开更多
关键词 原发性胆汁性肝硬化 临床意义 抗体测定 诊断 自身免疫性肝炎 显著性差异 抗线粒体抗体 间接免疫荧光法 乙型肝炎 丙型肝炎 正常对照组 戊型肝炎 阳性率 回顾性分析 肝硬化患者 AMA 检测比较 抗体检测 PBC 血清 正常组
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弓形虫AMA1蛋白真核表达载体的构建及免疫活性检测 被引量：1
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作者 金春梅 张厚双 +3 位作者 薛书江 权根花 崔金伟 王兴贵 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第29期16243-16244,16255,共3页
[目的]构建弓形虫AMA1基因的真核表达质粒,研究其在体外细胞中的表达情况。[方法]运用PCR方法和克隆技术,构建pcD-NA3.1-AMA1重组质粒;利用脂质体介导转染法,将该重组质粒导入HEK-293细胞,用Western blotting法检测其在体外的表达情况。... [目的]构建弓形虫AMA1基因的真核表达质粒,研究其在体外细胞中的表达情况。[方法]运用PCR方法和克隆技术,构建pcD-NA3.1-AMA1重组质粒;利用脂质体介导转染法,将该重组质粒导入HEK-293细胞,用Western blotting法检测其在体外的表达情况。[结果]从弓形虫RH株cDNA中扩增出AMA1基因片段,成功构建重组表达质粒pcDNA3.1-AMA1,转染AMA1基因的HEK-293细胞表达产物经Western blotting鉴定,其分子量约为70kD,能被特异性免疫血清所识别。[结论]构建的真核表达质粒pcDNA3.1-AMA1能在HEK-293细胞中表达,为下一步弓形虫DNA疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 弓形虫 AMA1基因 真核表达
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新孢子虫与弓形虫交叉抗原基因AMA1的克隆及原核表达载体构建 被引量：9
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作者 孙婷婷 金京顺 贾立军 《延边大学农学学报》 2015年第1期8-11,共4页
为了解新孢子虫与弓形虫交叉抗原基因AMA1的生物学特性,应用PCR技术扩增新孢子虫/弓形虫AMA1基因,将PCR产物纯化回收后克隆于pMD18-T Simple Vector,构建pMD18-T-Nc/Tg AMA1重组克隆质粒,经PCR鉴定、酶切鉴定及测序分析后,亚克隆于原核... 为了解新孢子虫与弓形虫交叉抗原基因AMA1的生物学特性,应用PCR技术扩增新孢子虫/弓形虫AMA1基因,将PCR产物纯化回收后克隆于pMD18-T Simple Vector,构建pMD18-T-Nc/Tg AMA1重组克隆质粒,经PCR鉴定、酶切鉴定及测序分析后,亚克隆于原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组原核表达质粒pGEX-4T-Nc/Tg AMA1,经PCR鉴定、酶切鉴定表明,构建的原核表达载体正确。该试验为新孢子虫/弓形虫AMA1基因重组疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 新孢子虫 弓形虫 AMA1 克隆 PGEX-4T-Nc/Tg AMA1
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原发性胆汁性肝硬化和原发性硬化性胆管炎的研究现状 被引量：4
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作者 姚定康 谢渭芬 《肝脏》 2004年第S1期81-86,共6页
关键词 原发性硬化性胆管炎 AIH 胆管癌 PSC 原发性胆汁性肝硬化 UDCA PBC 线粒体抗体 AMA
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原发性干燥综合征伴AMA阴性的原发性胆汁性肝硬化1例 被引量：1
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作者 郑瑞丹 陈雪婉 +2 位作者 陈碧芬 张惠勇 郎振为 《肝脏》 2010年第6期479-479,共1页
关键词 原发性胆汁性肝硬化 原发性干燥综合征 AMA 阴性 结缔组织病 胆汁淤积性 线粒体抗体 免疫学指标
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