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栉孔扇贝的急性病毒性坏死症(AVND)病毒多克隆抗体的制备及ELISA分析 被引量：4
1
作者 王秀华 贺桂珍 +2 位作者 李赟 王崇明 宋微波 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第9期84-88,共5页
以青岛太平角养殖海区患病栉孔扇贝组织中提纯的急性病毒性坏死症病毒作为抗原,制备出效价较高的多克隆抗体。用酶联免疫吸附分析(ELISA)方法对青岛黄岛等不同养殖海区、不同时间采集的栉孔扇贝材料进行检测,结果表明,7、8月份样品检测... 以青岛太平角养殖海区患病栉孔扇贝组织中提纯的急性病毒性坏死症病毒作为抗原,制备出效价较高的多克隆抗体。用酶联免疫吸附分析(ELISA)方法对青岛黄岛等不同养殖海区、不同时间采集的栉孔扇贝材料进行检测,结果表明,7、8月份样品检测结果呈强阳性,检出阳性率为75％～95％,其他时期阳性率较低。 展开更多
关键词 栉孔扇贝 急性病毒性坏死症病毒 多克隆抗体 ELISA 制备方法 酶联免疫吸附分析 阳性率
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栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒荧光定量PCR检测方法的建立和应用 被引量：11
2
作者 任伟成 王崇明 +3 位作者 孙世春 蔡玉勇 李赟 于佐安 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期564-571,共8页
根据栉孔扇贝(Chlamys farreri)急性病毒性坏死病毒(Acute viral necrobiotic virus,AVNV)的基因序列,选择保守区段,应用Beacon Designer 7.0软件设计了一对能特异性扩增90bp片段的引物和TaqMan探针,建立并完善了AVNV荧光定量聚合酶链... 根据栉孔扇贝(Chlamys farreri)急性病毒性坏死病毒(Acute viral necrobiotic virus,AVNV)的基因序列,选择保守区段,应用Beacon Designer 7.0软件设计了一对能特异性扩增90bp片段的引物和TaqMan探针,建立并完善了AVNV荧光定量聚合酶链式反应(Fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)诊断方法。该方法在108～102病毒拷贝范围内有较好的线性关系,AVNV拷贝数(X)和循环数(C)t的相关关系为:lgX=-0.29Ct+13.28(相关系数R2=0.998);检测AVNV的灵敏度为102拷贝;特异性实验表明只对AVNV基因组呈阳性反应。应用FQ-PCR对76份采自夏季发病期前后的栉孔扇贝样品进行检测,结果发现68份样品检测结果为阳性,阳性检出率为89.47%,高于普通PCR的阳性检出率(80.26%)。研究结果表明,该方法快速、灵敏,特异、重复性良好且能实现AVNV的定量检测,对AVNV的快速诊断和分子流行病学的调查以及AVNV疫情监测具有重要意义。 展开更多
关键词 栉孔扇贝 AVNV avnd 荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR) TAQ Man探针
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栉孔扇贝急性病毒性坏死症病毒单克隆抗体的制备及ELISA检测 被引量：6
3
作者 付崇罗 宋微波 +1 位作者 李赟 朱明壮 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期116-120,共5页
利用蔗糖密度梯度离心技术从自然发病的栉孔扇贝 (Chlamysfarrreri)组织分离纯化急性病毒性坏死症(Acutevirusnecrobioticdisease,AVND)病毒 ,并以此为抗原免疫Balb c小鼠。将免疫小鼠的脾细胞与NS_1骨髓瘤细胞进行融合 ,最终筛选出 4... 利用蔗糖密度梯度离心技术从自然发病的栉孔扇贝 (Chlamysfarrreri)组织分离纯化急性病毒性坏死症(Acutevirusnecrobioticdisease,AVND)病毒 ,并以此为抗原免疫Balb c小鼠。将免疫小鼠的脾细胞与NS_1骨髓瘤细胞进行融合 ,最终筛选出 4株能稳定传代并分泌该病毒特异性单克隆抗体 (MonoclonalAntibody ,MAb)的杂交瘤细胞系。应用胶体金标记免疫电镜技术在超微水平上对这 4株MAbs进行测定表明 ,它们对AVND病毒均具有高度的特异性 ,并且所识别的特异性位点均位于病毒粒子囊膜的纤突上。应用该单克隆抗体对不同养殖季节的一龄贝进行间接ELISA检测发现 ,7月中旬至 7月底病毒感染率与感染强度均处于当年的最高峰 。 展开更多
