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奶山羊ACSL6基因克隆及表达调控分析 被引量：2
1
作者 程菲 潘坛 +3 位作者 张飞 曾鑫 罗军 李聪 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第7期2291-2301,共11页
研究旨在获得西农萨能奶山羊长链脂酰CoA合成酶6(long-chain acyl-CoA synthetase 6,ACSL6)基因CDS序列,初步探究其对奶山羊乳腺上皮细胞脂质代谢的影响。以西农萨能奶山羊原代乳腺上皮细胞为试验材料,对ACSL6基因进行扩增和克隆,并利... 研究旨在获得西农萨能奶山羊长链脂酰CoA合成酶6(long-chain acyl-CoA synthetase 6,ACSL6)基因CDS序列,初步探究其对奶山羊乳腺上皮细胞脂质代谢的影响。以西农萨能奶山羊原代乳腺上皮细胞为试验材料,对ACSL6基因进行扩增和克隆,并利用实时荧光定量PCR方法对ACSL6基因进行组织表达分析,针对ACSL6基因的碱基序列利用在线软件进行生物信息学分析,采用RNA干扰技术改变奶山羊乳腺上皮细胞中ACSL6基因mRNA的表达水平。结果显示,ACSL6基因CDS区全长为2169 bp,编码722个氨基酸;生物信息学分析表明ACSL6蛋白为碱性不稳定蛋白。组织表达分析显示,ACSL6基因在奶山羊乳腺组织中高度表达,其次为脾脏。将设计合成的siRNA转染乳腺上皮细胞,发现干扰ACSL6基因的表达使脂质代谢相关基因乙酰辅酶A羧化酶(acetyl CoA carboxylase,ACC)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1(stearyl-CoA dehydrogenase 1,SCD1)、脂肪酸转运蛋白36(cluster of differentiation 36,CD36)、固醇调节元件结合蛋白1(sterol regulatory element binding proteins 1,SREBP1)的mRNA表达水平极显著下调(P<0.01)。本研究结果为从蛋白及个体水平上研究ACSL6基因对奶山羊乳腺脂质代谢的影响提供理论依据。 展开更多
关键词 奶山羊 acsl6基因 克隆 生物信息分析 RNA干扰
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鹅ACSL6基因编码区克隆、序列分析及组织表达 被引量：2
2
作者 王继文 刘贺贺 +1 位作者 吕佳 潘志雄 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2012年第23期27-30,共4页
为研究长链酯酰辅酶A合成酶6(ACSL6)在鹅中的功能,采用RT-PCR方法对其扩增,并采用荧光定量PCR方法检测其在四川白鹅不同组织中的差异表达。结果表明:实验成功获得了鹅ACSL6基因的编码区序列(GQ449255),序列全长2 097 bp,编码698个氨基酸... 为研究长链酯酰辅酶A合成酶6(ACSL6)在鹅中的功能,采用RT-PCR方法对其扩增,并采用荧光定量PCR方法检测其在四川白鹅不同组织中的差异表达。结果表明:实验成功获得了鹅ACSL6基因的编码区序列(GQ449255),序列全长2 097 bp,编码698个氨基酸;鹅ACSL6与鸡该基因在核苷酸和氨基酸水平上都有较高的同源性;鹅ACSL6氨基酸与哺乳动物一样,也存在2个保守功能区(跨膜区和luxE保守区),且在这些区域物种间变异较少;鹅ACSL6在脑组织中有较高表达,在肝脏中表达较少,仍与其在哺乳动物中的表达特性一致。以上研究结果表明,ACSL6基因在物种间比较保守,ACSL6与鹅大脑的发育关系密切,可能与鹅肥肝形成的关系较少。 展开更多
关键词 acsl6 CDS 序列分析 组织表达 鹅
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bta-miR-330对牛前体脂肪细胞增殖和分化的影响
3
作者 杨志梅 高妮 +1 位作者 马鑫浩 昝林森 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期1-11,22,共12页
