根瘤菌AcrR蛋白表达、纯化及热稳定性分析

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作者 闫靖芸 赵飞燕 +3 位作者 张涛 霍梦琦 冀照君 李国瑞 《内蒙古民族大学学报(自然科学版)》 2025年第1期63-73,共11页

成功克隆并表达纯化根瘤菌AcrR蛋白,同时对其热稳定性特征进行了表征。利用Sticky-End法将AcrR基因插入到表达载体pHAT2中,构建重组质粒pHAT2-AcrR。通过热激法将重组质粒转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞,并在异丙基-β-D-硫... 成功克隆并表达纯化根瘤菌AcrR蛋白,同时对其热稳定性特征进行了表征。利用Sticky-End法将AcrR基因插入到表达载体pHAT2中,构建重组质粒pHAT2-AcrR。通过热激法将重组质粒转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞,并在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下表达重组蛋白。结合亲和层析、离子交换层析和凝胶色谱层析等技术获得高纯度的AcrR蛋白,SDS-PAGE显示其分子量约为23.56 kDa。生物信息学分析预测,AcrR基因片段长度为606 bp,共编码201个氨基酸残基,等电点(pI)为5.74,总原子量为3168,分子式为C_(993)H_(1577)N_(285)O_(300)S_(13),该蛋白缺乏跨膜结构域,被归类为亲水性不稳定蛋白。进一步热稳定性实验(TSA)发现,AcrR蛋白在50 mmol/L Citric acid、500 mmol/L NaCl、pH 5.0的缓冲液中展现出较高的热稳定性。这些发现为理解AcrR蛋白的生物学特性及后续的晶体结构解析和功能研究提供了实验数据。 展开更多

关键词 根瘤菌 acrr基因 蛋白纯化 热稳定性分析

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大肠杆菌acrR插入序列对acrAB表达水平及多重耐药性的影响 被引量：3

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作者 任艳娜 李健 +6 位作者 甄盼盼 付小平 刘志杰 任金程 刘雅红 曾振灵 蒋红霞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期121-125,共5页

为研究大肠杆菌(E.coli)分离株ED28的acrR基因中777bp插入片段对外排泵AcrAB表达水平及多重耐药性的影响,本研究将野生型acrR通过互补实验导入ED28中得到C-ED28。通过药物的最低抑菌浓度(MIC)测定、有机溶剂耐受性试验和实时定量PCR(qP... 为研究大肠杆菌(E.coli)分离株ED28的acrR基因中777bp插入片段对外排泵AcrAB表达水平及多重耐药性的影响,本研究将野生型acrR通过互补实验导入ED28中得到C-ED28。通过药物的最低抑菌浓度(MIC)测定、有机溶剂耐受性试验和实时定量PCR(qPCR)等方法检测菌株中AcrAB外排泵的活性。通过PCR方法检测ED28和C-ED28喹诺酮耐药决定区(QRDR)的氨基酸突变及携带的质粒介导喹诺酮类耐药(PMQR)基因和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因。结果显示,临床分离菌株ED28对12种抗生素呈多重耐药表型,而互补菌株C-ED28恢复了对多种药物的敏感性。当能量抑制剂(CCCP)存在时,喹诺酮类和β-内酰胺类药物对ED28的MIC普遍降低,而对C-ED28的MIC保持不变。ED28对染料溴化乙锭(EB)的MIC为512μg/mL,对正己烷和环己烷耐受;而C-ED28对染料EB的敏感性增强,MIC为16μg/mL,对正己烷耐受,对环己烷不耐受。qPCR结果显示,基因acrA和acrB在C-ED28中的表达水平低于亲本菌株ED28,而基因marA在C-ED28中的表达水平高于ED28。靶位突变检测和耐药基因检测结果显示,ED28存在gyrA(Ser83Leu和Asp87Asn)和parC(Ser80Ile)双突变,携带aac(6')-Ib-cr、blaCTX-M-27和blaTEM-13个质粒编码耐药基因;而C-ED28仅存在gyrA(Asp87Asn)一个突变位点,并丢失aac(6')-Ib-cr、blaTEM-1两个基因。 展开更多

关键词 acrr 表达水平 耐药性 外排泵

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沙门氏菌环丙沙星诱导株marR,soxR和acrR基因突变与多重耐药性的相关性研究(英文) 被引量：1

