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谢瓦曲霉来源葡萄糖氧化酶的酶学性质及其比活性的优化
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作者 任美琪 王苑 +3 位作者 柏映国 田健 黄火清 杨浩萌 《生物技术进展》 2026年第1期123-130,共8页
研究通过原生质体转化技术将谢瓦曲霉(Aspergillus chevalieri)来源的葡萄糖氧化酶基因(glucose oxidase,AcGox)导入黑曲霉(A.niger)菌株,获得表达的重组AcGox蛋白。结果显示,重组AcGox蛋白的最适pH为6.0,最适温度为32℃,表现出优良的... 研究通过原生质体转化技术将谢瓦曲霉(Aspergillus chevalieri)来源的葡萄糖氧化酶基因(glucose oxidase,AcGox)导入黑曲霉(A.niger)菌株,获得表达的重组AcGox蛋白。结果显示,重组AcGox蛋白的最适pH为6.0,最适温度为32℃,表现出优良的耐酸性和较好的热稳定性。然而,AcGox的比活性仅为70.81 U·mg^(-1),成为限制其应用的关键瓶颈。为解决这一问题,研究在AcGox-5表达菌株基础上,进一步过表达编码核黄素激酶和黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide,FAD)合成酶基因,RT-qPCR证实2个基因的转录水平显著上调。最终,优化后的菌株AcGox/FAD/FMN-3生产的Gox比活性提升至111.55 U·mg^(-1),增幅达57.5%。研究证实辅因子FAD的供给水平是限制重组AcGox催化效率的关键因素,为酶工程中“辅因子工程”策略提供了直接实验证据,并为葡萄糖氧化酶的工业化生产提供了可推广的宿主改造方案,推动了Gox的应用。 展开更多
关键词 黑曲霉 谢瓦曲霉 葡萄糖氧化酶 黄素腺嘌呤二核苷酸 高效表达
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