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仿刺参补体AjC3部分基因的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量：1
1
作者 张思 李明 +3 位作者 张建清 卢亚楠 翟钰 张峰 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期94-98,共5页
通过制备仿刺参补体C3(AjC3)多克隆抗体,为进一步研究仿刺参补体AjC3免疫机制奠定基础。利用PCR技术扩增AjC3部分基因片段(4556~5110bp),将该片段与原核表达载体pGS-21a连接。将重组表达质粒转化到Transetta(DE3)中经IPTG诱导表达。表... 通过制备仿刺参补体C3(AjC3)多克隆抗体,为进一步研究仿刺参补体AjC3免疫机制奠定基础。利用PCR技术扩增AjC3部分基因片段(4556~5110bp),将该片段与原核表达载体pGS-21a连接。将重组表达质粒转化到Transetta(DE3)中经IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经镍柱纯化后,作为抗原免疫小鼠制备AjC3多克隆抗体。分别用间接ELISA,Western blot检测抗体的效价和特异性。结果显示,PCR扩增得到约555bp的目的片段,重组蛋白分子量大小约56ku;间接ELISA检测抗体效价达1∶25600,Western blot结果显示,多克隆抗体具有良好的特异性。该试验成功的制备了补体AjC3多克隆抗体,为补体AjC3的进一步研究提供了检测工具。 展开更多
关键词 仿刺参 ajc3 多克隆抗体 原核表达
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刺参补体AjC3活性相关miRNA的筛选与初步研究 被引量：7
2
作者 翟钰 曹雁惠 +1 位作者 张峰 常亚青 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期585-591,共7页
为了从miRNA调控方面探索刺参Apostichopus japonicus的免疫机制,用脂多糖刺激刺参,在第0、6、12 h取样(记为样本A00、A06、A12),以海胆Strongylocentrotus purpuratus基因组为参照基因,运用高通量测序和相关生物信息学方法筛选与刺参补... 为了从miRNA调控方面探索刺参Apostichopus japonicus的免疫机制,用脂多糖刺激刺参,在第0、6、12 h取样(记为样本A00、A06、A12),以海胆Strongylocentrotus purpuratus基因组为参照基因,运用高通量测序和相关生物信息学方法筛选与刺参补体(AjC3)相关的miRNAs,并通过实时定量PCR验证相关miRNA和AjC3 mRNA的表达变化。结果表明:经比对筛选出刺参体腔细胞的miRNA共41个;通过靶基因预测和差异表达分析,共得到靶基因为补体AjC3的miRNA有3个,分别为spu-miR-133、spu-miR-137、spu-miR-2006;3种miRNA和AjC3 mRNA实时定量PCR显示,spu-miR-133表达量呈先升高后降低的趋势,12 h达到最高值,spu-miR-137表达量呈先降低后升高的趋势,9 h达到最低值,12 h达到最高值,spu-miR-2006表达量呈先升高后降低的趋势,9 h达到最高值,AjC3 mRNA表达量呈先升高后降低的趋势,9 h达到最高值。研究表明,spu-miR-133、spu-miR-137可能共同抑制调控补体AjC3基因表达,spu-miR-2006在免疫反应中对其他靶基因进行调控。 展开更多
关键词 MIRNA 靶基因 补体ajc3 MRNA
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温度变化对刺参(Apostichopus japonicus)补体AjC3 mRNA和MicroR137活性的影响 被引量：1
3
作者 杜晓丽 邵洁 +1 位作者 许艺迪 张峰 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期3380-3383,共4页
本研究分析了温度对刺参AjC3 mRNA活性、MicroR-137表达的影响及MicroR-137和AjC3mRNA活性的相关性。研究结果表明不同温度下AjC3 mRNA和MicroR-137的表达量不同;低温对刺参的免疫反应有抑制作用;AjC3 mRNA在脂多糖刺激下呈现先升高后... 本研究分析了温度对刺参AjC3 mRNA活性、MicroR-137表达的影响及MicroR-137和AjC3mRNA活性的相关性。研究结果表明不同温度下AjC3 mRNA和MicroR-137的表达量不同;低温对刺参的免疫反应有抑制作用;AjC3 mRNA在脂多糖刺激下呈现先升高后下降的趋势,而MicroR-137则是呈现先降低后升高的趋势。实验表明,温度影响AjC3 mRNA的表达,对MicroR-137的表达影响不明显;MicroR-137和AjC3 mRNA之间存在负相关性,可能调控AjC3 mRNA的表达。 展开更多
关键词 RNA提取 刺参 miRNA ajc3 MRNA 实时定量PCR
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仿刺参补体类似物活性的测定 被引量：12
4
作者 张峰 宫晶 +2 位作者 王海峰 赵啸 李宣延 《大连水产学院学报》 CSCD 北大核心 2007年第4期246-248,共3页
用3种方法对仿刺参Apostichopus japonicus体腔液、体腔液上清液及体腔细胞中的总补体溶血活性和补体类似物AjC3、AjC4活性进行测定。结果表明:在仿刺参体腔液、体腔液上清液和体腔细胞中能够检测到总补体溶血活性和补体类似物AjC3、Aj... 用3种方法对仿刺参Apostichopus japonicus体腔液、体腔液上清液及体腔细胞中的总补体溶血活性和补体类似物AjC3、AjC4活性进行测定。结果表明:在仿刺参体腔液、体腔液上清液和体腔细胞中能够检测到总补体溶血活性和补体类似物AjC3、AjC4,表明仿刺参体内存在有脊椎动物的补体类似物,且活性与正常人补体活性相似。仿刺参体内总补体溶血活性和补体类似物AjC3、AjC4的活性依次顺序均为体腔液>体腔细胞>体腔液上清液。 展开更多
关键词 仿刺参 体腔液 体腔细胞 补体类似物ajc3 AjCA 溶血活性
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仿刺参体腔液补体类似物化学发光免疫检测 被引量：8
5
作者 张峰 王海峰 +1 位作者 宫晶 常少杰 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期413-416,共4页
首次应用酶联化学发光免疫检测(Chemiluminesent Immunoassay,CLIA)技术测定仿刺参体腔液补体类似物AjC3和AjC4。羊抗人C3、C4抗体吸附到经过紫外线处理的聚苯乙烯管内,采用辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体。过氧化氢和鲁米诺为辣根过氧化... 首次应用酶联化学发光免疫检测(Chemiluminesent Immunoassay,CLIA)技术测定仿刺参体腔液补体类似物AjC3和AjC4。羊抗人C3、C4抗体吸附到经过紫外线处理的聚苯乙烯管内,采用辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体。过氧化氢和鲁米诺为辣根过氧化物酶的底物。捕获抗体包被最适浓度为1μg/ml,免疫反应20℃孵育2h达到平衡。HRP-IgC3、IgC4抗体复合物适宜稀释度为1:2000,HRP-IgC3I、gC4抗体复合物4℃下保存8d性能稳定,室温下5d内性能稳定。标准品浓度在0.1～10ng/ml范围内时与化学发光值之间具有良好的线性相关性,检测灵敏度为0.1ng/ml。结果表明应用酶联化学发光免疫检测技术能够检测到仿刺参体腔液中含有补体类似物,AjC3含量为6.58±1.4μg/ml,AjC4含量为0.67±0.3μg/ml。 展开更多
关键词 仿刺参 体腔液 补体类似物ajc3、AjC4 化学发光免疫检测
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