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作者 李琳 王玉平 +2 位作者 吴永宁 吴聪明 沈建忠 《食品安全质量检测学报》 CAS 2009年第1期1-9,共9页

本文对11株动物源体外诱导的环丙沙星抗性沙门氏菌的m ar操纵子基因marO,marR,marA,marB,soxR,soxS和acrR基因(包括启动子区)的点突变进行检测,结果显示在沙门氏菌诱导株中marR,soxR和acrR基因检测到新突变,而marO,marA,marB和soxS基因... 本文对11株动物源体外诱导的环丙沙星抗性沙门氏菌的m ar操纵子基因marO,marR,marA,marB,soxR,soxS和acrR基因(包括启动子区)的点突变进行检测,结果显示在沙门氏菌诱导株中marR,soxR和acrR基因检测到新突变,而marO,marA,marB和soxS基因未发现突变。应用实时荧光定量PCR对诱导株的marA和soxS基因及外排泵基因acrA,acrB和tolC的mRNA表达水平进行检测,结果表明这些基因的表达量均显著增加,且marA,soxS和acrAB-tolC的mRNA表达水平与沙门氏菌诱导株的多重耐药表型(M ar表型)相关,环丙沙星诱导株对其它氟喹诺酮类药物和结构不相关的抗生素均产生耐药。本研究结果表明沙门氏菌诱导株的调控基因突变和mar操纵子介导的acrAB-tolC的表达上调均贡献了沙门氏菌诱导株的氟喹诺酮抗性和Mar表型,且诱导株的marR,soxR和acrR基因突变与氟喹诺酮抗性和Mar表型具有相关性。 展开更多

关键词 氟喹诺酮抗性 MARR soxR acrr基因突变 实时荧光定量PCR mar操纵子 acrAB-tolC

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诱导耐药型宋内志贺菌中主动外排阻遏基因acrR、marR的变化 被引量：1

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作者 高佩增 姚明晓 《中国实验诊断学》 2015年第10期1625-1629,共5页

目的分析宋内志贺菌在被环丙沙星诱导耐药后其主动外排阻遏基因acrR、marR突变与表达量的变化。方法通过1/2MIC逐级诱导宋内志贺菌对环丙沙星耐药,通过提取诱导株诱导前后DNA和总RNA,采用基因测序检测突变和实时荧光定量PCR方法检测acrR... 目的分析宋内志贺菌在被环丙沙星诱导耐药后其主动外排阻遏基因acrR、marR突变与表达量的变化。方法通过1/2MIC逐级诱导宋内志贺菌对环丙沙星耐药,通过提取诱导株诱导前后DNA和总RNA,采用基因测序检测突变和实时荧光定量PCR方法检测acrR、marR基因表达量的变化。结果 2株诱导耐药株中acrR、marR中均不存在基因突变,相对于诱导前acrR、marR Ct值增加,基因表达量降低。结论 acrR、marR基因表达量降低间接导致主动外排基因acrAB-tolC转录水平提高,证实了诱导剂环丙沙星激活了菌株的主动外排系统。 展开更多

关键词 诱导耐药 主动外排 阻遏基因 acrr MARR

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维氏气单胞菌acrR敲除株的构建 被引量：1

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作者 胡康 张伊动 +3 位作者 唐燕琼 李宏 马香 刘柱 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期42-45,共4页

从维氏气单胞菌C4(A.veronii C4)基因组DNA中扩增得到acrR基因上游同源臂片段和下游同源臂片段,连接到自杀质粒pRE112中以构建敲除重组质粒pRE112-ΔacrR,并通过电转化将敲除重组质粒导入大肠杆菌WM3064中,再通过双亲接合将其转入维氏... 从维氏气单胞菌C4(A.veronii C4)基因组DNA中扩增得到acrR基因上游同源臂片段和下游同源臂片段,连接到自杀质粒pRE112中以构建敲除重组质粒pRE112-ΔacrR,并通过电转化将敲除重组质粒导入大肠杆菌WM3064中,再通过双亲接合将其转入维氏气单胞菌C4中,以筛选得到acrR基因敲除的维氏气单胞菌突变株。生长曲线测定结果显示acrR基因敲除不会影响维氏气单胞菌的生长。生物膜测定表明,敲除acrR基因的维氏气单胞菌株表现出生物膜的形成显著增加。所构建的敲除株为进一步探索AcrR在维氏气单胞菌中的功能提供了必要材料,并提示AcrR在细菌生物膜形成中的潜在调控功能。 展开更多

