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新基因AY358935的生物信息学分析及功能预测 被引量：3
1
作者 熊绍权 杨寒朔 龙奇达 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期232-235,238,共5页
目的对新基因AY358935的功能性质进行生物信息分析,为深入研究该基因功能奠定基础。方法利用生物信息学分析软件,分析新基因AY358935及其编码蛋白的性质、定位、结构、表达谱等特征,并根据相关信息预测其生物学功能。利用Western blott... 目的对新基因AY358935的功能性质进行生物信息分析,为深入研究该基因功能奠定基础。方法利用生物信息学分析软件,分析新基因AY358935及其编码蛋白的性质、定位、结构、表达谱等特征,并根据相关信息预测其生物学功能。利用Western blotting检测病毒感染早期AY358935的表达变化。结果AY358935基因进化保守,与马、小鼠、斑马鱼、非洲爪蟾的相似性分别为74%、60%、38%、33%。亚细胞定位于线粒体的可能性大。含有一个N末端信号肽序列和单次跨膜结构,多个磷酸化位点,二级结构主要是α螺旋和无规则卷曲。在正常组织和癌组织表达广泛,并受双链RNA依赖蛋白激酶的表达调控。AY358935蛋白表达在水泡性口炎病毒感染2h后即明显上调。结论初步预测AY358935为具有重要功能的小分子分泌蛋白,可能参与细胞增殖和抗病毒天然免疫调控。 展开更多
关键词 ay358935 生物信息学 分泌蛋白 双链RNA依赖蛋白激酶 水泡性口炎病毒
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新基因AY358935对B16细胞小鼠体内外生长的影响
2
作者 熊绍权 蔡蕊 +6 位作者 李亚玲 王莉娟 罗秋月 宋婷婷 丁倩 李世杰 何成诗 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2018年第3期285-289,共5页
目的:探讨新基因AY358935对小鼠黑色素瘤B16在细胞小鼠体内外生长的影响及其可能的机制。方法:构建小鼠AY358935基因真核表达质粒并稳定转染B16细胞。MTT法检测AY358935转染细胞(B16-m AY细胞)、空质粒pc DNA3.1转染细胞(B16-pc DNA3.1... 目的:探讨新基因AY358935对小鼠黑色素瘤B16在细胞小鼠体内外生长的影响及其可能的机制。方法:构建小鼠AY358935基因真核表达质粒并稳定转染B16细胞。MTT法检测AY358935转染细胞(B16-m AY细胞)、空质粒pc DNA3.1转染细胞(B16-pc DNA3.1细胞)及未转染的B16细胞的体外增殖活性。将B16-m AY及B16-pc DNA3.1细胞分别腹背皮下接种于C57小鼠,观察两组成瘤情况。MTT法检测B16-m AY细胞培养上清对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响。结果:B16-m AY细胞的体外增殖活性明显高于B16-pc DNA3.1细胞及对照B16细胞(P<0.05)。B16-m AY细胞移植瘤体积较B16-pc DNA3.1组明显增大(P<0.05)。B16-m AY细胞培养上清组HUVEC增殖活性明显高于B16-pc DNA3.1培养上清组(P<0.05)。结论:AY358935具有促进B16细胞生长的作用,其机制可能涉及促血管生长。 展开更多
关键词 ay358935 B16细胞 小鼠
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AY358935基因抗水疱口炎病毒的作用及其机制探讨
3
作者 黎光平 柯见龙 +5 位作者 吕盼盼 朱茜 王翠 王金阳 申显英 熊绍权 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期540-545,共6页
目的初步探讨本课题组前期克隆的AY358935基因对水疱口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)的作用及机制。方法将构建完整的pcDNA3.1-AY358935质粒及pcDNA3.1空载体分别稳定转染HEK293细胞,并以VSV感染已转染上述基因或空白的HEK29... 目的初步探讨本课题组前期克隆的AY358935基因对水疱口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)的作用及机制。方法将构建完整的pcDNA3.1-AY358935质粒及pcDNA3.1空载体分别稳定转染HEK293细胞,并以VSV感染已转染上述基因或空白的HEK293细胞,感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.001。蚀斑分析法检测以上3组细胞上清液中不同时间点的病毒滴度,感染VSV 24 h后用台盼蓝排斥试验检测各组细胞死亡率;对稳定转染目的基因的细胞提取总RNA,进行全基因组cDNA芯片分析。结果①病毒滴度:感染VSV 12 h后,pcDNA3.1-AY358935组细胞上清病毒滴度较pcDNA3.1组和空白组低。18 h时3组病毒滴度分别为(7.16±2.33)×10^5 PFU/mL、(6.25±2.05)×10^6 PFU/mL、(7.75±2.54)×10^6 PFU/mL,pcDNA3.1-AY358935组细胞上清病毒滴度与其余两组的差异接近10倍(P<0.01);②细胞死亡率:病毒感染24 h后,pcDNA3.1-AY358935组、pcDNA3.1组和空白组的细胞死亡率分别为(35.00±6.68)%、(78.33±15.03)%和(83.34±14.98)%,pcDNA3.1-AY358935组的细胞死亡率较其余两组降低(P<0.01);③基因芯片分析结果:与pcDNA3.1空载体组比较,稳定转染pcDNA3.1-AY358935的细胞有30个基因表达上调在3倍以上,其中,干扰素激活基因、干扰素效应基因、细胞因子与趋化因子所占比例分别为27%、17%、20%。结论 AY358935基因具有抗VSV作用,其机制可能涉及干扰素相关的天然免疫应答。 展开更多
关键词 ay358935基因 VSV 干扰素
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AY358935基因真核表达质粒的构建及鉴定
4
作者 蔡蕊 万里 +7 位作者 吕盼盼 王莉娟 罗秋月 宋婷婷 丁倩 李亚玲 姚德神 熊绍权 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2018年第3期385-388,共4页
目的构建AY358935基因的真核表达质粒并进行初步鉴定。方法以逆转录聚合酶链反应（reverse transcription—polymerase chain reaction，RT-PCR）扩增AY358935基因的cDNA，将该片段克隆进pGEM-Teasy载体；以测序正确的pGEM-T-AY重组质... 目的构建AY358935基因的真核表达质粒并进行初步鉴定。方法以逆转录聚合酶链反应（reverse transcription—polymerase chain reaction，RT-PCR）扩增AY358935基因的cDNA，将该片段克隆进pGEM-Teasy载体；以测序正确的pGEM-T-AY重组质粒为模板构建pcDNA3．1-Ay真核表达质粒，并进行双酶切鉴定。以pcDNA3．1-Ay瞬时转染M14细胞，Western印迹法和3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐[3-（4，5）-dimethylthiahiazo（-z-y1）-3，5-di_phenytetrazoliumromide，MTT]比色法分别检测转染细胞AY358935蛋白表达水平及细胞增殖力。结果RT-PCR扩增片段符合AY358935基因cDNA大小，与pcDNA3．1诅y克隆区酶切片段-致。对pGEM-T-AY质粒克隆区测序，结果也与AY358935基因cDNA序列相同。M14细胞分别转染AY358935基因、peDNA3．1和脂质体48h后，AY358935基因组蛋白表达水平明显高于其余两组，且AY358935基因组细胞A值（0．74）也明显高于其余两组（0．39和0．46），差异有统计学意义（P〈0．05）。结论AY358935基因的真核表达质粒pcDNA3．1-Ay构建成功，AY358935基因可能具有促进M14细胞增殖的作用。 展开更多
关键词 ay358935基因 真核表达质粒构建 M14细胞
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