关键词 栉孔扇贝 avnd病毒 单克隆抗体 ELISA
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急性病毒性坏死症病毒在栉孔扇贝不同器官的感染状况 被引量：9
4
作者 贺桂珍 王秀华 +3 位作者 李赟 王崇明 艾海新 宋微波 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第7期93-96,105,共5页
应用超薄切片、负染电镜技术以及ＥＬＩＳＡ对自然发病和人工感染发病的栉孔扇贝之外套膜、鳃、肝胰腺、肾、肠、及闭壳肌等主要器官急性病毒性坏死症 (ＡｃｕｔｅＶｉｒｕｓＮｅｃｒｏｂｉｏｔｉｃＤｉｓｅａｓｅ,ＡＶＮＤ)病毒的感染... 应用超薄切片、负染电镜技术以及ＥＬＩＳＡ对自然发病和人工感染发病的栉孔扇贝之外套膜、鳃、肝胰腺、肾、肠、及闭壳肌等主要器官急性病毒性坏死症 (ＡｃｕｔｅＶｉｒｕｓＮｅｃｒｏｂｉｏｔｉｃＤｉｓｅａｓｅ,ＡＶＮＤ)病毒的感染状况进行了研究。三种检测方法均表明 ,病贝的外套膜及肝胰腺为ＡＶＮＤ病毒感染最严重的器官 ,肾以及肠组织次之 ,鳃及闭壳肌病毒感染程度最轻。本结果同时表明 ,ＡＶＮＤ病毒在病贝体内广泛分布 ,侵染的细胞主要为上述器官皮下肌细胞的细胞质内 ,侵染细胞超微结构表现为生物膜肿胀 ,并出现“髓袢样” 展开更多
关键词 急性病毒性坏死症病毒 栉孔扇贝 感染程度 超薄切片 负染电镜技术 ELISA 外套膜 肝胰腺 侵染细胞
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栉孔扇贝急性病毒性坏死症病毒感染的ELISA检测 被引量：8
5
作者 李赟 贺桂珍 +2 位作者 王秀华 王崇明 宋微波 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第7期90-92,共3页
应用纯化病毒免疫新西兰兔制备的抗血清 ,进行ELISA分析 ,检测栉孔扇贝体内急性病毒性坏死症病毒的感染情况。结果表明 :一龄贝在整个养殖期间感染该病毒呈现低 -高 -低的涨落过程 ,其中 7月下旬到 8月中旬检出阳性率为 75 %～ 95 % ,... 应用纯化病毒免疫新西兰兔制备的抗血清 ,进行ELISA分析 ,检测栉孔扇贝体内急性病毒性坏死症病毒的感染情况。结果表明 :一龄贝在整个养殖期间感染该病毒呈现低 -高 -低的涨落过程 ,其中 7月下旬到 8月中旬检出阳性率为 75 %～ 95 % ,为当年感染的高峰时期。对二龄贝感染该病毒的分析结果显示 。 展开更多
关键词 栉孔扇贝 急性病毒性坏死症病毒 ELISA检测 抗血清 感染率 酶联免疫吸附试验
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栉孔扇贝感染急性病毒性坏死症病毒的组织病理学与免疫荧光检测 被引量：14
6
作者 付崇罗 宋微波 +2 位作者 李 张永忠 闫华超 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期741-744,共4页
应用组织学和单克隆抗体免疫荧光技术 (Immunofluorescenceassay ,IFA)对夏季养殖中后期大规模死亡 (“急性病毒性坏死症”Acutevirusnecrobioticdisease ,AVND)高峰期的患病栉孔扇贝 (Chlamysfarreri)进行了检测。组织学检测结果显示 ... 应用组织学和单克隆抗体免疫荧光技术 (Immunofluorescenceassay ,IFA)对夏季养殖中后期大规模死亡 (“急性病毒性坏死症”Acutevirusnecrobioticdisease ,AVND)高峰期的患病栉孔扇贝 (Chlamysfarreri)进行了检测。组织学检测结果显示 ,患病扇贝的大多数器官 (外套膜、鳃、胃、肾等 )的上皮组织细胞可见显著的细胞肿胀、嗜碱性增强、排列紊乱、部分脱落以至完全坏死脱落等显著的组织病理学变化。作为对照 ,利用针对AVND病毒的特异性单克隆抗体所建立的免疫荧光原位检测技术对患病扇贝进行检测发现 ,上皮组织的病理变化与病毒感染之间具有一致的对应关系。这一结果表明 ,AVND病毒的感染可以对栉孔扇贝造成严重的病理性破坏。 展开更多
关键词 组织病理学 上皮组织 感染 急性病毒性坏死症病毒 单克隆抗体 病毒 免疫荧光检测 栉孔扇贝 大规模死亡 外套膜
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