关键词 acrr基因 基因敲除 生物膜 维氏气单胞菌

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大肠杆菌多重耐药调节基因AcrR和MarR突变 被引量：7

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作者 佟海山 李乾学 +2 位作者 邓彦宏 孙智勇 邓旭明 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第7期10-12,共3页

研究大肠杆菌多重耐药外输泵抑制基因AcrR和MarR突变对大肠杆菌多重耐药的调节机制。采用琼脂平板二倍稀释法测定环丙沙星、诺氟沙星、氯霉素、四环素、利福平、庆大霉素、大观霉素、阿米卡星、链霉素、阿莫西林等10种药物对临床分离的3... 研究大肠杆菌多重耐药外输泵抑制基因AcrR和MarR突变对大肠杆菌多重耐药的调节机制。采用琼脂平板二倍稀释法测定环丙沙星、诺氟沙星、氯霉素、四环素、利福平、庆大霉素、大观霉素、阿米卡星、链霉素、阿莫西林等10种药物对临床分离的33株大肠杆菌和大肠埃希氏菌的标准菌株ATCC25922的最小抑菌浓度(MIC),从中筛选出7株多重耐药菌和2株相对敏感菌,并对这9株菌及标准菌ATCC25922的AcrR和MarR基因进行聚合酶链式反应(PCR)扩增并克隆后测序,分析DNA序列及氨基酸序列的突变情况。耐药菌和敏感菌均发现有部分菌株发生了不同程度的点突变。AcrR和MarR同时突变将更大限度的提高细菌的耐药性。 展开更多

关键词 大肠埃希氏菌 AerR MARR MIC

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AcrR突变介导鼠伤寒沙门菌耐药的调控 被引量：1

7

作者 李小军 李胜利 +2 位作者 樊帅奇 邓翔杰 孙亚伟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2022年第10期44-52,共9页

为了阐明临床鼠伤寒沙门菌(CST1、CST2、CST3和CST4)多重耐药机制,本试验通过2倍微量稀释法测定不同抗菌药物在多重耐药泵抑制剂[苯丙氨酸-精氨酸-β-萘胺(PAβN)和羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)]、多重耐药泵AcrB和多重耐药泵调控蛋白存在... 为了阐明临床鼠伤寒沙门菌(CST1、CST2、CST3和CST4)多重耐药机制,本试验通过2倍微量稀释法测定不同抗菌药物在多重耐药泵抑制剂[苯丙氨酸-精氨酸-β-萘胺(PAβN)和羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)]、多重耐药泵AcrB和多重耐药泵调控蛋白存在及缺失条件下对鼠伤寒沙门菌的最小抑菌浓度(MIC);用实时荧光定量PCR(Real-time RT-PCR)检测临床菌和鼠伤寒沙门菌CVCC541(ST)的多重耐药泵基因表达水平;随后用PCR扩增临床菌喹诺酮耐药决定区和多重耐药泵调控蛋白编码基因并进行测序分析;依据所测序列,选取发生突变的耐药泵相关蛋白,构建该蛋白重组质粒并在临床突变菌中过表达并检测其对MICs的影响。结果显示:PAβN可导致盐酸四环素、多西环素、加替沙星和恩诺沙星对所测细菌的MICs下降3.00~26.67倍;临床菌acrA表达水平相对ST菌增加3~9倍。CST2、CST3和CST4中,多重耐药泵编码基因acrF、mdfA和emrB表达水平相对ST菌增加5~15倍。AcrB失活后,大部分药物对基因失活菌的MICs下降3~80倍,但多重耐药泵调控蛋白RamA、MarA和SoxS分别失活后,所测药物对基因缺失菌的MICs均未发生显著改变;测序结果表明,CST2和CST3染色体内AcrAB的负调控蛋白AcrR携带Ser216→Ala突变,CST4的acrR由于1个碱基缺失导致其转录提前终止;当ST的acrR在临床突变菌中过表达后,盐酸四环素、头孢噻呋钠、多西环素、恩诺沙星和加替沙星对细菌的MICs下降3.00~21.40倍。本试验首次在临床鼠伤寒沙门菌中检测到AcrR突变,该突变参与细菌耐药调控。 展开更多

