ATP4A联合ATP4B可作为胃癌早期诊断及判断预后的生物标志物 被引量：2

1

作者 黎滨茹 李琳琳 马锐 《解剖科学进展》 CAS 2024年第2期153-156,160,共5页

目的利用生物信息学筛选出潜在的具有早期诊断及判断胃癌预后的生物标志物。方法应用GEO2R从GEO数据集筛选出差异表达基因,应用GO/KEGG进行功能富集分析,使用STRING工具生成蛋白互作网络,再利用Cytoscape的MCODE插件鉴定出Hub基因。使用... 目的利用生物信息学筛选出潜在的具有早期诊断及判断胃癌预后的生物标志物。方法应用GEO2R从GEO数据集筛选出差异表达基因,应用GO/KEGG进行功能富集分析,使用STRING工具生成蛋白互作网络,再利用Cytoscape的MCODE插件鉴定出Hub基因。使用HPA分析Hub基因在胃癌组织中的表达情况,基于Kaplan-Meier分析预后生存曲线。结果从GSE13911、GSE19826、GSE29272三个数据集得到105个有交集的DEGs,它们主要参与代谢途径。筛选出蛋白互作节点共75个,最后得到10个Hub基因,其中发现ATP4A和ATP4B有明显相关性(r=0.699,P<0.001),且发现ATP4A和ATP4B在胃癌组织细胞浆中表达升高,与预后差呈正相关。结论ATP4A和ATP4B可能作为胃癌潜在的早期诊断及判断预后的生物标志物。 展开更多

关键词 胃癌 Hub基因 atp4a ATP4B GEO数据库

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健脾化瘀解毒方抑制NLRP3介导的细胞焦亡改善幽门螺杆菌相关胃癌前病变研究

2

作者 杨鹏辉 李思怡 +4 位作者 冯敏超 韦雅楠 曾科峰 潘华峰 陈更新 《世界科学技术-中医药现代化》 北大核心 2025年第10期2899-2909,共11页

目的 观察健脾化瘀解毒方对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)相关胃癌前病变(Gastric precancerous lesion,GPL)中核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(nucleotidebinding domain leucine-rich repeat and pyri... 目的 观察健脾化瘀解毒方对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)相关胃癌前病变(Gastric precancerous lesion,GPL)中核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(nucleotidebinding domain leucine-rich repeat and pyrin domain-containing receptor 3,NLRP3)介导的细胞焦亡通路的影响。方法 通过灌胃Hp悬液联合Atp4a基因缺陷鼠制备GPL小鼠模型,予健脾化瘀解毒方干预;采用苏木精-伊红(Hematoxylin and eosin,HE)染色观察胃黏膜组织病理损害;阿尔辛蓝-过碘酸希夫(Alcian blueperiodic acid Schiff,AB-PAS)染色观察肠上皮化生(Intestinal metaplasia,IM)情况;透射电镜观察细胞器的超微结构变化;ELISA法检测胃泌素(Gastrin 17,G-17)、胃蛋白酶原I(Pepsinogen I,PGI)水平以及促炎因子白细胞介素(Interleukin,IL)1β、IL-18的表达量;Western blot和RT-qPCR法检测细胞焦亡通路相关分子的表达。结果 与空白组相比,Hp相关GPL小鼠胃黏膜萎缩并伴有IM和异型增生;壁细胞线粒体及内质网结构损害;G-17、PGI和促炎因子IL-1β、IL-18升高;细胞焦亡相关分子表达升高;健脾化瘀解毒方能够显著减轻GPL小鼠胃黏膜组织病理损害,降低G-17、PGI水平,减轻炎症反应,下调细胞焦亡相关分子表达量。结论 健脾化瘀解毒方可能通过抑制NLRP3介导的细胞焦亡信号通路,从而发挥减轻甚至逆转Hp相关GPL胃黏膜病理损害的作用。 展开更多

关键词 健脾化瘀解毒方 胃癌前病变 幽门螺杆菌 细胞焦亡 NLRP3 atp4a

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环孢素A对Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼肠道自发绿色荧光的影响

