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Alg2通过调控Ku70糖基化对肺癌细胞放射敏感性的增强作用
1
作者 张兆阳 姚志成 +1 位作者 王茹茹 赵国平 《安徽大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第2期91-98,共8页
为了探究α-1,3/1,6-甘露糖基转移酶Alg2在增强肺癌细胞放射敏感性中发挥的作用及机制,采用人的非小细胞肺癌细胞(A549),构建Alg2过表达及敲低细胞系,辐照条件下利用DR-GFP质粒报告系统检测Alg2对DNA损伤修复方式,如对同源重组(HR)修复... 为了探究α-1,3/1,6-甘露糖基转移酶Alg2在增强肺癌细胞放射敏感性中发挥的作用及机制,采用人的非小细胞肺癌细胞(A549),构建Alg2过表达及敲低细胞系,辐照条件下利用DR-GFP质粒报告系统检测Alg2对DNA损伤修复方式,如对同源重组(HR)修复和非同源末端连接(NHEJ)修复的影响;再利用Western blot、免疫荧光等方法探究Alg2敲低细胞对辐射的响应,探究Alg2对Ku70糖基化的调控机制.结果表明:辐照引起Alg2敲低的肿瘤细胞死亡显著增加;Alg2敲低显著抑制非同源末端连接(NHEJ)修复途径,并导致Ku70蛋白糖基化减少.总的来说,Alg2通过调控NHEJ修复关键蛋白Ku70的糖基化,抑制Alg2后会抑制Ku70的染色质募集,影响肿瘤细胞的NHEJ修复,最终增加肿瘤细胞的放射敏感性. 展开更多
关键词 alg2 KU70 糖基化 放射敏感性 NHEJ
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人来源α-1,3/1,6甘露糖转移酶Alg2的异源表达及活性测定
2
作者 胥欣欣 王春迪 +1 位作者 陈帅 高晓冬 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期78-85,共8页
在N-糖基化途径中,双功能型的甘露糖转移酶Alg2蛋白催化两个甘露糖分别以α-1,3/1,6连键组装到多萜醇寡糖Man1GlcNAc2-PP-Dol上,形成Man3GlcNAc2-PP-Dol。作者探究人来源的Alg2蛋白(hAlg2)在酿酒酵母中的体内功能和在大肠杆菌中表达并... 在N-糖基化途径中,双功能型的甘露糖转移酶Alg2蛋白催化两个甘露糖分别以α-1,3/1,6连键组装到多萜醇寡糖Man1GlcNAc2-PP-Dol上,形成Man3GlcNAc2-PP-Dol。作者探究人来源的Alg2蛋白(hAlg2)在酿酒酵母中的体内功能和在大肠杆菌中表达并纯化后的体外活性。构建酿酒酵母w303a-GAL1pr-ALG2,并利用该菌株的生长被葡萄糖抑制的特点,发现过表达hALG2基因能够回补其生长缺陷,证实了hALG2和ScALG2的功能同源性。作者利用大肠杆菌表达系统,成功表达并纯化了TrxA-hAlg2,并以Man1GlcNAc2-PP-Phy(PPGn2M1)代替hAlg2的天然底物,测定了其体外活性。结合液质联用的方法,检测发现TrxA-hAlg2具有催化PPGn2M1生成PPGn2M2和PPGn2M3的甘露糖基转移酶活性,为建立基于大肠杆菌表达纯化的hAlg2体外反应体系奠定了基础。 展开更多
关键词 N-糖基化 alg2蛋白 甘露糖基转移酶 液质联用
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海藻酸-SiO_2杂化凝胶固定化洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶的研究 被引量：4
3
作者 喻本青 闫云君 +2 位作者 刘涛 汪小峰 杨江科 《生物加工过程》 CAS CSCD 2010年第1期16-22,共7页
利用四乙氧基硅烷(TEOS)原位水解法将S iO2掺杂于海藻酸(ALG)凝胶中,通过双交联制备出新型ALG-S iO2杂化凝胶以固定化洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶。结果表明,固定化酶的最优条件:质量分数为2.0%的ALG、0.2 mol/L CaC l2、V(ALG)/V(TEOS)为5... 利用四乙氧基硅烷(TEOS)原位水解法将S iO2掺杂于海藻酸(ALG)凝胶中,通过双交联制备出新型ALG-S iO2杂化凝胶以固定化洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶。结果表明,固定化酶的最优条件:质量分数为2.0%的ALG、0.2 mol/L CaC l2、V(ALG)/V(TEOS)为5、加酶量为1 g ALG加100 mg酶粉、固定化60 m in、采用直径为0.8 mm的针头滴定、真空冷冻干燥。在此条件下,酶蛋白的包埋率可达100%,酶活回收率可达91%。固定化酶的最适pH为8.0,最适作用温度为50℃,重复使用8次后,酶活性仍能保持80%以上。ALG-S iO2杂化凝胶的场扫描电镜(FESEM)观察发现凝胶的整体构造仍然是海藻酸凝胶骨架;与ALG凝胶平滑的内部相比较,杂化凝胶仍具有完整的网络结构,但内部更为粗糙,结构更为致密。 展开更多
关键词 ALG—SiO2杂化凝胶 洋葱伯克霍尔德菌 固定化 脂肪酶
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