家禽作为全球畜牧业的重要经济物种,表观遗传调控对其生长、繁殖、抗病能力具有关键影响。近年来,染色质转座酶可及性测序(Assay for Transposase Accessible Chromatin With High-Throughput Sequencing,ATAC-seq)技术的兴起,为解析家...家禽作为全球畜牧业的重要经济物种,表观遗传调控对其生长、繁殖、抗病能力具有关键影响。近年来,染色质转座酶可及性测序(Assay for Transposase Accessible Chromatin With High-Throughput Sequencing,ATAC-seq)技术的兴起,为解析家禽表观遗传的调控机制提供了关键技术支撑。本文综述了ATAC-seq技术在家禽生长发育、繁殖性状及疾病研究中的进展,旨在为染色质可及性及基因表达调控的相关研究提供参考资料。展开更多
目的·研究Apc^(min/+)小鼠自发结肠肿瘤的空间表观遗传特征。方法·使用8月龄雄性Apc^(min/+)小鼠自发结肠肿瘤模型,搭建空间染色质可及性测序(assay for transposase-accessible chromatin with high-throughput sequencing,A...目的·研究Apc^(min/+)小鼠自发结肠肿瘤的空间表观遗传特征。方法·使用8月龄雄性Apc^(min/+)小鼠自发结肠肿瘤模型,搭建空间染色质可及性测序(assay for transposase-accessible chromatin with high-throughput sequencing,ATAC-seq)技术平台。摘取一颗小鼠结肠肿瘤,经冷冻包埋后,进行连续切片;一张组织切片使用苏木精-伊红染色观察其组织学特征,另一张相邻的组织切片进行空间ATAC-seq技术处理,得到带有空间位置信息的DNA文库后进行测序,得到该小鼠结肠肿瘤的空间染色质可及性数据。取同一只小鼠的另一颗肿瘤组织,经消化后得到细胞悬液,通过流式细胞术分选有活性的单细胞悬液,进行单细胞转录组测序,与空间染色质可及性数据联合分析此小鼠的结肠肿瘤微环境表观遗传学特征。结果·成功搭建稳定的空间ATAC-seq技术体系,并据此将小鼠的肿瘤分为恶性区域、非恶性区域以及恶性-非恶性边界区域;恶性区域富集到的转录因子包括NK2同源框转录因子5(NK2 homeobox 5,NKX2-5)、转录因子3(transcription factor 3,TCF3)等。在3个区域分别对转录因子进行富集,得到2种不同的表达趋势:一种为表达水平自恶性‒边界‒非恶性区域逐步降低;另一种为在恶性和边界区域表达水平高,在非恶性区域表达水平低。对不同区域的基因分析显示恶性区域的缺氧反应明显上调,转化生长因子(transforming growth factor,TGF)、Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog,KRAS)信号通路显著上调,与细胞周期相关的功能明显增强。对肿瘤微环境中细胞间的相互作用分析发现不同区域的细胞互作强度具有显著差别,非恶性区域内部细胞的相互作用强,边界区与非恶性区以及恶性与非恶性区域的相互作用中等,恶性区与边界区的相互作用弱。结论·Apc^(min/+)小鼠结肠肿瘤呈高度空间异质性;肿瘤恶性区域富集了Tcf3等多种转录因子,恶性区域与边界、非恶性区域之间细胞相互作用相对较弱。展开更多
染色质转座酶可及性测序(assay for transposase-accessible chromatin with high-throughput sequencing,ATAC-seq)是利用Tn5转座酶研究染色质可及性的高通量测序技术。ATAC-seq可以在全基因组范围内绘制染色质可及性图谱,揭示转录因...染色质转座酶可及性测序(assay for transposase-accessible chromatin with high-throughput sequencing,ATAC-seq)是利用Tn5转座酶研究染色质可及性的高通量测序技术。ATAC-seq可以在全基因组范围内绘制染色质可及性图谱,揭示转录因子结合位点以及核小体的位置。在医学领域,ATAC-seq技术是研究重大疾病发病机制、药物作用机制、新药研发和生物标志物功能等的新一代有力工具。本文对ATAC-seq技术的优势及其在复杂疾病研究中的应用和前景进行了综述,以期为人类复杂疾病基因表达调控机制等相关研究的开展提供借鉴与参考。展开更多