3

作者 孔鹏 莫大双 +5 位作者 赵砚驰 张乙进 杨雁竹 路政 舒莉萍 何志旭 《贵州医科大学学报》 2025年第3期370-377,共8页

目的探讨斑马鱼肠道自发绿色荧光的原因及环孢素A(cyclosporine A,CsA)对自发荧光的影响,优化利用转基因(transgenic,Tg)斑马鱼Tg(abcb4:eGFP)筛选肿瘤多重耐药药物的方法。方法选取受精后5天(five day post fertilization,5 dpf)的野生... 目的探讨斑马鱼肠道自发绿色荧光的原因及环孢素A(cyclosporine A,CsA)对自发荧光的影响,优化利用转基因(transgenic,Tg)斑马鱼Tg(abcb4:eGFP)筛选肿瘤多重耐药药物的方法。方法选取受精后5天(five day post fertilization,5 dpf)的野生型(wild type,WT)和Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼幼鱼,观察其肠道自发荧光;将鲢鱼胆汁注射到WT斑马鱼胚胎后观察荧光情况;检测不同处理浓度和不同处理时间的CsA对WT斑马鱼肠道自发荧光的影响;10μmol/L CsA处理2 h对Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼荧光检测的影响;Western blot检测CsA对Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼b4型ATP结合盒(ATP-binding cassette b4,Abcb4)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,eGFP)表达的影响。结果斑马鱼肠道存在自发荧光,可影响Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼的荧光检测准确度;鲢鱼胆汁在斑马鱼胚胎中可激发出绿色荧光;CsA可抑制斑马鱼肠道自发荧光,其中10μmol/L CsA处理2 h可达到最佳抑制效应,且不影响斑马鱼Abcb4和eGFP蛋白表达。结论斑马鱼肠道自发荧光可能为胆红素所致,10μmol/L CsA处理2 h可有效抑制斑马鱼肠道自发荧光,提高Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼药物筛选时荧光检测的准确度。 展开更多

关键词 环孢素A 转基因斑马鱼 斑马鱼b4型ATP结合盒 自发荧光

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PMCA1-4及其A端和C端剪接变异体在成年大鼠前庭组织中的表达

4

作者 罗蜜 褚汉启 +5 位作者 陶雁玲 周良强 陈金 刘云 杜智会 陈请国 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期202-206,共5页

目的研究质膜钙ATP酶异构体1-4(plasma membrane Ca^(2+)-ATPase 1-4,PMCA1-4)在成年大鼠前庭组织的分布部位,及其A端和C端剪接变异体的表达类型。方法选择8周龄健康SD大鼠,解剖出内耳器官行前庭切片,同时取前庭椭圆囊斑和球囊斑提取总... 目的研究质膜钙ATP酶异构体1-4(plasma membrane Ca^(2+)-ATPase 1-4,PMCA1-4)在成年大鼠前庭组织的分布部位,及其A端和C端剪接变异体的表达类型。方法选择8周龄健康SD大鼠,解剖出内耳器官行前庭切片,同时取前庭椭圆囊斑和球囊斑提取总RNA。通过免疫荧光方法检测PMCA1-4在成年大鼠内耳前庭组织的表达部位,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PMCA1-4的A端和C端剪接变异体在成年大鼠前庭组织的表达类型。结果球囊和椭圆囊荧光染色切片中,于毛细胞和支持细胞的胞体外侧膜可见PMCA1表达,毛细胞纤毛中可见PMCA2强表达,毛细胞和支持细胞的胞体外侧膜可见PMCA3弱表达,PMCA4几乎不表达。4种PMCA亚型在球囊表达的剪接体分别为PMCA1x/b、PMCA2w/b、PMCA3z/(a,b)和PMCA4x/b,它们在椭圆囊的表达类型与球囊相同。结论PMCA1-4在成年大鼠前庭器官的表达部位存在差异,这4种PMCA亚型的剪接体类型也各不相同。这种差异性可能是为了满足前庭组织和亚细胞结构域对Ca2+调节的特殊需求。 展开更多

关键词 质膜钙ATP酶异构体1-4 球囊 椭圆囊 前庭毛细胞 剪接变异体

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健脾化瘀解毒方抑制PI3K/AKT/HIF-1α通路阻断胃癌前病变恶性进展的机制 被引量：31

5

作者 潘华峰 袁冬生 +7 位作者 刘伟 赵自明 郭廷洪 刘远亮 杨良俊 贺生才 刘洋 何维 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期2786-2790,共5页