关键词 鼠伤寒沙门菌 细菌耐药 ACRB acrr

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大肠杆菌的AcrR蛋白调控结直肠细胞NCM460的凋亡研究

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作者 冯春念 雷云波 +2 位作者 赵吉昌 赵千秋 廖琪 《标记免疫分析与临床》 CAS 2020年第4期670-676,共7页

目的探讨大肠杆菌的AcrR蛋白如何调控结直肠细胞NCM460的凋亡。方法大肠杆菌感染或大肠杆菌的AcrR蛋白转染结直肠细胞NCM460后,采用qPCR检测凋亡相关基因BCL-2、NOXA、BAK、BAX、BCL-2A1、BCL-XL、MCL-1、BIM、BMF和GAPDH的mRNA水平,采... 目的探讨大肠杆菌的AcrR蛋白如何调控结直肠细胞NCM460的凋亡。方法大肠杆菌感染或大肠杆菌的AcrR蛋白转染结直肠细胞NCM460后,采用qPCR检测凋亡相关基因BCL-2、NOXA、BAK、BAX、BCL-2A1、BCL-XL、MCL-1、BIM、BMF和GAPDH的mRNA水平,采用免疫印迹检测凋亡相关蛋白CLEAVED-CAS3、CLEAVED-CAS9、NOXA、BAK、BAX的表达量,Annex-V染色检测NCM460细胞凋亡水平;免疫共沉淀检测凋亡上游NF-KB通路RELA与AcrR蛋白的相互作用。结果当大肠杆菌感染结直肠细胞NCM460后,细胞凋亡相关基因BCL-2的mRNA水平显著下降(P<0.05),NOXA、BAK、BAX的mRNA水平显著上升(P<0.05),同时细胞凋亡水平显著上升(P<0.05)。大肠杆菌的AcrR蛋白转染结直肠细胞NCM460后,细胞凋亡相关基因NOXA、BAK、BAX的mRNA水平显著上升(P<0.05),凋亡相关蛋白NOXA、BAK、BAX、CLEAVED-CAS3、CLEAVED-CAS9的表达量显著上升,细胞凋亡水平显著上升(P<0.05)。大肠杆菌的AcrR蛋白与RelA存在相互作用,并且AcrR引起的NCM460细胞凋亡能被NF-κF通路抑制剂QNZ阻断。结论AcrR通过与NF-κB通路中的RelA相互作用促进结直肠细胞NCM460细胞凋亡。 展开更多

关键词 大肠杆菌 acrr 结直肠细胞 NCM460 细胞凋亡

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志贺菌临床分离株耐多药与调控基因突变关系 被引量：8

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作者 吕锐利 段广才 +1 位作者 宋春花 郗园林 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期568-570,共3页

目的研究志贺菌的耐多药性及其耐多药调控基因acrR、marOR的变异性。方法对56株临床分离的志贺菌进行四环素、氯霉素、氨苄青霉素、环丙沙星、诺氟沙星等5种药物的药敏试验,对其acrR、marOR基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增后,TaqI限制性... 目的研究志贺菌的耐多药性及其耐多药调控基因acrR、marOR的变异性。方法对56株临床分离的志贺菌进行四环素、氯霉素、氨苄青霉素、环丙沙星、诺氟沙星等5种药物的药敏试验,对其acrR、marOR基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增后,TaqI限制性内切酶酶切与单链构象多态性(SSCP)分析。结果筛选出35株耐多药株与11株敏感野生株。56株临床分离的志贺菌属细菌的耐多药率为62.5%;35株耐多药株与11株敏感野生株均扩增出acrR、marOR基因,未发现基因缺失株;单链构象多态性分析发现,acrR基因突变率为6.52%,marOR基因突变率为10.87%,11株敏感野生株均未检出以上2种基因突变。结论志贺菌耐多药率较高,acrR、marOR基因突变可能是其耐多药的调控机制之一。 展开更多

关键词 志贺菌 耐多药 acrr marOR 基因突变

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喹诺酮类耐药决定区、外排泵负调控基因对大肠杆菌氟喹诺酮高水平耐药分子机制的影响 被引量：6

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作者 任艳娜 甄盼盼 +5 位作者 李健 郭玉芳 王丽华 任君玉 张文慧 蒋红霞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期11-16,共6页