在真核生物中,染色质作为遗传物质DNA的载体,直接参与基因的表达调控。染色质的可及性是指染色质中的DNA能与转录因子等蛋白复合物结合的区域,对染色质可及性的测定可为获取开放区域的信息、核小体定位信息以及转录因子结合信息提供基...在真核生物中,染色质作为遗传物质DNA的载体,直接参与基因的表达调控。染色质的可及性是指染色质中的DNA能与转录因子等蛋白复合物结合的区域,对染色质可及性的测定可为获取开放区域的信息、核小体定位信息以及转录因子结合信息提供基础依据。随着高通量测序技术的进步以及测序成本的降低,研究者已开发多种研究染色质可及性的测序方法,该文介绍4种常见的染色质可及性测序方法,对其中的染色质转座酶可及性测序(assay for transposase-accessible chromatin with high-throughput sequencing,ATAC-seq)的原理和数据分析方法进行重点描述,讨论ATAC-seq的应用与发展趋势,为染色质可及性以及基因表达调控的研究提供参考。展开更多
为建立适用于多种禾本科植物染色质转座酶可及性测序(assay for transposase accessible chromatin with high-throughput sequencing, ATAC-seq)的细胞核提取和建库体系,本试验以水稻、小麦和结缕草的叶片及根系为研究材料,通过控制变...为建立适用于多种禾本科植物染色质转座酶可及性测序(assay for transposase accessible chromatin with high-throughput sequencing, ATAC-seq)的细胞核提取和建库体系,本试验以水稻、小麦和结缕草的叶片及根系为研究材料,通过控制变量试验确定最佳的细胞核提取方法:采用液氮研磨样品,初步提核离心速度选取1200×g,2次ORB溶液去除细胞器等杂质,蔗糖梯度缓冲液纯化细胞核。通过构建文库、库检及测序分析发现,所提取的细胞核适用于染色质转座酶可及性测序的建库,可获得高质量测序数据。本试验建立的适用于多种禾本科植物的提核体系为获取禾本科植物染色质开放区域信息以及深入研究基因表达的调控方式奠定了基础。展开更多
文摘家禽作为全球畜牧业的重要经济物种,表观遗传调控对其生长、繁殖、抗病能力具有关键影响。近年来,染色质转座酶可及性测序(Assay for Transposase Accessible Chromatin With High-Throughput Sequencing,ATAC-seq)技术的兴起,为解析家禽表观遗传的调控机制提供了关键技术支撑。本文综述了ATAC-seq技术在家禽生长发育、繁殖性状及疾病研究中的进展,旨在为染色质可及性及基因表达调控的相关研究提供参考资料。
文摘染色质转座酶可及性测序(assay for transposase-accessible chromatin with high-throughput sequencing,ATAC-seq)是利用Tn5转座酶研究染色质可及性的高通量测序技术。ATAC-seq可以在全基因组范围内绘制染色质可及性图谱,揭示转录因子结合位点以及核小体的位置。在医学领域,ATAC-seq技术是研究重大疾病发病机制、药物作用机制、新药研发和生物标志物功能等的新一代有力工具。本文对ATAC-seq技术的优势及其在复杂疾病研究中的应用和前景进行了综述,以期为人类复杂疾病基因表达调控机制等相关研究的开展提供借鉴与参考。
文摘在真核生物中,染色质作为遗传物质DNA的载体,直接参与基因的表达调控。染色质的可及性是指染色质中的DNA能与转录因子等蛋白复合物结合的区域,对染色质可及性的测定可为获取开放区域的信息、核小体定位信息以及转录因子结合信息提供基础依据。随着高通量测序技术的进步以及测序成本的降低,研究者已开发多种研究染色质可及性的测序方法,该文介绍4种常见的染色质可及性测序方法,对其中的染色质转座酶可及性测序(assay for transposase-accessible chromatin with high-throughput sequencing,ATAC-seq)的原理和数据分析方法进行重点描述,讨论ATAC-seq的应用与发展趋势,为染色质可及性以及基因表达调控的研究提供参考。
文摘为建立适用于多种禾本科植物染色质转座酶可及性测序(assay for transposase accessible chromatin with high-throughput sequencing, ATAC-seq)的细胞核提取和建库体系,本试验以水稻、小麦和结缕草的叶片及根系为研究材料,通过控制变量试验确定最佳的细胞核提取方法:采用液氮研磨样品,初步提核离心速度选取1200×g,2次ORB溶液去除细胞器等杂质,蔗糖梯度缓冲液纯化细胞核。通过构建文库、库检及测序分析发现,所提取的细胞核适用于染色质转座酶可及性测序的建库,可获得高质量测序数据。本试验建立的适用于多种禾本科植物的提核体系为获取禾本科植物染色质开放区域信息以及深入研究基因表达的调控方式奠定了基础。