目的:探讨健脾化瘀解毒方对磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)信号通路的影响,分析其治疗胃癌前病变(GPL)的机制。方法:以同窝野生型小鼠为空白组,将10周龄Atp4a^(-/-)小鼠随机均分为模型组,维酶素组,... 目的:探讨健脾化瘀解毒方对磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)信号通路的影响,分析其治疗胃癌前病变(GPL)的机制。方法:以同窝野生型小鼠为空白组,将10周龄Atp4a^(-/-)小鼠随机均分为模型组,维酶素组,健脾化瘀解毒方高、低剂量组,连续灌胃给药10周后,观察胃黏膜病理改变,采用Western Blot检测PI3K、p-AKT、HIF-1α和乳酸脱氢酶A(LDHA)蛋白的表达,免疫组化检测MUC2和Ki-67蛋白的表达。结果:光镜下可见模型组小鼠胃黏膜萎缩、肠上皮化生、异型增生性改变,而健脾化瘀解毒方各剂量组小鼠胃黏膜萎缩、肠上皮化生、组织异型性病变程度与范围均较模型组明显改善。与空白组比较,模型组胃黏膜PI3K、p-AKT、HIF-1α和LDHA蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,健脾化瘀解毒方各剂量组PI3K、p-AKT、HIF-1α和LDHA蛋白表达均降低(P<0.01,P<0.05)。免疫组化结果显示,与空白组比较,模型组胃黏膜MUC2和Ki-67平均光密度和累积面积百分率均升高(P<0.01);与模型组比较,健脾化瘀解毒方高剂量组MUC2和Ki-67的平均光密度和累积面积百分率均降低(P<0.01),健脾化瘀解毒方低剂量组的MUC2累积面积百分率和Ki-67的平均光密度降低(P<0.01)。结论:健脾化瘀解毒方可抑制PI3K/AKT/HIF-1α信号通路的激活,抑制有氧糖酵解代谢产物LDHA表达,阻断细胞的恶性增殖与肠上皮化生,改善局部缺氧微环境,延缓GPL恶变。 展开更多

关键词 胃癌前病变 健脾化瘀解毒方 磷脂酰肌醇-3-激酶 蛋白激酶B 缺氧诱导因子-1α 缺氧微环境 有氧糖酵解 atp4a基因敲除小鼠

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姜黄素调控ATP/P2X4/NLRP3/Caspase-1信号通路改善脑出血小鼠神经功能 被引量：3

6

作者 谭俊 张品晶 张海峰 《解剖科学进展》 2024年第6期599-602,共4页

目的探讨姜黄素对脑出血小鼠模型神经功能的影响,并从ATP/P2X4/NLRP3/Caspase-1信号通路角度阐明其可能的作用机制。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、姜黄素低、高剂量组。神经功能缺损评分(mNSS)评价小鼠神经功能;测... 目的探讨姜黄素对脑出血小鼠模型神经功能的影响,并从ATP/P2X4/NLRP3/Caspase-1信号通路角度阐明其可能的作用机制。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、姜黄素低、高剂量组。神经功能缺损评分(mNSS)评价小鼠神经功能;测定脑组织含水量;ELISA检测炎症因子白细胞介素-6(interleukin,IL-6)、IL-1β、IL-18表达水平;TUNEL检测小鼠脑内神经细胞凋亡;反相高效液相色谱法检测脑内三磷酸腺苷(ATP)水平;Western blot检测脑组织腺嘌呤核苷酸受体2X-4受体(P2X4)、NOD样受体蛋白-3(NLRP3)、凋亡相关颗粒样蛋白(ASC)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)蛋白的表达水平。结果与模型组相比,姜黄素低、高剂量组小鼠mNSS评分显著降低,神经功能明显改善,脑组织含水量显著降低,IL-6、IL-1β、IL-18表达水平显著降低,神经细胞凋亡数量显著减少,ATP含量显著降低,P2X4、NLRP3、ASC及Caspase-1蛋白表达水平均显著降低。结论姜黄素通过抑制ATP/P2X4/NLRP3/Caspase-1信号通路改善脑出血小鼠神经功能,抑制炎症反应及神经细胞凋亡。 展开更多

关键词 脑出血 姜黄素 ATP/P2X4/NLRP3/Caspase-1信号通路 炎症 凋亡

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1-苯基2-硫脲对Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼肿瘤多重耐药相关基因表达的影响

7

作者 孔鹏 莫大双 +5 位作者 陈敏 黄江涛 安丽娟 尹正昊 舒莉萍 何志旭 《贵州医科大学学报》 CAS 2024年第11期1587-1592,1600,共7页