为了探讨耐喹诺酮类决定区(QRDR)、外排泵负调控基因(acrR、marR和soxR)突变对临床分离株氟喹诺酮(FQs)高水平耐药的影响,本研究对临床分离的18株FQs耐药大肠杆菌(E.coli),采用PCR方法检测QRDR、acrR、marR和soxR的突变情况;通过RT-PCR... 为了探讨耐喹诺酮类决定区(QRDR)、外排泵负调控基因(acrR、marR和soxR)突变对临床分离株氟喹诺酮(FQs)高水平耐药的影响,本研究对临床分离的18株FQs耐药大肠杆菌(E.coli),采用PCR方法检测QRDR、acrR、marR和soxR的突变情况;通过RT-PCR的方法检测外排泵及膜孔蛋白相关基因的表达水平。结果显示,QRDR的突变主要集中在常规突变GyrA(Ser83Leu和Asp87Asn)和ParC(Ser80Ile),同时也检测出稀有突变ParC Glu84Gly、Glu84Lys、Glu84Val和Glu84Ala,ParE Ser458Ala等。ED28在acrR基因存在777bp插入序列;12株菌(包括ATCC25922)在MarR存在Gly103Ser和Tyr137His双突变,其中EP26和EG42存在插入片段;ED40在SoxR存在Thr38Ser、Gly74Arg氨基酸替换。在多突变药菌株中,AcrAB的表达水平明显升高,OmpC和OmpF表达量降低、甚至缺失。 展开更多

关键词 QRDR acrr MARR soxR 耐药 氟喹诺酮

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粉防己提取液对大肠埃希菌AcrAB-TolC外排泵调控基因的影响研究 被引量：3

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作者 乐小丽 曾杨梅 +4 位作者 陈红伟 张常华 杨森 金顺鑫 吴俊伟 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期28-33,共6页

目的:为考察粉防己提取液致耐药大肠埃希菌外排泵表达量的下降是否由其外排泵调控基因acrR和marR基因突变引起.方法:选取临床对喹诺酮类药物耐药性较强的大肠埃希菌菌株25-1,4-5,72-1,79和质控菌ATCC25922作为受试菌,用粉防己提取液进... 目的:为考察粉防己提取液致耐药大肠埃希菌外排泵表达量的下降是否由其外排泵调控基因acrR和marR基因突变引起.方法:选取临床对喹诺酮类药物耐药性较强的大肠埃希菌菌株25-1,4-5,72-1,79和质控菌ATCC25922作为受试菌,用粉防己提取液进行处理,并分析其多重耐药抑制基因marR和acrAB外排泵抑制基因acrR的突变情况.结果:耐药大肠埃希菌在粉防己提取液处理后,乳酸环丙沙星对其MIC(Minimal Inhibitory Concentration)值明显降低,且其acrR和marR基因序列较处理前有多处明显突变.结论:中药粉防己提取液可能具有逆转大肠埃希菌喹诺酮类药物耐药性的作用. 展开更多

关键词 粉防己 大肠埃希菌 外排泵 acrr基因 marR基因

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钠冷快堆碎片床长期冷却阶段冷却性能分析程序的开发及验证

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作者 赫连仁 张斌 +1 位作者 滕春明 单建强 《核动力工程》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第6期14-18,共5页

为精确地分析钠冷快堆碎片床在沸腾、干涸和通道干涸阶段的冷却性能以及温度分布,同时提高计算效率,基于COMMEN程序和DEBRIS-HT程序,结合其各自的计算优势开发了COMMEN-LT程序。为验证COMMEN-LT程序的计算结果,选择美国桑迪亚实验室的AC... 为精确地分析钠冷快堆碎片床在沸腾、干涸和通道干涸阶段的冷却性能以及温度分布,同时提高计算效率,基于COMMEN程序和DEBRIS-HT程序,结合其各自的计算优势开发了COMMEN-LT程序。为验证COMMEN-LT程序的计算结果,选择美国桑迪亚实验室的ACRR-D10实验进行了对比。结果表明:COMMEN-LT程序很好地模拟了碎片床在换热初始、沸腾和通道干涸阶段的换热机理和温度分布。计算时间降到了"秒"量级,大大降低了计算代价,大大提高了计算效率。 展开更多

关键词 碎片床 冷却性能 COMMEN-LT程序 acrr-D10实验 计算效率

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