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犬钩虫(Ancylostoma caninum)daf-1基因的克隆和表达鉴定
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作者 乔莹 杨玉荣 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期64-68,共5页
目的对犬钩虫(Ancylostoma caninum)TGF-βⅠ型受体daf-1基因进行了克隆和鉴定,并在原核系统中进行表达。方法以犬钩虫总RNA为模板,用RT-PCR对犬钩虫TGF-β受体基因daf-1的cDNA进行扩增和克隆,用PCR筛选阳性克隆,双酶切鉴定并测序。将... 目的对犬钩虫(Ancylostoma caninum)TGF-βⅠ型受体daf-1基因进行了克隆和鉴定,并在原核系统中进行表达。方法以犬钩虫总RNA为模板,用RT-PCR对犬钩虫TGF-β受体基因daf-1的cDNA进行扩增和克隆,用PCR筛选阳性克隆,双酶切鉴定并测序。将测序正确的阳性克隆双酶切后构建到表达载体pET-32m中,转化到E.coli DH5α内,提取质粒,酶切鉴定阳性,再转化入表达宿主E.coli BL21(DE3)菌株内,对转化菌株用IPTG进行诱导培养。收集培养液,破菌、离心进行SDS-PAGE检测重组蛋白的表达。蛋白纯化后进行免疫,并通过免疫印迹检测在钩虫各时期的表达。结果电泳发现转化了重组质粒的菌株在IPTG诱导下表达的重组蛋白为58kDa,在钩虫各时期都有AcDAF-1的表达。结论成功进行了犬钩虫TGF-βⅠ型受体daf-1基因的扩增、克隆和表达并在各期检测到该蛋白的表达。 展开更多
关键词 犬钩虫 TGF-βⅠ型受体 acdaf-1 克隆 表达
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