目的探讨去色素药物1-苯基2-硫脲(PTU)对Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼肿瘤多重耐药相关基因abcb4及其标记基因egfp表达的影响及可能机制。方法选取受精后24 h(24 hpf)Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼胚胎做药物暴露实验,分为Control、PTU以及PTU+RES 3个... 目的探讨去色素药物1-苯基2-硫脲(PTU)对Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼肿瘤多重耐药相关基因abcb4及其标记基因egfp表达的影响及可能机制。方法选取受精后24 h(24 hpf)Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼胚胎做药物暴露实验,分为Control、PTU以及PTU+RES 3个组;持续用药96 h,通过荧光显微镜拍照检测各组斑马鱼胃肠道荧光强度;RT-qPCR检测abcb4、egfp及pxr基因mRNA,Western Blot检测abcb4、egfp蛋白(Abcb4、eGFP)的表达,罗丹明B积累实验检测不同组Abcb4功能。结果与Control组相比,PTU组Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼荧光表达增强(P<0.01),PTU+RES组荧光变化不明显(P>0.05);PTU组abcb4、egfp及pxr基因mRNA表达均增加(P<0.005),PTU+RES组pxr基因mRNA表达增加(P<0.005),abcb4、egfp基因mRNA表达无明显变化(P>0.05);PTU组abcb4、egfp蛋白表达均增加(P<0.005),PTU+RES组无明显变化(P>0.05);PTU组Abcb4功能增强(P<0.01),PTU+RES组无明显变化(P>0.05)。结论PTU可诱导Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼abcb4和egfp表达增加,核因子pxr可能参与PTU对abcb4和egfp的诱导调节过程,在应用PTU去色素处理的Tg(abcb4:eGFP)斑马鱼进行药物筛选时需注意PTU对abcb4和egfp表达的影响。 展开更多

关键词 1-苯基2-硫脲 转基因斑马鱼 斑马鱼b4型ATP结合盒 人B1型ATP结合盒 孕烷X受体 增强型绿色荧光蛋白

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小鼠和大鼠NS5ATP4同源基因序列的生物信息学分析 被引量：4

8

作者 成军 杨倩 +2 位作者 刘妍 王建军 纪冬 《世界华人消化杂志》 CAS 2004年第7期1582-1587,共6页

目的:克隆、鉴定、分析小鼠和大鼠NS5ATP4基因序列, 确定编码产物序列,并对于其与人的NSSATP4基因及其编码产物的序列的同源性进行分析. 方法:利用基因芯片技术获得了人NS5ATP4的cDNA序列,利用生物信息学技术确定小鼠、大鼠的NS5ATP4的... 目的:克隆、鉴定、分析小鼠和大鼠NS5ATP4基因序列, 确定编码产物序列,并对于其与人的NSSATP4基因及其编码产物的序列的同源性进行分析. 方法:利用基因芯片技术获得了人NS5ATP4的cDNA序列,利用生物信息学技术确定小鼠、大鼠的NS5ATP4的基因及其编码产物的序列,并对于其同源性进行生物信息学分析. 结果:利用生物信息学技术确定了小鼠和大鼠的NS5ATP4 的基因及其编码产物的序列,小鼠和大鼠的NS5ATP4编码基因区分别由762和756个核苷酸(nt)组成.编码产物分别由263和261个氨基酸残基(aa)组成.与人NS5ATP4基因和蛋白质一级结构序列的同源性分别为90.29%,84.25%和95.65%,86.96%. 结论:应用生物信息学技术确定了小鼠和大鼠的NS5ATP4 的基因及编码产物的序列. 展开更多

关键词 小鼠 大鼠 NS5ATP4同源基因序列 生物信息学分析 基因芯片技术

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新基因NS5ATP4表达产物下调细胞周期素B2基因表达的研究 被引量：2

9

作者 郭江 成军 +7 位作者 赵龙凤 杨倩 纪冬 曲建慧 高学松 刘妍 张黎颖 戴久增 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2005年第4期352-354,共3页

目的探讨新基因NS5ATP4表达产物对细胞周期素B2(cyclinB2)基因启动子转录的调节作用。方法根据文献确定细胞周期素B2的启动子区域,聚合酶链反应(PCR)扩增细胞周期素基因因启动子(B2p),克隆至真核报告基因表达载体pCAT3Basic中,构建pCAT3... 目的探讨新基因NS5ATP4表达产物对细胞周期素B2(cyclinB2)基因启动子转录的调节作用。方法根据文献确定细胞周期素B2的启动子区域,聚合酶链反应(PCR)扩增细胞周期素基因因启动子(B2p),克隆至真核报告基因表达载体pCAT3Basic中,构建pCAT3cyclinB2p报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测报告基因氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性并与pcDNA3.1()NS5ATP4共转染HepG2细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性。结果成功获得细胞周期素B2启动子的正确克隆。pCAT3cyclinB2p和pcDNA3.1()NS5ATP4共转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3Basic空载体的10倍,pCAT3cyclinB2p的0.14倍。结论本文克隆的细胞周期素B2启动子有顺式调节下游基因表达的活性,NS5ATP4对细胞周期素B2基因的转录具有下调作用。 展开更多

关键词 NS5ATP4 细胞周期素B2 基因启动子 下调

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遗传性远端肾小管性酸中毒合并耳聋相关基因Atp6v0a4在小鼠内耳发育过程中的表达 被引量：3

10

作者 刘亚青 李琦 +1 位作者 辛凤 袁永一 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第1期88-93,共6页

