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Ad.TERT-TRAIL对肿瘤细胞的杀伤作用及其机理 被引量：5
1
作者 唐云霞 陈瑜 +4 位作者 顾锦法 齐荣 邹卫国 蒋琳兰 刘新垣 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第5期536-542,共7页
背景与目的:有学者用人端粒酶逆转录酶(TERT)启动子替换野生型腺病毒E1A自身的启动子,构建了一种肿瘤特异性增殖病毒,即溶瘤腺病毒Ad.TERT。细胞实验和动物实验表明,Ad.TERT有很好的抗癌作用。本研究目的是要在Ad.TERT中插入凋亡基因tr... 背景与目的:有学者用人端粒酶逆转录酶(TERT)启动子替换野生型腺病毒E1A自身的启动子,构建了一种肿瘤特异性增殖病毒,即溶瘤腺病毒Ad.TERT。细胞实验和动物实验表明,Ad.TERT有很好的抗癌作用。本研究目的是要在Ad.TERT中插入凋亡基因trail生成Ad.TERT-TRAIL,观察其是否具有更强的杀伤肿瘤细胞的功效并研究其机理。方法:通过腺病毒包装质粒pBH GE3与携带trail的小质粒pZhTERT-trail在H EK293细胞中同源重组构建Ad.TERT-TRAIL病毒,然后用PCR鉴定,并用W estern blot检测E1A、trail基因的表达以进一步确证。用结晶紫染色法和M TT法检测Ad.TERT和Ad.TERT-TRAIL对肿瘤细胞和正常细胞杀伤作用的差异。用W estern blot检测Caspase-3表达量以观察肿瘤细胞的凋亡情况,同时用流式细胞仪测定肿瘤细胞的凋亡率。结果:PCR扩增出来的条带为860bp,即为trail基因。W estern blot结果显示,Ad.TERT-TRAIL中的E1A和trail只在肿瘤细胞中表达,说明Ad.TERT-TRAIL构建成功。结晶紫染色结果表明,Ad.TERT-TRAIL对肿瘤细胞的杀伤力比Ad.TERT高10～100倍,而对正常细胞的影响跟Ad.TERT一样小。100M OI(m ultiple ofinfection)Ad.TERT-TRAIL感染结肠癌细胞SW62072h后,细胞存活率为4%;而感染了Ad.TERT的SW620细胞存活率却达56%。两种病? 展开更多
关键词 ad.tert ad.tert—TRAIL 溶瘤病毒 细胞凋亡
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