【目的】研究bta-miR-330对牛前体脂肪细胞增殖和分化的影响。【方法】利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测bta-miR-330在牛前体脂肪细胞分化进程中的表达量。根据bta-miR-330的成熟序列设计bta-miR-330的模拟物、抑制剂及其对照序列,通过... 【目的】研究bta-miR-330对牛前体脂肪细胞增殖和分化的影响。【方法】利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测bta-miR-330在牛前体脂肪细胞分化进程中的表达量。根据bta-miR-330的成熟序列设计bta-miR-330的模拟物、抑制剂及其对照序列,通过lip3000转染至牛前体脂肪细胞,利用EdU染色、RT-qPCR和Western blot方法检测bta-miR-330过表达和抑制表达对牛前体脂肪细胞增殖阳性细胞数量、增殖相关基因P21、P27、CDK1、CCND1、CCNE1、MCM3和PCNA及增殖相关蛋白PCNA和CDK1表达量的影响。利用油红O染色、RT-qPCR和Western blot方法检测bta-miR-330过表达和抑制表达对牛前体脂肪细胞脂滴累积、细胞分化相关基因PPARγ、CEBPα、SREBP1和FABP4及分化相关蛋白PPARγ、CEBPα和FABP4表达量的影响。利用生物信息学方法预测bta-miR-330的靶基因,采用RT-qPCR及双萤光素报告酶方法检测bta-miR-330与靶基因的靶向关系。【结果】bta-miR-330在牛前体脂肪细胞分化过程中表达量存在显著差异。过表达bta-miR-330可降低牛前体脂肪细胞增殖阳性细胞数量,显著抑制细胞增殖相关基因MCM3、CCNE1和CCND1及相关蛋白PCNA和CDK1的表达。过表达bta-miR-330可促进牛前体脂肪细胞脂滴累积,显著促进细胞分化相关基因CEBPα和FABP4及相关蛋白PPARγ和FABP4的表达。抑制bta-miR-330的表达会在一定程度上出现与过表达相反的作用。在线软件预测长链酯酰辅酶A合成酶6(ACSL6)基因为bta-miR-330的靶基因,RT-qPCR和双萤光素报告酶载体试验结果表明,bta-miR-330和ACSL6存在靶向关系。【结论】bta-miR-330对牛前体脂肪细胞增殖和分化具有调控作用。 展开更多
关键词 bta-miR-330 牛 前体脂肪细胞 acsl6基因
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基于GEO数据库分析糖尿病心肌病的差异表达基因 被引量：1
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作者 陈嘉敏 李莹 +3 位作者 吴会会 刘鹏 郑燕 苏国海 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期545-554,共10页
目的通过对GEO数据库中有关糖尿病心肌病的mRNA芯片进行分析,筛选出导致糖尿病心肌病的关键基因。方法使用GEO数据库的在线分析工具GEO2R对数据集GSE4745和GSE5606进行差异基因分析后,在R中绘制差异表达基因火山图,利用在线韦恩图绘制... 目的通过对GEO数据库中有关糖尿病心肌病的mRNA芯片进行分析,筛选出导致糖尿病心肌病的关键基因。方法使用GEO数据库的在线分析工具GEO2R对数据集GSE4745和GSE5606进行差异基因分析后,在R中绘制差异表达基因火山图,利用在线韦恩图绘制工具分析两个数据集共同表达的差异基因,在R中利用clusterProfile包将差异表达基因进行基因本体和京都基因与基因组百科全书富集分析,GSEA软件进行基因集富集分析,同时使用STRING在线数据库构建差异基因对应蛋白的蛋白互作网络,利用Cytoscape的插件Cytohubba中最大集团中心算法计算出排名前10的基因,在原代大鼠心肌细胞中观察比较筛选出的关键基因在正常组和高糖组的表达情况。结果Pdk4、Ucp3、Hmgcs2、Asl6、Slc2a4与芯片分析结果相符,Pdk4、Ucp3、Hmgcs2在高糖(25 mmol/L)刺激72 h后的心肌细胞中表达增加,Acsl6、Slc2a4在高糖刺激后的心肌细胞中表达下降。结论Pdk4、Ucp3、Hmgcs2、Asl6、Slc2a4可能与糖尿病心肌病的发生发展相关,可能是糖尿病心肌病潜在的生物标志物。 展开更多
关键词 糖尿病心肌病 GEO数据库 基因富集 acsl6 Pdk4 Slc2a4 Hmgcs2 Ucp3
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