目的常染色体隐性遗传远端肾小管酸中毒是一种严重的酸碱平衡紊乱性疾病,常常合并有感音神经性聋,ATP6V0A4被证实是其致病的相关基因,目前仍不明确致病机制。我们拟通过研究Atp6v0a4在不同发育阶段小鼠的内耳表达来探究ATP6V0A4在听觉... 目的常染色体隐性遗传远端肾小管酸中毒是一种严重的酸碱平衡紊乱性疾病,常常合并有感音神经性聋,ATP6V0A4被证实是其致病的相关基因,目前仍不明确致病机制。我们拟通过研究Atp6v0a4在不同发育阶段小鼠的内耳表达来探究ATP6V0A4在听觉系统形成中的作用。方法选择不同发育时期健康的昆明小鼠(E18,P1,P7,P14,P21),应用免疫荧光标记技术结合激光共聚焦显微镜观察Atp6v0a4蛋白在内耳的定位与表达。West-ern-blot定性定量研究该蛋白在不同时期小鼠内耳蛋白表达变化。结果 Atp6v0a4蛋白主要表达部位为耳蜗内毛细胞、外毛细胞、血管纹、内淋巴囊以及螺旋神经节,且在不同发育阶段表达位置稳定。Western-blot结果提示Atp6v0a4在小鼠内耳广泛表达,在不同发育阶段,Atp6v0a4在Corti’s器及螺旋神经节及血管纹中表达相对稳定,而在前庭组织中表达下降。结论通过对不同发育阶段的小鼠耳蜗切片进行Atp6v0a4蛋白表达分析研究,明确了Atp6v0a4在小鼠内耳的表达,为深入研究Atp6v0a4在内耳发育过程中的作用和致聋机制奠定了基础。 展开更多

关键词 Atp6v0a4 表达定位 内耳

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氧化铈-钒酸铁/凹土对染料废水脱色处理 被引量：1

11

作者 韩粉女 许琦 唐喆 《环境科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2016年第S2期134-136,共3页

把凹土作为载体来制备对废水进行脱色的催化剂,是现在废水脱色处理研究的热点。将CeO_2-FeVO_4/ATP和H_2O_2组成非均相类Fenton体系对红色基GP染料废水进行脱色研究。主要考察研究CeO_2-FeVO_4/ATP的加入量、脱色时间、脱色温度、pH值以... 把凹土作为载体来制备对废水进行脱色的催化剂,是现在废水脱色处理研究的热点。将CeO_2-FeVO_4/ATP和H_2O_2组成非均相类Fenton体系对红色基GP染料废水进行脱色研究。主要考察研究CeO_2-FeVO_4/ATP的加入量、脱色时间、脱色温度、pH值以及H_2O_2用量对染料废水脱色率的影响。实验结果表明:在CeO_2-FeVO_4/ATP的加入量为2 g/L,脱色时间为1 h,pH值为6,脱色温度为313 K,H_2O_2用量为9 mL/L时脱色率达到99%。 展开更多

关键词 凹凸棒土 脱色 CeO2-FeVO4/ATP

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猪ATP6V0A4基因启动子核心区的筛选与分析 被引量：1

12

作者 汪亮 李忠秋 +3 位作者 唐晓东 张海峰 刘娣 张冬杰 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2021年第3期216-221,共6页

ATP6V0A4基因编码V-ATP酶的一个亚基,与H+转运相关,是遗传性远端肾小管性酸中毒的致病基因。在前期研究中发现,民猪在遭受冷应激后其背脂中ATP6V0A4基因的转录水平发生了显著上升(P<0.05)。为了分析ATP6V0A4基因在转录水平的调控机制... ATP6V0A4基因编码V-ATP酶的一个亚基,与H+转运相关,是遗传性远端肾小管性酸中毒的致病基因。在前期研究中发现,民猪在遭受冷应激后其背脂中ATP6V0A4基因的转录水平发生了显著上升(P<0.05)。为了分析ATP6V0A4基因在转录水平的调控机制,构建了一系列长度不同的含有该基因5′端启动子区域的双荧光素酶报告基因质粒,转染PK15细胞并检测双荧光素酶的相对活性。根据检测结果,利用重叠PCR技术定点靶序列,预判可能存在的转录调控因子。结果发现,该基因启动子区的-1504~-1 bp片段具有转录活性,通过2轮启动子截短试验后判定-265~-1 bp区域内存在正调控元件,-581~-265 bp区域内存在负调控元件。定向缺失-205~-190 bp,-120~-110 bp小片段后,确定-205~-190 bp区域内存在调控该基因转录的正调控元件结合位点,通过在线软件预测后发现E2F3、SP2、EGR1、E2F6、CTCFL、E2F1、SP1和ETF可能是该基因的正调控转录因子。首次克隆了猪的ATP6V0A4基因的启动子区域并进行了转录因子结合位点的筛选与鉴定,为后续研究其在冷应激状态下的转录调控奠定了基础。 展开更多

关键词 猪 ATP6V0A4 启动子 核心区 双荧光素酶报告系统

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ATP6V0A4基因纯合内缺失致远端肾小管酸中毒1例并12年随访分析 被引量：2

13

作者 吴瑕 王文红 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2021年第11期67-71,共5页

目的分析远端肾小管酸中毒(dRTA)(MIM602722)的临床特点、基因型及预后。方法回顾分析1例dRTA患儿的临床资料并进行文献复习。结果病例为足月剖宫产男婴,出生后34 d体质量不增,血气分析提示阴离子间隙正常的高氯性代谢性酸中毒、低钾血... 目的分析远端肾小管酸中毒(dRTA)(MIM602722)的临床特点、基因型及预后。方法回顾分析1例dRTA患儿的临床资料并进行文献复习。结果病例为足月剖宫产男婴,出生后34 d体质量不增,血气分析提示阴离子间隙正常的高氯性代谢性酸中毒、低钾血症,碱性尿,肾脏锥体钙化,肾性骨病表现,随访12年,经枸橼酸合剂治疗,体格发育追赶至正常,肾性骨病消失,11岁时出现听力损害、蛋白尿及肾功能损害,基因测序显示患儿ATP6V0A4基因3~5号外显子的纯合缺失,父母亲均存在该基因杂合缺失,此变异为致病性变异,符合常染色体隐性dRTA诊断。结论发病年龄小的dRTA,应尽早干预使患儿获得满意的体格发育结局,基因测序是判定遗传性致病因素的重要手段,可预测远期预后,对遗传咨询具有重要意义,并应长期随访。 展开更多

关键词 远端肾小管酸中毒 ATP6V0A4基因 低钾血症 酸中毒 听力损害

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转基因重组质粒ATP4B-SV40T-IRES-GFP的构建及鉴定

14

作者 张隆 赵成根 +3 位作者 李大力 王金玉 李琦 范忠泽 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2012年第4期314-318,共5页

目的:构建ATP4B-SV40T-IRES-GFP重组质粒并进行鉴定.方法:根据小鼠ATP4B启动子序列设计引物,获得的小鼠ATP4B基因启动子序列,并加入限制性内切酶酶切位点.将其装入载体IRES-GFP,获得重组载体ATP4B-IRES-GFP并进行酶切鉴定.之后将SV40T... 目的:构建ATP4B-SV40T-IRES-GFP重组质粒并进行鉴定.方法:根据小鼠ATP4B启动子序列设计引物,获得的小鼠ATP4B基因启动子序列,并加入限制性内切酶酶切位点.将其装入载体IRES-GFP,获得重组载体ATP4B-IRES-GFP并进行酶切鉴定.之后将SV40T基因克隆入ATP4B-IRES-GFP载体,并用限制性内切酶PstI和AseⅠ进行验证.结果:将小鼠ATP4B启动子序列插入IRES-GFP载体,经过酶切验证获得正确的ATP4B-IRES-GFP质粒;将SV40T片段插入ATP4B-IRES-GFP,质粒测序及酶切结果验证获得正确的ATP4B-SV40T-IRES-GFP重组质粒.显微注射入小鼠受精卵可获得阳性小鼠.结论:成功构建ATP4B-SV40T-IRES-GFP重组质粒,可用于下一步构建原发性胃癌转基因小鼠. 展开更多

关键词 SV40T ATP4B启动子 质粒 转基因小鼠

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食蟹猴疟原虫 (Plasmodium cynomolgi)中一个真核翻译起始因子4A(eIF-4A)同源蛋白的cDNA克隆、表达和ATP酶活性测定(英文) 被引量：4

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作者 宋平 张竞男 +1 位作者 胡珈瑞 李奎 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期294-304,共11页

真核翻译起始因子 4A(eukaryoticinitiationfactor 4A ,eIF 4A)是DEAD盒蛋白家族的ATP依赖性的RNA解旋酶类中的一个原型成员 .它在真核细胞的蛋白质合成的起始过程中起着关键性作用 .通过PCR扩增和放射探针杂交相结合的方法筛选食蟹猴... 真核翻译起始因子 4A(eukaryoticinitiationfactor 4A ,eIF 4A)是DEAD盒蛋白家族的ATP依赖性的RNA解旋酶类中的一个原型成员 .它在真核细胞的蛋白质合成的起始过程中起着关键性作用 .通过PCR扩增和放射探针杂交相结合的方法筛选食蟹猴疟原虫 (Plasmodiumcynomolgi)的cDNA文库 ,克隆了一个eIF 4A同源蛋白的完整cDNA序列 ,命名为CH1F .CH1F全长 1 75 3bp ,包含一个1 1 97bp的完整阅读框 ,推测编码一个由 398个氨基酸组成的蛋白 .对CH1F的蛋白序列用BlastP进行搜索和分析 ,提示它应该是DEAD盒家族的一个eIF 4A同源蛋白 ;用DNAStar将其与许多典型的DEAD盒蛋白序列进行比对分析 ,结果显示 :比起其它的DEAD盒蛋白 ,它与eIF 4A或eIF 4A的同源蛋白具有更高的同源性和更多序列上的相似结构域 .将包含完整阅读框的片段亚克隆进表达载体pET 2 8a (+) ,在大肠杆菌DH5α中表达 ,产生的融合蛋白大小在 4 5kD左右 .对该融合蛋白进行纯化、重新折叠和初步鉴定 .ATP酶活性检测显示 ,该融合蛋白只有很低的ATP酶活性 ,而且它的ATP酶活性似乎不依赖于核酸底物 .对这一检测结果给出 3种可能的原因 .这一检测结果与根据序列分析得到的推论———CH1F蛋白可能是一个eIF 展开更多

关键词 真核翻译起始因子4A(eukaryotic initiation factor 4A eIF-4A) RNA解旋酶 ATP酶 食蟹猴 疟原虫(Plasmodium cynomolgi)

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ATP4B在不同程度胃黏膜病变中的表达及其与幽门螺杆菌感染的关系 被引量：5

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作者 李凤斐 杜维桓 杨桂彬 《北京医学》 CAS 2014年第1期12-14,共3页

目的研究ATP4B在胃黏膜病变演化过程中的表达变化,并探讨其与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染的关系。方法根据组织形态学检查将221例胃镜活检标本分为慢性浅表性胃炎(CSG)、慢性萎缩性胃炎(CAG)、肠上皮化生(IM)和异型增生(Dy... 目的研究ATP4B在胃黏膜病变演化过程中的表达变化,并探讨其与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染的关系。方法根据组织形态学检查将221例胃镜活检标本分为慢性浅表性胃炎(CSG)、慢性萎缩性胃炎(CAG)、肠上皮化生(IM)和异型增生(Dys)4组;采用免疫组织化学方法检测ATP4B的表达情况;根据胃镜检查时快速尿素酶试验结果确定Hp感染状态。结果 ATP4B表达水平随胃黏膜病变演化而降低,在4组的表达率分别为51.4%、15.4%、15.9%及5.0%,CSG组ATP4B表达水平显著高于其他各组(P<0.05)。CSG组中Hp阳性标本ATP4B的表达率为33.3%,显著低于其在Hp阴性标本中的表达率(59.7%,P<0.05);在另外3组中,Hp阳性标本与阴性标本ATP4B的表达率差异无统计学意义(P>0.05)。结论在胃黏膜病变演化过程中,ATP4B的表达随胃黏膜病变的进展而降低;Hp在胃黏膜病变演化的早期阶段抑制了ATP4B的表达。 展开更多

关键词 ATP4B 胃黏膜病变 幽门螺杆菌

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质膜钙ATP酶异构体1～4的剪接体在新生大鼠前庭器官的表达 被引量：2

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作者 罗蜜 褚汉启 +5 位作者 陶雁玲 周良强 陈金 刘云 潘春晨 陈请国 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期473-477,共5页

目的研究质膜钙ATP酶异构体(plasma membrane Ca^(2+)-ATPase isoforms,PMCAs)1~4(PMCA1~4)的A端和C端剪接变异体在新生大鼠前庭器官的表达。方法取出生2天的健康SD大鼠10只,断头后分离出前庭器官(椭圆囊斑和球囊斑),提取总RNA,通过逆... 目的研究质膜钙ATP酶异构体(plasma membrane Ca^(2+)-ATPase isoforms,PMCAs)1~4(PMCA1~4)的A端和C端剪接变异体在新生大鼠前庭器官的表达。方法取出生2天的健康SD大鼠10只,断头后分离出前庭器官(椭圆囊斑和球囊斑),提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测PMCA1~4的A端和C端剪接变异体的表达。结果在新生大鼠的椭圆囊斑和球囊斑PMCA1~4表达的剪接体分别为PMCA1x/b,PMCA2w/(a、b),PMCA3z/(a、b、c)和PMCA4(x、z)/b。结论在新生大鼠前庭器官,PMCA1、PMCA2、PMCA3和PMCA4之间表达的A端和C端剪接变异体类型均不同,这可能是由于椭圆囊斑和球囊斑对这些PMCA亚型有着不同的Ca2+调节需求。 展开更多

关键词 质膜钙ATP酶异构体1~4 剪接体 椭圆囊斑 球囊斑

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应用高通量测序技术对远端肾小管酸中毒家系进行基因诊断 被引量：2

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作者 卿艳荣 胥雨菲 +3 位作者 殷蕾 周纬 姚如恩 王剑 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2018年第11期825-829,共5页

目的对2例远端肾小管酸中毒家系进行基因突变分析。方法收集远端肾小管酸中毒患儿病历资料,应用高通量测序技术对患儿基因组DNA进行突变筛查,Sanger测序方法对患儿及家系成员进行验证,对可疑突变进行生物信息学预测。结果测序结果显示病... 目的对2例远端肾小管酸中毒家系进行基因突变分析。方法收集远端肾小管酸中毒患儿病历资料,应用高通量测序技术对患儿基因组DNA进行突变筛查,Sanger测序方法对患儿及家系成员进行验证,对可疑突变进行生物信息学预测。结果测序结果显示病例1患儿携带ATP6V0A4基因c.1185delC和c.1418C>T复合杂合突变;病例2患儿携带ATP6V0A4基因c.639+1G>A和c.2227C>T复合杂合突变; 2例患儿的突变均分别遗传自父母。c.1418C>T和c.2227C>T突变均未见报道,经生物信息学预测为有害突变,根据美国医学遗传学与基因组学会遗传变异分类指南均归类为可能致病性变异。结论发现ATP6V0A4基因2个新的备选突变位点,为基因检测和诊断治疗提供借鉴。 展开更多

关键词 远端肾小管酸中毒 ATP6V0A4基因 高通量测序 基因诊断

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粟酒裂殖酵母蛋白Atp4定位和功能的研究 被引量：1

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作者 李琴 张琳琳 黄鹰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期59-63,共5页

研究粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)中Atp4的定位和参与线粒体功能的机制。借助于基因敲除、荧光显微镜观察、线粒体提取、生化试剂处理和Western blotting等技术开展研究。在甘油培养基上,Δatp4突变菌株表现出生长缺陷,是... 研究粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)中Atp4的定位和参与线粒体功能的机制。借助于基因敲除、荧光显微镜观察、线粒体提取、生化试剂处理和Western blotting等技术开展研究。在甘油培养基上,Δatp4突变菌株表现出生长缺陷,是线粒体呼吸缺陷菌;Fluorescence microscope观察到用GFP标记的Atp4和线粒体是共定位的;采用生化试剂TritonX-100和蛋白酶K处理以及碳酸钠处理Atp4-Flag和yHL6381线粒体,结果表明Atp4定位在线粒体内膜;Western blotting实验结果表明Atp4缺失导致Cob1、Cox1、Cox2和Atp6表达量剧烈下降,Cox3和Cox4蛋白表达量也有略微下降。综上所述,Atp4在线粒体内膜发挥功能,对于维持线粒体编码蛋白的正常表达至关重要,是线粒体呼吸链功能的发挥所必需的。 展开更多

关键词 线粒体 Atp4 粟酒裂殖酵母 呼吸链

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真菌中的脂质不对称调节和P4型ATP酶 被引量：1

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作者 陈柯志 刘锦燕 +1 位作者 王鲁灵 项明洁 《中国真菌学杂志》 CSCD 2023年第4期364-369,共6页

脂质组分在双分子膜中不对称分布是广泛存在于真核细胞中的现象,有助于膜系统的出芽和融合,从而促进胞吞胞吐、蛋白分选运输等生理过程。多种蛋白参与维持脂质不对称,其中P4型ATP酶是重要的脂质转运体。P4型ATP酶又称脂质翻转酶,主要介... 脂质组分在双分子膜中不对称分布是广泛存在于真核细胞中的现象,有助于膜系统的出芽和融合,从而促进胞吞胞吐、蛋白分选运输等生理过程。多种蛋白参与维持脂质不对称,其中P4型ATP酶是重要的脂质转运体。P4型ATP酶又称脂质翻转酶,主要介导氨基磷脂的转位。在酿酒酵母、新生隐球菌、白念珠菌和构巢曲霉中,多种P4型ATP酶亚基的缺失导致蛋白运输失常,对唑类药物的敏感性升高,细胞壁完整性受损,毒力减低,在巨噬细胞中生存能力减弱等表型,提示脂质翻转酶的重要性及其作为抗真菌靶点的潜力。 展开更多

关键词 脂质不对称 P4型ATP酶 脂质翻转酶 Cdc50 真菌 酿酒酵母 新生隐球菌

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